一种调节女性内分泌平衡和缓解更年期综合征及月经不调的保健功能食品的制作方法

1.本发明涉及保健功能食品技术领域，具体而言，涉及一种调节女性内分泌平衡和缓解更 年期综合征及月经不调的保健功能食品。


背景技术：

2.女性在不同年龄阶段常常面临不同的生理不适。例如女性进入青春期开始，慢慢会有月 经出现，在经期前后很多女性会发生月经不调。在女性的生理期，体内部分激素分泌量急速 下降，体温降低，加上生理出血，造成体能消耗、营养流失，容易导致出现下腹部疼痛、情 绪激动，失眠，疲乏，水肿等多种症状的月经不调。
3.又如45～55岁绝大多数女性进入更年期，此阶段女性卵巢功能衰退直至彻底绝经。期间 女性雌激素水平减少，导致其呈现心理、生理等层面的改变，即多见代谢障碍、自主神经紊 乱等，称为更年期综合征，对妇女生活质量造成极大的影响。
4.而另一方面，内分泌系统是分泌各种激素与神经系统参与调节人体新陈代谢及维持人体 生理功能的重要系统，通常人体内的各种激素能够保持平衡，如因种种原因打破人体的激素 的生理平衡，造成体内激素含量的偏高或偏低，而出现一系列临床症状的疾病成为内分泌失 调。现代医学认为，妇科常见的面部黄褐斑、乳房肿块、月经不调、痛经、闭经、不孕症、 子宫肌瘤、免疫系统疾病、骨质疏松症、高脂血症、更年期综合征等病症均与妇科内分泌失 调有关。
5.目前能缓解女性月经不调的产品类型较少，西药治疗以止痛和激素类药物为主，效果均 不理想，且具有一定不良反应发生率。缓解更年期症状的药物有坤泰胶囊、利芙敏等。坤泰 胶囊由熟地黄，黄连，白芍，黄芩，阿胶，茯苓组成，具有促进雌二醇分泌的作用，从而缓 解更年期综合征的症状(滋阴清热法结合心理疏导治疗女性更年期综合征60例，山东中医药 大学学报，2008,32(4)：314-315)。而针对妇科内分泌失调疾病则以克罗米芬、绒毛促性腺 激素等西药治疗为主，但是治疗用时较长，而长期用药副作用情况明显，降低了疾病治疗预 期效果专利(cn 110367537 a)公开了“一种调理更年期综合征的保健功能食品及其制备方 法”，该产品以葛根、大豆、甘草为原料，分别对葛根进行醇提取、大豆和甘草进行水提取 制备，工艺复杂、成本较高且功效单一。但并没有针对这三方面疾病都有很好疗效的药物， 并且不管是西药还是中成药，都或多或少有一定副作用。
6.但目前仍然缺乏一种可以调节女性内分泌平衡，既能缓解女性更年期症状、又能缓解月 经不调的保健功能食品。


技术实现要素：

7.本发明目的是克服现有技术中的技术问题，提供一种不仅可以调节女性内分泌平衡和缓 解更年期综合症及月经不调，且又无副作用的保健功能食品，该食品由下述重量份数的原料 制成：
动物子宫重；c：各组动物子宫系数；d：各组动物扭体次数。
24.图4自由采食30天后各组动物血清中激素水平，其中a：各组动物血清中6-酮前列腺 素f1α(6-keto-f1α)水平；b：各组动物血清中血栓素b2(txb2)水平；c：各组动物血 清中血栓素b2(txb2)与6-酮前列腺素f1α(6-keto-f1α)比值；d：各组动物血清中β 内啡肽(β-ep)水平。
25.图5自由采食30天后各组动物子宫组织匀浆上清液中pgf2α、pge2浓度，其中a：各 组动物子宫组织匀浆上清液中前列腺素f2α(pgf2α)的浓度；b：各组动物子宫组织匀浆 上清液中前列腺素e2(pge2)的浓度；c：各组动物子宫组织匀浆上清液中前列腺素f2α与 前列腺素e2的比值。
26.图6子宫组织切片he染色(
×
100)图，其中a：正常组；b：模型组；c：定坤丹组； d：千金片组；e：坤怡康c组；f：坤怡康d组。
27.图7自由采食30天后各组动物扭体次数及脏器系数，其中a：各组动物体重；b：各组 动物子宫重；c：各组动物子宫系数；d：各组动物扭体次数。
28.图8自由采食30天后各组动物扭体次数及脏器系数，其中a：各组动物体重；b：各组 动物子宫重；c：各组动物子宫系数；d：各组动物扭体次数。
具体实施方式
29.实施例1保健功能食品制品
30.制备例(1)
31.步骤一、挑选市售山药、肉桂、茯苓、芡实、当归、姜黄、枸杞、甘草、葛根、百合、 莲子、燕麦生原料，净制，其中山药、茯苓、当归、姜黄、甘草、葛根切片或切块，低温烘 干(60℃)至水分为15％以下。
32.步骤二、上述各原料以低温微波熟化(120℃，10分钟)，按下述重量份数：山药150份、 肉桂30份、茯苓100份、芡实100份、当归30份、姜黄30份、枸杞100份、甘草30份、 葛根200份、百合100份、莲子50份、燕麦80份称量混合。
33.步骤三、将上述混合原料粉碎，过150目筛，装袋，即得本发明产品。
34.制备例(2)
35.步骤一、挑选市售山药、肉桂、茯苓、当归、芡实、姜黄、枸杞、甘草、葛根、黑豆、 百合、莲子、燕麦、黄豆生原料，净制，其中山药、茯苓、当归、姜黄、甘草、葛根切片或 切块，低温烘干(60℃)至水分为15％以下。
36.步骤二、上述各原料以低温微波熟化(120℃，10分钟)，另外选购市售九制黄精(即采 用传统九蒸九曝法制备的黄精)，按下述重量份数：山药50份、肉桂60份、茯苓100份、当 归30份、芡实100份、姜黄30份、枸杞100份、黄精20份、甘草30份、葛根200份、黑 豆100份、百合50份、莲子20份、燕麦60份、黄豆50份称量混合。
37.步骤三、将上述混合原料粉碎，过150目筛，装袋，即得本发明产品。
38.制备例(3)
39.采用低温烘烤(60℃，30分钟或120℃，10分钟低温烘烤，效果相同)熟化工艺替代 制备例(2)步骤二中低温微波熟化工艺，其余制备工艺与制备例(2)相同。
40.制备例(4)
41.步骤一、挑选市售山药、肉桂、茯苓、当归、芡实、姜黄、枸杞、黄精、甘草、葛根、 黑豆、百合、莲子、燕麦、黄豆生原料，净制，其中山药、茯苓、当归、姜黄、黄精、甘草、 葛根切片或切块，低温烘干(60℃)至水分为15％以下。
42.步骤二、上述各原料以微波熟化(120℃，10分钟)，按下述重量份数：山药150份、肉 桂30份、茯苓150份、当归10份、芡实50份、姜黄10份、枸杞50份、黄精100份、甘草 10份、葛根100份、黑豆50份、百合100份、莲子50份、燕麦40份、黄豆100份称量混 合。
43.步骤三、将上述混合原料粉碎，过150目筛，装袋，即得本发明产品。
44.制备例(5)
45.以市售九制黄精(即采用传统九蒸九曝法制备的黄精)、市售酒当归(即按以下工艺制作： 取净当归，加入适量黄酒拌匀，稍闷润，待酒被吸净后，置锅内，用文火加热，微炒至干， 香气浓郁并略有酒香气时，取出放凉即得)替代制备例(4)中的黄精和当归，其余原料配比 与加工工艺与制备例(4)相同。
46.制备例(6)
47.采用炒制(120℃，15分钟或150℃，10分钟炒制，效果相同)熟化工艺替代制备例(4) 步骤二中低温微波熟化工艺，其余制备工艺与制备例(4)相同。
48.制备例(7)
49.步骤一、选购市售山药、肉桂、茯苓、芡实、姜黄、枸杞、甘草、葛根、黑豆、百合、 莲子、燕麦、黄豆、玛卡、砂仁、生原料，净制，其中山药、肉桂、茯苓、姜黄、甘草、葛 根、玛卡切片或切块，低温烘干(40℃)至水分为15％以下。
50.步骤二、上述各原料以低温微波熟化(100℃，20分钟)，另外选购市售九制黄精(即采 用传统九蒸九曝法制备的黄精)，另外选购市售酒当归(即按以下工艺制作：取净当归，加入 适量黄酒拌匀，稍闷润，待酒被吸净后，置锅内，用文火加热，微炒至干，香气浓郁并略有 酒香气时，取出放凉即得)，按下述重量份数：山药50份、肉桂60份、茯苓90份、当归50 份、芡实80份、姜黄25份、枸杞80份、黄精20份、甘草25份、葛根100份、黑豆100份、 百合40份、莲子20份、燕麦60份、黄豆50份、玛卡100份、砂仁50份称量、混合；
51.步骤三、将上述混合原料粉碎，过150目筛，装袋，即得本发明产品。
52.制备例(8)
53.步骤一、选购市售山药、肉桂、茯苓、当归、芡实、姜黄、枸杞、甘草、葛根、黑豆、 百合、莲子、燕麦、黄豆、玛卡、砂仁、生原料，净制，其中山药、肉桂、茯苓、当归、姜 黄、甘草、葛根、玛卡、切片或切块，低温烘干(40℃)至水分为15％以下。
54.步骤二、上述各原料以低温烘烤(60℃，30分钟或120℃，10分钟低温烘烤，效果相同) 熟化，另外选购市售九制黄精(即采用传统九蒸九曝法制备的黄精)，按下述重量份数：山药 100份、肉桂30份、茯苓70份、当归30份、芡实50份、姜黄10份、枸杞50份、黄精100 份、甘草30份、葛根50份、黑豆50份、百合100份、莲子60份、燕麦100份、黄豆100 份、玛卡50份、砂仁20份称量、混合；
55.步骤三、将上述混合原料粉碎，过150目筛，装袋，即得本发明产品。
56.制备例(9)
57.步骤一、选购市售山药、肉桂、茯苓、当归、芡实、姜黄、枸杞、甘草、葛根、黑豆、 百合、莲子、燕麦、黄豆、玛卡、砂仁、玉米生原料，净制，其中山药、肉桂、茯苓、当归、 姜黄、甘
草、葛根、玛卡切片或切块，低温烘干(40℃)至水分为15％以下。
58.步骤二、上述各原料以低温微波熟化(100℃，20分钟)，另外选购市售九制黄精(即采 用传统九蒸九曝法制备的黄精)，按下述重量份数：山药200份、肉桂50份、茯苓50份、当 归50份、芡实20份、姜黄30份、枸杞20份、黄精30份、甘草20份、葛根120份、黑豆 50份、百合60份、莲子20份、燕麦30份、黄豆50份、玛卡80份、砂仁20份、玉米100 份称量、混合；
59.步骤三、将上述混合原料粉碎，过150目筛，装袋，即得本发明产品。
60.制备例(10)
61.步骤一、选购市售山药、肉桂、茯苓、芡实、姜黄、枸杞、甘草、葛根、黑豆、百合、 莲子、燕麦、黄豆、玛卡、砂仁、玉米生原料，净制，其中山药、肉桂、茯苓、姜黄、甘草、 葛根、玛卡切片或切块，低温烘干(40℃)至水分为15％以下。
62.步骤二、上述各原料以炒制(120℃，15分钟或150℃，10分钟炒制，效果相同)熟化， 另外选购市售九制黄精(即采用传统九蒸九曝法制备的黄精)，另外选购市售酒当归(即按以 下工艺制作：取净当归，加入适量黄酒拌匀，按下述重量份数：山药50份、肉桂20份、茯 苓150份、当归20份、芡实50份、姜黄10份、枸杞60份、黄精100份、甘草30份、葛根 50份、黑豆100份、百合30份、莲子40份、燕麦60份、黄豆100份、玛卡50份、砂仁30 份、玉米50份称量、混合；
63.步骤三、将上述混合原料粉碎，过150目筛，装袋，即得本发明产品。
64.制备例(11)
65.步骤一、选购市售山药、茯苓、当归、芡实、生姜、枸杞、黄精、甘草、葛根、黑豆、 百合、莲子、燕麦、黄豆、玛卡、砂仁、玉米生原料，净制，其中山药、茯苓、当归、生姜、 黄精、甘草、葛根、玛卡、切片或切块，低温烘干(40℃)至水分为15％以下。
66.步骤二、上述各原料以挤压膨化(150℃)熟化，按下述重量份数：山药150份、茯苓 100份、当归50份、芡实25份、生姜10份、枸杞50份、黄精50份、甘草25份、葛根100 份、黑豆75份、百合50份、莲子25份、燕麦50份、黄豆75份、玛卡100份、砂仁25份、 玉米40份称量、混合；
67.步骤三、将上述混合原料粉碎，过150目筛，装袋，即得本发明产品。
68.制备例(12)
69.步骤一、挑选市售山药、茯苓、芡实、生姜、枸杞、黄精、甘草、葛根、黑豆、百合、 莲子、燕麦、黄豆、玛卡、砂仁、玉米生原料，净制，其中山药、茯苓、生姜、黄精、甘草、 葛根、玛卡切片或切块，低温烘干(60℃)至水分为15％以下。
70.步骤二、上述各原料以微波熟化(80℃，30分钟)，按下述重量份数：山药50份、茯苓 50份、芡实30份、生姜30份、枸杞20份、黄精80份、甘草60份、葛根50份、黑豆120 份、百合30份、莲子50份、燕麦60份、黄豆120份、玛卡100份、砂仁100份、玉米50 份称量混合。
71.步骤三、将上述混合原料粉碎，过150目筛，装袋，即得本发明产品。
72.实施例2在更年期综合征大鼠模型上的药效评价
73.材料来源：
74.保健功能食品(坤怡康
tm
)：采用制备例1(即坤怡康a)、制备例7(即坤怡康b)中工 艺制备得到。
75.莉芙敏片：进口药品注册证号：z20130001，德国夏菩天然药物制药公司生产，用来作为 本次实验中的阳性药物。
76.实验动物：sd大鼠选购于上海斯莱克实验动物有限公司，动物规格：spf级，雌性， 180-200g。
77.基础饲料：选购于江苏省协同医药生物工程有限公司。
78.饲养条件和环境：动物在江苏众红生物工程创药研究院有限公司比较医学中心(母公司 常州千红生化制药股份有限公司实验动物中心，使用许可证号：syxk(苏)2016-0036)饲养。 动物饲养于聚碳酸酯塑料盒中，饲养盒规格为长
×
宽
×
高＝545mm
×
395mm
×
200mm，每笼不 超过5只/性别，动物饲养于屏障环境动物房，动物自由摄食和饮水。环境条件控制在室温 20℃～26℃，相对湿度40％～70％，光照12小时明暗交替。
79.实验动物识别方法：实验组用标签区分，并写明专题代号、组别、分组日期、动物编号 和剂量信息等。组内动物编号标记于耳标签上。
80.一、更年期综合征大鼠模型建立及给药方案
81.选择体重在180-260g的sd大鼠作为实验动物，摘除大鼠双侧卵巢。恢复饲养2周后去 势大鼠根据体重进行分组，分成模型组、莉芙敏组、坤怡康a组、坤怡康b组每组12只动物。 莉芙敏组每日进行灌胃给药，剂量为0.056g(0.2片)/kg，坤怡康a、b组按照相应的分组 编号分别给予制备例1、制备例7中对应的保健功能食品/基础饲料＝1/5的混合饲料自由采食， 模型组给予基础饲料自由采食。
82.分别于给药后的45天和60天安乐死部分动物取出子宫，称其湿重，计算子宫系数，elisa 试剂盒检测血清中雌二醇的水平。
83.二、自由采食45天后各组动物的脏器系数及血清激素水平
84.将上述方案中的各组动物，每组4只，禁食12h后所有大鼠安乐死。取出子宫，称其湿 重，计算子宫系数，数据见表1、表2、图1。
85.表1自由采食45天后各组动物的脏器系数
86.组别体重(g)子宫重(g)子宫系数模型组356.00
±
23.450.201
±
0.010.567
±
0.051莉芙敏组362.00
±
7.620.224
±
0.040.618
±
0.109坤怡康a组336.75
±
27.220.204
±
0.030.611
±
0.105坤怡康b组357.00
±
18.870.224
±
0.040.630
±
0.138
87.表2自由采食45天后各组动物血清中雌二醇
[0088][0089]
与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01。
[0090]
三、自由采食60天后各组动物的脏器系数及血清激素水平
[0091]
将上述方案中的各组动物，每组8只，禁食12h后所有大鼠安乐死。取出子宫，称其湿 重，计算子宫系数，数据见表3、表4、图2。
[0092]
表3自由采食60天后各组动物的脏器系数
[0093]
组别体重(g)子宫重(g)子宫系数模型组377.38
±
17.730.12
±
0.020.33
±
0.06莉芙敏组370.25
±
20.670.14
±
0.020.37
±
0.07坤怡康a组359.00
±
10.940.12
±
0.020.34
±
0.06坤怡康b组365.33
±
26.520.14
±
0.040.38
±
0.12
[0094]
表4自由采食60天后各组动物血清中雌二醇
[0095][0096][0097]
与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01。
[0098]
从数据可知，在自由采食45天后，与模型组动物相比较，坤怡康b组雌二醇存在上升的 趋势，但无统计学差异。在自由采食60天后，与模型组动物相比较，坤怡康b组可显著升高 体内雌二醇含量。坤怡康a组与坤怡康b组相比无黄豆、黑豆、黄精，在雌二醇结果与模型 组无显著性差异。
[0099]
实施例1中制备例3-10得到的产品也有与坤怡康b组相近的结果。
[0100]
上述结果提示坤怡康b相比阳性药莉芙敏能更好地改善更年期综合征，并能有效改善激 素平衡，调节内分泌的平衡。
[0101]
实施例3在痛经大鼠模型上的药效评价
[0102]
材料来源：
[0103]
保健功能食品(坤怡康
tm
)：采用制备例8(即坤怡康c)、制备例9(即坤怡康d)中工 艺制备得到。
[0104]
妇科千金片：国药准字z43020027，选购于京东，用来作为本次实验中的阳性药物。
[0105]
广誉远定坤丹：国药准字z20059003，选购于京东，用来作为本次实验中的阳性药物。
[0106]
实验动物：sd大鼠选购于上海斯莱克实验动物有限公司，动物规格：spf级，雌性， 180-200g。
[0107]
基础饲料：选购于江苏省协同医药生物工程有限公司。
[0108]
饲养条件和环境：动物在江苏众红生物工程创药研究院有限公司比较医学中心(母公司 常州千红生化制药股份有限公司实验动物中心，使用许可证号：syxk(苏)2016-0036)饲养。 动物饲养于聚碳酸酯塑料盒中，饲养盒规格为长
×
宽
×
高＝545mm
×
395mm
×
200mm，每笼不 超过5只/性别，动物饲养于屏障环境动物房，动物自由摄食和饮水。环境条件控制在室温 20℃～26℃，相对湿度40％～70％，光照12小时明暗交替。
[0109]
实验动物识别方法：实验组用标签区分，并写明专题代号、组别、分组日期、动物编号 和剂量信息等。组内动物编号标记于耳标签上。
[0110]
一、大鼠原发性痛经模型的建立及给药方案
[0111]
选择体重在180-260g的sd大鼠作为实验动物，大鼠根据体重进行分组，分成正常组、 模型组、定坤丹组、千金片组、坤怡康c组、坤怡康d组，每组12只动物。阳性药组给予灌 胃给药。d1-7：定坤丹组大鼠给药剂量为1g/kg，千金片组大鼠给药剂量为1.65片/kg，每 周7次，连续1周；d8-28：定坤丹组大鼠给药剂量为1.4g/kg，千金片组大鼠给药剂量为2.3 片/kg，每周5次，连续3周。坤怡康c、d组按照相应的分组编号分别给予制备例8、制备 例9中对应的保健功能食品/基础饲料＝1/5的混合饲料自由采食。除正常组外，所有动物皮 下注射0.1mg/ml苯甲酸雌二醇食用油溶液造模，d21和d30：剂量为0.3mg/只；d22-29：剂 量为0.15mg/只。d31：除正常组外，所有动物腹腔注射催产素(2u/只)。
[0112]
测定注射催产素30min内动物的扭体次数；动物安乐死后取出子宫，称其湿重，计算子 宫系数；elisa试剂盒检测血清中f1α(6-keto-f1α)、txb2浓度、txb2/f1α(6-keto-f1α)、 β-ep浓度浓度；子宫组织匀浆后检测上清液中pgf2α、pge2浓度。
[0113]
二、自由采食30天后各组动物的脏器系数
[0114]
将上述方案中的各组动物，每组12只，禁食12h后所有大鼠安乐死。取出子宫，称其湿 重，计算子宫系数，数据见表5、图3。
[0115]
表5扭体次数及脏器系数统计
[0116][0117]
与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01。
[0118]
从数据可知，在自由采食30天后，与模型组动物相比较，正常组的动物子宫重量低于模 型组，坤怡康d组动物子宫重量存在降低的趋势。在体重方面，各组大鼠间不存在显著差异。 在子宫系数方面，与模型组动物相比较，正常组动物子宫系数显著性降低，而阳性药组和坤 怡康组不存在显著差异。在扭体反应方面，与模型组动物相比较，坤怡康c、d组大鼠扭体次 数显著降低，其中坤怡康d组大鼠扭体次数更少。
[0119]
二、自由采食30天后各组动物血清中f1α(6-keto-f1α)、txb2浓度、txb2/f1α (6-keto-f1α)、β-ep浓度。
[0120]
将上述方案中的各组动物，每组12只，禁食12h后进行眼眶取血，3000rpm离心10min 后，取上清液，通过试剂盒检测大鼠-6-酮前列腺素f1α(6-keto-f1α)、血栓素b2(txb2)、 β内啡肽(β-ep)在血清内的浓度，并计算txb2/f1α(6-keto-f1α)。数据见表6、图4。
[0121]
表6血清中f1α(6-keto-f1α)、txb2浓度、txb2/f1α(6-keto-f1α)、β-ep浓度
[0122][0123]
与正常组比较，#p《0.05，####p《0.0001。
[0124]
与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，****p《0.0001。
[0125]
从数据可知，在自由采食30天后。与正常组相比，模型组大鼠血清内f1α(6-keto-f1α) 的含量显著降低，txb2无差异，txb2/6-keto-f1α显著升高，β-内啡肽无差异。
[0126]
与模型组相比，各给药组大鼠血清中6-keto-f1α水平均无显著差异；阳性药定坤丹和 千金片均可显著降低血清内txb2水平，其中千金片效果更好，坤怡康c对血清中txb2水平 存在降低趋势，坤怡康d可显著降低血清内txb2水平；在比值方面，阳性药和坤怡康均可显 著降低大鼠血清中txb2/6-keto-f1α的比值，阳性药组中千金片作用更佳，坤怡康d作用更 佳。阳性药定坤丹不能显著升高血清中β-内啡肽水平；千金片对血清中β-内啡肽水平存在 升高趋势；坤怡康c和d可显著升高血清中β-内啡肽水平，其中坤怡康d效果更优。
[0127]
6-keto-f1α是血管舒张因子pgi2的代谢产物，pgi2可抑制血小板聚集，舒张血管。txb2 是txa2的代谢产物。txa2可显著促进血管收缩及血小板聚集。β-内啡肽具有内源性镇痛 和外周调节作用，子宫是其靶器官，可参与子宫功能的调节，故血清中β-内啡肽水平升高， 可一定程度上提高患者的痛阈值。本实验结果发现，坤怡康d并不能增加大鼠体内血管舒张 因子pgi2的水平，而是通过降低血管收缩因子txb2的水平，从而改变机体内 txb2/6-keto-f1α的比值，同时，促进机体自身合成内源性β-内啡肽，达到减缓血管收缩， 提高痛经大鼠痛阈值，缓解痛经反应的作用。
[0128]
三、自由采食30天后各组动物子宫组织匀浆后检测上清液中pgf2α、pge2浓度
[0129]
将上述方案中的各组动物，每组12只，禁食12h后所有大鼠安乐死。取出子宫，将子宫 称重，按照1:4的比列加入pbs进行匀浆，3000rpm离心20min，取上清液通过试剂盒检测大 鼠子宫内前列腺素f2α(pgf2α)、前列腺素e2(pge2)的浓度，并计算pgf2α/pge2。数 据见表7、图5。
[0130]
表7子宫组织匀浆后检测上清液中pgf2α、pge2浓度
[0131][0132]
与模型组比较，*p《0.05。
[0133]
与模型组相比，坤怡康c可显著升高子宫内pge2水平，坤怡康d、千金片对子宫内pge2 水平存在上升趋势，而定坤丹对子宫内pge2水平无影响；各给药组对pgf2α和pgf2α/pge2 均不存在显著差异。
[0134]
pge2可以促进血管扩张和平滑肌的舒展。pgf2α具有刺激子宫收缩的作用。实验结果发 现：坤怡康c可一定程度上改善痛经期间子宫平滑肌的过度收缩，从而起到改善痛经症状的 作用。
[0135]
四、自由采食30天后各组大鼠的子宫组织结构
[0136]
将上述方案中的各组大鼠子宫置于10％中性缓冲福尔马林内进行固定，固定完全后，进 行组织脱水、包埋、切片及he染色等操作，待染色完成后，对子宫组织切片进行镜检，结果 见附图6。
[0137]
从镜检结果可知，各组大鼠子宫组织内膜完整，内膜表面呈波浪型，且子宫内膜厚度不 存在明显差异；各组大鼠腺上皮和腔上皮细胞完整，呈立方状，排列紧密，间质均无水肿且 腺体数量正常。
[0138]
综合上述实验结果可以看出，坤怡康c、d组可以很好地缓解痛经症状，改善月经不调征， 并能有效改善激素平衡，调节内分泌的平衡，并且，很大程度上，疗效要优于定坤丹、千金 片等阳性药。同时组织切片结果显示坤怡康对子宫组织无不良影响。
[0139]
实施例4在痛经大鼠模型上的药效评价
[0140]
材料来源：
[0141]
保健功能食品(坤怡康
tm
)：采用制备例10(即坤怡康e)、制备例11(即坤怡康f)中 工艺制备得到。
[0142]
实验动物：sd大鼠选购于上海斯莱克实验动物有限公司，动物规格：spf级，雌性， 180-200g。
[0143]
基础饲料：选购于江苏省协同医药生物工程有限公司。
[0144]
饲养条件和环境：动物在江苏众红生物工程创药研究院有限公司比较医学中心(母公司 常州千红生化制药股份有限公司实验动物中心，使用许可证号：syxk(苏)2016-0036)饲养。 动物饲养于聚碳酸酯塑料盒中，饲养盒规格为长
×
宽
×
高＝545mm
×
395mm
×
200mm，每笼不 超过5只/性别，动物饲养于屏障环境动物房，动物自由摄食和饮水。环境条件控制在室温 20℃～26℃，相对湿度40％～70％，光照12小时明暗交替。
[0145]
实验动物识别方法：实验组用标签区分，并写明专题代号、组别、分组日期、动物编号 和剂量信息等。组内动物编号标记于耳标签上。
[0146]
一、大鼠原发性痛经模型的建立及给药方案
[0147]
选择体重在180-260g的sd大鼠作为实验动物，大鼠根据体重进行分组，分成正常组、 模型组、坤怡康e组、坤怡康f组，每组12只动物。坤怡康e、f组按照相应的分组编号分 别给予制备例10、制备例11对应的保健功能食品/基础饲料＝1/5的混合饲料自由采食。除正 常组外，所有动物皮下注射0.1mg/ml苯甲酸雌二醇食用油溶液造模，d21和d30：剂量为0.3mg/ 只；d22-29：剂量为0.15mg/只。d31：除正常组外，所有动物腹腔注射催产素(2u/只)。
[0148]
测定注射催产素30min内动物的扭体次数；动物安乐死后取出子宫，称其湿重，计算子 宫系数。
[0149]
二、自由采食30天后各组动物的脏器系数
[0150]
将上述方案中的各组动物，每组12只，禁食12h后所有大鼠安乐死。取出子宫，称其湿 重，计算子宫系数，数据见表8、图7。
[0151]
表8扭体次数及脏器系数统计
[0152][0153]
与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。
[0154]
从数据可知，在自由采食30天后，与模型组动物相比较，正常组的动物子宫重量低于模 型组。在体重方面，各组大鼠间不存在显著差异。在子宫系数方面，与模型组动物相比较， 正常组动物子宫系数显著性降低，而坤怡康组不存在显著差异。在扭体反应方面，与模型组 动物相比较，坤怡康e、f组大鼠扭体次数显著降低，其中坤怡康e组大鼠扭体次数更少。
[0155]
通过上述实验结果可以看出，坤怡康e、f组可以很好地缓解痛经症状，改善月经不调征。
[0156]
实施例5在痛经大鼠模型上的药效评价
[0157]
材料来源：
[0158]
保健功能食品(坤怡康
tm
)：采用制备例12(即坤怡康g)。
[0159]
实验动物：sd大鼠选购于上海斯莱克实验动物有限公司，动物规格：spf级，雌性， 180-200g。
[0160]
基础饲料：选购于江苏省协同医药生物工程有限公司。
[0161]
饲养条件和环境：动物在江苏众红生物工程创药研究院有限公司比较医学中心(母公司 常州千红生化制药股份有限公司实验动物中心，使用许可证号：syxk(苏)2016-0036)饲养。 动物饲养于聚碳酸酯塑料盒中，饲养盒规格为长
×
宽
×
高＝545mm
×
395mm
×
200mm，每笼不 超过5只/性别，动物饲养于屏障环境动物房，动物自由摄食和饮水。环境条件控制在室温 20℃～26℃，相对湿度40％～70％，光照12小时明暗交替。
[0162]
实验动物识别方法：实验组用标签区分，并写明专题代号、组别、分组日期、动物编号 和剂量信息等。组内动物编号标记于耳标签上。
[0163]
一、大鼠原发性痛经模型的建立及给药方案
[0164]
选择体重在180-260g的sd大鼠作为实验动物，大鼠根据体重进行分组，分成模型组、 坤怡康g组，每组10只动物。坤怡康g组按照相应的分组编号给予制备例12对应的保健功 能食品/基础饲料＝1/5的混合饲料自由采食。各组动物皮下注射0.1mg/ml苯甲酸雌二醇食用 油溶液造模，d21和d30：剂量为0.3mg/只；d22-29：剂量为0.15mg/只。d31：各组动物腹 腔注射催产素(2u/只)。
[0165]
测定注射催产素30min内动物的扭体次数；动物安乐死后取出子宫，称其湿重，计算子 宫系数。
[0166]
二、自由采食30天后各组动物的脏器系数
[0167]
将上述方案中的各组动物，每组10只，禁食12h后所有大鼠安乐死。取出子宫，称其湿 重，计算子宫系数，数据见表9、图8。
[0168]
表9扭体次数及脏器系数统计
[0169][0170]
与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。
[0171]
从数据可知，在自由采食30天后，与模型组动物相比较，坤怡康g组在扭体次数、子宫 重量、子宫系数上均不存在显著差异。坤怡康g组相比其他制备例组未添加当归、肉桂、生 姜，且甘草及砂仁的份数不同，这些组分改变后无法改善痛经模型大鼠的相关症状。