培养植物乳杆菌的方法及其应用与流程

1.本发明涉及微生物领域，具体涉及一种培养植物乳杆菌的方法及其应用。


背景技术：

2.植物乳杆菌是一种常用的微生物代谢产物(例如乳酸、细菌素等)生产工程菌，同时，还是一种获得我国农业部允许使用的饲料微生物添加剂。在饲料中添加植物乳杆菌，即使是灭活植物乳杆菌菌剂，也能通过竞争性抑制作用起到改善动物肠道生态、提高动物免疫力的作用。而且，植物乳杆菌还能够用于饲料防腐，是一种多功能的饲料添加剂。然而，目前常用于培养植物乳杆菌或利用植物乳杆菌进行代谢产物生产的培养基采用的氮源(例如牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、酵母粉等)价格较为昂贵，使得植物乳杆菌的培养和生产成本较高。
3.谷物酒精糟是采用谷物进行酒精发酵生产过程中产生的副产品，根据不同的来源可以分为干酒精糟(ddg)和可溶性酒精糟(dds)。其中，ddg是蒸馏废液中的固体物质经过干燥获得的产物，而dds是除去固体物质后的蒸馏废液经浓缩后获得的产物。随着燃料乙醇的推广，工业乙醇的需求量逐渐增加，这使得乙醇生产企业在应需提高乙醇产量的同时，作为副产品的谷物酒精糟产量也逐年递增。而且，随着玉米价格的增长，在玉米豆粕减量替代的政策背景下，各酒精生产企业均添加不同比例的其他谷物，例如小麦等，以降低生产成本，这使得谷物酒精糟，尤其是dds的产量进一步上升，出现了明显的dds供大于求的局面，急剧加大了dds的处理压力。
4.目前dds的主要处理途径是将其与ddg掺杂成ddgs作为饲料添加剂用于畜禽饲料中，但是，随着ddgs中dds含量的提高，ddgs的色泽也会随之变深，从而使得产品最终的品质和价值定位降低。而且ddgs在饲料中的添加量有限，仅靠该途径已经完全无法消耗产量逐年增加的dds。但是将无法消耗的dds直接丢弃显然会造成极大浪费，而且容易造成污染，还会提高废弃物处理的压力。因此，亟需探索dds的新用途，解决dds产量过剩问题的同时，充分合理地将其资源化利用。


技术实现要素：

5.本发明的目的是为了克服现有技术存在的植物乳杆菌培养和生产成本高，以及谷物酒精糟(尤其是dds)产量过剩，消耗途径有限的问题，提供一种培养植物乳杆菌的方法及其应用。本发明提供的乳酸发酵培养基中采用谷物酒精糟作为主要氮源，不仅能够提供了dds的新用途，有助于缓解dds消耗压力，而且能够降低植物乳杆菌培养和生产的成本。
6.为了实现上述目的，本发明一方面提供一种培养植物乳杆菌的方法，所述方法包括将植物乳杆菌接种于培养基中，进行培养，其中，所述培养基中90重量％以上的氮源由谷物酒精糟提供。
7.本发明第二方面提供如前所述的方法在乙醇、乳酸和饲料添加剂的联产中的应用。
8.通过上述技术方案，本发明具有如下有益效果：
9.(1)本发明通过将谷物酒精糟作为主要氮源进行植物乳杆菌培养，与使用价格较高的传统氮源(例如蛋白胨、牛肉膏、酵母浸膏、酵母浸粉等)的发酵培养基相比，使得植物乳杆菌培养的成本大幅降低；
10.(2)采用本发明提供的方法进行植物乳杆菌培养的同时，还可以进行乳酸生产，与采用传统氮源的培养基相比乳酸产量大幅提升，结合培养基成本的降低，能够显著提高乳酸生产效率和经济效益；
11.(3)本发明提供的方法能够实现植物乳杆菌的高密度发酵培养，能够在较短的时间内获得高浓度(8
×
109cfu/ml以上)的植物乳杆菌菌液，该菌液可以进一步处理制成饲料添加剂等产品，进一步提高经济效益；
12.(4)本发明提供的方法增加了谷物酒精糟，尤其是dds的消耗途径，实现了dds的有效利用，规模化应用后能够大量分流在ddgs制备中的dds消耗量，从而解决由于dds掺加量过多造成的ddgs色泽深，品质评级低的问题；
13.(5)本发明提供的方法能够应用于乙醇、乳酸、饲料添加剂(如植物乳杆菌菌剂等)的联产，实现产品多样化，有助于企业多元发展。
具体实施方式
14.在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
15.本发明中，未做特殊说明的情况下，“谷物酒精糟”包括采用任意谷物进行酒精(乙醇)发酵生产时产生的干酒精糟和可溶性酒精糟。“干酒精糟”是指乙醇生产中，蒸馏废液中的固体物质经过干燥获得的产物，其与“ddg”是意义相同的术语，可互换使用。“可溶性酒精糟”是指乙醇生产中，除去固体物质后的蒸馏废液经浓缩后获得的产物，其与“dds”是意义相同的术语，可互换使用。
16.本发明中，未进行特殊说明的情况下，“dds”在单独使用时，等同于“谷物dds”，其可以是任意谷物进行乙醇生产过程中产生的dds，也可以是多种谷物dds的混合物。只有当dds前明确标注谷物种类时，例如“玉米dds”、“小麦dds”等才代表特定来源的dds。
17.谷物酒精糟可以直接由酒精生产企业购买获得，其中含有蛋白质、脂肪、纤维素等营养成分，尤其是其中的蛋白质含量较高，具有较高的营养价值。其中，谷物可溶性酒精糟(谷物dds)中更是含有高达85％以上的酸溶性蛋白，具有成为优质廉价氮源的潜力。但是由于其ph较低，而且酸溶性蛋白需要在酸性环境中才能充分溶解，因此，目前尚未有采用谷物酒精糟作为(主要)氮源进行微生物培养的报道。本发明的发明人在研究的过程中发现，植物乳杆菌作为乳酸发酵工程菌，其本身具有一定的耐酸性，因此具有进行谷物酒精糟(尤其是dds)有效利用的能力。通过与培养基中其他特定的成分相配合，能够实现主要甚至完全以谷物酒精糟为氮源进行植物乳杆菌的高密度培养。
18.本发明一方面提供一种(高密度)培养植物乳杆菌的方法，所述方法包括将植物乳杆菌接种于培养基中，进行培养，其中，所述培养基中90重量％以上的氮源由谷物酒精糟提
供。本发明中，“由谷物酒精糟提供”意指直接将谷物酒精糟作为原料用于培养基中作为氮源的主要来源。
19.根据本发明的优选实施方式，其中，所述培养基中，92重量％以上的氮源由谷物酒精糟提供。
20.本发明的发明人在研究的过程中发现，完全以谷物酒精糟作为氮源对植物乳杆菌进行培养，培养结束时的菌液中植物乳杆菌的含量即能达到较高水平(例如达到8
×
109cfu/ml以上)。但是，若在培养基中添加微量的(不超过氮源总量的8重量％)其他氮源，例如本领域现有的氮源，能够进一步提高所得菌液中植物乳杆菌的含量。
21.优选地，所述培养基中，92.5-99.9重量％的氮源由谷物酒精糟提供。氮源余量由酵母浸膏、酵母浸粉、牛肉膏、蛋白胨(包括动物源性蛋白胨、植物源性蛋白胨和微生物蛋白胨，例如胰胨、肉胨、骨胨、蚕蛹蛋白胨、血液蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母蛋白胨等)中的至少一种提供，优选为酵母浸粉。
22.本发明提供的方法中，所述“谷物酒精糟”是指采用谷物进行乙醇发酵生产过程中产生的副产品，包括干酒精糟(ddg)和可溶性酒精糟(dds)。考虑到ddg中不溶于水的物质含量较高，以及植物乳杆菌的高密度培养效果等因素，根据本发明的优选实施方式，其中，所述谷物酒精糟选自谷物可溶性酒精糟(谷物dds)
23.优选地，所述谷物酒精糟选自玉米可溶性酒精糟(玉米dds)、小麦可溶性酒精糟(小麦dds)、水稻可溶性酒精糟(水稻dds)、大米可溶性酒精糟(大米dds)和木薯可溶性酒糟(木薯dds)中的至少一种。
24.本发明提供的方法中，所述培养基中除以谷物酒精糟为主的氮源外，其他成分(例如碳源、无机盐等)均可为任意本领域现有用于植物乳杆菌培养的培养基配置时的成分。为了获得更好的植物乳杆菌扩培效果(例如在更短的培养时间内获得更多的植物乳杆菌等)，根据本发明的优选实施方式，其中，以所述培养基的总重量计，所述培养基的配方包括：
[0025][0026]
所述培养基的(初始)ph，即在接种植物乳杆菌之前的培养基ph值，没有特殊限定，可以根据实际情况进行调整。为了达到更好的培养效果，优选地，所述培养基的(初始)ph可以为6-6.5。
[0027]
本发明的发明人在研究的过程中发现，当上述培养基中加入微量的酵母浸粉时，与完全采用dds作为氮源相比，能够进一步提高采用该培养基进行培养(尤其是高密度培养)时植物乳杆菌的增殖效率。根据本发明的优选实施方式，其中，以所述培养基的总重量计，所述培养基的配方包括：
[0028][0029]
优选地，所述培养基的ph为6-6.3。
[0030]
任意本领域现有的谷物酒精糟均可适用于本发明提供的方法中。例如，可以为浓缩和/或干燥处理后的谷物酒精糟。由于制备培养基的过程中本就需要加入一定量的水，因此，为了降低成本(例如浓缩、干燥等操作的成本)，简化操作流程，根据本发明的优选实施方式，其中，所述谷物酒精糟(例如上述配方中的谷物酒精糟)为固形物含量在5-30重量％的谷物酒精糟(dds)溶液。所述“固形物含量”指的是将一定量的谷物酒精糟溶液进行干燥后所获得的固体物质占干燥前的谷物酒精糟溶液重量的百分比。
[0031]
应当能够理解的是，由于本发明的主要目的之一是解决谷物酒精糟(尤其是dds)产量过剩的问题，因此，本发明提供的方法中采用的谷物酒精糟可以根据与谷物酒精糟供应地的距离选择谷物酒精糟溶液的浓度。例如，近距离供应时，可以采用较低浓度的谷物酒精糟溶液(例如5-10重量％)，以减少操作流程和处理成本；远距离供应时，可以采用较高浓度的谷物酒精糟溶液(例如25-30重量％)，以减少运输成本。
[0032]
本发明提供的上述配方中的水指的是额外加入的水，即所述水不包括谷物酒精糟(例如上述谷物酒精糟溶液)中所含的水。若谷物酒精糟中的含水量足够，则无需额外添加水。
[0033]
本发明提供的方法中，“微量元素源”是指用于提供微量元素的无机/有机盐，对于其中所含的微量元素的具体种类没有特别限定，只要能够满足植物乳杆菌高密度培养的需要即可，可以根据实际情况进行调整。根据本发明的优选实施方式，其中，所述微量元素源中(至少)含有钙源。
[0034]
根据本发明的某些优选实施方式，其中，所述培养基中可以仅含有钙源作为微量元素源。
[0035]
本发明提供的方法中，所述钙源的含量可以根据钙盐种类的选择、培养基中其他成分的含量、植物乳杆菌培养条件等进行调整。优选地，以所述培养基的总重量计，所述钙源的含量可以为0.3-0.5重量％。
[0036]
本发明提供的方法中，所述钙源可以是任意本领域用于提供ca的盐、酸、碱等。优选地，所述钙源选自碳酸钙、碳酸氢钙和氢氧化钙中的至少一种。
[0037]
本发明提供的方法中，(除ca之外)所述微量元素源中还可以含有其他元素。根据本发明的优选实施方式，其中，所述微量元素源中含有ca、mn、mg、na、k、s和p中的至少一种。
[0038]
本发明中，所述微量元素源可以是任意本领域现有用于植物乳杆菌培养的含有上述元素的酸、碱、盐等。优选地，所述微量元素源中含有碳酸钙、碳酸氢钙、氢氧化钙、硫酸
锰、硫酸镁、醋酸钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾中的至少一种。
[0039]
由于dds的加入会使得培养基中的ph降低，且为了使dds中的酸溶性蛋白能够充分溶出，从而被植物乳杆菌更好地利用。因此，虽然配制过程中会对培养基的ph进行一定的调节，但总体而言，本发明提供的方法中使用的培养基的ph应保持一定的酸性。故具有一定耐酸能力的植物乳杆菌更适用于本发明提供的方法。
[0040]
根据本发明的优选实施方式，其中，所述植物乳杆菌选自具有耐酸性的植物乳杆菌。
[0041]
本发明提供的方法对于植物乳杆菌的耐酸性没有特别限定，考虑到培养效果和菌株获得的便利性等因素，优选地，所述植物乳杆菌对乳酸的耐受量为20g/l以上。优选为40g/l以上，更优选45-55g/l。
[0042]
更优选地，所述植物乳杆菌为保藏编号cgmcc no.15013的植物乳杆菌。
[0043]
本发明的发明人在研究的过程中发现，本发明提供的方法中，利用上述培养基采用特定的培养条件对植物乳杆菌进行培养时，不仅能够实现植物乳杆菌的高密度培养(扩培)，而且能够同时进行较高浓度的乳酸发酵生产。
[0044]
根据本发明的优选实施方式，其中，所述培养的条件包括：搅拌转速80-120rpm，温度35-40℃，时间8-15h(优选为10-13h)，植物乳杆菌的接种量使得培养体系中植物乳杆菌的初始浓度为1
×
10
6-1
×
107cfu/ml。
[0045]
优选地，所述乳酸发酵培养采用全程厌氧或兼性厌氧培养的方式进行。
[0046]
本发明提供的方法中，植物乳杆菌的接种方式可以采用任意本领域现有的用于植物乳杆菌培养的接种方式进行。例如，可以根据实际需要，对植物乳杆菌进行活化、预培养等，再按照如前所述的方式进行植物乳杆菌培养。
[0047]
根据本发明的一种优选实施方式，其中，对于超低温冻存的植物乳杆菌，本发明提供的方法可以包括以下步骤：
[0048]
(1)菌种活化：将植物乳杆菌接种至培养基中，在活化培养条件下培养，获得活化的植物乳杆菌；
[0049]
(2)种子培养：将所述活化的植物乳杆菌接种至培养基中，在种子培养条件下培养，获得植物乳杆菌种子液；
[0050]
(3)高密度(发酵)培养：将所述植物乳杆菌种子液接种至培养基中，在高密度(发酵)培养条件下，进行培养，获得发酵液。
[0051]
上述方法中，步骤(1)-(3)中，培养基的加入量可以为培养体系总体积的50-80体积％。
[0052]
优选地，对于小规模培养体系(例如采用1l以下的发酵罐或摇瓶)而言，培养基的加入量可以为50-60体积％。
[0053]
优选地，对于中试水平和大规模培养体系(例如采用1l以上，优选5l以上的发酵罐)而言，培养基的加入量可以为70-80体积％。
[0054]
在上述方法中，步骤(1)中所述植物乳杆菌是将超低温冻存的植物乳杆菌进行解冻后获得的。所述解冻可以采用任意本领域现有的解冻冻存菌种的方式进行，优选地，采用自然解冻的方式。例如，可以是在接种前0.1-0.5h取出，置于室温无菌环境中自然解冻等。
[0055]
为了提高活化效率，优选地，步骤(1)中所述菌种活化采用(摇瓶培养等)小规模培
养体系进行活化培养。
[0056]
优选地，步骤(1)中，可以采用mrs培养基等本领域现有用于植物乳杆菌培养(或活化)的培养基。
[0057]
更优选地，步骤(1)中，培养基的初始ph为6-6.5。
[0058]
对于菌种活化时的植物乳杆菌接种量没有特别限定，可以根据实际情况进行调整。为了提高活化效率，优选地，步骤(1)中，可以采用活化培养体系中植物乳杆菌的初始含量为1
×
10
6-1
×
107cfu/ml的接种量进行接种。
[0059]
本发明提供的方法中，可以采用任意现有的对植物乳杆菌进行活化培养的条件进行培养。优选地，步骤(1)中，所述活化培养条件可以包括：温度36-38℃，时间16-20h，静置(厌氧)培养，当活化体系od值达到3-4，ph达到4-4.5时结束活化培养。
[0060]
根据本发明的优选实施方式，其中，步骤(1)中的活化培养时间可以根据实际情况进行调整，并不仅限于16-20h。当活化体系od值和/或ph值达到上述范围内时，即可停止活化培养。例如，当活化体系od值和/或ph值达到上述范围内时，培养时间未达到16h，则可以提前结束。又例如，培养时间达到20h时，活化体系od值和/或ph值尚未达到上述范围，则可以适当延长活化培养时间。
[0061]
在上述方法中，步骤(2)中种子培养的目的在于为后续的高密度培养提供种子液，为了能够提供足够多的植物乳杆菌，步骤(2)可以采用1-50l的中试水平发酵罐进行种子培养。
[0062]
由于步骤(1)中获得的活化的植物乳杆菌从冻存状态活化不久，较为脆弱，因此，步骤(2)中优选采用mrs培养基等本领域现有用于植物乳杆菌培养的培养基。
[0063]
优选地，步骤(2)中，培养基的初始ph为6-6.5。
[0064]
对于种子培养时的植物乳杆菌接种量没有特别限定，可以根据实际情况进行调整。为了提高种子培养的效率，优选地，步骤(2)中，采用种子培养体系中植物乳杆菌初始含量为1
×
10
6-1
×
107cfu/ml的接种量进行接种。
[0065]
本发明提供的方法中，可以采用任意现有的对植物乳杆菌进行种子培养的条件进行培养。优选地，步骤(2)中，所述种子培养条件可以包括：温度36-38℃，时间6-7h，搅拌转速80-120rpm，厌氧培养，当种子培养体系od值达到4-6，ph达到5-5.5时结束种子培养。
[0066]
根据本发明的优选实施方式，其中，步骤(2)中的种子培养时间可以根据实际情况进行调整，并不仅限于6-7h。当种子培养体系od值和/或ph值达到上述范围内时，即可停止培养。例如，当种子培养体系od值和/或ph值达到上述范围内时，培养时间未达到6h，则可以提前结束。又例如，培养时间达到7h时，种子培养体系od值和/或ph值尚未达到上述范围，则可以适当延长种子培养时间。
[0067]
由于步骤(3)的目的即为对植物乳杆菌进行高密度培养和乳酸发酵，以获得大量的植物乳杆菌，以及植物乳杆菌的代谢产物乳酸，因此，步骤(3)中可以根据实际生产情况选择50-5000l的发酵罐进行培养。
[0068]
上述方法中，步骤(3)中所述高密度(发酵)培养即为本发明前述植物乳杆菌的培养方法，其具体方法和条件如前所述，在此不再赘述。
[0069]
本发明第二方面提供如前所述的方法在乙醇、乳酸和饲料添加剂的联产中的应用。
[0070]
本发明提供的方法中采用谷物酒精糟(dds)作为主要氮源进行植物乳杆菌高密度发酵培养，可以大量消耗乙醇生产企业产生的dds，而植物乳杆菌培养过程中又会产生大量乳酸，培养结束后的发酵液中含有大量植物乳杆菌，可以用于植物乳杆菌菌剂等产品制备。因此，根据本发明的优选实施方式，其中，所述应用可以包括将乙醇生产企业产生的dds采用如前所述的方法进行植物乳杆菌培养，同时获得植物乳杆菌和乳酸，而后再将所得植物乳杆菌制成饲料添加剂等产品，从而实现乙醇、乳酸和饲料添加剂的联产。
[0071]
本发明中，所述“饲料添加剂”可以指添加至饲料中，供动物食用，以提供调节动物肠胃功能、提高动物免疫力等动物保健功能的饲料添加剂。还可以指在饲料制备过程中添加，以达到饲料防腐等作用的饲料添加剂。例如用于制备发酵饲料、青储饲料等。
[0072]
根据本发明的优选实施方式，其中，所述饲料添加剂可以是利用本发明提供的方法获得的植物乳杆菌作为原料，通过与其他用于饲料添加剂制备的原料混合，再加工而成的饲料添加剂。也可以是直接将所述本发明提供的方法获得的植物乳杆菌直接制成固体和/或液体菌剂作为饲料添加剂使用。
[0073]
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。应当能够理解的是，以下实施例仅用于示例性地进一步详细解释和说明本发明，而不用于限制本发明。
[0074]
以下实施例中，采用的mrs培养基购自北京陆桥技术股份有限公司，其他未做特殊说明的化学试剂均购自正规化学试剂供应商，纯度为化学纯。以下实施例中使用的培养基配制完成后均采用121℃高压蒸汽灭菌20min，冷却至室温后使用，或置于室温无菌环境中保存。
[0075]
以下实施例中采用的dds为固形物含量6重量％的dds溶液，其来源于中粮生物科技股份有限公司沫河口分厂，主要为玉米dds、小麦dds、水稻dds的混合物，经检测，其中(以干物质计)主要含有0.7重量％总糖和30重量％蛋白等成分。
[0076]
以下实施例中，培养体系(或发酵液)中植物乳杆菌的含量采用稀释平板涂布法检测获得。
[0077]
制备例1
[0078]
采用表1中的配方进行培养基配制。表1中各成分的用量单位是在该配方中，各成分占培养基总重量的百分比。
[0079]
表1
[0080][0081]
实施例1
[0082]
本实施例中采用的植物乳杆菌为中粮生物科技安徽研发基地自行分离获得，并于2017年12月4日保藏于cgmcc，保藏编号为cgmcc no.15013。该菌株的获得方法可参考cn109423467a。
[0083]
(1)菌种活化：采用250ml三角瓶进行活化培养，培养基加入量为150ml。
[0084]
具体培养方法为：将-80℃超低温冻存的植物乳杆菌cgmcc no.15013取出后于室温无菌环境自然解冻0.5h，而后接种至初始ph6.2
±
0.2的mrs培养基中，接种后活化体系中植物乳杆菌的初始含量约为6
×
106cfu/ml。37℃静置厌氧培养，使活化培养体系中植物乳杆菌od值达到3.5
±
0.5，ph为4.2
±
0.2，结束活化培养，获得活化的植物乳杆菌。
[0085]
(2)种子培养：采用购自荷兰applikon公司的5l的发酵罐进行种子培养，培养基加入量为3.5l。
[0086]
具体培养方法为：将步骤(1)获得的活化的植物乳杆菌接种至初始ph6.2
±
0.2的mrs培养基中，接种后种子培养体系中植物乳杆菌的初始含量为6
×
106cfu/ml。搅拌转速100rpm条件下37℃全程厌氧培养，使种子培养体系中植物乳杆菌od值达到5
±
1，ph为5.2
±
0.2，结束种子培养，获得植物乳杆菌种子液。
[0087]
(3)高密度发酵培养：采用购自上海百仑生物公司的500l的发酵罐进行高密度发酵培养，培养基加入量为400l。
[0088]
具体培养方法为：将步骤(2)获得的植物乳杆菌种子液分别接种至mrs培养基和按照表1中配方制备的培养基(初始ph均调节为6.2
±
0.2)中，搅拌转速100rpm，37
±
2℃全程厌氧或兼性厌氧培养(兼性厌氧培养方式：培养基灭菌结束开始降温时，向罐内通入无菌空
气保压，使得罐内压力为0.04
±
0.01mpa，而后待培养基温度降低至培养温度，接种植物乳杆菌种子液进行培养，且培养过程中不再通气)，其他培养条件见表2。
[0089]
培养结束后，检测获得的发酵液中乳酸和植物乳杆菌的含量，结果详见表2。乳酸含量采用安捷伦1200系列液相色谱检测获得。
[0090]
表2
[0091][0092]
*培养时间由培养体系的ph值变化决定。植物乳杆菌培养过程中不断产生乳酸，导致培养体系ph下降，当培养体系的ph开始回升时即停止培养。
[0093]
**乳酸含量以培养结束后获得的发酵液中乳酸根的含量计，即，表2中的乳酸含量为发酵液中的乳酸和乳酸盐的总含量。
[0094]
经计算，采用如上方法，使用mrs培养基生产1m3发酵液的成本约为2500元。而采用1#-6#培养基时，生产1m3发酵液的成本约为750元(与采用mrs培养基相比节约了高价值氮源约22000g，其中牛肉粉约10000g、蛋白胨约10000g、酵母浸粉约2000g)。相比之下，采用本发明提供的方法进行植物乳杆菌高密度发酵培养时成本约降低了70％。
[0095]
实施例2
[0096]
采用表1中的6#培养基，培养植物乳杆菌bc30140(购自中粮营养健康研究院有限公司)，培养方法和条件与实施例1中采用6#培养基培养植物乳杆菌cgmcc no.15013时相同。培养15.5h时，培养体系ph开始回升，结束培养。获得的发酵液中，植物乳杆菌的含量为1.3
×
10
10
cfu/ml，乳酸含量为33g/l。
[0097]
实施例3
[0098]
采用表1中的5#培养基，培养植物乳杆菌bc00171(购自中粮营养健康研究院有限公司)，培养方法和条件与实施例1中相同。培养12.5h时，培养体系ph开始回升，结束培养。获得的发酵液中，植物乳杆菌的含量为8.5
×
109cfu/ml，乳酸含量为24g/l。
[0099]
测试例1
[0100]
对实施例2和3中采用的植物乳杆菌进行耐酸性检测，结果详见表3。具体检测方法如下：在mrs培养基中加入不同浓度乳酸，然后按植物乳杆菌的初始含量为6
×
106cfu/ml的接种量进行接种，培养20h后，进行稀释平板涂布，以不加乳酸组为对照组，终点植物乳杆菌数量达到对照组40％及以上视为该菌株的耐酸限值。
[0101]
表3
[0102]
植物乳杆菌耐酸性*(g/l)cgmcc no.1501355bc3014040bc0017125
[0103]
*耐酸性以培养基中的乳酸和乳酸盐的含量计。
[0104]
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。