一种用于培养MDCK细胞及扩增病毒的组合培养基及其应用的制作方法

技术特征：
1.一种用于扩增病毒的组合培养基，其特征在于，包括：用于贴壁培养mdck细胞的培养基；病毒维持液；其中，所述用于贴壁培养mdck细胞的培养基包括：mem培养基；3~5体积%的血清；添加剂，所述添加剂包括：65.2重量份的l-丙氨酸；55.384重量份的l-盐酸精氨酸；11.08重量份的l-天门冬氨酸；27.04重量份的l-门冬酰胺；13重量份的l-半胱氨酸盐酸盐一水合物；20重量份的l-胱氨酸二盐酸盐；75.944重量份的l-谷氨酸；105.784重量份的l-谷氨酰胺；36.928重量份的甘氨酸；5.704重量份的l-盐酸组氨酸一水合物；22.4重量份的l-羟脯氨酸；15.92重量份的l-异亮氨酸；20.4重量份的l-亮氨酸；21.472重量份的l-盐酸赖氨酸；12.944重量份的l-甲硫氨酸；7.872重量份的l-苯丙氨酸；40.424重量份的l-脯氨酸；39.184重量份的l-丝氨酸；6.224重量份的l-苏氨酸；4.144重量份的l-色氨酸；14.44重量份的l-缬氨酸；695.2重量份的丙氨酰谷氨酰胺；83重量份的丙酮酸钠；960重量份的hepes；640重量份的大豆水解物；640重量份的酵母水解物；196.4重量份的无水磷酸氢二钠；1590.384重量份的d-无水葡萄糖；0.208重量份的还原型谷胱甘肽；0.248重量份的七水硫酸亚铁；0.272重量份的七水硫酸锌；1.2重量份的维生素c；
13.32重量份的氯化胆碱；0.504重量份的d-泛酸钙；0.46重量份的叶酸；13.4424重量份的肌醇；0.02重量份的九水硝酸铁；0.5重量份的氯化锂；2.2重量份的柠檬酸；4重量份的牛磺酸；0.8重量份的重组人胰岛素；4重量份的柠檬酸铁；0.96重量份的乙醇胺；0.84重量份的edta；1.112重量份的烟酰胺；1.0344重量份的维生素b6；0.328重量份的维生素b1；2.552重量份的维生素b12；6.4重量份的无水l-酪氨酸二钠盐；0.00104重量份的五水硫酸铜；33.52重量份的六水氯化镁；0.072重量份的d-生物素；1.432重量份的次黄嘌呤；0.0496重量份的亚油酸；0.168重量份的硫辛酸；0.048重量份的1，4-丁二胺二盐酸盐；0.104重量份的维生素b2；0.312重量份的胸苷；0.208重量份的对氨基苯甲酸；0.00016006重量份的氯化铝；0.000460172重量份的乙酸钡；0.000200075重量份的六水氯化钴；1.6006e-05重量份的四水氯化锰；0.000600224重量份的氟化钠；0.000140052重量份的氯化亚锡；0.000140052重量份的氯化镉；6.00224e-05重量份的二氧化锗；0.004重量份的亚硒酸钠；0.000800299重量份的九水偏硅酸钠；2.00075e-05重量份的氯化镍；4.00149e-05重量份的偏钒酸铵；
5.00e-06重量份的溴化钾；1.6006e-05重量份的碘化钾；8.00e-07重量份的氯化铷；1.00037e-05重量份的钼酸铵；6.00e-07重量份的硝酸银；0.06重量份的腺嘌呤；0.02重量份的盐酸鸟嘌呤；0.01重量份的维生素d2；0.1328重量份的维生素e；0.016重量份的维生素a醋酸酯；0.0024重量份的5-氨基-4-甲酰胺咪唑；0.004重量份的烟酸；0.06重量份的2d-脱氧核糖；0.0008重量份的氢化可的松；0.016184561重量份的肉豆蔻酸；0.016184561重量份的油酸；0.016184561重量份的棕榈酸；0.016184561重量份的硬脂酸；0.0048重量份的egf；0.0024重量份的igf；所述病毒维持液包括：所述用于贴壁培养mdck细胞的培养基且不含有大豆水解物、酵母水解物、egf和igf。2.一种扩增病毒的方法，其特征在于，包括：利用权利要求1所述用于扩增病毒的组合培养基中的用于贴壁培养mdck细胞的培养基，对mdck细胞进行贴壁培养；收集所述培养所得细胞并加入至权利要求1所述用于扩增病毒的组合培养基中的病毒维持液，得到细胞液；将病毒接种于所述细胞液中进行培养，以便对所述病毒进行扩增。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述病毒选自季节性流感病毒。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述季节性流感病毒包括甲型流感病毒h1n1、h3n2、乙型流感病毒by、bv。5.一种制备疫苗的方法，其特征在于，包括：按照权利要求2或3所述的方法扩增病毒。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，进一步包括：将所述扩增病毒所得到的病毒液进行减毒或者灭活处理，以便获得所述疫苗。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述疫苗选自人季节性流感疫苗、禽流感疫苗、猪流感疫苗。8.一种疫苗，其特征在于，所述疫苗是通过权利要求5-7任一项所述制备疫苗的方法获得的。9.权利要求8所述疫苗在制备药物中的用途，其特征在于，所述药物用于治疗或者预防
病毒相关疾病。10.根据权利要求9所述用途，其特征在于，所述病毒相关疾病选自人季节性流感、禽流感或猪流感疫苗。

技术总结
本发明提出了一种用于培养MDCK细胞及扩增病毒的组合培养基及其应用，所述组合培养基包括：用于贴壁培养MDCK细胞的培养基和病毒维持液。利用本发明的用于贴壁培养MDCK细胞的培养基可以更快地完成对MDCK细胞的驯化适应，支持MDCK细胞在固定床生物反应器内高密度贴壁培养，细胞活率高，结团率低，能够在多项指标上获得比血清培养更优异的表现，同时提高被病毒感染能力，有助于病毒感染。感染细胞后的病毒可以在本发明的病毒维持液中有效扩增，提高病毒效价，从而更好地应用于疫苗病毒的扩增生产，提高生产效率。提高生产效率。提高生产效率。


技术研发人员：陈文庆 赵洪磊 徐舸辰 王杰勇 浦勇 类成霞
受保护的技术使用者：天信和（苏州）生物科技有限公司
技术研发日：2022.12.01
技术公布日：2022/12/30