一种头孢克洛干混悬剂的溶出度检测方法与流程

1.本发明属于药物分析技术领域，具体涉及头孢克洛干混悬剂的溶出度检测方法。


背景技术：

2.头孢克洛(cefaclor)，化学名(6r,7r)-7-[(r)-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-3-氯-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸一水合物，化学式为c
15h14
cln3o4s
·
h2o，其结构式如下：
[0003][0004]
头孢克洛为广谱半合成头孢菌素类抗生素，属于第二代头孢类，通过抑制细菌细胞壁的合成发挥作用。其对产青霉素酶金黄色葡萄球菌、a组溶血性链球菌、草绿色链球菌和表皮葡萄球菌的活性与头孢羟氨苄相同，对不产酶金黄色葡萄球菌和肺炎球菌的抗菌作用较头孢羟氨苄强2～4倍，对革兰阴性杆菌包括对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌等的活性较头孢氨苄强，与头孢羟氨苄相仿，对奇异变形杆菌、沙门菌属和志贺菌属的活性较头孢羟氨苄强。2.9～8mg/l的本品可抑制所有流感嗜血杆菌，包括对氨苄西林耐药的菌株。头孢克洛干混悬剂主要适用于敏感菌所致的呼吸系统、泌尿系统、耳鼻喉科及皮肤、软组织感染等。
[0005]
发明人在研究中发现本品在ph6.8磷酸盐缓冲液介质溶出样品稳定性较差，室温(25℃)下紫外检测吸光度随即持续下降，不利于本品在ph6.8磷酸盐缓冲液介质下溶出曲线的准确测量。同时通过对头孢克洛相关产品溶出文献检索，发现当前并无相关文献资料报道。


技术实现要素：

[0006]
本发明的目的是提供一种头孢克洛干混悬剂在ph6.8介质中的溶出度检测方法，包括以下步骤：
[0007]
s1.对照品用ph6.8介质溶解后置36℃-38℃水浴中第一时间t1，取出后用酸性溶液稀释制成对照品溶液；取供试品于溶出杯中，采用中国药典2020年版第四部通则0931第二法，置于ph6.8介质中进行溶出处理，经第二时间t2取溶出液过滤，再用酸性溶液稀释，制成供试品溶液；其中，t1≤60min、t2≤60min；
[0008]
s2.采用紫外-可见分光光度法检测进行检测。
[0009]
作为实施方式之一，当t2《t1时，供试品溶液的制备在所述经t2时间取溶出液过滤和所述用酸性溶液稀释之间还包括以下步骤：将续滤液置于36℃-38℃水浴中，经第三时间t3后取出，其中，t1＝30-60min、5min≤t2《60min、t3 t2＝t1。
[0010]
作为实施方式之一，所述ph6.8介质的配制方法为将0.2mol/l磷酸二氢钾溶液250ml和0.2mol/l氢氧化钠溶液112.0ml混合后，用水稀释至1000ml。
[0011]
作为实施方式之一，步骤s1中所述酸性溶液为盐酸、醋酸、磷酸或柠檬酸溶液，优选稀盐酸。
[0012]
作为实施方式之一，所述酸性溶液的浓度不大于0.1mol/l。
[0013]
作为实施方式之一，步骤s1中所述水浴温度为37℃。
[0014]
作为实施方式之一，步骤s1中所述t1为30min，所述t2和t3均为15min。
[0015]
作为实施方式之一，所述溶出处理的转速为50r/min。
[0016]
作为实施方式之一，步骤s1中用酸性溶液进行稀释的时间优选为在从水浴中取出后的10分钟内。如不及时用酸性溶液进行稀释，样品会发生降解，导致测定结果不准。
[0017]
在检测ph6.8介质溶出曲线或溶出度时，以溶出介质直接稀释后检测，供试品溶液和对照品溶液稳定性较差，紫外检测10分钟吸光度已下降超2％，造成难以准确检测本品在ph6.8介质中的溶出结果。本发明人通过研究创造性的将该介质配制的对照品储备液及溶出液置于36℃-38℃水浴后，再于10分钟内用0.01m盐酸稀释，可满足本品ph6.8介质溶出度或溶出曲线的评价要求。同时本方法无需额外引入对照品、计算方法等，简便、易行，快捷，准确度、精密度好，工作中实用性较好。
附图说明
[0018]
图1为对照品溶液的全波长扫描结果。
[0019]
图2为线性试验结果。
具体实施方式
[0020]
下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明的简单改进都属于本发明要求保护的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。以下实验中“约”的含义遵从中国药典凡例，即取用量时“约”若干时，系指取用量不得超过规定量的
±
10％。
[0021]
以下实施例所采用的材料及设备如下：
[0022]
头孢克洛对照品：国家食品药品鉴定研究院
[0023]
可见-紫外分光光度计：赛默飞evolution 201
[0024]
溶出仪：天大天发rc12ad，rzq-12d自动取样溶出系统；
[0025]
富科思fadt-801rc，fadt-801qy自动取样溶出系统。
[0026]
ph6.8磷酸盐溶液(即溶出介质)的配制方法为：将0.2mol/l磷酸二氢钾溶液250ml和0.2mol/l氢氧化钠溶液112.0ml混合后，用水稀释至1000ml。
[0027]
实施例1
–
本品在ph6.8磷酸盐溶液中供试品溶液稳定性考察
[0028]
对照品溶液制备：取头孢克洛对照品适量(相当于头孢克洛13.3mg)，置100ml量瓶中，加适量溶出介质，轻摇瓶身至底部无结块，超声5min，加相应介质溶解并稀释至刻度，摇匀，37℃
±
1℃水浴中放置30min，得对照品母液。精密移取母液15ml置100ml量瓶中，用0.01m盐酸稀释至刻度，摇匀即得。
[0029]
供试品溶液制备：取本品5瓶，将内容物混合均匀，称取细粉3.125g(相当于头孢克
洛，按c
15h14
cln3o4s计125mg)置溶出杯中，按照溶出度与释放度测定法(中国药典2020年版四部通则0931第二法桨法)测定，以ph6.8磷酸盐溶液900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，经30min手动取样80ml，经0.45μm、25mm水系微孔滤膜过滤，得供试品母液，从中精密移取母液15ml置100ml量瓶中，用0.01m盐酸稀释至刻度，摇匀即得。
[0030]
稳定性考察溶液1制备(未加0.01m盐酸溶液)：取40ml供试品母液、对照品溶液母液于25℃放置，分别于0、5、10、15、20、30分钟，精密移取3ml置20ml量瓶中，用0.01m盐酸稀释至刻度，摇匀即得，分别测定吸光度。
[0031]
稳定性考察溶液2制备(加0.01m盐酸溶液)：取供试品溶液、对照品溶液于25℃放置，分别于0、5、10、15、20、30、45、60、90、120分钟测定吸光度。
[0032]
吸光度测定：以最大吸收波长为测定波长(263nm)，照紫外-可见分光光度法(中国药典2020年版第四部通则0401)，测定吸光度，结果如表5-表8所示：
[0033]
表5.供试品溶液稳定性实验结果(未加0.01m盐酸溶液)
[0034]
时间(min)0510152030rsd％吸光度0.4500.4410.4380.4370.4330.4301.6
[0035]
表6.对照品溶液稳定性实验结果(未加0.01m盐酸溶液)
[0036]
时间(min)0510152030rsd％吸光度0.4280.4120.4100.4060.4050.4022.3
[0037]
表7.供试品溶液稳定性实验结果(加0.01m盐酸溶液)
[0038]
时间(min)0510152030456090120rsd％吸光度0.4500.4500.4500.4500.4520.4510.4530.4540.4530.4590.6
[0039]
表8.对照品溶液稳定性实验结果(加0.01m盐酸溶液)
[0040]
时间(min)0510152030456090120rsd％吸光度0.4280.4310.4300.4310.4300.4310.4360.4370.4350.4441.1
[0041]
结果表明：未加0.01m盐酸的供试品及对照品溶液的稳定性均较差，5min时吸光度均已出现明显下降且随着放置时间的延长吸光度持续下降，对照品溶液在30min时，rsd已经超过2％；而加了0.01m盐酸的供试品及对照品溶液的稳定性均较好，120min内的rsd均未超过2％。从以上实验结果可以得知，用0.01m盐酸稀释可提高样品溶液的稳定性，可满足本品ph6.8介质溶出度或溶出曲线的评价要求。因此，在25℃下，ph6.8磷酸盐溶液中，对照品溶液应在10分钟内加0.01m盐酸溶液稀释，并在120分钟内测定完毕；供试品溶液应在10分钟内加0.01m盐酸溶液稀释，并在120分钟内测定完毕。
[0042]
实施例2-本品在ph6.8磷酸盐溶液中专属性
[0043]
空白辅料溶液：称取6份，每份按处方配比称取空白辅料(约319mg)，置100ml量瓶中，加适量溶出介质，轻摇瓶身至底部无结块，超声5min，加ph6.8磷酸盐溶液溶解并稀释至刻度，置37℃
±
1℃水浴中30min，摇匀，过滤，精密移取续滤液3ml置20ml量瓶中，用0.01m盐酸稀释至刻度，摇匀即得。
[0044]
对照品 空白辅料溶液：称取6份，每份按处方配比称取空白辅料(约319mg)和工作对照品(相当于头孢克洛13.3mg)，置100ml量瓶中，加适量溶出介质，轻摇瓶身至底部无结块，超声5min，加溶出介质溶解并稀释至刻度，置37℃
±
1℃水浴中30min，摇匀，过滤，精密
移取续滤液3ml置20ml量瓶中，用0.01m盐酸稀释至刻度，摇匀即得。
[0045]
对照品溶液：称取头孢克洛工作对照品14mg(相当于头孢克洛13.3mg)，置100ml量瓶中，加适量溶出介质，轻摇瓶身至底部无结块，超声5min，加溶出介质溶解并稀释至刻度，置37℃
±
1℃水浴中30min，摇匀，精密移取3ml置20ml量瓶中，用0.01m盐酸稀释至刻度，摇匀即得。测定方法和结果：于200～400nm处扫描各溶液1次，扫描结果见图1。结果表明：ph6.8磷酸盐溶液中，对照品 空白辅料溶液及对照品溶液的最大吸收波长为263nm，空白辅料对供试品溶液及对照品溶液测定无干扰。
[0046]
实施例3
–
本品在ph6.8磷酸盐溶液中的线性与范围
[0047]
溶液配制：精密称取头孢克洛工作对照品14mg(相当于头孢克洛13.3mg)，置100ml量瓶中，加适量溶出介质，轻摇瓶身至底部无结块，超声5min，加入相应介质溶解并定容至刻度，于37℃
±
1℃水浴中放置30min，作为对照品母液，按下表10精密移取该母液进行稀释，即得各线性溶液。
[0048]
表9.线性溶液配制
[0049]
范围稀释方法浓度(μg/ml)160％取母液4.8ml，加0.01m盐酸稀释至20ml，摇匀即得。32120％取母液4.5ml，加0.01m盐酸稀释至25ml，摇匀即得。24100％取母液3ml，加0.01m盐酸稀释至20ml，摇匀即得。2080％取母液3ml，加0.01m盐酸稀释至25ml，摇匀即得。1640％取母液3ml，加0.01m盐酸稀释至50ml，摇匀即得。8
[0050]
吸光度测定：以最大吸收波长为测定波长(263nm)，照紫外-可见分光光度法(中国药典2020年版第四部通则0401)，测定各线性溶液的吸光度，结果如表10所示；以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，进行线性回归。
[0051]
表10.ph6.8磷酸盐溶液介质线性和范围结果
[0052][0053][0054]
结果表明：ph6.8磷酸盐溶液介质中，头孢克洛溶液在浓度7.981μg/ml～31.922μg/ml的范围与吸收值呈良好的线性关系，线性方程：y＝0.0215x-0.0040，相关系数r＝1.0000，参见图2。
[0055]
实施例4
–
本品在ph6.8磷酸盐溶液中的准确度
[0056]
对照品溶液：精密称取头孢克洛对照品14mg(相当于头孢克洛13.3mg)，置100ml量瓶中，加适量溶出介质，轻摇瓶身至底部无结块，超声5min，加入相应介质溶解并定容至刻度，于37℃
±
1℃水浴中放置30min，精密量3ml置20ml量瓶中，用0.01m盐酸溶液稀释至刻度，摇匀即得。
[0057]
供试品溶液：精密称取头孢克洛对照品(相当于头孢克洛10.6、13.3、16mg)置100ml量瓶中，加入处方配比剂量的空白辅料319mg(相当于头孢克洛13.3mg)，加适量溶出介质，轻摇瓶身至底部无结块，超声5min，加入相应介质溶解并定容至刻度，摇匀，于37℃
±
1℃水浴中放置30min，过滤，精密量取续滤液3ml置20ml量瓶中，用0.01m盐酸溶液稀释至刻度，摇匀即得。
[0058]
吸光度测定：以最大吸收波长为测定波长(263nm)，照紫外-可见分光光度法(中国药典2020年版第四部通则0401)，测定相应介质的对照品溶液和供试品溶液的吸光度，计算溶出量。结果如表11所示：
[0059]
表11.ph6.8磷酸盐溶液介质准确度实验结果
[0060][0061]
结果表明：本方法准确度较高。
[0062]
实施例5-本品在ph6.8磷酸盐溶液中精密度
[0063]
对照品溶液：精密称取头孢克洛对照品14mg(相当于头孢克洛13.3mg)，置100ml量瓶中，加适量溶出介质，轻摇瓶身至底部无结块，超声5min，加入相应介质溶解并定容至刻度，于37℃
±
1℃水浴中放置30min，精密量3ml置20ml量瓶中，用0.01m盐酸溶液稀释至刻度，摇匀即得。
[0064]
供试品溶液：取本品内容物，称取细粉3.125g(相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计125mg)置溶出杯中，按照溶出度与释放度测定法(中国药典2020年版四部通则0931第二法桨法)测定，以ph6.8磷酸盐溶液900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，经15min手动取样30ml，经0.45μm、25mm水系微孔滤膜过滤，于37℃
±
1℃水浴中放置15min，取出，精密移取续滤液6份，每份3ml置20ml量瓶中，用0.01m盐酸溶液稀释至刻度，摇匀即得。
[0065]
吸光度测定：以最大吸收波长为测定波长(263nm)，照紫外-可见分光光度法(中国药典2020年版第四部通则0401)，测定相应介质的对照品溶液和供试品溶液的吸光度，计算溶出量。
[0066]
以两个分析员于不同天采用不同的仪器分别独立操作，结果如表12-13所示。
[0067]
表12实施例5的测量结果
[0068][0069]
结果表明：本方法精密度度较高。
[0070]
实施例6
–
本品在ph6.8磷酸盐溶液中的耐用性
[0071]
对照品溶液制备：取头孢克洛对照品适量，置100ml量瓶中，加ph6.8磷酸盐溶液溶解并稀释至刻度，置水浴中t1时间，摇匀，精密量取3ml置20ml量瓶中，用酸性溶液稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含头孢克洛(按c
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cln3o4s计)20μg的溶液。
[0072]
供试品溶液制备：取本品内容物，称取细粉3.125g(相当于头孢克洛，按c
15h14
cln3o4s计125mg)置溶出杯中，按照，按照溶出度与释放度测定法(中国药典2020年版四部通则0931第二法桨法)测定，以ph6.8磷酸盐溶液900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，经t2时间，取溶出液适量，滤过，取续滤液于水浴中放置t3时间，取出，精密移取续滤液3ml置20ml量瓶中，用酸性溶液稀释至刻度，摇匀即得。
[0073]
以最大吸收波长为测定波长(263nm)，照紫外-可见分光光度法(中国药典2020年版第四部通则0401)，通过改变一些试验条件测定相应介质的对照品溶液和供试品溶液的吸光度，计算溶出量。
[0074]
表13.实施例6测量结果
[0075][0076]
通过以上实验可知，在试验条件稍有改变的情况下，本方法的测量结果与标准条件相比差值很小，说明本方法具有很好的耐用性。
[0077]
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。