修复型巨噬细胞、培养液及其应用

技术特征：
1.一种修复型巨噬细胞，其特征在于，其利用tams的培养液或肿瘤提取液培养单核细胞或巨噬细胞得到。2.根据权利要求1所述的修复型巨噬细胞，其特征在于，所述tams的培养液是将tams在完全培养基内培养15-20天后得到的培养液；优选地，所述完全培养基包括1640完全培养基；优选地，所述tams是从肿瘤中分离得到的细胞。3.根据权利要求2所述的修复型巨噬细胞，其特征在于，形成tams的步骤包括：将剪碎的肿瘤与胶原蛋白水解酶、核酸内切酶混合进行消化，而后过滤得到单细胞悬液，接着，利用红细胞裂解液去除红细胞，将所述单细胞悬液与白细胞共同抗原磁珠进行孵育，而后分选白细胞共同抗原阳性细胞，接着，将白细胞共同抗原阳性细胞与cd45,cd11b,ly6g,,ly6c,mhc ii和siglecf抗体进行孵育，而后分选tams；优选地，形成tams的步骤包括：将剪碎的肿瘤转入含有胶原酶型ⅳ和dnaseⅰ的裂解缓冲液中进行消化，形成单细胞和未消化的肿瘤组织块的混合物，而后将所述混合物进行过滤去除未消化的肿瘤组织块，得到总单细胞悬液，接着，利用红细胞裂解液对过滤后的总单细胞悬液进行处理，去除红细胞，再用磷酸缓冲液进行重悬形成单细胞悬液，将所述单细胞悬液与cd45磁珠孵育，而后分选cd45阳性的细胞，随后，cd45阳性细胞与cd45,cd11b,ly6g,,ly6c,mhc ii和siglecf抗体在冰上避光孵育，通过流式分选技术将tams分选出来。4.根据权利要求1所述的修复型巨噬细胞，其特征在于，形成所述肿瘤提取液的步骤包括：将剪碎的肿瘤与缓冲液混合进行匀浆，而后离心得到上清液；优选地，形成所述肿瘤提取液的步骤包括：将剪碎的肿瘤与磷酸缓冲液按照0.2～0.5g肿瘤/1毫升的比例混合，而后进行多次匀浆，再离心，收集上清液。5.根据权利要求2-4任一项所述的修复型巨噬细胞，其特征在于，所述肿瘤包括骨肉瘤、黑色素瘤、小鼠结肠腺癌和小鼠乳腺癌中的任意一种。6.根据权利要求1所述的修复型巨噬细胞，其特征在于，所述单核细胞和所述巨噬细胞均为从正常组织得到的细胞；优选地，所述单核细胞和所述巨噬细胞均来源哺乳动物，优选地，所述单核细胞来源于骨髓单核细胞或外周血单核细胞；所述巨噬细胞来源于骨髓巨噬细胞或腹腔巨噬细胞。7.根据权利要求1所述的修复型巨噬细胞，其特征在于，每毫升tams的培养液对应添加0.25
×
107～1
×
107个单核细胞或0.25
×
107～1
×
107个巨噬细胞；每毫升肿瘤提取液对应添加0.25
×
107～1
×
107个单核细胞或0.25
×
107～1
×
107个巨噬细胞；优选地，培养所述单核细胞或所述巨噬细胞的步骤包括：将所述单核细胞或所述巨噬细胞接种至含有tams的培养液的第一接种培养基或含有肿瘤提取液的第二接种培养基中，在37～38℃的条件下培养36-50小时；优选地，tams的培养液在所述第一接种培养基中的体积浓度为15-25％；优选地，所述肿瘤提取液在所述第二接种培养基中的浓度为20-40μg/ml。8.一种培养液，其特征在于，其通过培养权利要求1-7任一项所述的修复型巨噬细胞得到。9.一种权利要求1所述的修复型巨噬细胞或权利要求8所述的培养液在制备以下任意
一种制剂中的应用；(1)诱导未极化的巨噬细胞向抑炎表型转变的诱导制剂；(2)促进血管新生的修复剂；(3)诱导成纤维细胞活化的活化剂；(4)促进胶原沉积的制剂。10.一种权利要求1所述的修复型巨噬细胞在制备促进皮肤创面愈合的药物中的应用；优选地，所述药物为促进糖尿病创面愈合的药物。

技术总结
本发明涉及免疫学、细胞生物学和再生医学交叉技术领域，具体而言，涉及修复型巨噬细胞、培养液及其应用。修复型巨噬细胞利用TAMs的培养液或肿瘤提取液培养单核细胞或巨噬细胞得到。该修复型巨噬细胞具备很好的促进创伤愈合的功能。的功能。的功能。


技术研发人员：王春明 母若雨 张哲
受保护的技术使用者：澳门大学
技术研发日：2021.08.11
技术公布日：2023/2/17