非诺贝特在制备预防中暑合并并发症中的应用

1.本发明属于药物应用领域，具体涉及一种非诺贝特在制备预防中暑合并并发症的药物中的应用。


背景技术：

2.近些年来，全球平均气温持续上升，自2022年6月中旬以来，极端高温不断出现，全国范围内不同城市的气温陆续刷新了往年同时间的最高纪录。
3.人的正常体温大约是37℃，皮肤温度大约维持在35℃。在高温环境下，人体主要会通过排汗来调节体温，但是当所处环境的湿度较高时，这一散热途径受阻，人就会感觉到“闷热”。人体的自身降温功能有一定的阈值，当温度超过一定阈值时，即使健康的人也无法正常散热，从而导致核心体温上升并可能带来极大健康风险，甚至造成死亡。中暑是高温环境直接诱发的最为严重的疾病之一。中暑通常表现为在高热环境中机体无法控制体温时出现体温过高(通常定义为体温＞40℃)，从而导致谵妄、昏迷、癫痫发作等中枢神经系统功能障碍，以及多器官(肝脏、肾脏、心脏)功能衰竭。目前对于中暑合并多器官功能衰竭仍无有效的治疗措施，因此寻求有效的预防手段是亟待解决的问题，具有重要的公共卫生学意义。
4.非诺贝特(fenofibrate，ff)是一种过氧化物酶体增殖物激活受体α (pparα)激动剂，是一种经典的药物，临床上常用来治疗高甘油三酯血症。随着研究的不断深入，发现非诺贝特具有抗炎、抗氧化、抗细胞损伤等作用，药理作用广泛。但现有技术中还未见有将非诺贝特应用于预防中暑合并并发症的相关技术启示或文献报道。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于解决现有技术问题的不足，提供一种非诺贝特在制备预防中暑合并并发症的药物中的应用。
6.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
7.本发明的目的是提供一种非诺贝特在制备预防中暑合并并发症的药物中的应用。
8.优选的，所述的中暑合并并发症为中暑合并肝损伤、中暑合并肾损伤、中暑合并心肌损伤的至少一种。
9.优选的，所述非诺贝特作为预防中暑合并并发症的药物中的主要活性成分之一或唯一活性成分。
10.优选的，所述药物还包含药学上可接受的载体。更优选的，所述载体选自填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、溶剂中的至少一种。
11.优选的，所述药物的剂型为口服剂或注射剂，更优选为液剂、片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、膜剂、膏剂、冲剂等口服剂或注射剂。液剂可以包括溶液剂或混悬剂。
12.优选的，所述应用中，制备的预防中暑合并肝损伤的药物的剂型为口服剂，更优选的非诺贝特的用量为以小鼠终浓度计为200mg/kg。更优选地，口服剂中非诺贝特的浓度为20mg/ml；更优选地，口服剂为液剂，溶剂为 1％cmc-na水溶液、5％dmso水溶液的至少一种。
13.本发明与现有技术相比，其有益效果主要体现在：
14.本发明提供了一种非诺贝特的新应用，首次提出一种非诺贝特在制备预防中暑合并并发症的药物领域中的新应用。本发明揭示，非诺贝特能有效保护机体防止或减轻中暑合并的急性肝损伤、中暑合并的急性肾损伤以及中暑合并的急性心肌损伤的症状，具有优秀的预防中暑合并急性肝、肾和心肌损伤的效果，能够有效应用于制备预防中暑合并并发症包括急性肝、肾和心肌损伤的药物，具有广阔的药物应用前景。本发明提供的技术内容对于当前的中暑合并并发症的预防及治疗领域而言是重大的新突破，对于中暑合并并发症的研究领域及其相应的药物领域具有重要意义。
附图说明
15.图1为本发明非诺贝特对小鼠血清谷丙转氨酶(alt)的影响图；
16.图2为本发明非诺贝特对小鼠血清谷草转氨酶(ast)的影响图；
17.图3为本发明非诺贝特对小鼠肝脏d-双功能蛋白1(dbp1)的影响图；
18.图4为本发明非诺贝特对小鼠肝脏肉毒碱棕榈酸转移酶1α(cpt1α) 的影响图；
19.图5为本发明非诺贝特对小鼠血清尿素氮(bun)的影响图；
20.图6为本发明非诺贝特对小鼠血清肌酐(crea)的影响图；
21.图7为本发明非诺贝特对小鼠肾脏d-双功能蛋白1(dbp1)的影响图；
22.图8为本发明非诺贝特对小鼠肾脏酰基辅酶a氧化酶1(acox1)的影响图；
23.图9为本发明非诺贝特对小鼠血清肌酸激酶(ck)的影响图；
24.图10为本发明非诺贝特对小鼠血清乳酸脱氢酶(ldh)的影响图；
25.图11为本发明非诺贝特对小鼠心肌d-双功能蛋白1(dbp1)的影响图；
26.图12为本发明非诺贝特对小鼠心肌酰基辅酶a氧化酶1(acox1)的影响图。
具体实施方式
27.下面通过具体实施例，并结合附图对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
28.实施例1非诺贝特用于预防中暑合并急性肝损伤的动物药效学实验
29.1)材料准备
30.实验动物：9-10周龄健康雄性c57bl/6n小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，公司许可证编号：scxk(浙)2019-0001，饲养于浙江中医药大学实验动物中心，饲养环境：在22
±
1℃，12/12小时的昼/夜周期下饲养，并给予自由饮食及饮水。
31.试剂：非诺贝特(sigma)；cmc-na(sigma)，alt(美康生物)，ast (美康生物)。
32.2)药物制备
33.非诺贝特灌胃液的剂量(1％cmc-na水溶液作为口服剂溶剂，非诺贝特在口服剂中浓度为20mg/ml)：以非诺贝特计，小鼠终浓度为200mg/kg 小鼠体重；即每只小鼠每次给非诺贝特200mg/kg。此处需要注意的是，本发明中对应的小鼠模型所适宜的非诺贝特终浓度为200mg/kg，但实际上，不同小鼠模型所适宜的非诺贝特的用量也可能具有不同，甚至超出上述范围，因此具体的非诺贝特的用量可以依据具体的实验对象进行优化选择，而不局限于上述范围。在优化非诺贝特的用量过程中，凡是可以起到本发明所述技术效果的，均属于本发明所述的技术方案，落入本发明保护范围内。
34.3)研究方案
35.3.1)动物模型：
36.c57bl/6小鼠于spf级别动物实验室进行适应性喂养后，随机分为4 组，每组8只，分别为对照组(control cmc-na，cc)，对照 非诺贝特组(control ff，cf)，模型组(heat cmc-na，cc)，模型 非诺贝特组 (heat ff，hf)。
37.将对照组小鼠置于22
±
1℃的环境中，非诺贝特组(涉及有非诺贝特喂入的小鼠组)在暴露前20小时和4小时两次给予小鼠灌胃非诺贝特溶液 (即药物制备中非诺贝特口服剂)，将模型组和模型 非诺贝特组小鼠暴露于39.5
±
0.5℃高温环境中。在高温暴露期间小鼠禁水禁食，使用小鼠肛温计监测小鼠核心体温，观察高温暴露组(即模型组)小鼠核心体温达到最大值或热衰竭状态时，停止暴露，将模型组和模型 非诺贝特组小鼠转移至 22
±
1℃温度下恢复9小时，并给予水和饲料。对照组小鼠除高温暴露外均给予相同处理。
38.3.2)肝功能检测
39.小鼠恢复9小时后用戊巴比妥钠腹腔注射进行麻醉，腹下腔静脉取血测定alt和ast。
40.3.3)肝脏组织基因表达水平检测：
41.使用rnaiso plus试剂提取肝脏样本的总rna，用cdna逆转录试剂盒将rna逆转录成cdna，用sybr green对dbp1和cpt1α的mrna水平进行检测。
42.4)实验结果：
43.图1为本发明动物模型中非诺贝特对小鼠血清谷丙转氨酶(alt)的影响，结果表明，与高温暴露组相比，非诺贝特可以显著改善高温引起的血清alt水平升高现象(cc:52.1
±
2.05u/l；cf:57.6
±
2.36u/l；hc:508.6
ꢀ±
71.76u/l；hf:132.0
±
27.34u/l)。alt主要存在于肝细胞浆内，在正常情况下在血清中的含量很低，当肝细胞受损后，细胞膜通透性增加，细胞内的alt就会释放入血。alt被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。血清alt水平较低意味着肝功能并未受较大损伤。
44.图2为本发明动物模型中非诺贝特对小鼠血清谷草转氨酶(ast)的影响，结果表明，与高温暴露组相比，非诺贝特可以显著改善高温引起的血清ast水平升高现象(cc:200.8
±
14.89u/l；cf:208.4
±
10.83u/l；hc: 1012.0
±
130.30u/l；hf:367.4
±
70.84u/l)。大部分的ast存在于肝脏线粒体内，在正常情况下在血清中的含量很低，当出现严重肝损伤时，通常伴有线粒体膜损伤，ast就会释放入血。ast反映肝细胞受损的严重程度，已经波及到肝细胞内的细胞器。血清ast水平较低意味着肝功能并未受较大损伤。
45.图3为本发明非诺贝特对小鼠肝脏d-双功能蛋白1(dbp1)的影响图，结果表明，与高温暴露组相比，非诺贝特可以显著改善高温引起的肝脏 dbp1水平降低现象(cc:1.0
±
0.07；cf:2.02
±
0.17；hc:0.71
±
0.05；hf: 2.79
±
0.28)。dbp1是参与过氧化物酶体脂肪酸β-氧化的一种酶，在多不饱和脂肪酸、2-甲基支链脂肪酸和d-异构体羟基脂肪酸的β-氧化中起着至关重要的作用，是细胞供能过程中的关键酶。肝脏dbp1水平较高意味着肝细胞供能未受较大影响。
46.图4为本发明非诺贝特对小鼠肝脏肉毒碱棕榈酸转移酶1α(cpt1α) 的影响图，结果表明，与高温暴露组相比，非诺贝特可以显著改善高温引起的肝脏cpt1α水平降低现象(cc:1.0
±
0.09；cf:1.19
±
0.18；hc:0.66
±
0.07；hf:1.44
±
0.14)。cpt1α是线粒体脂肪酸β
氧化的限速酶，脂肪酸通过脂肪酸β氧化，最终生成大量能量供机体利用。肝脏cpt1α水平较高意味着肝细胞供能未受较大影响。
47.由上述实验结果可知，模型组小鼠在高温暴露条件下，均表现出相应表征指标的显著变化，出现明显的中暑合并肝损伤的症状；而同时，与模型组相比，在非诺贝特的作用下，小鼠的肝功能相关的各项指标均明显优于模型组的相应指标，由此可知在非诺贝特的作用下能够有效防止或减缓小鼠的中暑合并急性肝损伤的症状，因此可知非诺贝特具有优秀的预防中暑合并急性肝损伤的作用，将非诺贝特应用于制备预防中暑合并肝损伤的药物，将会具有良好的预防效果和保护机体的作用。
48.实施例2非诺贝特用于预防中暑合并急性肾损伤的动物药效学实验
49.1)材料准备，药物准备，参考实施例1；
50.试剂：bun(美康生物)，crea(美康生物)。
51.2)研究方案
52.2.1)肾功能检测
53.小鼠恢复9小时后用戊巴比妥钠腹腔注射进行麻醉，腹下腔静脉取血测定bun和crea。
54.2.2)肾脏组织基因表达水平检测：
55.使用rnaiso plus试剂提取肾脏样本的总rna，用cdna逆转录试剂盒将rna逆转录成cdna，用sybr green对dbp1和acox1的mrna水平进行检测。
56.4)实验结果：
57.图5为本发明非诺贝特对小鼠血清尿素氮(bun)的影响图，结果表明，非诺贝特可以显著改善高温引起的血清bun水平升高现象(cc:7.4
ꢀ±
0.43mmol/l；cf:7.6
±
0.38mmol/l；hc:41.3
±
2.41mmol/l；hf:8.1
±ꢀ
0.50mmol/l)。在正常情况下血中尿素氮主要是经肾小球滤过而随尿排出的，当肾小球滤过功能减退时，血中的尿素氮浓度升高。血清bun水平较低且与对照组基本持平意味着肾小球滤过功能并未受到损伤。
58.图6为本发明非诺贝特对小鼠血清肌酐(crea)的影响图,结果表明，非诺贝特可以显著改善高温引起的血清crea水平升高现象(cc:5.3
±ꢀ
0.99μmol/l；cf:3.8
±
0.42μmol/l；hc:39.7
±
9.4μmol/l；hf:4.5
±
0.58 μmol/l)。血清肌酐的浓度变化主要由肾小球的滤过能力(肾小球滤过率) 来决定。滤过能力下降，则肌酐浓度升高。血肌酐值明显较高意味着肾脏受损，血肌酐能较准确的反映肾实质受损的情况。血清crea水平较低与对照组基本持平意味着肾实质并未受到较大损伤。
59.图7为本发明非诺贝特对小鼠肾脏d-双功能蛋白1(dbp1)的影响图，结果表明，与高温暴露组相比，非诺贝特可以显著改善高温引起的肾脏 dbp1水平降低现象(cc:1.0
±
0.04；cf:1.3
±
0.09；hc:0.60
±
0.06；hf:1.5
ꢀ±
0.10)。dbp1是参与过氧化物酶体脂肪酸β-氧化的一种酶，在多不饱和脂肪酸、2-甲基支链脂肪酸和d-异构体羟基脂肪酸的β-氧化中起着至关重要的作用，是细胞供能过程中的关键酶。肾脏dbp1水平较高意味着肾细胞供能未受较大影响。
60.图8为本发明非诺贝特对小鼠肾脏酰基辅酶a氧化酶1(acox1)的影响图，结果表明，与高温暴露组相比，非诺贝特可以显著改善高温引起的肾脏acox1水平降低现象(cc:1.0
±
0.07；cf:1.6
±
0.11；hc:0.67
±
0.11；hf: 1.3
±
0.14)。acox1是参与过氧化物酶体脂
肪酸β-氧化的关键酶，在细胞供能过程中发挥着重要作用。肾脏acox1水平较高意味着肾细胞供能未受较大影响。
61.由上述实验结果可知，模型组小鼠在高温暴露条件下，均表现出相应表征指标的显著变化，出现明显的中暑合并肾损伤的症状；而同时，与模型组相比，在非诺贝特的作用下，小鼠的肾功能相关的各项指标均明显优于模型组的相应指标，由此可知在非诺贝特的作用下能够有效防止或减缓小鼠的中暑合并急性肾损伤的症状，因此可知非诺贝特具有优秀的预防中暑合并急性肾损伤的作用，将非诺贝特应用于制备预防中暑合并肾损伤的药物，将会具有良好的预防效果和保护机体的作用。
62.实施例3非诺贝特用于预防中暑合并急性心肌损伤的动物药效学实验
63.1)材料准备，药物准备，参考实施例1；
64.试剂：ck(美康生物)，ldh(美康生物)。
65.2)研究方案
66.2.1)心肌酶谱检测
67.小鼠恢复9小时后用戊巴比妥钠腹腔注射进行麻醉，腹下腔静脉取血测定ck和ldh。
68.2.2)心肌组织基因表达水平检测：
69.使用rnaiso plus试剂提取心脏样本的总rna，用cdna逆转录试剂盒将rna逆转录成cdna，用sybr green对dbp1和acox1的mrna水平进行检测。
70.4)实验结果：
71.图9为本发明非诺贝特对小鼠血清肌酸激酶(ck)的影响图，结果表明，非诺贝特可以显著改善高温引起的血清ck水平升高现象(cc:1837
ꢀ±
230.3u/l；cf:1905
±
149.0u/l；hc:3889
±
552.4u/l；hf:1917
±
199.0 u/l)。ck主要存在于心脏的细胞浆和线粒体中，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、atp再生有直接关系的重要激酶。ck升高通常见于急性心肌损伤。血清ck水平较低意味着心肌并未受到较大急性损伤。
72.图10为本发明非诺贝特对小鼠血清乳酸脱氢酶(ldh)的影响图，结果表明，非诺贝特可以显著改善高温引起的血清ldh水平升高现象(cc: 835.0
±
103.2u/l；cf:904.8
±
96.66u/l；hc:5432.0
±
804.1u/l；hf: 1307.0
±
404.4u/l)。乳酸脱氢酶是生物体内糖酵解途径中一种至关重要的氧化还原酶，能可逆地催化乳酸氧化为丙酮酸，该催化反应是无氧糖酵解的最终产物。ldh广泛存在于人体组织中，以心、肾、骨骼肌含量最高， ldh水平升高通常提示心肌可能出现损伤。血清ldh水平较低提示心肌并未受到较大损伤。
73.图11为本发明非诺贝特对小鼠心肌d-双功能蛋白1(dbp1)的影响图，结果表明，与高温暴露组相比，非诺贝特可以显著改善高温引起的心肌dbp1水平降低现象(cc:1.0
±
0.04；cf:1.0
±
0.03；hc:0.71
±
0.03；hf: 0.92
±
0.06)。dbp1是参与过氧化物酶体脂肪酸β-氧化的一种酶，在多不饱和脂肪酸、2-甲基支链脂肪酸和d-异构体羟基脂肪酸的β-氧化中起着至关重要的作用，是细胞供能过程中的关键酶。心肌dbp1水平升高意味着心肌细胞供能未受较大影响。
74.图12为本发明非诺贝特对小鼠心肌酰基辅酶a氧化酶1(acox1)的影响图，结果表明，与高温暴露组相比，非诺贝特可以显著改善高温引起的心肌acox1水平降低现象(cc:1.0
±
0.04；cf:1.0
±
0.12；hc:0.83
±
0.05； hf:1.1
±
0.08)。acox1是参与过氧化物酶体脂
肪酸β-氧化的关键酶，在细胞供能过程中发挥着重要作用。心肌acox1水平升高意味着肾细胞供能未受较大影响。
75.由上述实验结果可知，模型组小鼠在高温暴露条件下，均表现出相应表征指标的显著变化，出现明显的中暑合并心肌损伤的症状；而同时，与模型组相比，在非诺贝特的作用下，小鼠的心肌功能相关的各项指标均明显优于模型组的相应指标，由此可知在非诺贝特的作用下能够有效防止或减缓小鼠的中暑合并急性心肌损伤的症状，因此可知非诺贝特具有优秀的预防中暑合并急性心肌损伤的作用，将非诺贝特应用于制备预防中暑合并心肌损伤的药物，将会具有良好的预防效果和保护机体的作用。
76.由以上实验可知，非诺贝特对于预防中暑合并并发症如合并肾损伤、合并肝损伤、合并心肌损伤等，均具有优秀的预防效果，这提示将非诺贝特用于制备预防中暑合并并发症的药物，将会具有优秀的预防效果，维护机体的正常运行，这对于预防中暑合并症的研究和治疗领域和公共医疗安全领域具有重要意义。
77.实施例4非诺贝特用于制备预防中暑合并并发症的药物
78.本实施例提供一种药物作为非诺贝特用于制备预防中暑合并并发症、尤其是中暑合并肝/肾/心肌损伤的药物的示例，但不局限于以下示例。
79.一种非诺贝特的口服剂，包含以下成分：非诺贝特5mg，其余为1％ cmc-na水溶液。所述口服剂中非诺贝特浓度优选为20mg/ml；非诺贝特的给药剂量终浓度优选为200mg/kg体重。
80.一种非诺贝特的口服悬浮液，所述口服悬浮液中溶剂为5％dmso水溶液，主要成分为非诺贝特。