一种胃泌素17血液样本的保护剂的制作方法

1.本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种胃泌素17血液样本的保护剂。


背景技术：

2.在自然人群中推行早期胃癌筛查并在高危人群中进行进一步的内镜精查 策略，是改变严峻的胃癌诊治形势行之有效的途径。因此，中国早期胃癌筛 查流程专家共识意见(草案)(2017年，上海)提出了一种新型的胃癌筛查评分 系统，在该评分系统中，年龄、性别、幽门螺杆菌(hp)抗体、胃蛋白酶原 (pg)和胃泌素17(g-17)共5项变量被赋予了不同的分值(权重)，用 于综合评估目标人群胃癌的风险高低。根据评分的高低采取不同的措施，如 对胃癌发生风险高的人群采取内镜精查策略，从而提高早期胃癌诊断率；对 相对低风险人群采取适合的随访策略，达到节约医疗资源的目的。
3.胃泌素17是评分系统中一个重要的标志物，但是，由于胃泌素17样本 不稳定，给临床使用带来了极大的困扰。刘志敏等的研究显示，与即刻检测 结果比较，2h、4h、8h、24h分离血清检测的结果均有明显的下降趋势，下 降百分率分别为：17.03％、32.53％、52.06％、64.52％，分离血清组在室温和4℃ 保存条件下有下降的趋势，-20℃、-70℃保存和添加稳定剂组4天内的结果 未见明显的变化(p》0.05)(刘志敏,周海青,李静.不同分离时间和保存方 法对胃泌素-17测定的影响[j].实验与检验医学,2017,035(005):717-718.)。 麦涛等的研究显示，胃泌素17在离体后即开始降解，其降解速度大概成抛物 线型。在室温25℃和37℃的保存时间仅为4小时和2.5小时(麦涛,唐义斌,王 加强,等.血清样本保存温度和时间对胃泌素-17检测结果的影响[j].实用医院 临床杂志,2018,015(002):26-29.)。
[0004]
胃泌素17是一种由17个氨基酸组成的小分子多肽，血液离体之后胃泌 素17即开始降解，如果样本不能及时进行检测，检测结果将不准确，进而影 响到新型胃癌评分系统的准确性，从而增加误诊的风险。
[0005]
为了尽量降低胃泌素17离体后的降解幅度，biohit公司的胃泌素17检测 试剂盒说明书规定，血清采集后在室温(20-25℃)中放置不应超过30分钟， 如果于碎冰浴中凝结不应超过60分钟。血清凝结后或血浆应在3小时内用离 心方法分离后完成检测。新产业公司说明书要求，血样凝结在室温(20-25℃) 中不应超过30分钟，如果于碎冰浴中凝结不应超过60分钟。血样凝结后置 于冷冻离心机中进行离心，得到的血清立即检测；如暂时不能检测，最好将 血样等分并冻至-20℃或以下。要求血液离体后3小时内完成离心并检测，条 件过于苛刻，在很多中小医院实际操作过程中实现不了。要求客户使用冷冻 离心机进行离心，只能减少离心过程中胃泌素17的降解，无法解决离心前以 及离心后胃泌素17的降解问题。
[0006]
为解决胃泌素17的降解问题，biohit公司推荐在离心后得到的血清或血 浆中添加一定比例的样本稳定剂，添加稳定剂后胃泌素17的保存时间可以由 3h延长到72h。根据biohit公司之前申请的专利(cn1950398a-肽的稳定) 及相关文献可知，其提供的胃泌素17
稳定剂的成分为二甲基亚砜(dmso), 但dmso仅能添加在离心后的血清或血浆中。刘志敏等的研究显示，dmso 不能添加到全血中，会导致严重的溶血并影响检测结果。而且在血浆加入稳 定剂后只能在室温保存，不能在2-8℃度或-20℃以下保存，因为会析出白色 絮状沉淀(刘志敏,周海青,李静.不同分离时间和保存方法对胃泌素-17测定 的影响[j].实验与检验医学,2017,035(005):717-718)。此外，dmso有一定 的毒性，对人体皮肤有渗透性，对眼有刺激作用，对使用人员存在一定的安 全隐患。
[0007]
目前，已上市的胃泌素17检测试剂尚无法很好地解决胃泌素17离体后 降解的问题，即便biohit公司已经提供了一种dmso样本稳定剂，但其实际 应用效果并不理想。临床上亟需一种更好的胃泌素17样本稳定剂，解决胃泌 素17的降解问题，从而保障胃泌素17检测结果的准确性。


技术实现要素：

[0008]
有鉴于此，本发明提供了一种胃泌素17血液样本的保护剂。该保护剂能 够有效地避免血液样本中胃泌素17的降解，大大延长样本的保存时间，从而 保证了检测结果的准确性。
[0009]
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0010]
本发明提供一种胃泌素17血液样本的保护剂，包括稳定剂、防腐剂和水； 所述稳定剂为2-二(2-羟乙基)氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇和/或1,3-双[(三羟甲基) 甲基氨基]丙烷；所述稳定剂的浓度为0.5-1mol/l。
[0011]
本发明提供的保护剂以2-二(2-羟乙基)氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇和/或 1,3-双[(三羟甲基)甲基氨基]丙烷作为稳定剂，可有效地避免胃泌素17的降解， 大大延长胃泌素17血液样本的保存时间，从而保证检测结果的准确性。
[0012]
一些具体实施例中，所述稳定剂的浓度为0.5mol/l或1mol/l。
[0013]
一些实施方案中，所述防腐剂占所述保护剂的体积百分比为0.2-1％。
[0014]
一些实施方案中，所述防腐剂包括proclin 300和/或mit。一些具体实施 例中，所述防腐剂由proclin 300和mit组成；所述proclin 300的体积百分含 量为0.2％，mit的体积百分含量为0.2％。
[0015]
本发明中，所述血液样本为血浆、血清或全血。
[0016]
本发明还提供一种胃泌素血液样本的保存方法，利用本发明所述的保护 剂保存胃泌素17血液样本。
[0017]
本发明还提供一种采血管，包括管体、胶塞、外帽和本发明所述的保护 剂。在一些具体实施例中，所述管体为试管，所述采血管包括试管1，在试管 1开口处设置有密封胶塞2和塑料外帽3，试管1内预充有胃泌素17血液样 本的保护剂4(如图1所示)，可有效防止胃泌素17的降解，延长血清或血 浆样本的保存时间。本发明保护剂4的形式没有特殊限制，可以是液体形式， 也可以使用真空冷冻干燥机进行冻干处理得到冻干饼，再使用匀质机处理冻 干饼得到均匀的粉状物。也可以直接称量采血管血量的0.1-1％(w/v)重量的 稳定剂的固体成分，做成采血管，但该操作比较较为繁琐，而且需要的稳定 剂添加量较小，不方便操作。
[0018]
采血管的试管1可采用玻璃或塑料材质制成，密封胶塞可采用丁基橡胶 制成。
3002ml，mit 2ml，充分搅拌均匀，分装成10ml每瓶，室温保存备用。
[0036]
实施例5本发明提供的含有胃泌素17保护剂的采血管的制备方法
[0037]
第一步，按实施例1-4制备保护剂。
[0038]
第二步，清洗试管1内壁，在超净台无菌工作环境下将保护剂4加入试 管1底部，加入量为采血管血量的5-10％(w/v)；
[0039]
第三步，按照采血管的计量进行抽真空处理，然后将密封胶塞2和塑料 外帽3组装好，成品采血管结构如图1所示。
[0040]
对比例1胃泌素17保护剂的制备方法
[0041]
用量筒量取纯化水1000ml，依次加入1,3-双[(三羟甲基)甲基氨基]丙烷 70.58g，防腐剂proclin 3002ml，mit 2ml，充分搅拌均匀，分装成10ml每瓶， 室温保存备用。
[0042]
对比例2胃泌素17保护剂的制备方法
[0043]
以dmso为保护剂，阴凉干燥处避光保存。
[0044]
对比例3胃泌素17保护剂的制备方法
[0045]
量取纯化水1000ml，依次加入nah2po4·
2h2o 0.59g、na2hpo4·
12h2o5.8g、nacl 9g、酪蛋白10g、十二烷基硫酸钠20g、抑肽酶2g、proclin3001ml，搅拌直至混合溶液澄清透明。
[0046]
测试例1本发明胃泌素17保护剂的稳定效果考核
[0047]
考核普通采血管分离的血清样本、在离心分离后血清/血浆中添加实施例 1的样本、在全血中添加实施例1的血清样本的保存时间，分别在0h、3h、 4h、1天、3天、5天、7天的时间点，使用安图生物的胃泌素17检测试剂盒 (磁微粒化学发光法)在autolumoa2000上对样本进行检测，考核2-8℃保 存条件下的样本稳定性，结果见表1。
[0048]
表1 2-8℃条件下胃泌素17保护剂的稳定效果(样本)
[0049][0050][0051]
在胃泌素17质控品中添加实施例4，考核胃泌素17质控品复溶后保存时 间，分别在0h、3h、4h、1天、3天、5天、7天的时间点，使用安图生物的 胃泌素17检测试剂盒(磁微粒化学发光法)在autolumoa2000上对质控品 进行检测，考核2-8℃保存条件下的质控品稳定性，结果见表2。
[0052]
表2 2-8℃条件下胃泌素17保护剂的稳定效果(质控品)
[0053][0054]
由表1及表2的实验数据可以看出，使用本发明专利所述的保护剂，g-17 样本可以在2-8℃至少稳定保存7天，降幅小于10％；g-17质控品复溶后也 可在2-8℃至少稳定保存7天，降幅小于10％。
[0055]
考核普通的采血管分离的血清样本(对照)、在离心分离后血清/血浆中 添加实施例2、实施例3和对比例1，对比例2，对比例3的胃泌素17血液样 本的保存时间，分别在0h、3h、4h、1天、3天、5天、7天的时间点，使用 安图生物的胃泌素17检测试剂盒(磁微粒化学发光法)在autolumoa2000 上对样本进行检测，考核2-8℃保存条件下的样本稳定性，结果见表3。
[0056]
表3 2-8℃条件下不同胃泌素17保护剂的稳定效果
[0057][0058][0059]
由表3的实验数据可以看出，使用本发明专利所述的保护剂，g-17样本 可以在2-8℃至少稳定保存7天，降幅小于10％；使用比对例1保护剂，g-17 样本仅可以在2-8℃稳定保存3小时，降幅小于10％；使用比对例2保护剂， g-17样本仅可以在2-8℃稳定保存3天，降幅小于10％；使用比对例3保护 剂，g-17样本仅可以在2-8℃稳定保存3小时，降幅小于10％。
[0060]
测试例2本发明提供的含有胃泌素17保护剂的采血管的样本稳定性考核
[0061]
使用含本发明实施例5的采血管(含保护剂5％)和常规的普通管采血管 同时进行
血样处理，共考核10例样本。使用安图生物的胃泌素17检测试剂 盒(磁微粒化学发光法)在autolumoa2000上对样本进行检测。抽血后均上 下颠倒8-10次，置于37℃温箱放置30分钟，取出后在4000转/分钟的转速下 离心10分钟；离心后置于2-8℃保存。分别在0h、3h、4h、1天、3天、5天、 7天、14天的时间点，使用安图生物胃泌素17检测试剂盒(磁微粒化学发光 法)对样本进行检测，考核两种采血管在2-8℃保存条件下的样本稳定性，结 果见表4和表5。
[0062]
表4 2-8℃条件下本发明专利采血管样本保存时间
[0063][0064]
[0065]
表5 2-8℃条件下常规普通管采血管样本保存时间
[0066][0067][0068]
由表4和表5的实验数据可以看出，使用本发明专利所述的含有胃泌 素17样本保护剂的采血管，g-17样本可以在2-8℃稳定保存7天，降幅小于 10％。而使用常规的普通管采血管，g-17样本在2-8℃保存1天后，g-17样 本可以在2-8℃稳定仅能保存3h，1天后降幅已超过25％。
[0069]
测试例3保护剂对检测结果的影响考核
[0070]
使用本发明所述保护剂，使用安图生物的胃泌素17检测试剂盒(磁微粒 化学发光
法)在autolumoa2000上对样本进行检测，考核添加保护剂对样本 检测结果的影响，结果见表6及表7。
[0071]
表6保护剂对检测结果的影响(实施例1)
[0072][0073][0074]
表7保护剂对检测结果的影响(实施例2和3)
[0075]
样本编号p6p7p8p9p10普通采血管血清99.4146.0026.6233.129.55含5％实施例2血清98.2242.042733.279.08偏倚-1.20％-8.61％1.43％0.45％-4.92％含5％实施例3血清96.144.5525.6232.799.74偏倚3.44％3.25％3.90％1.01％-1.95％
[0076]
由表6及表7的实验数据可以看出，使用本发明专利所述的保护剂，对 样本检测结果的影响偏差在10％以内，保护剂对检测结果无影响。
[0077]
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技 术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰， 这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。