去氢骆驼蓬碱在制备治疗结肠癌药物中的应用

1.本发明属于医药技术领域，涉及去氢骆驼蓬碱在制备治疗结肠癌药物中的应用，具体涉及去氢骆驼蓬碱在制备通过fak/akt/gsk-3β和erk
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/creb通路治疗结肠癌药物中的应用。


背景技术：

2.结肠癌是常见的发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤，多发于直肠与乙状结肠交界处，发病率占胃肠道肿瘤的第三位，每年约占全球癌症发病率的6.1％。我国结肠癌的发病率近年来呈上升趋势，发病率随年龄增长而增加。根据结肠癌侵犯程度(t分期)、局部淋巴结转移情况(n分期)和远处转移的情况(m分期)，将结肠癌按严重程度分为0～ⅳ期，ⅳ期结肠癌患者五年生存率仅为10％左右。
3.目前，结肠癌的治疗仍然是医学上的一个难题，其治疗方式主要以手术切除为主，结合放疗、化疗，但由于结肠癌复发快、易转移等特点，且手术伴随一系列并发症，所以寻求有效的靶向治疗药物成为治疗结肠癌的聚焦点。
4.随着人们对中医药重视的增加，一些中药材中的单体化合物有望成为靶向治疗肿瘤的药物。去氢骆驼蓬碱(7-甲氧基-1-甲基-9h-吡啶并[3,4-b]吲哚,harmine)，又名肉叶芸香碱、哈尔明碱，是一种三环β-咔啉类生物碱，从蒺藜科植物骆驼蓬的种子中提取得到，分子量为212.25，分子式为c
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n2o。去氢骆驼蓬碱有许多传统的药用和药理活性，包括抗炎、抗微生物、抗寄生虫和抗癌作用等，除此之外，去氢骆驼蓬碱还被用作许多草药配方的成分，用于治疗各种疾病。据多项研究报道，去氢骆驼蓬碱对胃癌、肝癌、甲状腺癌、宫颈癌等多种癌细胞有抑制增殖的作用，还可以诱导多种癌细胞的凋亡；然而去氢骆驼蓬碱对结肠癌的作用及机制并不清楚。


技术实现要素：

[0005]
针对上述背景技术所提，本发明的目的在于提供一种去氢骆驼蓬碱在制备治疗结肠癌药物中的应用。在本发明中，去氢骆驼蓬碱是通过fak/akt/gsk-3β和erk
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/creb通路达到治疗结肠癌的目的。具体而言，去氢骆驼蓬碱是通过抑制fak/akt和erk
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/creb磷酸化以抑制结肠癌细胞增殖，通过抑制akt蛋白下游vegf、mmp2和mmp9的表达以延缓结肠癌细胞的迁移，抑制bcl-2表达和促进bax表达以促进结肠癌细胞的凋亡，从而达到治疗脑胶质瘤的目的。此外，去氢骆驼蓬碱还能抑制结肠癌细胞中pcna蛋白的表达。
[0006]
为实现上述目的，本发明具体采用如下技术手段：
[0007]
本发明提供了去氢骆驼蓬碱在制备治疗结肠癌药物中的应用，所述药物中去氢骆驼蓬碱通过fak/akt/gsk-3β和erk
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/creb通路治疗结肠癌。
[0008]
本发明中的小分子化合物去氢骆驼蓬碱是天然产物，副作用较小，可作为新的抗肿瘤药物或者其辅助成分进行开发，为治疗和治愈肿瘤提供新的途径和手段。
[0009]
进一步地，所述药物能够抑制结肠癌细胞的增殖、延缓结肠癌细胞的迁移、促进结
肠癌细胞的凋亡。
[0010]
进一步地，所述药物抑制结肠癌细胞增殖是去氢骆驼蓬碱通过抑制fak、akt、erk
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和creb活性而达到的。
[0011]
进一步地，所述药物延缓结肠癌细胞迁移是去氢骆驼蓬碱通过抑制akt蛋白下游vegf、mmp2和mmp9的表达而达到的。
[0012]
进一步地，所述药物促进结肠癌细胞凋亡是去氢骆驼蓬碱通过抑制bcl-2表达、促进bax表达而达到的。
[0013]
进一步地，所述药物由去氢骆驼蓬碱和药学上可接受的辅料和/或赋形剂组成。
[0014]
进一步地，所述药物中去氢骆驼蓬碱的质量百分含量为1％-99％。
[0015]
进一步地，所述药物的剂型为注射剂或口服剂。
[0016]
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0017]
本发明主要侧重降低结肠癌细胞中fak、akt、erk
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、creb磷酸化表达的抗结肠癌药物研究。本发明发现去氢骆驼蓬碱能够显著抑制结肠癌细胞的增殖，延缓结肠癌细胞的迁移，促进结肠癌细胞的凋亡，提示去氢骆驼蓬碱有望作为抗结肠癌药物进行开发。
附图说明
[0018]
图1为去氢骆驼蓬碱抑制结肠癌细胞增殖实验结果柱形图。
[0019]
图2为去氢骆驼蓬碱抑制结肠癌细胞中pcna蛋白表达实验结果图。
[0020]
图3为去氢骆驼蓬碱抑制结肠癌细胞克隆形成结果图及柱状图。
[0021]
图4为去氢骆驼蓬碱下调结肠癌细胞中fak、akt、erk
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、creb蛋白磷酸化表达实验结果图。
[0022]
图5为去氢骆驼蓬碱抑制结肠癌细胞迁移实验结果图。
[0023]
图6为去氢骆驼蓬碱下调bcl-2蛋白表达，上调bax蛋白表达实验结果图。
具体实施方式
[0024]
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0025]
除非另有定义，本文所使用的所有技术和科学术语与本发明技术领域的技术人员通常理解的含义相同。在本发明的说明书所使用的术语只是为了描述具体实施例的目的，并非用于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0026]
实施例1mtt检测细胞活性实验
[0027]
本发明采用结肠癌细胞株caco2和hct116作为研究对象，研究去氢骆驼蓬碱对结肠癌细胞增殖的影响。用不同浓度(0，1，5，10，20，30，40，50μm)去氢骆驼蓬碱处理细胞，培养48小时后，将培养基更换为含有10％mtt溶液的新鲜培养基，反应1小时后测定450nm处的光密度(od)，观察去氢骆驼蓬碱对结肠癌细胞增殖的抑制作用，从图1中可观察到去氢骆驼蓬碱的浓度越高，对结肠癌细胞增殖的抑制作用越强。为了进一步检测去氢骆驼蓬碱作用不同时间对细胞活力的影响，选用10μm(ic50)去氢骆驼蓬碱分别处理细胞24、48和72小时，
检测后发现去氢骆驼蓬碱以剂量依赖性和时间依赖性的方式显著抑制结肠癌细胞的增殖，抑制时间越长，抑制效果越明显(如图1所示)。
[0028]
实施例2去氢骆驼蓬碱下调结肠癌细胞中pcna蛋白的表达
[0029]
本发明采用结肠癌细胞株caco2和hct116作为研究对象，研究去氢骆驼蓬碱对结肠癌细胞中pcna蛋白表达的影响。使用10μm去氢骆驼蓬碱分别刺激细胞24小时和48小时后，用western blot检测细胞中pcna蛋白表达的变化，从图2中可观察到去氢骆驼蓬碱处理后，对结肠癌细胞中pcna蛋白表达有显著的抑制作用。
[0030]
实施例3克隆形成实验检测细胞增殖能力
[0031]
本发明采用结肠癌细胞株caco2和hct116作为研究对象，研究去氢骆驼蓬碱对结肠癌细胞增殖的影响。用不同浓度的去氢骆驼蓬碱(10，20μm)培养10天，从图3中可以观察到去氢骆驼蓬碱处理后，对结肠癌细胞克隆形成能力有显著的抑制作用，并随着去氢骆驼蓬碱浓度的升高，对结肠癌细胞的抑制作用越强。
[0032]
实施例4去氢骆驼蓬碱下调结肠癌中fak、akt、erk
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、creb蛋白磷酸化表达
[0033]
本发明采用结肠癌细胞株caco2和hct116作为研究对象，研究去氢骆驼蓬碱对结肠癌细胞中fak、akt、erk
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、creb蛋白磷酸化表达的影响。使用10μm去氢骆驼蓬碱在不同时间点(0，1，5，10，20，30分钟)刺激细胞，用western blot检测细胞中fak、akt、erk
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、creb蛋白磷酸化表达的变化，从图4中可观察到去氢骆驼蓬碱处理时间越长，对结肠癌细胞中fak、akt、erk
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、creb蛋白磷酸化表达抑制作用越强。
[0034]
实施例5划痕检测细胞迁移能力实验
[0035]
本发明采用结肠癌细胞株caco2/hct116作为研究对象，研究去氢骆驼蓬碱对结肠癌细胞迁移的影响。用直尺作为参考使用移液管尖端在6孔板均匀划线，然后用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤细胞去除漂浮的细胞和碎片。加入不同浓度的去氢骆驼蓬碱(10，20μm)，培养24小时，并在指定时间点(0，24小时)用显微镜拍摄划痕。从图5中可以观察到去氢骆驼蓬碱可以明显延缓结肠癌细胞的迁移，并随着去氢骆驼蓬碱浓度的升高，抑制结肠癌细胞的迁移作用越强。
[0036]
实施例6去氢骆驼蓬碱通过下调bcl-2表达上调bax表达促进结肠癌细胞的凋亡
[0037]
本发明采用结肠癌细胞株caco2/hct116作为研究对象，研究去氢骆驼蓬碱对结肠癌细胞中bcl-2、bax蛋白表达的影响。用不同浓度的去氢骆驼蓬碱(0，1，10，20μm)处理细胞培养24小时后，用western blot检测细胞中bcl-2、bax蛋白表达的变化，从图6中可以观察到去氢骆驼蓬碱可以下调bcl-2表达、上调bax表达，促进结肠癌细胞的凋亡，并且随着去氢骆驼蓬碱浓度的升高，bcl-2、bax蛋白表达的变化越明显。
[0038]
以上所描述的实施例仅表达了本发明的几种优选实施例，其描述较为具体和详细，但并不用于限制本发明。应当指出，对于本领域的技术人员来说，本发明还可以有各种变化和更改，凡在本发明的构思和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。