一种2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的检测方法

1.本发明涉及分析检测技术领域，更具体地，涉及一种2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的检测方法。


背景技术：

[0002]
2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐，其cas号为1243308-37-3，是制备依度沙班药物的重要中间体。2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的纯度以及未知单杂的含量大小直接影响该药物疗效。2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的分子结构如下式(ⅰ)所示：
[0003][0004]
目前，还未发现2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的纯度的检测方法的相关文献及报道，为了加强2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐质量控制，亟需开发一种2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的含量的检测方法。


技术实现要素：

[0005]
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的检测方法，能够将2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐和杂质很好地分离，并且准确地检测出2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐及杂质的含量。
[0006]
本发明的第一方面提供一种2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的检测方法。
[0007]
具体地，一种2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的检测方法，包括如下步骤：
[0008]
采用液相色谱检测，所述液相色谱的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，所述液相色谱的流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为高氯酸水溶液，所述流动相b为乙腈，所述液相色谱采用梯度洗脱。
[0009]
本发明采用液相色谱检测2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐及杂质的含量，通过选用特定的色谱柱类型，以及利用高氯酸水溶液和乙腈分别作为流动相a和流动相b，能够有效地将2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐及杂质分离，并采用梯度洗脱，准确、快速地检测出2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐及杂质的含量，可
用于2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的制备过程中或者药物的制备过程中，用于实施对2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的质量监控。
[0010]
优选地，所述色谱柱为岛津的inertsil ods 3v色谱柱。
[0011]
优选地，所述高氯酸水溶液的质量分数为0.01-1％。
[0012]
更优选地，所述高氯酸水溶液的质量分数为0.1％。
[0013]
优选地，所述梯度洗脱为：
[0014]
0.01-55分钟，所述流动相a的体积分数为85-100％，所述流动相b的体积分数为0-15％；
[0015]
55-70分钟，所述流动相a的体积分数为30-50％，所述流动相b的体积分数为50-70％；
[0016]
70-72分钟，所述流动相a的体积分数为30-50％，所述流动相b的体积分数为50-70％；
[0017]
72-80分钟，所述流动相a的体积分数为85-100％，所述流动相b的体积分数为0-15％。
[0018]
更优选地，所述梯度洗脱为：
[0019]
0.01-55分钟，所述流动相a的体积分数为95％，所述流动相b的体积分数为5％；
[0020]
55-70分钟，所述流动相a的体积分数为40％，所述流动相b的体积分数为60％；
[0021]
70-72分钟，所述流动相a的体积分数为40％，所述流动相b的体积分数为60％；
[0022]
72-80分钟，所述流动相a的体积分数为95％，所述流动相b的体积分数为5％。
[0023]
优选地，所述液相色谱的稀释液为乙腈和水的混合溶液。
[0024]
优选地，所述液相色谱的稀释液为乙腈和水的混合溶液。
[0025]
更优选地，所述液相色谱的稀释液为体积比为30-50：50-70的乙腈和水的混合溶液。
[0026]
优选地，所述液相色谱的流速为0.1-2ml/min。
[0027]
更优选地，所述液相色谱的流速为1.0ml/min。
[0028]
优选地，所述液相色谱的洗针液为乙腈和水的混合溶液。
[0029]
更优选地，所述液相色谱的洗针液为体积比为1:1-3的乙腈和水的混合溶液。
[0030]
优选地，所述液相色谱的样品盘温度为5-15℃。
[0031]
更优选地，所述液相色谱的样品盘温度为10℃。
[0032]
优选地，所述液相色谱的检测器为紫外检测器或二极管阵列检测器(dad检测器)。
[0033]
优选地，所述液相色谱的进样量为10-30μl。
[0034]
更优选地，所述液相色谱的进样量为20μl。
[0035]
优选地，所述液相色谱的柱温为20-40℃。
[0036]
更优选地，所述液相色谱的柱温为30℃。
[0037]
优选地，所述液相色谱的检测波长为200-220nm。
[0038]
更优选地，所述液相色谱的检测波长为210nm。
[0039]
优选地，所述液相色谱的定量方法为面积归一化法。以保留时间定性，峰面积定量。
[0040]
优选地，所述采用液相色谱检测，包括如下步骤：
[0041]
配制空白溶液；
[0042]
取供试品配制供试品溶液；
[0043]
将所述空白溶液采用液相色谱进行检测，得到色谱图a；
[0044]
将所述供试品溶液采用液相色谱进行检测，得到色谱图b；
[0045]
然后利用色谱图b扣除色谱图a的色谱峰后，计算2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的纯度和杂质含量。
[0046]
本发明的第二方面提供一种2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的检测方法的应用。
[0047]
一种2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的检测方法在制备2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐或药物中的应用。
[0048]
相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
[0049]
(1)本发明采用液相色谱检测2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐及杂质的含量，通过选用特定的色谱柱类型，利用高氯酸水溶液和乙腈分别作为流动相a和流动相b，并采用梯度洗脱，能够有效地将2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐及杂质分离，并准确、快速地检测出2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐及杂质的含量；
[0050]
(2)本发明提供的2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的检测方法可用于2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的制备过程中或者药物的制备过程中，用于实施对2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的质量监控，以更好地控制所生产的2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐或药物的质量。
附图说明
[0051]
图1为本发明实施例1的检测结果；
[0052]
图2为本发明实施例2的检测结果；
[0053]
图3为本发明实施例3的检测结果。
具体实施方式
[0054]
为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例对本发明要求的保护范围不构成限制作用。
[0055]
以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。
[0056]
实施例1
[0057]
一种2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐(名称为：edb24)的检测方法，包括如下步骤：
[0058]
1、对照品溶液配制：精密称定2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐工作对照品约50.0mg至50ml容量瓶中，加稀释液适量溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
[0059]
系统适用性试验：精密量取对照品溶液溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；主峰理论塔板数应不小于3000；
[0060]
2、精密称定供试品约50.0mg至50ml容量瓶中，加稀释液适量溶解并稀释至刻度，
摇匀，作为供试品溶液；
[0061]
精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；扣除空白，按面积归一化法计算未知杂质的百分比。
[0062]
上述液相色谱条件：
[0063]
色谱柱：岛津，inertsil ods 3v(4.6*250mm，5μm)及其等同的色谱柱
[0064]
进样量：20μl
[0065]
流速：1.0ml/min
[0066]
柱温：30℃
[0067]
检测波长：210nm
[0068]
样品盘温度：10℃
[0069]
流动相a：质量分数为0.1％的高氯酸水溶液
[0070]
流动相b：乙腈
[0071]
流动相(梯度洗脱)：如下表1所示：
[0072]
表1实施例1的梯度洗脱
[0073]
时间(分钟)流动相a(体积分数％)流动相b(体积分数％)0.019555540607040607295580955
[0074]
稀释液：体积比为40：60的乙腈和水
[0075]
洗针液：体积比为1：1的乙腈：水
[0076]
检测器：紫外检测器
[0077]
定量方法：面积归一化法。
[0078]
实施例2
[0079]
本实施例与实施例1为同一生产规格指令生产的不同批次2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐产品，按照上述实施例1的检测方法进行检测。
[0080]
实施例3
[0081]
本实施例与实施例1为同一生产规格指令生产的不同批2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐产品，按照上述实施例1的检测方法进行检测。
[0082]
实施例1-3的检测结果如图1-图3所示。图1中的“1-5”峰的出峰时间分别为8.227、8.937、20.120、40.120、48.960min。图2中的“1-5”峰的出峰时间分别为7.080、7.990、18.990、40.160、46.097min。图3中的“1-5”峰的出峰时间分别为9.080、9.693、21.180、40.033、51.020min。其中图1-图3中“4”峰是edb24的出峰时间，“1”峰是最大单杂的出峰时间。具体检测数据见表2-表4。
[0083]
表2实施例1的检测结果
[0084][0085]
表3实施例2的检测结果
[0086][0087]
表4实施例3的检测结果
[0088][0089]
根据以上表2-表4的检测结果可知，本发明采用液相色谱检测2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的制备过程中的2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐及杂质的含量，采用inertsil ods 3v色谱柱作为色谱柱，以质量分数为0.1％高氯酸水溶液和乙腈作为流动相，并配合特定的梯度洗脱程序，使得2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐与杂质能够很好地分离，主峰理论塔板数应不小于3000，峰型好，实施例1-3所制得的2-[(5-氯吡啶)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐的纯度分别为99.11％、98.74％、99.51％。