一种皂角多糖的制备方法与流程

1.本发明属于植物多糖技术领域，具体涉及一种皂角多糖的制备方法。


背景技术：

2.皂角是我国特有的苏木科皂荚属树种之一，其种子长条形而扁，表面不平，红褐色或紫红色，被灰白色粉霜，擦去后有光泽，两端略尖，质坚硬，含有丰富的多糖和蛋白质。皂角还含有多种皂苷，另含非瑟素、黄颜木素、白桦脂酸、白桦醇、木栓酮等成分。皂角可做中药成分，具有开窍祛痰、散结消肿、润燥通便的功效，属涌吐药。
3.从皂角中提取皂苷、三萜酸、皂角黄酮是目前研究的热点，鲜有报道皂角中多糖的提取和利用的报道，皂角质地坚硬，皂角多糖多储存于坚硬的皂角内部，采用传统粉碎，化学萃取的方法提取到的多糖得率太低。皂角多糖的功能也鲜有人研究，余铭等公开了皂角多糖涂膜保鲜甜柿的研究，低温条件下1％皂角多糖溶液涂膜与pe膜包装处理都能明显延缓甜柿果实硬度下降趋势，贮藏60d果实硬度大于8kg/m2，贮藏期间果实类胡萝卜素含量上升，虽然皂角多糖对于甜柿的保鲜效果较好，但是，对于其他水果以及蔬菜，保鲜效果并不佳，需要进一步提高皂角多糖提取物的生物活性。皂角多糖是否还有其他生物学活性，也鲜有报道。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种皂角多糖的制备方法。
5.一种皂角多糖的制备方法，按照如下步骤进行：
6.(1)取成熟干燥的皂角，粉碎，加入打碎的糜子皮，再加入蔗糖、碳酸钙、磷酸二氢钾、硫酸镁、水，配置成原料培养基；将原料培养基高压灭菌；
7.(2)接种灵芝斜面菌种，放置到摇床上进行培养，培养5-10d；
8.(3)取发酵产物，打浆，加入复合酶酶解；
9.(4)将酶解液体过滤除去大的杂质，在1000-3000rpm条件下离心，取上清液，除去上清液中蛋白；
10.(5)将除去蛋白的上清液进行醇沉、冻干，得到皂角粗多糖；
11.(6)将皂角粗多糖通过大孔树脂去除色素，得到皂角多糖。
12.所述原料培养基中组分的重量配比为：皂角25-35％、糜子皮10-20％、蔗糖1-5％、碳酸钙1-3％、磷酸二氢钾0.01-0.05％、硫酸镁0.01-0.05％、余量为水。
13.所述高压灭菌的温度为121℃，时间为20min。
14.所述灵芝菌种的接种量为原料培养基质量的0.1-0.5％。
15.所述复合酶为蛋白酶和纤维素酶，加入量分别为发酵产物重量的0.5-1.5％。
16.所述除去上清液中蛋白的操作步骤为：将上清液与sevage试剂按照体积比4∶1混合，得到混合溶液，将混合溶液充分振摇20-40min，1000-3000rpm离心，去除混合溶液下层有机层和中间蛋白层。
17.所述醇沉步骤中加入无水乙醇的体积为上清液体积的30-70％。
18.上述制备的皂角多糖在水果或蔬菜保鲜方面的应用。
19.上述制备的皂角多糖在制备抗氧化降脂的药物中的应用。
20.本发明的有益效果：本发明制备的皂角多糖，具有良好的水果或蔬菜保鲜功效和抗氧化功效，在制备过程中采用灵芝菌发酵原料的方法，并加入糜子皮作为增效原料，使得制备的皂角多糖生物活性更高。
具体实施方式
21.为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
22.实施例1
23.一种皂角多糖的制备方法，按照如下步骤进行：
24.(1)取成熟干燥的皂角，粉碎，加入打碎的糜子皮，再加入蔗糖、碳酸钙、磷酸二氢钾、硫酸镁、水，配置成原料培养基；将原料培养基高压灭菌；所述原料培养基中组分的重量配比为：皂角30％、糜子皮15％、蔗糖3％、碳酸钙2％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.03％、余量为水；所述高压灭菌的温度为121℃，时间为20min；
25.(2)接种灵芝斜面菌种，放置到摇床上进行培养，培养8d；所述灵芝菌种的接种量为原料培养基质量的0.3％；
26.(3)取发酵产物，打浆，加入复合酶酶解；所述复合酶为蛋白酶和纤维素酶，加入量分别为发酵产物重量的1％；
27.(4)将酶解液体过滤除去大的杂质，在2000rpm条件下离心，取上清液，除去上清液中蛋白；所述除去上清液中蛋白的操作步骤为：将上清液与sevage试剂按照体积比4：1混合，得到混合溶液，将混合溶液充分振摇30min，2000rpm离心，去除混合溶液下层有机层和中间蛋白层；
28.(5)将除去蛋白的上清液进行醇沉、冻干，得到皂角粗多糖；所述醇沉步骤中加入无水乙醇的体积为上清液体积的50％；
29.(6)将皂角粗多糖通过大孔树脂去除色素，得到皂角多糖；具体操作为：使用无水乙醇对大孔树脂进行浸泡清洗，使用蒸馏水对大孔树脂进行清洗溶胀；将皂角粗多糖与所述大孔树脂进行混合形成混合溶液，静态吸附14h，对混合溶液进行抽滤、浓缩，去除色素。
30.实施例2
31.一种皂角多糖的制备方法，按照如下步骤进行：
32.(1)取成熟干燥的皂角，粉碎，加入打碎的糜子皮，再加入蔗糖、碳酸钙、磷酸二氢钾、硫酸镁、水，配置成原料培养基；将原料培养基高压灭菌；所述原料培养基中组分的重量配比为：皂角25％、糜子皮10％、蔗糖2％、碳酸钙1％、磷酸二氢钾0.02％、硫酸镁0.02％、余量为水；所述高压灭菌的温度为121℃，时间为20min；
33.(2)接种灵芝斜面菌种，放置到摇床上进行培养，培养5-10d；所述灵芝菌种的接种量为原料培养基质量的0.1％；
34.(3)取发酵产物，打浆，加入复合酶酶解；所述复合酶为蛋白酶和纤维素酶，加入量
分别为发酵产物重量的0.5％；
35.(4)将酶解液体过滤除去大的杂质，在1000rpm条件下离心，取上清液，除去上清液中蛋白；所述除去上清液中蛋白的操作步骤为：将上清液与sevage试剂按照体积比4：1混合，得到混合溶液，将混合溶液充分振摇20min，1000rpm离心，去除混合溶液下层有机层和中间蛋白层；
36.(5)将除去蛋白的上清液进行醇沉、冻干，得到皂角粗多糖；所述醇沉步骤中加入无水乙醇的体积为上清液体积的30％；
37.(6)将皂角粗多糖通过大孔树脂去除色素，得到皂角多糖；具体操作为：使用无水乙醇对大孔树脂进行浸泡清洗，使用蒸馏水对大孔树脂进行清洗溶胀；将皂角粗多糖与所述大孔树脂进行混合形成混合溶液，静态吸附14h，对混合溶液进行抽滤、浓缩，去除色素。
38.实施例3
39.一种皂角多糖的制备方法，按照如下步骤进行：
40.(1)取成熟干燥的皂角，粉碎，加入打碎的糜子皮，再加入蔗糖、碳酸钙、磷酸二氢钾、硫酸镁、水，配置成原料培养基；将原料培养基高压灭菌；所述原料培养基中组分的重量配比为：皂角35％、糜子皮20％、蔗糖5％、碳酸钙3％、磷酸二氢钾0.05％、硫酸镁0.05％、余量为水；所述高压灭菌的温度为121℃，时间为20min；
41.(2)接种灵芝斜面菌种，放置到摇床上进行培养，培养10d；所述灵芝菌种的接种量为原料培养基质量的0.5％；
42.(3)取发酵产物，打浆，加入复合酶酶解；所述复合酶为蛋白酶和纤维素酶，加入量分别为发酵产物重量的1.5％；
43.(4)将酶解液体过滤除去大的杂质，在3000rpm条件下离心，取上清液，除去上清液中蛋白；所述除去上清液中蛋白的操作步骤为：将上清液与sevage试剂按照体积比4：1混合，得到混合溶液，将混合溶液充分振摇40min，3000rpm离心，去除混合溶液下层有机层和中间蛋白层；
44.(5)将除去蛋白的上清液进行醇沉、冻干，得到皂角粗多糖；所述醇沉步骤中加入无水乙醇的体积为上清液体积的60％；
45.(6)将皂角粗多糖通过大孔树脂去除色素，得到皂角多糖；具体操作为：使用无水乙醇对大孔树脂进行浸泡清洗，使用蒸馏水对大孔树脂进行清洗溶胀；将皂角粗多糖与所述大孔树脂进行混合形成混合溶液，静态吸附14h，对混合溶液进行抽滤、浓缩，去除色素。
46.对比例1
47.一种皂角多糖的制备方法，按照如下步骤进行：
48.(1)取成熟干燥的皂角，粉碎，加入蔗糖、碳酸钙、磷酸二氢钾、硫酸镁、水，配置成原料培养基；将原料培养基高压灭菌；所述原料培养基中组分的重量配比为：皂角45％、蔗糖3％、碳酸钙2％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.03％、余量为水；所述高压灭菌的温度为121℃，时间为20min；
49.(2)接种灵芝斜面菌种，放置到摇床上进行培养，培养8d；所述灵芝菌种的接种量为原料培养基质量的0.3％；
50.(3)取发酵产物，打浆，加入复合酶酶解；所述复合酶为蛋白酶和纤维素酶，加入量分别为发酵产物重量的1％；
51.(4)将酶解液体过滤除去大的杂质，在2000rpm条件下离心，取上清液，除去上清液中蛋白；所述除去上清液中蛋白的操作步骤为：将上清液与sevage试剂按照体积比4：1混合，得到混合溶液，将混合溶液充分振摇30min，2000rpm离心，去除混合溶液下层有机层和中间蛋白层；
52.(5)将除去蛋白的上清液进行醇沉、冻干，得到皂角粗多糖；所述醇沉步骤中加入无水乙醇的体积为上清液体积的50％；
53.(6)将皂角粗多糖通过大孔树脂去除色素，得到皂角多糖；具体操作为：使用无水乙醇对大孔树脂进行浸泡清洗，使用蒸馏水对大孔树脂进行清洗溶胀；将皂角粗多糖与所述大孔树脂进行混合形成混合溶液，静态吸附14h，对混合溶液进行抽滤、浓缩，去除色素。
54.对比例2
55.一种糜子多糖的制备方法，按照如下步骤进行：
56.(1)取糜子皮，粉碎，再加入蔗糖、碳酸钙、磷酸二氢钾、硫酸镁、水，配置成原料培养基；将原料培养基高压灭菌；所述原料培养基中组分的重量配比为：糜子皮45％、蔗糖3％、碳酸钙2％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.03％、余量为水；所述高压灭菌的温度为121℃，时间为20min；
57.(2)接种灵芝斜面菌种，放置到摇床上进行培养，培养8d；所述灵芝菌种的接种量为原料培养基质量的0.3％；
58.(3)取发酵产物，打浆，加入复合酶酶解；所述复合酶为蛋白酶和纤维素酶，加入量分别为发酵产物重量的1％；
59.(4)将酶解液体过滤除去大的杂质，在2000rpm条件下离心，取上清液，除去上清液中蛋白；所述除去上清液中蛋白的操作步骤为：将上清液与sevage试剂按照体积比4：1混合，得到混合溶液，将混合溶液充分振摇30min，2000rpm离心，去除混合溶液下层有机层和中间蛋白层；
60.(5)将除去蛋白的上清液进行醇沉、冻干，得到糜子皮多糖；所述醇沉步骤中加入无水乙醇的体积为上清液体积的50％；
61.(6)将糜子皮粗多糖通过大孔树脂去除色素，得到糜子皮多糖；具体操作为：使用无水乙醇对大孔树脂进行浸泡清洗，使用蒸馏水对大孔树脂进行清洗溶胀；将糜子皮粗多糖与所述大孔树脂进行混合形成混合溶液，静态吸附14h，对混合溶液进行抽滤、浓缩，去除色素。
62.实验例：
63.实验选用成熟度一致的紫金冠茄，采摘当天进行清洗和套保鲜袋处理；将实施例1-3及对比例1-2制备的多糖配置质量浓度为1％的水溶液，进行涂膜处理，手工涂膜后自然晾干，每组处理10个，重复3次。套保鲜袋在4℃条件下储存15d，采用双气路大气采样仪dcy-2测定呼吸强度，对照为只套保鲜袋处理的紫金冠茄，测定结果见表1：
64.表1
[0065][0066][0067]
注：*代表与对照组比较p《0.05，#代表与实施例1比较p《0.05。
[0068]
采用电子分析天平测定储存前和储存后紫金冠茄的重量变化，测定失重百分比：(储存前重量-储存后重量)/储存前重量x100％，测定结果见表2：
[0069]
表2
[0070][0071]
注：*代表与对照组比较p《0.05，#代表与实施例1比较p《0.05。
[0072]
将实施例1-3及对比例1-2制备的多糖配置成5mg/ml的溶液，称取1.2mg dpph粉末溶于15ml无水乙醇中，充分混匀，即得到0.2mmol/l的dpph储备液，避光保存。取100μl样品，再加100μl的dpph储备液，避光反应30min，在517nm下测其吸光度值(a1)。清除能力的计算公式为r％＝(1-(a1-a2)/a0)
×
100％。其中，a2为100μl的样品和100μl的无水乙醇，为样品本底组，a0为100μl的dpph和100μl的50％乙醇，为空白对照组。
[0073]
表3
[0074][0075][0076]
注：*代表与实施例1比较p《0.05。
[0077]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。