一种LAMP2B/VWF-A3区域共修饰的外泌体及其制备方法和应用

技术特征：
1.一种lamp2b/vwf-a3区域共修饰的外泌体，其特征在于，所述外泌体是由过表达lamp2b-vwf-a3区域融合蛋白的哺乳细胞系分泌得到。2.根据权利要求1所述外泌体，其特征在于，所述lamp2b-vwf-a3区域融合蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。3.根据权利要求1所述外泌体，其特征在于，所述哺乳细胞系过表达gfp-lamp2b-vwf-a3区域融合蛋白。4.根据权利要求3所述外泌体，其特征在于，所述gfp-lamp2b-vwf-a3区域融合蛋白的氨基酸序列如seq id no:2所示。5.根据权利要求1～4任意一项所述外泌体，其特征在于，所述哺乳细胞系包括293t或msc。6.权利要求1～5任意一项所述lamp2b/vwf-a3区域共修饰的外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)构建过表达lamp2b-vwf-a3区域融合基因的重组载体；2)将过表达lamp2b-vwf-a3区域融合基因的重组载体转染哺乳细胞系，获得lamp2b-vwf-a3区域融合蛋白过表达细胞；3)将所述lamp2b-vwf-a3区域融合蛋白过表达细胞转染哺乳动物细胞系，得到的转染细胞系进行培养，固液分离，从得到的细胞培养上清液中分离纯化外泌体。7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述过表达lamp2b-vwf-a3区域融合基因的重组载体的构建方法，包括以下步骤：合成两端带有xhoi/bamhi的粘性末端的编码lamp2b-vwf-a3融合蛋白的基因序列，插入经xhoi/bamhi双酶切后的线性化plvx-puro质粒中，转入大肠杆菌感受态扩增，提取质粒进行测序验证，确定dna序列无误后质粒保存备用。8.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述108细胞转染重组质粒4μg。9.权利要求1～5任意一项所述lamp2b/vwf-a3区域共修饰的外泌体在靶向受损血管中的应用。10.权利要求1～5任意一项所述lamp2b/vwf-a3区域共修饰的外泌体作为载体在制备治疗血管损伤相关疾病的药物中的应用。

技术总结
本发明提供了一种LAMP2B/VWF-A3区域共修饰的外泌体及其制备方法和应用，本发明属于基因工程技术领域。本发明基于外泌体针对受损血管靶向性差的问题，提供一种工程化外泌体，基于血管性血友病因子(VWF)介导血小板和胶原的结合这一生物学特性，将VWF-A3区域与外泌体标志蛋白LAMP2B蛋白融合表达于细胞中，将细胞培养上清液分离纯化得到的工程化外泌体具有靶向损伤血管的能力，可以作为载体应用于血管损伤相关疾病的药物制备中，具有极大的临床应用价值。价值。价值。


技术研发人员：张斌 何宝玉 别庆丽 赵柔 冯雪芹 王森 王凤鸽
受保护的技术使用者：济宁医学院附属医院
技术研发日：2022.09.26
技术公布日：2023/8/24