一种猫爪草配方颗粒及其制备方法

1.本发明涉及中药新饮片及保健品技术领域，具体涉及一种猫爪草配方颗粒及其制备方法。


背景技术：

2.猫爪草为毛茛科植物小毛茛(ranunculus ternatus thunb.)的干燥块根，猫爪草临床用药具有上千年的历史，其性温，味甘、辛，入肝、肺经，具有化痰散结、解毒消肿等功效，可应用于瘰疬痰核、疔疮肿毒、蛇虫咬伤、肺癌、咽炎的治疗，也可用于颈淋巴结结核、甲状腺肿瘤、淋巴瘤等疾病的治疗。近年来，猫爪草的应用范围是很广的，既可内服也可外敷，甚至可作为食材使用。现代药理研究表明，其能抑制人型结核杆菌的代谢过程而杀痨虫，对肺及项淋巴结核有特殊功效，也能消炎抗肿瘤。诸多试验研究表明，猫爪草主要有效成分有黄酮类、多糖类、微量元素等。猫爪草主要分布于河南、湖北、安徽等地，而信阳不仅是野生猫爪草的发现地，也是国内猫爪草的主要栽培产区，信阳猫爪草的品质较佳，多糖含量较高。经现代研究证实猫爪草多糖具有免疫活性作用、抗氧化、抗肿瘤和保肝作用。
3.目前猫爪草制剂产品比较单一，只有1个国药准字号的猫爪草胶囊产品，因此，研究者纷纷对猫爪草其他产品进行开发，以期填补猫爪草其它剂型或各类型保健品的市场空白，扩大猫爪草的临床应用，方便临床医疗调剂和方便患者使用，也促进猫爪草资源的开发和利用，提高猫爪草的附加值，助力当地中药材产业发展。然而，在猫爪草产品开发过程中，猫爪草提取物中多糖成分的提取率不高，猫爪草提取物干燥困难，干燥时间较长，且干膏收率也较低，不能对猫爪草的有效成分进行充分利用，造成资源浪费。为此，本发明提供一种猫爪草配方颗粒及其制备方法。


技术实现要素：

4.本发明提供了一种猫爪草配方颗粒及其制备方法，有效解决了现有技术中猫爪草多糖提取率较低且干膏收率较低的技术问题，同时提供了一种具有保健功能及方便临床医疗调剂的猫爪草配方颗粒。
5.本发明提供了一种猫爪草配方颗粒的制备方法，包括以下步骤：
6.s1，猫爪草多糖提取：猫爪草饮片粉末溶于水后，加入木聚糖酶进行酶解，再加水进行超声酶解、离心，取上清液，即得猫爪草提取液ⅰ；
7.s2，猫爪草干膏粉的制备：将s1的猫爪草提取液ⅰ减压浓缩后，于70℃喷雾干燥，得到猫爪草干膏粉；
8.s3，猫爪草配方颗粒的制备：将s2的猫爪草干膏粉采用干法制粒，得到猫爪草配方颗粒。
9.优选的，s1中，以猫爪草饮片粉末质量计，所述木聚糖酶的用量为0.3％～0.5％。
10.优选的，s1中，所述木聚糖酶的酶解温度40～60℃，酶解ph值为3～5，酶解时间为20～40min。
11.优选的，s1中，所述超声参数为：超声温度50～70℃，超声功率400～600w，超声时间20～40min。
12.优选的，s1中，所述猫爪草饮片粉末中加入相当于猫爪草2～4倍重量的水；所述再加水的量相当于猫爪草的6～8倍重量。
13.优选的，s1中，离心后，取沉淀物加水，重复s1，得到猫爪草提取液ⅱ，合并所述猫爪草提取液ⅰ和猫爪草提取液ⅱ，得到猫爪草提取液。
14.优选的，所述沉淀物与水的质量比为1:9～12。
15.采用上述猫爪草配方颗粒的制备方法制备得到猫爪草配方颗粒。
16.上述猫爪草配方颗粒在临床医疗调剂及制备保健品中的应用。
17.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
18.(1)本发明提供的猫爪草配方颗粒的制备方法通过对猫爪草采用木聚糖酶协同超声处理的方式进行提取，得到含有多糖成分的猫爪草提取液，浓缩后采用低温喷雾干燥机进行干燥，得到猫爪草干膏粉，有效提高猫爪草多糖提取率和干膏收率，其猫爪草配方颗粒多糖提取率和干膏粉收率可分别高达38.05％和52.13％；制备方法简单，易于操作，适合工厂化生产且市场需求较大。
19.(2)本发明制备的猫爪草配方颗粒未添加任何附加剂，天然绿色，方便临床使用，保健价值高，提高了猫爪草药材的附加值，有效促进了地方的经济发展。
附图说明
20.图1是本发明葡萄糖标准曲线；
21.图2是本发明对比例3、对比例2、实施例3和对比例1不同酶作用下猫爪草多糖提取率结果；
22.图3是本发明对比例3、对比例2、实施例3和对比例1不同酶作用下猫爪草干膏收率结果；
23.图4是本发明实施例2提取得到的猫爪草干膏粉；
24.图5是本发明实施例2制备得到的猫爪草配方颗粒。
具体实施方式
25.为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但所举实施例不作为对本发明的限定。
26.下述试验方法和检测方法，如没有特殊说明，均为常规方法；所述试剂和原料，如没有特殊说明，均为市售。
27.本发明采用的猫爪草药材原料购于淮滨县永康猫爪草种植专业合作社，产品批号：20210120；产地：信阳，并由专业人员鉴定鉴定为毛茛科植物小毛茛干燥块跟。
28.实施例1
29.一种猫爪草配方颗粒的制备方法，包括以下步骤：
30.s1，猫爪草多糖提取：猫爪草饮片粉末溶于水后，加入猫爪草饮片粉末质量0.3％的木聚糖酶进行酶解，再加水进行超声酶解、5000r/min离心25min，取上清液，即得猫爪草提取液ⅰ；
31.所述木聚糖酶的酶解温度40℃，酶解ph值为3，酶解时间为20min；所述超声参数为：超声温度50℃，超声功率400w，超声时间20min；
32.所述猫爪草饮片粉末中加入相当于猫爪草2倍重量的水；所述再加水的量相当于猫爪草饮片粉末6倍的重量；
33.离心后，按照1:9的质量比向沉淀物中加水，重复s1，得到猫爪草提取液ⅱ，合并所述猫爪草提取液ⅰ和猫爪草提取液ⅱ，得到猫爪草提取液。
34.s2，猫爪草干膏粉的制备：将所述猫爪草提取液采用旋转蒸发仪减压浓缩，转速50r/min，温度70℃，浓缩约至1ml相当于原饮片的1.6g，用低温喷雾干燥方法制备猫爪草干膏粉，喷雾干燥机的温度设置为70℃，待达到设定温度时，蠕动泵速度设置为12ml/min，进行喷雾干燥，得到猫爪草干膏粉；
35.s3，猫爪草配方颗粒的制备：将s2的猫爪草干膏粉采用干法制粒，得到猫爪草配方颗粒。
36.实施例2
37.一种猫爪草配方颗粒的制备方法，包括以下步骤：
38.s1，猫爪草多糖提取：猫爪草饮片粉末溶于水后，加入猫爪草饮片粉末质量0.5％的木聚糖酶进行酶解，再加水进行超声酶解、5000r/min离心25min，取上清液，即得猫爪草提取液ⅰ；
39.所述木聚糖酶的酶解温度60℃，酶解ph值为4，酶解时间为30min；所述超声参数为：超声温度60℃，超声功率500w，超声时间20min；
40.所述猫爪草饮片粉末中加入相当于猫爪草3倍重量的水；所述再加水的量相当于猫爪草饮片粉末7倍的重量；
41.离心后，按照1:10的质量比向沉淀物中加水，重复s1，得到猫爪草提取液ⅱ，合并所述猫爪草提取液ⅰ和猫爪草提取液ⅱ，得到猫爪草提取液。
42.s2，猫爪草干膏粉的制备：将所述猫爪草提取液采用旋转蒸发仪减压浓缩，转速50r/min，温度70℃，浓缩约至1ml相当于原饮片的1.6g，用低温喷雾干燥方法制备猫爪草干膏粉，喷雾干燥机的温度设置为70℃，待达到设定温度时，蠕动泵速度设置为12ml/min，进行喷雾干燥，得到猫爪草干膏粉；
43.s3，猫爪草配方颗粒的制备：将s2的猫爪草干膏粉采用干法制粒，得到猫爪草配方颗粒。
44.实施例3
45.一种猫爪草配方颗粒的制备方法，包括以下步骤：
46.s1，猫爪草多糖提取：猫爪草饮片粉末溶于水后，加入猫爪草饮片粉末质量0.4％的木聚糖酶进行酶解，再加水进行超声酶解、5000r/min离心25min，取上清液，即得猫爪草提取液ⅰ；
47.所述木聚糖酶的酶解温度50℃，酶解ph值为5，酶解时间为40min；所述超声参数为：超声温度70℃，超声功率600w，超声时间40min；
48.所述猫爪草饮片粉末中加入相当于猫爪草4倍重量的水；所述再加水的量相当于猫爪草饮片粉末8倍的重量；
49.离心后，按照1:12的质量比向沉淀物中加水，重复s1，得到猫爪草提取液ⅱ，合并
所述猫爪草提取液ⅰ和猫爪草提取液ⅱ，得到猫爪草提取液。
50.s2，猫爪草干膏粉的制备：将所述猫爪草提取液采用旋转蒸发仪减压浓缩，转速50r/min，温度70℃，浓缩约至1ml相当于原饮片的1.6g，用低温喷雾干燥方法制备猫爪草干膏粉，喷雾干燥机的温度设置为70℃，待达到设定温度时，蠕动泵速度设置为12ml/min，进行喷雾干燥，得到猫爪草干膏粉；
51.s3，猫爪草配方颗粒的制备：将s2的猫爪草干膏粉采用干法制粒，得到猫爪草配方颗粒。
52.实施例4
53.一种猫爪草配方颗粒的制备方法，包括以下步骤：
54.s1，猫爪草多糖提取：猫爪草饮片粉末溶于水后，加入猫爪草饮片粉末质量0.3％的木聚糖酶进行酶解，再加水进行超声酶解、5000r/min离心25min，取上清液，即得猫爪草提取液ⅰ；
55.所述木聚糖酶的酶解温度45℃，酶解ph值为4，酶解时间为25min；所述超声参数为：超声温度55℃，超声功率450w，超声时间30min；
56.所述猫爪草饮片粉末中加入相当于猫爪草2倍重量的水；所述再加水的量相当于猫爪草饮片粉末6倍的重量；
57.离心后，按照1:11的质量比向沉淀物中加水，重复s1，得到猫爪草提取液ⅱ，合并所述猫爪草提取液ⅰ和猫爪草提取液ⅱ，得到猫爪草提取液。
58.s2，猫爪草干膏粉的制备：将所述猫爪草提取液采用旋转蒸发仪减压浓缩，转速50r/min，温度70℃，浓缩约至1ml相当于原饮片的1.6g，用低温喷雾干燥方法制备猫爪草干膏粉，喷雾干燥机的温度设置为70℃，待达到设定温度时，蠕动泵速度设置为12ml/min，进行喷雾干燥，得到猫爪草干膏粉；
59.s3，猫爪草配方颗粒的制备：将s2的猫爪草干膏粉采用干法制粒，得到猫爪草配方颗粒。
60.实施例5
61.一种猫爪草配方颗粒的制备方法，包括以下步骤：
62.s1，猫爪草多糖提取：猫爪草饮片粉末溶于水后，加入猫爪草饮片粉末质量0.4％的木聚糖酶进行酶解，再加水进行超声酶解、5000r/min离心25min，取上清液，即得猫爪草提取液ⅰ；
63.所述木聚糖酶的酶解温度55℃，酶解ph值为3，酶解时间为35min；所述超声参数为：超声温度65℃，超声功率550w，超声时间25min；
64.所述猫爪草饮片粉末中加入相当于猫爪草3倍重量的水；所述再加水的量相当于猫爪草饮片粉末8倍的重量；
65.离心后，按照1:9的质量比向沉淀物中加水，重复s1，得到猫爪草提取液ⅱ，合并所述猫爪草提取液ⅰ和猫爪草提取液ⅱ，得到猫爪草提取液。
66.s2，猫爪草干膏粉的制备：将所述猫爪草提取液采用旋转蒸发仪减压浓缩，转速50r/min，温度70℃，浓缩约至1ml相当于原饮片的1.6g，用低温喷雾干燥方法制备猫爪草干膏粉，喷雾干燥机的温度设置为70℃，待达到设定温度时，蠕动泵速度设置为12ml/min，进行喷雾干燥，得到猫爪草干膏粉；
67.s3，猫爪草配方颗粒的制备：将s2的猫爪草干膏粉采用干法制粒，得到猫爪草配方颗粒。
68.实施例6
69.一种猫爪草配方颗粒的制备方法，包括以下步骤：
70.s1，猫爪草多糖提取：猫爪草饮片粉末溶于水后，加入猫爪草饮片粉末质量0.5％的木聚糖酶进行酶解，再加水进行超声酶解、5000r/min离心25min，取上清液，即得猫爪草提取液ⅰ；
71.所述木聚糖酶的酶解温度60℃，酶解ph值为5，酶解时间为22min；所述超声参数为：超声温度58℃，超声功率500w，超声时间35min；
72.所述猫爪草饮片粉末中加入相当于猫爪草3倍重量的水；所述再加水的量相当于猫爪草饮片粉末7倍的重量；
73.离心后，按照1:10的质量比向沉淀物中加水，重复s1，得到猫爪草提取液ⅱ，合并所述猫爪草提取液ⅰ和猫爪草提取液ⅱ，得到猫爪草提取液。
74.s2，猫爪草干膏粉的制备：将所述猫爪草提取液采用旋转蒸发仪减压浓缩，转速50r/min，温度70℃，浓缩约至1ml相当于原饮片的1.6g，用低温喷雾干燥方法制备猫爪草干膏粉，喷雾干燥机的温度设置为70℃，待达到设定温度时，蠕动泵速度设置为12ml/min，进行喷雾干燥，得到猫爪草干膏粉；
75.s3，猫爪草配方颗粒的制备：将s2的猫爪草干膏粉采用干法制粒，得到猫爪草配方颗粒。
76.实施例7
77.一种猫爪草配方颗粒的制备方法，包括以下步骤：
78.s1，猫爪草多糖提取：猫爪草饮片粉末溶于水后，加入猫爪草饮片粉末质量0.5％的木聚糖酶进行酶解，再加水进行超声酶解、5000r/min离心25min，取上清液，即得猫爪草提取液ⅰ；
79.所述木聚糖酶的酶解温度40℃，酶解ph值为4，酶解时间为38min；所述超声参数为：超声温度62℃，超声功率400w，超声时间20min；
80.所述猫爪草饮片粉末中加入相当于猫爪草4倍重量的水；所述再加水的量相当于猫爪草饮片粉末7倍的重量；
81.离心后，按照1:12的质量比向沉淀物中加水，重复s1，得到猫爪草提取液ⅱ，合并所述猫爪草提取液ⅰ和猫爪草提取液ⅱ，得到猫爪草提取液。
82.s2，猫爪草干膏粉的制备：将所述猫爪草提取液采用旋转蒸发仪减压浓缩，转速50r/min，温度70℃，浓缩约至1ml相当于原饮片的1.6g，用低温喷雾干燥方法制备猫爪草干膏粉，喷雾干燥机的温度设置为70℃，待达到设定温度时，蠕动泵速度设置为12ml/min，进行喷雾干燥，得到猫爪草干膏粉；
83.s3，猫爪草配方颗粒的制备：将s2的猫爪草干膏粉采用干法制粒，得到猫爪草配方颗粒。
84.为了进一步说明本发明的效果，本发明还设置了对比例，具体如下：
85.对比例1(α淀粉酶)
86.一种猫爪草配方颗粒的制备方法，包括以下步骤：
87.s1，猫爪草多糖提取：猫爪草饮片粉末溶于水后，加入猫爪草饮片粉末质量0.4％的α淀粉酶进行酶解，再加水进行超声酶解、5000r/min离心25min，取上清液，即得猫爪草提取液ⅰ；
88.所述α淀粉酶的酶解温度55℃，酶解ph值为5，酶解时间为40min；所述超声参数为：超声温度55℃，超声功率600w，超声时间40min；
89.所述猫爪草饮片粉末中加入相当于猫爪草4倍重量的水；所述再加水的量相当于猫爪草饮片粉末8倍的重量；
90.离心后，按照1:12的质量比向沉淀物中加水，重复s1，得到猫爪草提取液ⅱ，合并所述猫爪草提取液ⅰ和猫爪草提取液ⅱ，得到猫爪草提取液。
91.s2，猫爪草干膏粉的制备：将所述猫爪草提取液采用旋转蒸发仪减压浓缩，转速50r/min，温度70℃，浓缩约至1ml相当于原饮片的1.6g，用低温喷雾干燥方法制备猫爪草干膏粉，喷雾干燥机的温度设置为70℃，待达到设定温度时，蠕动泵速度设置为12ml/min，进行喷雾干燥，得到猫爪草干膏粉；
92.s3，猫爪草配方颗粒的制备：将s2的猫爪草干膏粉采用干法制粒，得到猫爪草配方颗粒。
93.对比例2(果胶酶)
94.一种猫爪草配方颗粒的制备方法，包括以下步骤：
95.s1，猫爪草多糖提取：猫爪草饮片粉末溶于水后，加入猫爪草饮片粉末质量0.4％的果胶酶进行酶解，再加水进行超声酶解、5000r/min离心25min，取上清液，即得猫爪草提取液ⅰ；
96.所述果胶酶的酶解温度50℃，酶解ph值为3.5，酶解时间为40min；所述超声参数为：超声温度50℃，超声功率600w，超声时间40min；
97.所述猫爪草饮片粉末中加入相当于猫爪草4倍重量的水；所述再加水的量相当于猫爪草饮片粉末8倍的重量；
98.离心后，按照1:12的质量比向沉淀物中加水，重复s1，得到猫爪草提取液ⅱ，合并所述猫爪草提取液ⅰ和猫爪草提取液ⅱ，得到猫爪草提取液。
99.s2，猫爪草干膏粉的制备：将所述猫爪草提取液采用旋转蒸发仪减压浓缩，转速50r/min，温度70℃，浓缩约至1ml相当于原饮片的1.6g，用低温喷雾干燥方法制备猫爪草干膏粉，喷雾干燥机的温度设置为70℃，待达到设定温度时，蠕动泵速度设置为12ml/min，进行喷雾干燥，得到猫爪草干膏粉；
100.s3，猫爪草配方颗粒的制备：将s2的猫爪草干膏粉采用干法制粒，得到猫爪草配方颗粒。
101.对比例3(木瓜蛋白酶)
102.一种猫爪草配方颗粒的制备方法，包括以下步骤：
103.s1，猫爪草多糖提取：猫爪草饮片粉末溶于水后，加入猫爪草饮片粉末质量0.4％的木瓜蛋白酶进行酶解，再加水进行超声酶解、5000r/min离心25min，取上清液，即得猫爪草提取液ⅰ；
104.所述木瓜蛋白酶的酶解温度60℃，酶解ph值为5，酶解时间为40min；所述超声参数为：超声温度60℃，超声功率600w，超声时间40min；
105.所述猫爪草饮片粉末中加入相当于猫爪草4倍重量的水；所述再加水的量相当于猫爪草饮片粉末8倍的重量；
106.离心后，按照1:12的质量比向沉淀物中加水，重复s1，得到猫爪草提取液ⅱ，合并所述猫爪草提取液ⅰ和猫爪草提取液ⅱ，得到猫爪草提取液。
107.s2，猫爪草干膏粉的制备：将所述猫爪草提取液采用旋转蒸发仪减压浓缩，转速50r/min，温度70℃，浓缩约至1ml相当于原饮片的1.6g，用低温喷雾干燥方法制备猫爪草干膏粉，喷雾干燥机的温度设置为70℃，待达到设定温度时，蠕动泵速度设置为12ml/min，进行喷雾干燥，得到猫爪草干膏粉；
108.s3，猫爪草配方颗粒的制备：将s2的猫爪草干膏粉采用干法制粒，得到猫爪草配方颗粒。
109.对比例4(木聚糖酶 无超声)
110.一种猫爪草配方颗粒的制备方法，包括以下步骤：
111.s1，猫爪草多糖提取：猫爪草饮片粉末溶于水后，加入猫爪草饮片粉末质量0.4％的木聚糖酶进行酶解，5000r/min离心25min，取上清液，即得猫爪草提取液ⅰ；
112.所述木聚糖酶的酶解温度50℃，酶解ph值为5，酶解时间为40min；
113.所述猫爪草饮片粉末中加入相当于猫爪草3倍重量的水；
114.离心后，按照1:12的质量比向沉淀物中加水，重复s1，得到猫爪草提取液ⅱ，合并所述猫爪草提取液ⅰ和猫爪草提取液ⅱ，得到猫爪草提取液。
115.s2，猫爪草干膏粉的制备：将所述猫爪草提取液采用旋转蒸发仪减压浓缩，转速50r/min，温度70℃，浓缩约至1ml相当于原饮片的1.6g，用低温喷雾干燥方法制备猫爪草干膏粉，喷雾干燥机的温度设置为70℃，待达到设定温度时，蠕动泵速度设置为12ml/min，进行喷雾干燥，得到猫爪草干膏粉；
116.s3，猫爪草配方颗粒的制备：将s2的猫爪草干膏粉采用干法制粒，得到猫爪草配方颗粒。
117.对比例5(无酶，有超声)
118.一种猫爪草配方颗粒的制备方法，包括以下步骤：
119.s1，猫爪草多糖提取：猫爪草饮片粉末溶于水后，超声处理，5000r/min离心25min，取上清液，即得猫爪草提取液ⅰ；
120.所述超声参数为：超声温度70℃，超声功率600w，超声时间40min；
121.所述猫爪草饮片粉末中加入相当于猫爪草3倍重量的水；
122.离心后，按照1:12的质量比向沉淀物中加水，重复s1，得到猫爪草提取液ⅱ，合并所述猫爪草提取液ⅰ和猫爪草提取液ⅱ，得到猫爪草提取液。
123.s2，猫爪草干膏粉的制备：将所述猫爪草提取液采用旋转蒸发仪减压浓缩，转速50r/min，温度70℃，浓缩约至1ml相当于原饮片的1.6g，用低温喷雾干燥方法制备猫爪草干膏粉，喷雾干燥机的温度设置为70℃，待达到设定温度时，蠕动泵速度设置为12ml/min，进行喷雾干燥，得到猫爪草干膏粉；
124.s3，猫爪草配方颗粒的制备：将s2的猫爪草干膏粉采用干法制粒，得到猫爪草配方颗粒。
125.猫爪草多糖提取工艺考察
126.(1)正交试验工艺参数设置如表1所示
127.表1正交设计提取工艺因素水平表
[0128][0129][0130]
(2)正交试验直观分析如表2所示
[0131]
表2正交试验直观分析表
[0132][0133]
(3)正交试验方差分析如表3所示
[0134]
表3正交试验方差分析表
[0135][0136]
(4)最佳提取工艺验证性试验结果如表4所示
[0137]
表4最佳提取工艺验证表
[0138][0139]
由表2与表3中的正交试验结果和方差分析表明，各因素对提取猫爪草多糖的影响次序为c＞a＞b＞d，即酶解ph值＞酶解温度＞酶解时间＞加酶量。由正交试验优化得到的最佳工艺组合是a3b3c2d3，即酶解温度为60℃、酶解时间30min、酶解ph值4、加酶量为猫爪草质量的0.5％为最佳的木聚糖酶协同超声波法提取猫爪草多糖工艺，此条件下多糖提取率高达38.05％、干膏收率高达52.13％。
[0140]
由表4可知，最佳提取工艺验证结果显示：猫爪草多糖平均提取率为38.05％，rsd为0.253％(n＝3)，猫爪草干浸膏的平均收率为52.13％，rsd为0.432％(n＝3)，表明该提取工艺稳定，具有可行性。
[0141]
猫爪草多糖含量的检测：
[0142]
(一)检测方法
[0143]
(1)标准品溶液的配制
[0144]
取葡萄糖对照品105℃干燥至恒重，精密称取20mg，加入纯化水进行溶解，而后定容于250ml的容量瓶中，摇匀并静置，制得浓度为0.08mg/ml的葡萄糖标准溶液。
[0145]
(2)葡萄糖标准曲线的绘制
[0146]
精密量取上述葡萄糖标准溶液0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml于具塞试管中，用纯化水补至2.0ml，而后加入5％苯酚溶液1ml，摇匀，再加浓硫酸5ml，摇匀，静置30min，之后于490nm处测其吸光度，以标准品溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
[0147]
(3)猫爪草提取液供试品溶液的配制
[0148]
猫爪草提取液用纯化水定容至500ml，摇匀，静置1min。精密量取上述溶液1ml置于200ml的容量瓶中，用纯化水定容，摇匀，静置，而后精密量取1ml至干燥具塞试管中，加入1ml纯化水，5％苯酚1ml，摇匀，再加入浓硫酸5ml，摇匀，静置30min。采用紫外-可见分光光度计测定吸光度，测定波长为490nm，计算猫爪草多糖的含量。
[0149]
(二)检测结果
[0150]
(1)葡萄糖标准曲线
[0151]
以葡萄糖的质量浓度为横坐标，以吸光度(a)为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，得到线性回归方程y＝0.0634x 0.0723，r2＝0.9994，线性回归方程中：y为吸光度值，x为葡萄糖质量浓度(μg/ml)，结果表明，葡萄糖在0μg/ml～10μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系结果见图1。
[0152]
(2)方法学考察
[0153]
1、精密度试验结果
[0154]
精密称取0.08mg/ml葡萄糖对照品液0.8ml，采用紫外-可见分光光度法，连续测定6次，记录吸光度值，结果如表8所示。计算得葡萄糖吸光度的rsd值为0.18％(n＝6)
[0155]
表8精密度试验结果
[0156][0157][0158]
由表8计算可知：葡萄糖吸光度的rsd值为0.18％(n＝6)，表明该设备的精密度符合试验要求。
[0159]
2、稳定性试验结果
[0160]
精密吸取供试品溶液1ml，并采用猫爪草供试品溶液的配制方法处理后，于室温放置0、30、60、90、120、150min后，采用紫外-可见分光光度法，连续测定6次，记录吸光度值，结果如表9所示。
[0161]
表9稳定性试验结果
[0162][0163]
由表9计算可知：多糖吸光度的rsd为0.93％(n＝6)，表明供试品溶液在室温放置150min内稳定性良好。
[0164]
3、重复性试验结果
[0165]
精密吸取供试品溶液1ml，并采用猫爪草供试品溶液的配制方法处理后，采用紫外-可见分光光度法测定吸光度，根据标准曲线计算含量，结果如表10所示。
[0166]
表10重复性试验结果
[0167][0168]
由表10可知，多糖含量的rsd为0.19％(n＝6)，表明该方法重复性良好。
[0169]
4、加样回收率试验结果
[0170]
精密称取6份样品，每份约0.1g，按照1:0.8、1：1和1：1.2的比例分别加入葡萄糖对
照品，按猫爪草提取液供试品溶液的配制方法制备供试品溶液后，采用紫外分光光度法测定吸光度，再根据标准曲线测定多糖含量，并计算加样回收率，结果如表11所示。
[0171]
表11加样回收率试验结果
[0172][0173]
由表11可知，多糖的平均加样回收率为100.43％，rsd为0.89％(n＝6)，表明该方法准确可靠。
[0174]
针对不同生物酶对猫爪草多糖提取率和干膏收率的影响如表5、图2和图3所示，添加木瓜蛋白酶、果胶酶、木聚糖酶和α淀粉酶分别为对比例3、对比例2、实施例3和对比例1。
[0175]
表5不同生物酶对猫爪草多糖提取率的影响
[0176][0177]
由表5、图2和图3可知，木聚糖酶协同超声波法来提取猫爪草，猫爪草多糖提取率和干膏收率分别为34.23％、49.31％，多糖提取率和干膏收率最高，而添加木瓜蛋白酶、果胶酶和α淀粉酶时，猫爪草多糖提取率分别为21.21％、27.65％、31.28％，猫爪草干膏收率分别为43.08％、46.82％、48.63％。由此可见，木聚糖酶协同超声波提取技术可以有效提高猫爪草多糖提取率和干膏收率。
[0178]
针对上述实施例1～7和对比例1～5制备的猫爪草提取液中多糖提取率和猫爪草干膏粉的收率进行检测，其结果如表6所示：
[0179]
表6猫爪草提取液多糖提取率和干膏粉收率表
[0180] 多糖提取率(％)干膏粉收率(％)实施例135.8450.13实施例238.0552.13实施例334.2349.31实施例437.2651.37实施例536.1450.26
实施例636.9550.94实施例737.6851.86对比例131.2848.63对比例227.6546.82对比例321.2143.08对比例432.5149.37对比例518.3625.13
[0181]
由表6可知：本发明实施例2制备的猫爪草配方颗粒多糖提取率和干膏粉收率可分别高达38.05％和52.13％，而对比例1～7中多糖提取率和干膏粉收率最多可分别达32.51％和49.37％。
[0182]
针对实施例1～7和对比例1～5制备的猫爪草配方颗粒的质量进行检测，以外观、性状、粒度、水分、溶化性、装量差异、微生物限度和多糖含量为检测指标，其检测结果如下。
[0183]
(1)外观：重压法压缩成大片状，迅速粉碎、过筛、整粒，密封保存，颗粒干燥均匀，色泽一致，无吸潮、软化、结块、潮解等现象。
[0184]
(2)性状：本品为棕黄色的颗粒；味甜、微苦。
[0185]
(3)粒度：按照中国药典2020年版四部的粒度和粒度分布测定法(第二法双筛分法)测定，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％，而本发明实施例1～7的粒度平均值为4.3％，符合规定。
[0186]
(4)水分：照中国药典2020年版四部的水分测定法烘干法测定，水分不得超过8.0％，本发明实施例1～7的水分平均值为6.2％，符合规定。
[0187]
(5)溶化性：按照中国药典2020年版四部检查，取1袋，加热水200ml，搅拌5min，立即观察，颗粒应全部溶化或轻微浑浊，本发明实施例1～7的颗粒全部溶化，为澄清的黄棕色液体，符合规定。
[0188]
(6)装量差异：按照中国药典2020年版四部检查，取供试品10袋，除去包装，分别精密称定每袋内容物的重量，求出每袋内容物的装量与平均装量。每袋装量与标示装量比较，超出装量差异限度(
±
7％)的颗粒剂不得多于2袋，并不得有1袋超出装量差异限度1倍，本发明实施例1～7装量差异如表7所示：
[0189]
表7猫爪草配方颗粒装量差异表
[0190][0191]
由表7可知，装量范围均在规定的1.8600g～2.1400g之间，在其装量差异限度内，符合规定。
[0192]
(7)微生物限度：按照中国药典2020年版四部微生物限度检查法平皿法检查，本发明实施例1～7的猫爪草配方颗粒的微生物限度采用平皿法检查，符合规定。
[0193]
(8)多糖含量测定：取装量差异项下的颗粒，混匀，精密度称取0.1g，加纯化水使溶解，定容至1000ml容量瓶中，摇匀，静置1min。精密量取1ml进行测定，本发明的多糖含量应不低于60％，本发明实施例1～7的猫爪草配方颗粒多糖含量为71.5％，符合规定。
[0194]
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精
神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。