一种2，4-二取代苯并咪唑类化合物在抗肿瘤中的用途

1.本发明属于抗肿瘤药学技术领域，尤其涉及一种用于抑制parp的2，4-二取代苯并咪唑类化合物在抗肿瘤中的用途。


背景技术：

2.dna损伤修复(dna damage repair，ddr)缺陷是癌症病理学的一种核心特征。它主要分为单链修复和双链修复。parp可以参与多种生物学过程，是dna单链损伤修复途径中不可或缺的酶。同源重组(homologous recombination，hr)是dna双链修复的重要途径。而brca1/2是hr中高准确度修复dna双链断裂的关键蛋白。parp抑制剂olaparib的人体临床试验证明，parp1与brca1/2具有合成致死的相互作用。
3.目前，四种parp抑制剂获得fda批准。然而，肿瘤患者对parp抑制剂也逐渐产生了耐药性。parp抑制剂的耐药机制主要是同源重组恢复、dna复制叉稳定性增强，以及药物外排蛋白的过表达等。因此寻找克服parp抑制剂耐药性的方法十分迫切。本发明设计并合成了一种靶向parp的2，4-二取代苯并咪唑类抑制剂。该抑制剂对parp具有良好的抑制效果，并在相应肿瘤细胞中表现出良好的抗增殖活性。


技术实现要素：

4.为了解决以上技术问题，本发明提供一种2，4-二取代苯并咪唑类化合物在抗肿瘤中的用途，该化合物是一种靶向parp的抑制剂。
5.本发明提供如下所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[0006][0007]
本发明还提供上述化合物或其药学上可接受的盐在制备抗结直肠癌药物中的用途。
[0008]
进一步的，所述抗肿瘤药物优选为靶向parp的抑制剂类药物。
[0009]
所述抗肿瘤药物优选为抗肿瘤的药物，所对应的肿瘤为结直肠癌。
[0010]
本发明制备的化合物或其药学上可接受的盐，可以作为靶向parp的抑制剂，具有抗结直肠癌活性，能有效的抑制相应结直肠癌细胞的生长。
附图说明
[0011]
图1为式i所示化合物对hct116、sw480细胞抗增殖活性测试结果
具体实施方式
[0012]
本发明提供如下所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[0013][0014]
本发明还提供上述化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。
[0015]
进一步的，所述抗肿瘤药物优选为靶向parp的抑制剂类药物。
[0016]
所述抗肿瘤药物优选为抗肿瘤的药物，所对应的肿瘤为结直肠癌。
[0017]
本发明还提供一种药物组合物，它是包含有效剂量的上述化合物或其药学上可接受的盐的制剂。
[0018]
可以通过本领域已知的方法可将本发明化合物制成以下形式：片剂、胶囊剂、水性或油性溶液剂、混悬剂、乳剂、乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、喷鼻剂、栓剂、用于吸入的细小分散的粉剂或气雾剂或喷雾剂、用于胃肠道外(包括静脉内、肌内或输注)的无菌水性或油性溶液或混悬剂或无菌乳剂。可采用无菌水或水-丙二醇溶液作为溶剂来制备液体制剂，还可将活性组分配制在聚乙二醇水溶液中。用于口服给予的水性溶液可通过将活性组分溶解在水中并按需要加入合适的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂来制备。口服使用的水性混悬剂可通过将细小分散的活性组分与粘性物质一道分散在水中，所述粘性物质如为天然合成胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素和其他药剂领域已知的悬浮剂。
[0019]
药物组合物可为单位剂量形式。在这些形式中，将所述组合物分成含适量活性组分的单位剂量。该单位剂量形式可为包装制剂，包装中包括分隔量的制剂，例如盒装片剂、胶囊剂和在管形瓶或安瓿中的粉剂。单位剂量形式还可为胶囊剂、扁囊剂或片剂或其可为适当数量的任何这些包装形式。
[0020]
本发明的药物组合物，其活性成分可仅为本发明的化合物，也可与其它抗肿瘤化合物组合作为活性成分。
[0021]
在治疗肿瘤的过程中，可采用本发明的药物组合物与其他抗肿瘤药进行联合治疗。例如，与用于医学肿瘤学的抗增殖/抗肿瘤药、细胞生长抑制剂、抗入侵药物、生长因子功能抑制剂、抗血管生成剂、血管损伤剂等联用。
[0022]
在治疗肿瘤时，可通过同时、序贯或单独给予各种治疗成分可实现这种联合治疗。此类组合产品应用有效剂量范围内的本发明化合物和准许剂量范围内的其他药学活性剂。
[0023]
下面结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步的描述，并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
[0024]
实施例1 化合物的合成
[0025]
化合物采用如下反应式合成：
[0026][0027]
(i)brcn，meoh，h2o，50℃，2h；(ii)n-boc-piperidine-4-carboxylic acid，hatu，diea，overnight，r.t.；(iii)acryloyl chloride，dcm，k2co3，0℃，2h；(iv)(a)dcm，tfa；(b)hatu，diea，dmf，4h，r.t..
[0028]
1.中间体1-3的合成通法
[0029]
将2，3-二氨基苯甲酰胺(0.302g，2mmol)溶解于甲醇(10ml)和水(10ml)的混合溶液中(甲醇/水＝1/1)，随后加入brcn(0.309ml，6mmol)，将反应混合溶液在50℃恒温搅拌下反应2h。反应结束后，等待反应液冷却至室温。接着，通过减压蒸馏，除去反应溶剂(甲醇和水)，得到棕黄色固体。在棕黄色固体中加入10ml水，调节ph至碱性(ph＝10)，析出浅黄色固体，静置后真空抽滤，用少量水洗涤滤饼，烘干滤饼，得到相应的中间体1(0.27g，产率78％)。
[0030]
将1-boc-4-哌啶甲酸(0.23g，1mmol)溶于dmf溶液中，将反应液置于0℃下搅拌。随后在上述反应混合液中依次加入hatu(0.46g，1.2mmol)。在0℃下反应0.5h后依次加入中间体1(0.19g，1.1mmol)的dmf溶液以及diea(0.50g，3mmol)。上述反应混合溶液转移至常温搅拌，反应过夜。tlc监测反应。反应结束后，加入大量的水淬灭反应。反应液中有浅黄色固体析出，静置5min。真空抽滤，收集沉淀，并用大量水冲洗滤饼。真空干燥后得到中间体2(0.25g，产率58％)。
[0031]
将4-氨基-2-氟苯甲酸(0.16g，1mmol)溶解于dcm中，随后加入k2co3(0.35g，2.5mmol)。在0℃恒温搅拌下滴加丙烯酰氯(0.14g，1.2mmol)。上述混合液冰浴反应2h。用少量乙酸乙酯萃取反应液后，收集水层。用2mol/l的盐酸调节水层ph，有固体析出，真空抽滤后得到中间体3(0.14g，产率67.1％)。
[0032]
2.化合物1的合成方法
[0033]
将中间体2(0.43g，1.1mmol)溶解于3ml的dcm中，反应液置于常温下搅拌。然后缓慢滴加1.5ml的tfa，dcm和tfa的体积比为2∶1。常温搅拌反应2h。待反应结束后，反应液经减压蒸馏除去反应溶剂，得到相应的中间体胺。将中间体3(0.21g，1mmol)溶于dmf溶液(2ml)中，加入hatu(0.46g，1.2mmol)。冰浴条件下搅拌30min，加入diea(0.33g，2mmol)和胺的dmf溶液。将反应混合液移至常温搅拌反应。tlc监测反应。反应结束后，加入大量水淬灭。乙酸乙酯萃取反应液三次，合并有机相。有机相使用饱和食盐水洗涤两次，然后用水洗涤一次。收集有机相，加入无水na2so4干燥。经减压蒸馏，将有机相浓缩，并得到棕黄色油状液体。通过ptlc板分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1)，分离得到白色固体化合物1(0.16g，收率为34.2％)。
[0034]
化合物1，白色固体，收率34.2％；1h nmr(400mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：12.49(1h，s)，11.82(1h，s)，10.11(1h，s)，8.99(1h，s)，8.14(1h，t，j＝8.1hz)，7.75(1h，d，j＝7.4hz)，7.65(2h，m)，7.37(1h，m)，7.26(1h，d，j＝8.8hz)，7.18(1h，t，j＝7.8hz)，6.66(1h，m)，6.30
(1h，m)，5.80(1h，m)，4.72-4.18(1h，m)，3.94-3.55(1h，m)，3.20-2.90(2h，m)，2.88-2.78(1h，m)，2.03-1.81(2h，m)，1.78-1.56(2h，m).
13
c nmr(100mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：167.9，164.1，131.7，128.3，123.9，123.6，115.4，115.0，114.8，42.3.
[0035]
试验例1 化合物1对hct116、sw480细胞抗增殖试验
[0036]
在hct116、sw480细胞中进行抗增值活性试验：
[0037]
取对数生长期的hct116、sw480细胞分别接种在96孔板中(每孔大约5
×
103个细胞)。培养24小时，待细胞贴壁生长后，分别加入指定浓度(0-40μm)的各个化合物，并孵育24小时。使用pbs溶解mtt至终浓度为0.5％，随后每孔添加20μl的mtt溶液。在37℃，5％co2的细胞培养箱中避光孵育3-4小时，随后弃去已有培养基，每孔添加150μl的dmso，通过酶标仪检测490nm波长下对应的od值，利用spss分析各化合物对细胞增殖的影响，评估各化合物的抗增殖活性。
[0038]
用本发明中化合物1处理hct116、sw480细胞，测定了对不同肿瘤细胞的半数抑制浓度。利用酶标仪测定对应的od值，采用mtt方法进行抗增殖活性评价。
[0039]
结果见图1，从图1可以明显看出，该化合物对表达parp的结直肠癌细胞具有显著的较强的抗增殖活性，对hct116、sw480细胞半数抑制浓度分别为24.4
±
1.05μm，20.1
±
2.23μm。
[0040]
综合以上实验，我们获得了能够有效抑制parp发挥抗肿瘤作用的抑制剂，该类抑制剂能够为治疗结直肠癌提供了一种好的方法，针对于此类抑制剂的开发，具有很广阔的研究前景。