一种孢子悬浮液及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及农业微生物学技术领域，具体涉及一种孢子悬浮液及其制备方法和应用。


背景技术：

2.随着烟草产业的迅速发展及气候环境、作物布局和栽培制度等的改变，我国烟草害虫种类日趋增多，危害程度逐年加重，特别是恩施州的烟草虫害已严重影响我省的烟草生产质量。目前恩施州已发现的虫害主要为斜纹夜蛾、小地老虎等，这大大影响了烟草农业的可持续发展，尤其危害着拥有巨大雪茄烟产业规模的来凤县。化学药剂防治果树害虫易引发农药残留、环境污染、害虫抗药性等问题。如何用真菌对害虫产生致病效果进而实现生物防治是现有技术需要解决的技术问题。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于克服上述技术不足，提供一种孢子悬浮液及其制备方法和应用，解决现有技术中如何用真菌对害虫产生致病效果进而实现生物防治的技术问题。
4.我们了解到的是，白僵蚕用白僵菌孢子粉能够感染蚕蛾科的白僵蚕，但对于能否致病不同科的鳞翅目夜蛾科的斜纹夜蛾不可得知，我们抱着尝试的心态开展了相关技术方案的研究。
5.为达到上述技术目的，本发明的技术方案提供一种孢子悬浮液的制备方法，包括以下步骤：
6.将市售白僵蚕用白僵菌孢子粉在培养基上培养，充分产孢后，用水冲洗，置于振荡器上振荡，之后将孢子用水配制成孢子悬浮液。
7.进一步地，所述培养基为ppda斜面培养基。
8.进一步地，置于所述振荡器上振荡的速度为170-190r/min，所述震荡的时间为15-25min。
9.进一步地，所述孢子悬浮液的浓度为0.5-1.5
×
107ml-1
。
10.此外，本发明还提出一种孢子悬浮液，由上述制备方法制备得到。
11.此外，本发明还提出上述孢子悬浮液在抑制虫斜纹夜蛾中的应用。
12.与现有技术相比，本发明的有益效果包括：利用本发明制得的孢子悬浮液我们惊奇的发现可有效抑制烟草上重要害虫斜纹夜蛾，且杀虫效果特别好。除此之外，孢子悬浮液也对斜纹夜蛾有着很好的防病效果，且孢子悬浮液对烟草无毒害作用，避免化学防治对环境和作物安全的潜在不良影响。
附图说明
13.图1是本发明实施例2中斜纹夜蛾2龄幼虫感染白僵蚕用白僵菌后不同时期的外部症状的照片；
14.图2是本发明实施例2中幼虫感染白僵蚕用白僵菌对斜纹夜蛾2龄幼虫的时间-剂量-死亡率结果图。
具体实施方式
15.本具体实施方式提供一种孢子悬浮液的制备方法，包括以下步骤：
16.将市售白僵蚕用白僵菌孢子粉在为ppda斜面培养基上培养，充分产孢后，用水冲洗，置于振荡器上以150-180r/min的速度振荡20-30min，之后将孢子用水配制成浓度为0.5-1.5
×
107ml-1
的孢子悬浮液。
17.本具体实施方式还提出一种孢子悬浮液，由上述制备方法制备得到。
18.本具体上述方式还包括上述孢子悬浮液在抑制虫斜纹夜蛾中的应用。
19.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
20.下述实施例中，ppda斜面培养基通过取土豆200g切成条状煮30min后滤液，蛋白胨20g，葡萄糖20g，蒸馏水定容至1000ml，自然ph值，灭菌得到。
21.实施例1
22.本实施例提出一种孢子悬浮液，有以下步骤制得：
23.将市售白僵蚕用白僵菌孢子粉在ppda斜面培养基上扩大培养，充分产孢后，用10ml的0.05％tween 80无菌水洗下，置于振荡器上以180r/min振荡20min，血球计数板计数，将各菌株用0.05％tween 80无菌水配制成的孢子悬浮液备用。
24.实施例2
25.孢子悬浮液在抑制虫斜纹夜蛾中的应用：
26.选择饲养了2d的健康成虫作为供试虫。使用微型手动喷雾器，以不同梯度浓度浓度分别为0.5
×
107ml-1
、1.0
×
107ml-1
和1.5
×
107ml-1
的孢子悬浮液以及空白对照(及ck)喷雾法接菌。每个广口瓶装40-50头成虫后，置于喷雾器正下方，垂直喷菌3下。并在广口瓶底部放入血球计数板，以同样的方法模拟接菌，统计单位面积的接菌量。
27.如图1所示，孢子悬浮液对斜纹夜蛾2龄幼虫具有良好的致病性。致死率达到87.65％，lt
50
为6.80d。高浓度的孢子悬浮液比低浓度孢子悬浮液可更早更有效的致使斜纹夜蛾2龄幼虫的死亡，同时，如图2所示，随着接种时间的增长，斜纹夜蛾2龄幼虫的累积死亡率逐步增加。
28.实施例3
29.孢子悬浮液在抑制虫斜纹夜蛾中的应用：
30.试验小区：5个处理，20平方米(20株烟)，形状为长方形(5m
×
4m)，随机排列，小区四周起埂；4次重复。
31.施药方法及用水量(升/公顷)：用matabi super green-16背负式手动喷雾器，按600升/公顷用水量喷雾处理。
32.适宜施药时期和用量：孢子悬浮液用于防除斜纹夜蛾，含孢子量1
×
107孢子ml-1
，于幼虫2-3龄高峰期施药，每株施药量45毫升，对烟叶正反两面均匀喷雾，每公顷施药量750升，以上操作选择无雨天操作，以后正常栽培管理。
33.害虫药效调查方法：共调查5次。调查时间：药前、药后1、5、8、10天分别调查斜纹夜蛾存活虫数一次。逐株逐叶到调查，每小区固定调查30株，记数存活虫数。
34.作物药害调查方法：药剂试验期间，在药后5-10天调查一次烟株叶色、叶片等有无药害症状，每小区查30株，每株查10片叶，若有则详细记录药害症状、药害株率，并记载药害症状减轻或消失时间，以明确试验药剂对烟草的安全性。
35.药效计算方法：
36.虫口减退率＝100％
×
(药前虫数-药后虫数)/药前虫数
37.校正防效＝100％
×
(各处理区虫口减退率-清水对照虫口减退率)/(1-清水对照虫口减退率)
38.利用dps统计分析软件中的duncan新复极差法进行差异显著性分析，分析结果中相同小写字母表示5％水平上差异不显著。
39.孢子悬浮液的防效也比较理想，药后第8天校正防效达到85.3％，具有良好的防除效果，可在烟草种植田推广使用。
40.以上所述本发明的具体实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何根据本发明的技术构思所做出的各种其他相应的改变与变形，均应包含在本发明权利要求的保护范围内。


技术特征：
1.一种孢子悬浮液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将市售白僵蚕用白僵菌孢子粉在培养基上培养，充分产孢后，用水冲洗，置于振荡器上振荡，之后将孢子用水配制成孢子悬浮液。2.根据权利要求1所述的孢子悬浮液的制备方法，其特征在于，所述培养基为ppda斜面培养基。3.根据权利要求1所述的孢子悬浮液的制备方法，其特征在于，置于所述振荡器上振荡的速度为170-190r/min，所述震荡的时间为15-25min。4.根据权利要求1所述的孢子悬浮液的制备方法，其特征在于，所述孢子悬浮液的浓度为0.5-1.5
×
107ml-1
。5.一种孢子悬浮液，其特征在于，由权利要求1-4任一项所述的制备方法制备得到。6.权利要求5所述的孢子悬浮液在抑制虫斜纹夜蛾中的应用。

技术总结
本发明公开一种孢子悬浮液及其制备方法和应用，属于农业微生物学技术领域。该孢子悬浮液的制备方法，包括以下步骤：将市售白僵蚕用白僵菌孢子粉在培养基上培养，充分产孢后，用水冲洗，置于振荡器上振荡，之后将孢子用水配制成孢子悬浮液。本发明还提出一种孢子悬浮液，由上述制备方法制备得到。此外，本发明还提出上述孢子悬浮液在抑制虫斜纹夜蛾中的应用。该孢子悬浮液也对斜纹夜蛾有着很好的抑制效果。果。果。


技术研发人员：夏鹏亮 任晓红 黄勇 宋兴宜 文涛 乔保明
受保护的技术使用者：湖北省烟草公司恩施州公司
技术研发日：2022.11.08
技术公布日：2022/12/30