羌活醇在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的用途

1.本发明属于医药技术领域，具体涉及羌活醇在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的用途。


背景技术：

2.溃疡性结肠炎又称慢性非特异性溃疡性结肠炎，病变多位于直肠和乙状结肠，也可蔓延到降结肠，甚至整个结肠。临床整个症状为腹泻、脓血便、腹痛和里急后重。现代医学认为是自身细胞免疫异常，导致粘膜被破坏，或由于精神因素导致大脑皮质活动障碍，植物神经功能紊乱而产生肠道运动亢进，肠血管平滑肌痉挛收缩，组织缺血，毛细血管通透性增加，从而形成肠粘膜的炎症、糜烂及溃疡。治疗溃疡性结肠炎的药物有柳氮磺胺吡啶、肾上腺皮质激素等广谱抗炎药物和免疫抑制、免疫调节剂等。目前关于羌活醇在治疗溃疡性结肠炎中的应用，还未见报道。


技术实现要素：

3.本发明的目的旨在提供羌活醇在制备治疗溃疡性结肠炎病药物中的应用。
4.本发明的目的是这样实现的，羌活醇作为主要活性物质或活性物质之一在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用，羌活醇的给药剂量为每日1-2次，每次50-150 mg。
5.本发明的有益效果为：经实验证明，羌活醇能显著改善葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎症，表现为显著降低小鼠疾病活动指数，明显改善造模引起的小鼠结肠长度缩短；显著降低血清中mpo的含量；显著减轻小鼠结肠组织病理改变，包括减少炎性细胞浸润、恢复组织结构和肠腺数量；显著降低结肠组织中前炎因子il-1β的含量，减轻结肠部位炎症反应，具有显著的抗溃疡性结肠炎的活性，在制备治疗溃疡性结肠炎药物中具有良好的应用前景。
附图说明
6.图1为本发明羌活醇对dss诱导的uc模型小鼠结肠组织病理学改变的影响图（200
×
）。
具体实施方式
7.下面对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明所作的任何变换，均属于本发明的保护范围。
8.本发明提供了羌活醇作为主要活性物质或活性物质之一在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的用途，羌活醇的给药剂量为每日1-2次，每次50-150 mg。
9.羌活醇的给药剂量为每日2次，每次100 mg。
10.本发明还提供了所述药物组合物包括羌活醇和药学上可接受的载体或赋型剂。
11.所述的药物组合物为丸剂、胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂、注射剂、复方制剂或其他
口服剂型。
12.实施例1取羌活醇适量，与等量淀粉和糊精混合，以适当浓度乙醇作润湿剂，常规方法制粒，加入适量硬脂酸镁混合，制成片剂。
13.实验例1羌活醇对治疗葡聚糖硫酸钠所致溃疡性结肠炎的作用1、实验材料1.1 主要仪器hhs-11-1恒温水浴锅，上海博讯实业有限公司医疗设备厂；5424r小型高速冷冻离心机，艾本德中国有限公司；万分之一电子天平，bt 124s 北京赛多利斯仪器系统有限公司；涡旋震荡仪，lab-blogen倍捷科技vtx-e；纯水机（milli-q academic a10超纯水系统），美国millipore公司；超低温（-80℃）冰箱，赛默飞世尔科技（中国）有限公司；酶标分析仪（molecular devices），美国分子仪器公司；超声波清洗仪，宁波新芝生物科技股份有限公司。
14.1.2 主要药品与试剂盒羌活醇（乐美天医药科技有限公司，批号：dstdq004302）；柳氮磺吡啶肠溶片（0.25 g，上海信谊天平药业有限公司，批号：09210601）；小鼠白介素（il）-1βelisa试剂盒（杭州联科生物技术股份有限公司，批号：a201b21121），髓过氧化物酶（mpo）检测试剂盒（杭州联科生物技术股份有限公司，批号：a213320952）。葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium salt, dss; mw：36000-50000；mp biomedicals公司，批号：s5648）。其他化学试剂均购自云南罗德宝生物科技有限公司。
15.1.3 实验动物c57bl/6小鼠，雄性，22
±
2 g，购自北京斯贝福生物技术有限公司，许可证号：scxk(京)2019-0010。实验用小鼠饲料及垫料，购自北京斯贝福生物技术生物科技有限公司，许可证号：scxk(京)2019-0010。实验动物进驻动物饲养房后，实验室条件下适应性喂养1周。实验方法及条件经云南中医药大学动物实验中心伦理委员会审查合格，动物伦理审查文件编号：r-062021lh115。
16.1.4 主要试剂配制3% dss溶液，称取dss 30 g，加入蒸馏水1000 ml，混合均匀，使其充分溶解，现配现用，每2天更换一次。
17.柳氮磺吡啶混悬液：取柳氮磺吡啶肠溶片（0.25 g）1片，用刀片刮去肠溶衣，研钵充分研细后，加入0.5% 羧甲基纤维素钠溶液混悬均匀并使终体积为 8.33 ml，得柳氮磺吡啶混悬液（0.03 g/ml）备用。灌胃体积为0.1 ml/10 g，给药剂量为0.3 g/kg。
18.羌活醇混悬液制备：羌活醇高剂量组药液：取羌活醇纯品适量，用0.5% 羧甲基纤维素钠配制成5 mg/ml的溶液。灌胃体积为0.1 ml/10 g，给药剂量为50 mg/kg。
19.羌活醇低剂量组药液：取羌活醇成品适量，用0.5% 羧甲基纤维素钠配制成2.5 mg/ml的溶液。灌胃体积为0.1 ml/10 g，给药剂量为25 mg/kg。
20.2、实验方法2.1 动物分组、造模及给药
动物随机分为正常组、模型组、羌活醇高剂量组（50 mg/kg）、羌活醇低剂量组（25 mg/kg）、柳氮磺吡啶组（0.3 g/kg）共5组，每组8只。实验开始当天记为第0天。正常组和模型组均给予同等体积的0.5% 羧甲基纤维素钠溶液灌胃，其他组给予对应的药物灌胃。除正常组外，其余各组从实验开始第0天起，自由饮用3% dss溶液，于小鼠开始出现明显便血时（约为5~6天）将dss溶液更换为纯水，后恢复3天。取材当日前12h，禁食不禁水。取材当日灌胃后2h后进行取材。
21.2.2 小鼠疾病活动指数（dai）评分综合小鼠体重下降情况、大便性状及隐血情况对各组小鼠进行dai评分。体重评分标准如下：(前一天的体重-当天的体重)/前一天的体重（负值评分为0，下降1%-5%评为1分，下降5%-10%评为2分，下降10%-15%评为3分，下降百分率大于15%评为4分）、大便性状（正常为0，稀便为2分，水样泻为4分）和大便出血（正常0分，隐血阳性为2分，显性出血为4分）。取以上三项评分的平均值，即得小鼠疾病活动指数（disease activity index, dai）。
22.2.3 样本采集实验第9天，小鼠禁食不禁水12小时，于第10天，给药结束后2h，摘眼球取血，室温静置2 h，4℃、3000 rpm离心15 min后收集上清，-80℃冰箱保存备用。采血后脱颈椎处死小鼠，解剖小鼠并剪取整段结肠，清理干净肠系膜后整齐摆放于滤纸上，测量并记录结肠长度。在每段结肠的相同位置剪取1 cm的结肠组织固定于4%多聚甲醛溶液。剩余结肠组织用冰生理盐水漂洗干净后放至-80℃冰箱保存备用。
23.2.4 结肠组织病理学检查4%的多聚甲醛固定24 h后，常规脱水、包埋、切片、染色。镜下观察结肠组织炎症程度、隐窝损伤、炎症深度、炎症浸润面积和病变深度，按照文献方法随机双盲评分。
24.2.5血清mpo含量检测将所有试剂、血清样本移至室温条件下，平衡30 min。按照试剂盒说明书分别配制工作液、标准品溶液及样品稀释液，并进行测定。根据标准曲线，计算各样本中相应细胞因子的含量。
25.2.6结肠中炎性因子il-1β含量检测剪取40 mg保存的结肠组织，加入360 μlpbs，用低温均浆机充分匀浆后，4℃、12000 rpm 15 min离心后取上清备用。将所有试剂移至室温条件下，平衡30 min。按照试剂盒说明书分别配制工作液、标准品溶液及样品稀释液，并进行测定。根据标准曲线，计算各样本中相应细胞因子的含量。
26.2.7 数据统计分析实验数据采用spss 21.0进行分析处理，以均值
±
标准差（`x
±
sd）表示，采用单因素方差分析方法（anova）进行分析。数据预先用homogeneity of variances进行方差齐性分析，方差齐则进行lsd检验，方差不齐则进行tamhane’s t2检验。
27.3、实验结果3.1 羌活醇对小鼠疾病活动指数（dai）的影响自从实验第0天开始，除正常组外，各组小鼠自由饮用3% dss溶液。小鼠逐渐出现活动量减少、食量下降、体重减轻等体征变化。实验第5天开始，部分小鼠出现腹泻、少量肉眼可见的便血，多数小鼠在实验第6天出现腹泻及便血。第6天各造模组3% dss溶液更换为
饮用水。模型组小鼠至第6天出现便血及腹泻程度最严重；实验第8天至第10天，模型组小鼠便血、腹泻程度有所缓解。
28.表1 羌活醇对dss诱导的uc模型小鼠dai的影响（n=8）注：与正常组比较，
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：p《0.01；与模型组比较，
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：p《0.05，
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：p《0.01由表1可见，本发明羌活醇高、低剂量组及阳性药柳氮磺吡啶从造模第6天至第9天均能显著降低uc模型小鼠dai评分。
29.3.2 对小鼠结肠长度变化的影响表2 羌活醇对dss诱导的uc模型小鼠结肠长度变化影响（n=8）注：与正常组比较，
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：p《0.01；与模型组比较，
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：p《0.01由表2可见，模型小鼠结肠长度较正常组小鼠显著缩短，羌活醇的高、低剂量组均能显著改善小鼠结肠缩短的情况，其中羌活醇低剂量组的改善作用与柳氮磺吡啶的效果相当。
30.3.3 羌活醇对小鼠体重变化的影响表3羌活醇对dss诱导的uc模型小鼠体重变化影响（n=8）
注：与正常组比较，
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：p《0.01；与模型组比较，
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：p《0.05，
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：p《0.01由表3可见，羌活醇高、低剂量组从第7天开始能改善uc小鼠体重下降，低剂量组第9、10天趋势显著。
31.3.4 羌活醇对小鼠结肠组织病理学改变的影响从图1和表4可知，正常组组织结构完整，肠腺数量丰富，未见明显异常。模型组大量肠腺消失，被增生的结缔组织取代，同时伴有较多炎性细胞浸润。而与模型组相比，羌活醇低剂量组可显著降低结肠病理组织切片评分，羌活醇高剂量组有降低趋势，切片显示组织结构较完整，肠腺数量增多，对uc结肠病理组织病变具有改善作用。
32.表4 羌活醇对dss诱导的uc模型小鼠结肠组织病理学评分的影响（n=6）注：与正常组比较，
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：p《0.01；与模型组比较，
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：p《0.01，
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：p《0.053.5 羌活醇对小鼠血清中mpo含量的影响表5 羌活醇对小鼠血清中mpo含量的影响（n=8）注：与正常组比较，
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：p《0.01；与模型组比较，
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：p《0.01由表5可见，模型小鼠血清mpo含量显著高于正常小鼠，羌活醇高、低剂量组及阳性药柳氮磺吡啶均能显著改善该现象。
33.3.6 对小鼠结肠组织炎性因子含量的影响由表6可见，模型组小鼠结肠组织中炎性因子il-1β含量和正常组小鼠相比，显著升高。羌活醇高剂量及阳性药柳氮磺吡啶均能显著降低小鼠结肠组织中il-1β的含量，羌活醇低剂量对il-1β有降低趋势。结果表明羌活醇能显著减轻uc模型小鼠结肠部位的炎症反应。
34.表6 羌活醇对小鼠结肠组织il-1β含量的影响（n=8）
注：与正常组比较，
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：p《0.05；与模型组比较，
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：p《0.05综上可知，本发明羌活醇具有显著治疗炎症性肠病的活性，在制备治疗溃疡性结肠炎药物中具有很好的应用前景。
35.在本发明所述的小鼠试验中，羌活醇的剂量为50 mg/kg、25 mg/kg。换算为人（以成人体重60 kg计算）剂量为300 mg、100 mg。考虑到人的体重有不同，及各种其他病理情况，推荐剂量为每日1-2次，每次50-150 mg。最常用的剂量为每日2次，每次100 mg。