用于治疗细胞因子风暴的组合物和方法与流程

用于治疗细胞因子风暴的组合物和方法


背景技术：

1.细胞因子在正常免疫应答中发挥重要作用，但大量细胞因子全都同时在体内释放可能是有害的。这种身体过快地将过多细胞因子释放到血液中的严重免疫反应被称为“细胞因子风暴”(url是cancer.gov/publications/dictionaries/cancer-terms/def/797584)。细胞因子风暴可能作为多种感染性和非感染性疾病、自身免疫疾病或其他疾病的结果而发生。它也可能在用某些类型的免疫疗法治疗后发生。具体来说，细胞因子风暴也可能是治疗行动例如嵌合抗原受体(“car”)t细胞疗法的意外结果(url是blog.dana-farber.org/insight/2017/08/what-are-the-side-effects-of-car-t-cell-therapy/，4/9/2020访问)。
2.细胞因子风暴已引起公众和科学界的关注，并且促炎性细胞因子的过量或不受控制的释放的概括性认识是众所周知的(tisoncik,jennifer r等，“进入细胞因子风暴之眼”(into the eye of the cytokine storm)，microbiology and molecular biology reviews:mmbr vol.76,1(2012):16-32.doi:10.1128/mmbr.05015-11)。细胞因子是炎性免疫蛋白，它们的存在是为了抵抗感染和阻挡癌症，这些病症如果失控可能导致严重疾病(cron，《细胞因子风暴综合征》(cytokine storm syndrome)，springer，2019)。
3.《nci癌症术语词典》(the nci dictionary of cancer terms)将细胞因子风暴描述为一种严重免疫反应，其中身体过快地将过多细胞因子释放到血液中。在细胞因子风暴中，大量白细胞被激活并释放炎性细胞因子，它们进而又激活更多白细胞。细胞因子风暴的体征和症状包括高烧、炎症(红肿)、严重疲劳和恶心。有时，细胞因子风暴可能是严重或危及生命的，并导致多器官衰竭。
4.细胞因子风暴的其他名称是高细胞因子血症、细胞因子释放综合征(“crs”)、巨噬细胞活化综合征(“mas”)和噬血细胞性淋巴组织细胞增多症。当作为给药药物的结果而发生时，细胞因子风暴也被称为输注反应(url是newswise.com/articles/here-s-a-playbook-for-stopping-deadly-cytokine-storm-syndrome，0/05/2020访问)。
5.术语“细胞因子风暴”令人联想到免疫系统出错并且炎性反应失控的画面。然而，尚未良好地理解参与细胞因子风暴的分子事件，这种“风暴”对发病机理的贡献，或者哪些治疗策略可用于预防所述风暴或在它开始后平息它(tisoncik等，见前引文)。
[0006]“细胞因子风暴”的首次使用似乎是在1993年发表的关于移植物抗宿主病的文章中。所述术语在传染病研究中的使用始于2000年代早期，在关于巨细胞病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒相关噬血细胞性淋巴组织细胞增多症、a组链球菌、流感病毒、天花病毒和严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(“sars-cov”)的报告中。所述术语似乎在2005年首次被应用于h5n1禽流感病毒感染的背景中。
[0007]
细胞因子风暴在大量白细胞被激活并释放炎性细胞因子时引发。这些细胞因子进而激活更多白细胞。细胞因子风暴也是某些单克隆抗体药物以及过继性t细胞疗法的副作用。
[0008]
巨噬细胞活化综合征(“mas”)这种在患有系统性幼年特发性关节炎的儿童中最常
出现的压倒性炎症发作的发生，以细胞因子风暴为特征(schulert,grant s和alexei a grom，“巨噬细胞活化综合征和细胞因子定向疗法”(macrophage activation syndrome and cytokine-directed therapies)，best practice&research.clinical rheumatology vol.28,2(2014):277-92.doi:10.1016/j.berh.2014.03.002)。
[0009]
细胞因子
[0010]
细胞因子是由细胞分泌的用于细胞间信号传导和通讯的一组多样化蛋白质。特定细胞因子具有自分泌、旁分泌和/或内分泌活性，并且通过与受体结合引发各种不同的应答。它们的应答取决于细胞因子和靶细胞。细胞因子的功能包括控制细胞增殖和分化以及调控血管生成、免疫和炎性反应。许多细胞因子具有多种并且有时甚至是不相关的功能。表1列出了各种不同细胞因子及其相应的作用。
[0011]
表1
[0012]
细胞因子的主要类型和作用
[0013][0014]
干扰素
[0015]
干扰素(“ifn”)在针对病毒和其他微生物病原体的先天性免疫中发挥中心作用。它们在受体特异性的基础上被分为三大类(i、ii和iii型)。干扰素的受体结合启动下游信号传导级联，其激活转录因子并诱导数百个ifn刺激的基因，以编码具有抗病毒、抗增殖或免疫调节性质的蛋白质产物。
[0016]
白介素
[0017]
白介素是一类多样化的免疫系统调节物，其主要在免疫细胞分化和活化中起作用。白介素可能是促炎性或抗炎性的，并引发广泛类型的应答。
[0018]
促炎性细胞因子il-1α和il-1β通过直接和间接机制介导宿主对感染的反应。这些细胞因子增加急性期信号传导、免疫细胞向原发感染部位的运输、上皮细胞活化和次级细胞因子的产生。炎性体是由核苷酸结合结构域和含有富含亮氨酸的重复序列的受体(nlr)家族成员组成的细胞溶质大分子复合物(nlrp3炎性体是表征最为充分的)，其在对抗病原体的防御中产生il-1β和il-18。所述对感染的急性期反应导致广泛的局部效应和系统性改变，它们的证据是通常为促炎性的变化例如特定细胞因子产生的增加，并且可能与病毒清除有关。il-1受体信号传导造成急性肺免疫病理，但通过增强igm抗体反应和将cd4 t细胞召集到感染部位，提高了感染流感病毒的小鼠的存活率。
[0019]
趋化因子
[0020]
最大的细胞因子家族是趋化因子。趋化因子与一种或多种g蛋白偶联受体结合。趋
化因子起到化学引诱物的作用，控制细胞、特别是免疫系统细胞的迁移。趋化因子也有助于其他过程，例如胚胎发生、先天性和适应性免疫系统发育和功能以及癌症转移。大多数趋化因子被认为是促炎性的，并且由各种不同细胞对病毒(或其他微生物)感染做出响应而释放。促炎性趋化因子的释放导致免疫系统细胞(嗜中性粒细胞、单核细胞/巨噬细胞和淋巴细胞)召集到感染部位。趋化因子和它们的受体已成为制药行业的重要标靶，但成效有限。
[0021]
csf
[0022]
集落刺激因子(“csf”)刺激造血祖细胞增殖和分化。csf分为三种类型：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)，巨噬细胞集落刺激因子(m-csf)和粒细胞集落刺激因子(g-csf)。csf也与炎症有关。有证据表明csf可能是包括il-1和肿瘤坏死因子(“tnf”)在内的相互依赖的促炎性细胞因子网络的一部分。
[0023]
tnf
[0024]
tnf现在被认为是包括由流感病毒、登革病毒和埃博拉病毒引起的病毒疾病在内的急性病毒疾病中的中心细胞因子。tnf被各种不同的免疫细胞表达，并且其主要受体tnfr1似乎被所有细胞类型表达，确保了这种细胞因子的广泛效应。过量的tnf产生与许多慢性炎症和自身免疫性疾病有关，并且tnf抑制剂已被批准用于治疗炎性肠病、银屑病和类风湿性关节炎。相反，tnf抑制剂用于治疗脓毒症的用途尚未被证明是成功的。
[0025]
细胞因子风暴病理学
[0026]
细胞因子风暴引发的炎症始于局部位点并通过系统循环传播，导致在局部位点处发红、肿胀或水肿、发热、疼痛和功能丧失。这些反应增加血流量，能够使血管白细胞和血浆蛋白到达血管外损伤部位，引起上面列出的因素，从而发出局部应答的警告。然后启动修复过程以恢复组织和器官功能。炎症严重时，局部组织结构的修复导致伴有纤维化的愈合，这可能导致持续的器官功能障碍。
[0027]
急性肺损伤(“ali”)是肺泡环境和系统循环中细胞因子风暴的常见结果。ali与肺或其他器官中的疑似或已证实的感染有关。在人类中，ali的特征在于急性单核细胞/嗜中性粒细胞炎性反应，然后是以肺中的进行性胶原蛋白沉积为标志的慢性纤维增生期。病原体诱导的肺损伤可以发展成ali或其更严重的形式急性呼吸窘迫综合征(“ards”)，正如在sars-cov、2019冠状病毒病(“covid-19”)和流感病毒感染时看到的。
[0028]
细胞因子风暴的示例是严重肺部感染，其中局部炎症扩散到系统循环中，产生系统性脓毒症，其被定义为持续低血压、体温过高或过低、白细胞增多或白细胞减少，并常见血小板减少。病毒、细菌和真菌肺部感染都导致脓毒性综合征，并且这些病因因子在临床背景上难以区分。在某些情况下，肺中无严重微生物感染的持续性组织损伤也伴有细胞因子风暴和模拟脓毒性综合征的临床表现。除了肺部感染之外，细胞因子风暴是胃肠道、泌尿道、中枢神经系统、皮肤、关节间隙和其他部位中的严重感染的结果。
[0029]
症状包括高烧、脾脏肿大、出血过多、所有类型的血细胞(红细胞、白细胞和血小板)计数低以及潜在的多器官衰竭(newswise.com，见前引文)。
[0030]
病因
[0031]
细胞因子风暴与多种感染性和非感染性疾病有关。alabama-birmingham大学的儿科和医学教授randy cron,m.d.,ph.d.陈述道“在病例报告中有80至100种与其有关的疾病”(newswise.com，见前引文)。细胞因子风暴也已成为治疗性干预尝试的不幸后果。
[0032]
下述细菌感染是与细胞因子风暴有关的感染：链球菌，葡萄球菌，和胰腺炎。
[0033]
与细胞因子风暴有关的病毒感染包括流感病毒(包括但不限于h1n1、h5n1、猪流感、西班牙流感和禽流感)、人类冠状病毒(包括但不限于冠状病毒229e、nl63、oc43、hku1、mers-cov、sars-cov和sars-cov2)、其他非人类冠状病毒、其他病毒(包括但不限于爱泼斯坦-巴尔病毒(包括引起单核细胞增多症的毒株)、天花病毒、登革病毒和埃博拉病毒、西尼罗病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、呼吸道病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒(“cmv”)以及任何上述病毒的任何突变。
[0034]
非感染性病症可以引起细胞因子风暴(包括但不限于移植物抗宿主病(“gvhd”)、多发性硬化症、多器官功能障碍综合征、风湿性疾病例如幼年型关节炎和狼疮、纤维化、肺损伤和血液癌症如白血病和淋巴瘤)。
[0035]
治疗活动可能引起细胞因子风暴。t细胞上的表面受体当被治疗性单克隆抗体(“mab”)激活时可以引起细胞因子风暴。最近，在20％至30％的用car-t作为癌症免疫疗法治疗的患者中也已注意到细胞因子风暴。某些使用心肺旁路机例如体外膜氧合设备的患者，受到细胞因子风暴困扰(newswise.com.，见前引文)。
[0036]
某些遗传突变是细胞因子风暴导致的死亡的风险因素(schulert,grant s等，“全外显子测序揭示出在h1n1流感致死病例中与噬血细胞性淋巴组织细胞增多症和巨噬细胞活化综合征相关的基因的突变”(whole-exome sequencing reveals mutations in genes linked to hemophagocytic lymphohistiocytosis and macrophage activation syndrome in fatal cases of h1n1 influenza)，the journal of infectious diseases vol.213,7(2016):1180-8.doi:10.1093/infdis/jiv550)。
[0037]
当前的治疗
[0038]
liao等公开了使用葡甲胺作为环腺苷单磷酸(“camp”)的添加剂，所述添加剂采取环腺苷酸葡甲胺(mca)的形式。然而，mca被用作渗透增强剂而不是因为它的治疗效果(liao,j.,xie,j.,lin,d.,lu,n.,guo,l.,li,w.,pu,b.,yang,y.,yang,z.,zhang,y.,song,y.，“在大鼠中环腺苷酸葡甲胺改善急性脊髓损伤后的神经功能”(meglumine cyclic adenylate improves neurological function following acute spinal cord injury in rats)，molecular medicine reports 10.3(2014):1225-1230。此外，liao等人报告了mca的负面冠脉副作用(jia l,hou dh.zhongguo yao li xue bao.1988；9(5):421
–
426)。
[0039]
faulds等人的美国专利申请公布号2014/0275237公开了在与细胞因子风暴相关的疾病的治疗中使用贝前列素异构体。在某些实施方式中，所述贝前列素异构体采取用阳离子部分制备的盐的形式。faulds公开了使用葡甲胺作为用于此类盐中的阳离子的许多可能选择之一，然而没有教导将葡甲胺用于治疗目的的任何特定治疗益处，甚至没有提及葡甲胺为13种公开的阳离子中的优选阳离子。
[0040]
研究人员报告了将达沙替尼(sprycel)这种被批准用于治疗白血病的酪氨酸激酶抑制剂用于暂时关闭由car-t引起的细胞因子风暴而不破坏细胞。所述药物通过阻断car-t细胞活化的磷酸化步骤发挥作用。然而，他们的研究需要所述药物的及时给药。此外，所述药物给受试者带来了巨大的金钱成本并具有危险的副作用，限制了它的使用(url为mskcc.org/blog/drug-hits-car-snooze-button-can-quiet-cytokine-storm 1)(url为www.webmd.com/drugs/2/drug-144641/sprycel-oral/details 2)。
[0041]
遭受与covid-19有关的细胞因子风暴的患者在接受类风湿性关节炎药物actemra(一种品牌的托珠单抗)的iv输注后恢复。acterma阻断细胞因子il-6受体，这是在covid-19细胞因子风暴中飙升的几种受体之一。在某些病例中，这些acterma治疗用大量维生素c注射补充(血流中正常量的4,000至5,000倍)。(url为richmond.com/special-report/coronavirus/a-richmond-doctor-s-dramatic-story-of-covid-19-infection-hospitalization-and-survival/article_750722ad-7918-544d-bc4d-798d456033f6.html，4-20-2020访问；url为webmd.com/lung/news/20200417/cytokine-storms-may-be-fueling-some-covid-deaths,accessed 4-19-2020)。
[0042]
通过阻断某些能够触发细胞因子释放的化学物质，可能可以一起阻止细胞因子风暴，一种类型的所述化学物质是儿茶酚胺。儿茶酚胺通过免疫细胞中的自放大前馈环路增加il-6和其他细胞因子的产生，从而增强炎性损伤。在一项未经审查的研究中，超过12,673名患有急性呼吸窘迫综合征或ards的人的医学记录给出了与许多重症covid-19患者相同的诊断。然而，这些患者未被引起covid-19的病毒感染。所述数据揭示出，在诊断前一年服用阻断儿茶酚胺释放的药物的患者与其他患者相比，在诊断后需要使用呼吸机的可能性降低约20％，这种效应具有统计学显著性。儿茶酚胺合成的预防性抑制使用α1-ar拮抗剂哌唑嗪来实现。哌唑嗪在小鼠中减轻儿茶酚胺和细胞因子反应，并在各种不同的超炎性刺激后导致显著提高的存活率(konig等，“靶向儿茶酚胺-细胞因子轴以预防sars-cov-2细胞因子风暴综合征”(targeting the catecholamine-cytokine axis to prevent sars-cov-2 cytokine storm syndrome)(url doi.org/10.1101/2020.04.02.20051565)。
[0043]
使用所述药物作为缓解细胞因子风暴的方法的安全性和效能是实验性的，并且所述案例并没有真正提供关于所述药物是否以我们认为它们应该采用的方式起作用的可靠科学信息，也没有提供关于它们应该在何时使用的任何指导。此外，所述药物可能被证明过于昂贵而无法广泛使用。例如，actemra价格昂贵，每剂价格在$3,000至$5,000之间，并且其供应可能有限。
[0044]
在本领域中需要用于在受试者中治疗病症的新的组合物和方法，其中所述病症至少部分由所述受试者中的细胞因子风暴引起。本发明满足了这种需求。


技术实现要素：

[0045]
本发明的一个方面描述了一种在受试者中治疗障碍的方法，其中所述障碍至少部分由所述受试者中的细胞因子风暴引起，其中所述方法包括向所述受试者给药包含葡甲胺或其盐的组合物。
[0046]
本发明还包括向所述受试者给药包含葡甲胺或其盐和选自止痛药物、抗生素、抗病毒药物和消炎药的治疗剂的组合物。
[0047]
本发明的方法还包括向所述受试者给药所述包含葡甲胺或其盐的组合物，并且进一步包括向所述受试者给药选自用于减轻引起细胞因子风暴的障碍的药物的治疗剂。在一个实施方式中，所述引起细胞因子风暴的障碍选自细菌感染、病毒感染、非感染性病症、遗传突变和治疗活动。在一个实施方式中，所述细菌感染选自链球菌、葡萄球菌、胰腺炎以及任何上述的任何突变。在一个实施方式中，所述病毒感染选自流感病毒、人类冠状病毒、其他非人类冠状病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒(包括引起单核细胞增多症的毒株)、天花病毒、登
革病毒、埃博拉病毒、西尼罗病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、呼吸道病毒、疱疹巨细胞病毒以及任何上述病毒的任何突变。在一个实施方式中，所述流感病毒选自h1n1、h5n1、猪流感、西班牙流感、禽流感以及任何上述病毒的任何突变。在一个实施方式中，所述冠状病毒选自229e、nl63、oc43、hku1、mers-cov、sars-cov、sars-cov2以及任何上述病毒的任何突变。在一个实施方式中，所述非感染性病症选自移植物抗宿主病(“gvhd”)、多发性硬化症、多器官功能障碍综合征、纤维化、肺损伤、风湿性疾病和血液癌症。在一个实施方式中，所述风湿性疾病选自幼年型关节炎和狼疮。在一个实施方式中，所述血液癌症选自白血病和淋巴瘤。在一个实施方式中，所述治疗活动选自mab疗法和car-t。
[0048]
本发明的一个方面描述了一种用于在受试者中治疗病症的组合物，其中所述病症至少部分由所述受试者中的细胞因子风暴引起，其中所述组合物包含葡甲胺或其盐。
[0049]
本发明的组合物包含葡甲胺或其盐。在一个实施方式中，葡甲胺或其盐是所述组合物中的唯一活性成分。在另一个实施方式中，所述组合物还包含选自止痛药物、抗生素、抗病毒药物和消炎药的治疗剂。
[0050]
本发明的组合物包括一种用于在受试者中治疗病症的组合物，其中所述病症至少部分由所述受试者中的细胞因子风暴引起，其中所述细胞因子风暴由外部事件引起，其中所述外部事件选自细菌感染、病毒感染、非感染性病症、遗传突变和治疗活动。在一个实施方式中，所述细菌感染选自链球菌、葡萄球菌、胰腺炎以及任何上述的任何突变。在一个实施方式中，所述病毒感染选自流感病毒、人类冠状病毒、其他非人类冠状病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒(包括引起单核细胞增多症的毒株)、天花病毒、登革病毒、埃博拉病毒、西尼罗病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、呼吸道病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒以及任何上述病毒的任何突变。在一个实施方式中，所述流感病毒选自h1n1、h5n1、猪流感、西班牙流感、禽流感以及任何上述病毒的任何突变。在一个实施方式中，所述冠状病毒选自229e、nl63、oc43、hku1、mers-cov、sars-cov、sars-cov2以及任何上述病毒的任何突变。在一个实施方式中，所述非感染性病症选自移植物抗宿主病(“gvhd”)、多发性硬化症、多器官功能障碍综合征、纤维化、肺损伤、风湿性疾病和血液癌症。在一个实施方式中，所述风湿性疾病选自幼年型关节炎和狼疮。在一个实施方式中，所述血液癌症选自白血病和淋巴瘤。在一个实施方式中，所述治疗活动选自mab疗法和car-t。
[0051]
本发明的葡甲胺或其盐还包括一种组合物，其包含选自定时释放剂、渗透增强剂、可药用载体和受控释放组分的治疗剂。
[0052]
本发明的方法还包括通过选自吸入、口服、直肠、阴道、肠胃外、局部、透皮、肺、鼻内、颊、眼、鞘内、肠胃外、静脉内、皮下、肌肉内及其任何组合的途径向所述受试者给药所述包含葡甲胺或其盐的组合物。
[0053]
在本发明的方法中，将所述包含葡甲胺或其盐的组合物以治疗有效量给药到所述受试者。本发明还包括一种方法，其中所述治疗有效量大于每位受试者每日4克葡甲胺或其盐。在一个实施方式中，本发明的方法包括一种方法，其中所述治疗有效量在每位受试者每日约5克葡甲胺或其盐至每位受试者每日约100克葡甲胺或其盐之间。在一个实施方式中，本发明的方法包括一种方法，其中所述治疗有效量在每位受试者每日约10克葡甲胺或其盐克至每位受试者每日约80克葡甲胺或其盐之间。在一个实施方式中，本发明的方法包括一种方法，其中所述治疗有效量为每位受试者每日约15克。本发明还包括所述治疗有效量为
每kg受试者体重约500mg葡甲胺或其盐和每kg受试者体重约80mg葡甲胺或其盐。本发明还包括所述治疗有效量为每kg受试者体重约70mg葡甲胺或其盐。治疗有效量包括其中70kg的受试者每日接受15克葡甲胺或其盐的剂量。
[0054]
在一个实施方式中，本发明包括以与可接受剂量的(钆特酸-葡甲胺)中所含的葡甲胺的量相等的量给药葡甲胺或其盐。dotarem目前被fda批准以在10ml溶液中含有约0.9克至约10克之间的葡甲胺(离子结合到钆特酸)、即约90mg至约100mg/ml的葡甲胺之间的剂量用于静脉内给药。本发明不需要给药dotarem的钆特酸部分。
[0055]
在一个实施方式中，本发明包括以每剂约0.2克至约10克之间的量静脉内给药葡甲胺或其盐。这样的剂量可以在每小时一次至约每六小时一次的时间段内给药。
[0056]
在一个实施方式中，本发明包括以释放水平在每张贴片约0.5克至约3克之间的量口服给药葡甲胺或其盐。
[0057]
在一个实施方式中，本发明包括以每剂约0.2克至约4克之间的量透皮给药葡甲胺或其盐。
[0058]
本发明还包括用于在受试者中治疗病症的组合物和方法，其中所述病症至少部分由所述受试者中的细胞因子风暴引起，其中所述方法包括向所述受试者给药所述包含葡甲胺或其盐的组合物，其中所述细胞因子风暴与其他疾病或障碍相关联引起。在一个实施方式中，所述其他疾病或障碍选自细菌感染、病毒感染、非感染性病症、遗传突变和治疗活动。在一个实施方式中，所述细菌感染选自链球菌、葡萄球菌、胰腺炎以及任何上述的任何突变。在一个实施方式中，所述病毒感染选自流感病毒、人类冠状病毒、其他非人类冠状病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒(包括引起单核细胞增多症的毒株)、天花病毒、登革病毒、埃博拉病毒、西尼罗病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、呼吸道病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒以及任何上述病毒的任何突变。在一个实施方式中，所述流感病毒选自h1n1、h5n1、猪流感、西班牙流感、禽流感以及任何上述病毒的任何突变。在一个实施方式中，所述冠状病毒选自229e、nl63、oc43、hku1、mers-cov、sars-cov、sars-cov2以及任何上述病毒的任何突变。在一个实施方式中，所述非感染性病症选自移植物抗宿主病(“gvhd”)、多发性硬化症、多器官功能障碍综合征、纤维化、肺损伤、风湿性疾病和血液癌症。在一个实施方式中，所述风湿性疾病选自幼年型关节炎和狼疮。在一个实施方式中，所述血液癌症选自白血病和淋巴瘤。在一个实施方式中，所述治疗活动选自mab疗法和car-t。
附图说明
[0059]
图1示出了葡甲胺的结构。
[0060]
对于图2至7来说，在每个分开的独立研究中使用了来自于两位供体的细胞。在2、4、6、24和48小时测量由所述细胞分泌在培养基中的细胞因子。
[0061]
图2a和2b示出了对添加各种不同浓度的葡甲胺做出响应的il-6产生减少。
[0062]
图3a和3b示出了对添加各种不同浓度的葡甲胺做出响应的tnf-α产生减少。
[0063]
图4a和4b示出了对添加各种不同浓度的葡甲胺做出响应的mip1α产生减少。
[0064]
图5a和5b示出了对添加各种不同浓度的葡甲胺做出响应的mcp1产生减少。
[0065]
图6a和6b示出了对添加各种不同浓度的葡甲胺做出响应的il-10产生减少。
[0066]
图7示出了通过将人类细胞与40mm吗啉代果糖温育而刺激的il-6产生。
[0067]
图8示出了细胞中il-6的减少，在所述细胞中通过添加脂多糖(“lps”)刺激il-6产生。
[0068]
图9示出了通过向细胞添加葡甲胺而引起的il-1α增加，在所述细胞中通过添加lps刺激il-1α产生。
[0069]
图10示出了通过向细胞添加葡甲胺而引起的il-1β减少，在所述细胞中通过添加lps刺激il-1β产生。
[0070]
图11示出了通过向细胞添加较高剂量的葡甲胺而引起的il-8减少，在所述细胞中通过添加lps刺激il-8产生。
[0071]
图12示出了通过向细胞添加较高剂量的葡甲胺而引起的il-9减少，在所述细胞中通过添加lps刺激il-9产生。
[0072]
图13示出了通过向细胞添加较高剂量的葡甲胺而引起的mip-1α减少，在所述细胞中通过添加lps刺激mip-1α产生。
[0073]
图14示出了通过向细胞添加较高剂量的葡甲胺而引起的mip-1β减少，在所述细胞中通过添加lps刺激mip-1β产生。
[0074]
图15示出了通过向细胞添加较高剂量的葡甲胺而引起的血管内皮生长因子(“vegf”)减少，在所述细胞中通过添加lps刺激vegf产生。
具体实施方式
[0075]
定义
[0076]
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管与本文中描述的相似或等同的任何方法和材料均可用于本发明的实践或测试，但本文描述了优选的方法和材料。
[0077]
当在本文中使用时，每个下述术语具有本章节中与其相关的含义。
[0078]
当在本文中使用时，没有具体数目的指称是指一个或超过一个(即至少一个)指称物。例如，“要素”意味着一个要素或超过一个要素。
[0079]
当在本文中使用时，“附加成分”包括但不限于下述一者或多者：赋形剂，表面活性剂，分散剂，惰性稀释剂，成粒剂和崩解剂，粘合剂，润滑剂，甜味剂，调味剂，着色剂，防腐剂，生理可降解组合物例如明胶，水性媒介物和溶剂，油性媒介物和溶剂，悬浮剂，分散或润湿剂，乳化剂，缓和剂，缓冲剂，盐类，增稠剂，填充剂，乳化剂，抗氧化剂，抗生素，抗真菌剂，稳定剂，以及可药用聚合或疏水材料。可以包括在本发明的药物组合物中的其他“附加成分”在本领域中是已知的，并描述在例如通过参考并入本文的genaro主编(1985，《remington制药学》(remington’s pharmaceutical sciences)，mack publishing co.,easton,pa.)中。
[0080]
当在本文中使用时，“减轻疾病或障碍症状”意味着降低症状的严重程度。
[0081]“化合物”或“组合物”意味着通常被认为是药物或用作药物的候选物的任何类型的物质或药剂，以及上述物质或所述化合物的改良版本或衍生物的组合和混合物。
[0082]
术语“受控释放组分”意味着便于活性成分的受控释放的一种或多种化合物，包括但不限于聚合物、聚合物基质、凝胶、渗透膜、脂质体或微球或其组合。
[0083]“细胞因子风暴”是一种严重的免疫反应，其中身体过快地将过多细胞因子释放到
血液中。细胞因子风暴也被称为“高细胞因子血症”、“细胞因子释放综合征”(“crs”)、“巨噬细胞活化综合征”(“mas”)和“噬血细胞性淋巴组织细胞增多症”。当作为药物给药的结果出现时，细胞因子风暴也被称为“输注反应”。
[0084]“疾病”是动物的一种健康状态，其中所述动物不能维持稳态，并且其中如果所述疾病未被改善，则所述动物的健康持续恶化。当在本文中使用时，正常衰老被认为是一种疾病。
[0085]
动物中的“障碍”是一种健康状态，其中所述动物不能维持稳态，但其中所述动物的健康状态与不存在所述障碍的情况下相比不太有利。如果不治疗，障碍不一定会引起所述动物健康状态的进一步下降。
[0086]“dotarem”意味着(钆特酸-葡甲胺)，正如在url accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2018/204781s008lbl.pdf处所描述的。
[0087]
化合物的“有效量”或“治疗有效量”是化合物的足以为给药所述化合物的受试者提供有益效果的量或在化妆品中显示出提供治疗效果的量。
[0088]“肌肉内”或“im”意味着在肌肉内或肌肉中。“肌肉内注射”是注射到肌肉中。
[0089]“静脉内”或“iv”意味着通过插入到静脉中的针头或管提供药物或其他物质的方式。
[0090]“突变”是细胞的dna序列中的任何变化。“突变体”是已经历突变的生物体。“病毒突变体”或“病毒突变”或“病毒的突变体”或“病毒的突变”是通过子代病毒的突变而制造的病毒。
[0091]“外周置入中心导管”或“picc”是一种用于抽血和提供包括静脉内流体、药物或输血在内的治疗的装置。将一根细软管插入到上臂的静脉中并引导(穿入)到上腔静脉中。将针头插入到身体外的端口中以通过它抽血或提供流体。外周置入中心导管可以长时间保持在位，避免了对重复扎针的需求。
[0092]
当在本文中使用时，“渗透增强”和“渗透增强剂”是指导致皮肤或其他生物学屏障(包括细胞膜或针对血流的屏障)对透过性不佳的药理活性剂的渗透性提高，即以便提高药物透过所述屏障并进入所述屏障相反一侧上的区域的速率提高的过程和添加的材料。“渗透增强剂”可以与“透过增强剂”互换使用。
[0093]
当在本文中使用时，术语“可药用载体”意味着可以与适合的化合物或衍生物组合，并在组合后可用于将所述适合的化合物给药到受试者的化学组合物。
[0094]
当在本文中使用时，术语“生理上可接受的”酯或盐意味着活性成分的酯或盐形式，其与药物组合物的任何其他成分相容，对所述组合物将要给药到的受试者无害。
[0095]“预防性”治疗是给药到未表现出疾病征兆或仅表现出疾病的早期征兆的受试者，目的是降低发生与所述疾病相关的病理的风险的治疗。
[0096]“皮下”意味着在皮肤下方。“皮下端口”是手术放置在血管中并附连到置于皮肤下的盘以给药静脉内流体或药物或获得血样的管。
[0097]“治疗性”治疗是给药到表现出病理征兆的受试者，目的是减少或消除这些征兆的治疗。
[0098]“透皮”递送意指透皮(或“经皮”)和透黏膜给药两者，即通过使药物穿过皮肤或黏膜组织并进入血流进行的递送。透皮也是指皮肤通过向其局部施用药物或化合物而作为所
述药物或化合物给药的入口。
[0099]
当在本文中使用时，术语“局部施用”是指给药到表面，例如皮肤。该术语可以与“皮肤施用”互换使用。
[0100]
当在本文中使用时，术语“治疗”意味着降低患者或受试者所经历的症状的频率或给药药剂或化合物以降低所经历的症状的频率。
[0101]
当在本文中使用时，“治疗疾病或障碍”意味着降低患者所经历的疾病或障碍的症状的频率。疾病和障碍在本文中可互换使用。当在本文中使用时，术语“野生型”是指物种的大多数成员天然存在的特征性的基因型和表型，并与突变体的基因型和表型形成对比。
[0102]
关于葡甲胺
[0103]
葡甲胺是一种从葡萄糖衍生的糖醇。它也从山梨糖醇衍生。葡甲胺的iupac名称是(2r,3r,4r,5s)-6-(甲基氨基)己-1,2,3,4,5-五醇。葡甲胺的其他名称包括n-甲基-d-葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、n-甲基葡萄糖胺、1-脱氧-1-(甲基氨基)-d-葡萄糖醇、1-脱氧-1-甲基氨基山梨糖醇、n-甲基山梨糖胺。葡甲胺的结构示出在图1中。
[0104]
糖醇如木糖醇和山梨糖醇是被fda“通常认为是安全的”(“gras”)食品成分。葡甲胺目前作为赋形剂用于非治疗目的。尚未报道葡甲胺的不良副作用。
[0105]
葡甲胺这种fda批准的药物赋形剂已被使用超过50年，并且即使在最高剂量下也是安全的。搜索fda数据库“批准药物产品的无活性成分搜索”(url：www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/iig/index.cfm)，对葡甲胺的搜索做出响应给出了下述名单：
[0106]
表2葡甲胺的制药用途
[0107][0108][0109]
fda批准的显像剂例如dotarem含有16克葡甲胺(230mg/kg)的快速浓注剂量。含有葡甲胺的造影剂在许多商品名下销售，包括dotarem和clariscan。这些试剂是基于钆的造影剂，用于脑、脊髓和相关组织的磁共振成像，以检测和可视化具有血脑屏障破坏和/或异常血管分布的区域。它们通常作为iv溶液以0.5mmol/ml的浓度分配(其含有376.9mg/ml的
钆特酸葡甲胺)(fallenberg,e.m.,renz,d.m.,karle,b.等，“乳腺磁共振成像中大环造影剂钆布醇和钆特酸葡甲胺的个体内随机比较”(intraindividual,randomized comparison of the macrocyclic contrast agents gadobutrol and gadoterate meglumine in breast magnetic resonance imaging)，eur radiol 25,837
–
849(2015)(url为doi.org/10.1007/s00330-014-3426-0)。dotarem目前被fda批准用于以在10ml溶液中含有大约0.9克葡甲胺(离子结合到钆特酸)的剂量静脉内给药。本发明不需要给药dotarem的钆特酸部分。
[0110]
在独立的葡甲胺安全性报告中概括的数据显示，葡甲胺盐酸盐在比为临床试验提议的人类等效剂量(hed)水平高10倍的剂量下，在大鼠、小鼠和狗中是安全的。
[0111]
本发明涉及在药物组合物中给药已鉴定的化合物以实践本发明的方法，所述组合物包含所述化合物或所述化合物的适合衍生物或片段和可药用载体。
[0112]
在一个实施方式中，所述可用于实践本发明的药物组合物可以被给药以递送1ng/kg受试者体重/日至100g/kg/日之间的剂量。在另一个实施方式中，所述可用于实践本发明的药物组合物可以被给药以递送1ng/kg/日至100g/kg/日之间的剂量。在本发明的方法中，将所述包含葡甲胺或其盐的组合物以治疗有效量给药到所述受试者。本发明还包括一种方法，其中所述治疗有效量大于每位受试者每日4克葡甲胺或其盐。在一个实施方式中，本发明的方法包括一种方法，其中所述治疗有效量在每位受试者每日约5克葡甲胺或其盐克至每位受试者每日约100克葡甲胺或其盐之间。在一个实施方式中，本发明的方法包括一种方法，其中所述治疗有效量在每位受试者每日约10克葡甲胺或其盐至每位受试者每日约80克葡甲胺或其盐之间。在一个实施方式中，本发明的方法包括一种方法，其中所述治疗有效量为每位受试者每日约15克。本发明还包括所述治疗有效量为每kg受试者体重约500mg葡甲胺或其盐和每kg受试者体重约80mg葡甲胺或其盐。本发明还包括所述治疗有效量为每kg受试者体重约70mg葡甲胺或其盐。治疗有效量包括其中70kg的受试者每日接受15克葡甲胺或其盐的剂量。所述可用于实践本发明的药物组合物可以被给药，以递送10ml溶液中约0.9克葡甲胺的剂量。
[0113]
在一个实施方式中，所述葡甲胺被配制在液体药物组合物中。这可用于静脉内注射或输注。所述制剂可以含有一定浓度范围的葡甲胺，例如每ml至少约10mg、或至少约20mg、或至少约30mg、或至少约40mg、或至少约50mg、或至少约60mg、或至少约70mg、或至少约80mg、或至少约90mg、或约至少100mg、或至少约110mg、或至少约120mg、或至少约130mg、或至少约140mg、或至少约150mg、或至少约160mg、或至少约170mg、或至少约180mg、或至少约190mg、或至少约200mg或更高浓度，直至在给定溶剂或缓冲液中的溶解度极限。上限可以每ml高达约10mg、或高达约20mg、或高达约30mg、或高达约40mg、或高达约50mg、或高达约60mg、或高达约70mg、或高达约80mg、或高达约90mg、或高达约100mg、或高达约110mg、或高达约120mg、或高达约130mg、或高达约140mg、或高达约150mg、或高达约160mg、或高达约170mg、或高达约180mg、或高达约190mg、或高达约200mg或更高，直至在给定溶剂或缓冲液中的溶解度极限。在一个实施方式中，所述制剂含有每ml约10mg至约200mg之间、或每ml约20mg至约190mg之间、或每ml约30mg至约180mg之间、或每ml约40mg至约170mg之间、或每ml约50mg至约160mg之间、或每ml约60mg至约150mg之间、或每ml约70mg至约140mg之间、或每ml约80mg至约130mg之间、或每ml约90mg至约120mg之间的葡甲胺。在一个实施方式中，所述
制剂含有每ml约90mg至约100mg之间的葡甲胺。
[0114]
通过静脉内注射或输注给药葡甲胺液体制剂的剂量范围可以变化。在一个实施方式中，给药例如每千克体重约10mg、或约20mg、或约30mg、或约40mg、或约50mg、或约60mg、或约70mg、或约80mg、或约90mg、或约100mg、或约120mg、或约130mg、或约140mg、或约150mg、或约160mg、或约170mg、或约180mg、或约190mg、或约200mg的浓注剂量。
[0115]
在一个实施方式中，所述药物组合物包含在生理上可接受的载体例如缓冲盐水或其他缓冲水性溶液中的葡甲胺。在一个实施方式中，所述药物组合物不含葡甲胺之外的活性成分。
[0116]
正如专业技术人员会理解的，当掌握了本文中阐述的公开内容时，可用于本发明的组合物可以包括一种活性成分，即如上所述的葡甲胺。或者，可用于本发明的组合物可以包括至少两种活性成分。在一种情况下，多种活性成分可能以累加方式起作用。在另一种情况下，多种活性成分可能以协同方式起作用。也就是说，本发明的组合物中的多种活性成分可能提供比由每种活性成分单独提供的治疗效果累加更大的治疗效果。作为非限制性实例，组合物可以包含葡甲胺或其盐和用于治疗细胞因子风暴或相伴的障碍例如充血、头晕、恶心等的附加化合物两者。
[0117]
其他有用的可药用载体包括但不限于甘油、水、盐水、乙醇和其他可药用盐溶液例如磷酸盐和有机酸盐。这些和其他可药用载体的实例描述在《remington制药学》(remington’s pharmaceutical sciences)(1991,mack publication co.,new jersey)中。
[0118]
所述药物组合物可以以无菌注射水性或油性悬液或溶液的形式制备、包装或销售。这种悬液或溶液可以按照已知技术配制，并且除了所述活性成分之外，还可以包含附加成分例如本文中描述的分散剂、润湿剂或悬浮剂。例如，此类无菌注射制剂可以使用无毒性肠胃外可接受的稀释剂或溶剂例如水、盐水或1,3-丁二醇来制备。其他可接受的稀释剂和溶剂包括但不限于林格氏溶液、等渗氯化钠溶液和固定油例如合成的甘油单酯或二酯。
[0119]
可用于本发明的方法的药物组合物可以以适合于口服、直肠、阴道、肠胃外、局部、肺、鼻内、颊、眼或其他给药途径的制剂给药、制备、包装和/或销售。其他设想的制剂包括含有所述活性成分的投射纳米粒子、脂质体制剂、重新密封的红细胞以及基于免疫学的制剂。
[0120]
本发明的组合物可以通过大量途径给药，包括但不限于口服、直肠、阴道、肠胃外、局部、肺、鼻内、颊或眼给药途径。所述给药途径对于专业技术人员来说是显而易见的，并且取决于许多因素，包括所治疗的疾病的类型和严重程度、所治疗的兽医或人类患者的类型和年龄等。在一个实施方式中，所述组合物被静脉内给药。在一种静脉内给药中，所述组合物可以作为造影剂以治疗有效量给药。dotarem的推荐剂量对于成人和儿科患者(包括足月新生儿)是0.2ml/kg(0.1mmol/kg)体重，作为静脉内快速浓注注射液，手动或通过电动注射器给药，流速对于成人来说为大约2ml/秒，并且对于儿科患者来说为1-2ml/秒。dotarem目前被fda批准用于以在10ml溶液中含有0.9克葡甲胺(离子结合到钆特酸)的剂量静脉内给药。本发明不需要给药dotarem的钆特酸部分。
[0121]
为了确保dotarem的完全注射，在注射后可以进行正常盐水冲洗。本发明的方法还包括将本发明的药物组合物与其他药物组合物或附加成分一起给药。在静脉内给药中，本发明的组合物可以通过iv注射递送，通过目前在位的递送装置或在专门用于给药本发明的
组合物的递送装置中。
[0122]
可用于本发明的方法的药物组合物可以在口服固体制剂、眼用制剂、栓剂、气溶胶、局部或其他类似制剂中系统性给药。除了本发明的化合物、其他化合物例如硫酸乙酰肝素或其生物学等同物之外，此类药物组合物可以含有可药用载体和已知增强和便于药物给药的其他成分。其他可能的制剂例如纳米粒子、脂质体、重新密封的红细胞和基于免疫学的系统，也可用于根据本发明的方法给药化合物。
[0123]
对适合于给药到人类的药物组合物进行修改以便提供适合于给药到各种不同动物的组合物是众所周知的，并且普通技术的药理学家如果需要的话只需普通实验即可设计和进行此类修改。设想的本发明的药物组合物给药到的受试者包括但不限于人类和其他灵长动物、哺乳动物，包括商业上相关的哺乳动物例如牛、猪、马、绵羊、猫和狗。
[0124]
可用于本发明的方法的药物组合物可以以适合于口服、直肠、阴道、肠胃外、局部、肺、鼻内、颊、眼、鞘内或其他给药途径的制剂制备、包装或销售。其他设想的制剂包括含有所述活性成分的投射纳米粒子、脂质体制剂、重新密封的红细胞和基于免疫学的制剂。
[0125]
本发明的药物组合物可以散装、作为单一单位剂量或作为多个单一单位剂量制备、包装或销售。当在本文中使用时，“单位剂量”是包含预定量的活性成分的分立量的药物组合物。所述活性成分的量通常等于要给药到受试者的活性成分的剂量或这种剂量的方便的分数，例如这种剂量的一半或三分之一。
[0126]
本发明的药物组合物中活性成分、可药用载体和任何附加成分的相对量随着所治疗的受试者的身份、尺寸和病情而变，并且还取决于所述组合物将被给药的途径。例如，所述组合物可以包含0.1％至100％(w/w)之间的活性成分。
[0127]
除了活性成分之外，本发明的药物组合物还可以包含一种或多种附加药物活性剂。
[0128]
本发明的药物组合物的受控或持续释放制剂可以使用常规技术来制备。
[0129]
在某些情况下，待使用的剂型可以被提供成其中的一种或多种活性成分的缓慢或受控释放，其使用例如采取不同比例的羟丙基甲基纤维素、其他聚合物基质、凝胶、渗透膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体或微球或其组合，以提供所需的释放特性。可以容易地选择本领域普通技术人员已知的、包括本文中描述的适合的受控释放制剂，以与本发明的药物组合物一起使用。因此，本发明涵盖了被改造以适应于受控释放的适合于口服给药的单一单位剂型例如片剂、胶囊、凝胶帽和囊片。
[0130]
所有受控释放药物制品均具有改进药物疗法以超过它们的非受控对应物所实现的效果的共同目标。理想情况下，在医学治疗中使用最佳设计的受控释放制剂的特征在于使用最少的药物物质在最少量的时间内治愈或控制病症。受控释放制剂的优点包括延长药物活性、降低剂量频率和提高患者顺从性。此外，受控释放制剂可用于影响起效时间或其他特征例如药物的血液水平，因此可以影响副作用的发生。
[0131]
大多数受控释放制剂被设计成在一开始释放出迅速产生所需治疗效果的量的药物，并逐渐且持续地释放出其他量的药物以在长时间内维持这种具有治疗效果的水平。为了在体内维持这种恒定的药物水平，药物必须以一定速率从所述剂型释放，代替被代谢和从体内排泄的药物量。
[0132]
活性成分的受控释放可以通过各种不同的诱导物刺激，例如ph、温度、酶、水或其
他生理条件或化合物。
[0133]
液体悬液可以使用常规方法来制备，以实现活性成分在水性或油性媒介物中的悬浮。水性媒介物包括例如水和等渗盐水。油性媒介物包括例如杏仁油、油性酯、乙醇、植物油例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油、分馏植物油和矿物油例如液体石蜡。液体悬液还可以包含一种或多种附加成分，包括但不限于悬浮剂、分散剂或润湿剂、乳化剂、缓和剂、防腐剂、缓冲剂、盐类、调味剂、着色剂和甜味剂。油性悬液还可以包含增稠剂。已知的悬浮剂包括但不限于山梨糖醇糖浆、氢化食用脂肪、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄耆胶、阿拉伯胶和纤维素衍生物例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素。已知的分散剂或润湿剂包括但不限于天然存在的磷脂例如卵磷脂，亚烷基氧化物与脂肪酸、与长链脂肪醇、与源自于脂肪酸和己糖醇的偏酯或与源自于脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(分别例如聚氧乙烯硬脂酸酯、十七氧化乙烯鲸蜡醇、聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯和聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯)。已知的乳化剂包括但不限于卵磷脂和阿拉伯胶。已知的防腐剂包括但不限于对羟基苯甲酸甲酯、乙酯或正丙酯、抗坏血酸和山梨酸。已知的甜味剂包括例如甘油、丙二醇、山梨糖醇、蔗糖和糖精。用于油性悬液的已知增稠剂包括例如蜂蜡、硬石蜡和鲸蜡醇。
[0134]
活性成分在水性或油性溶剂中的液体溶液可以以与液体悬液基本上相同的方式制备，主要区别是将所述活性成分溶解而不是悬浮在所述溶剂中。本发明的药物组合物的液体溶液可以包含针对液体悬液所描述的每种组分，应该理解悬浮剂不必定有助于活性成分在溶剂中的溶解。水性溶剂包括例如水和等渗盐水。油性溶剂包括例如杏仁油、油性酯、乙醇、植物油例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油、分馏植物油和矿物油例如液体石蜡。
[0135]
本发明的药物组合物的粉状和颗粒制剂可以使用已知方法来制备。此类制剂可以直接给药到受试者，用于例如形成片剂、填充胶囊或通过向其添加水性或油性媒介物来制备水性或油性悬液或溶液。每种这些制剂可以进一步包含分散剂或润湿剂、悬浮剂和防腐剂中的一者或多者。附加赋形剂例如填充剂和甜味剂、调味剂或着色剂，也可以包括在这些制剂中。
[0136]
本发明的药物组合物也可以以水包油乳液或油包水乳液的形式制备、包装或销售。油相可以是植物油例如橄榄油或花生油、矿物油例如液体石蜡或它们的组合。此类组合物还可以包含一种或多种乳化剂例如天然存在的树胶例如阿拉伯胶或黄耆胶，天然存在的磷脂例如大豆磷脂或卵磷脂，源自于脂肪酸与己糖醇酐的组合的酯或偏酯例如失水山梨糖醇单油酸酯，以及此类偏酯与乙烯氧化物的缩合产物例如聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯。这些乳液也可以含有附加成分包括例如甜味剂或调味剂。
[0137]
当在本文中使用时，“油性”液体是包含含碳液体分子并表现出比水更低的极性特点的液体。
[0138]
本发明的药物组合物的适合于口服给药的制剂可以以分立的固体剂量单元的形式制备、包装或销售，包括但不限于片剂、硬或软胶囊、扁囊剂、锭剂或含片，其各自含有预定量的活性成分。适合于口服给药的其他制剂包括但不限于粉状或颗粒制剂、水性或油性悬液、水性或油性溶液、糊剂、凝胶、牙膏、漱口水、包衣、口腔灌洗液或乳液。术语口腔灌洗液和漱口水在本文中可互换使用。
[0139]
本发明的药物组合物可以以适合于口服或颊给药的制剂制备、包装或销售。这种制剂可以包括但不限于凝胶、液体、悬液、糊剂、牙膏、漱口水或口腔灌洗液和包衣。例如，本
发明的口腔灌洗液可以包含约1.4％的本发明的化合物、葡萄糖酸氯己定(0.12％)、乙醇(11.2％)、糖精钠(0.15％)、fd&c blue no.1(0.001％)、胡椒薄荷油(0.5％)、甘油(10.0％)、吐温60(0.3％)，并加水至100％。在另一个实施方式中，本发明的牙膏可以包含约5.5％的本发明的化合物、70％山梨糖醇水溶液(25.0％)、糖精钠(0.15％)、月桂基硫酸钠(1.75％)、6％卡波姆934悬液(15％)、留兰香油(1.0％)、50％氢氧化钠水溶液(0.76％)、二水磷酸二钙(45％)，并加水至100％。本文描述的制剂的实例不是穷举性的，并且应该理解本发明包括这些制剂的其他修改和本文中未描述但为本领域技术人员所知的其他制剂。
[0140]
包含活性成分的片剂可以例如通过将所述活性成分任选地与一种或多种附加成分一起压制或模制来制备。压缩片剂可以通过将采取自由流动形式的活性成分例如粉末或颗粒制备物任选地与粘合剂、润滑剂、赋形剂、表面活性剂和分散剂中的一者或多者混合，在适合的装置中压缩来制备。模制片剂可以通过将活性成分、可药用载体的混合物和至少足以润湿所述混合物的液体在适合的装置中模制来制备。在片剂的制备中使用的可药用赋形剂包括但不限于惰性稀释剂、成粒剂和崩解剂、粘合剂和润滑剂。已知的分散剂包括但不限于马铃薯淀粉和羟基乙酸淀粉钠。已知的表面活性剂包括但不限于月桂基硫酸钠。已知的稀释剂包括但不限于碳酸钙、碳酸钠、乳糖、微晶纤维素、磷酸钙、磷酸氢钙和磷酸钠。已知的成粒剂和崩解剂包括但不限于玉米淀粉和海藻酸。已知的粘合剂包括但不限于明胶、阿拉伯胶、预明胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基甲基纤维素。已知的润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、二氧化硅和滑石。
[0141]
片剂可以是未包衣的，或者它们可以使用已知方法包衣以在受试者的胃肠道中实现延迟崩解，从而提供活性成分的持续释放和吸收。例如，可以使用诸如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯的材料来包衣片剂。此外，例如，片剂可以使用在美国专利号4,256,108、4,160,452和4,265,874中描述的方法来包衣，以形成渗透受控释放片剂。片剂还可以包含甜味剂、调味剂、着色剂、防腐剂或这些物质的某些组合，以便提供药学上优雅可口的制备物。
[0142]
包含活性成分的硬胶囊可以使用生理上可降解的组合物例如明胶来制备。此类硬胶囊包含活性成分，并且还可以包含附加成分，包括例如惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土。
[0143]
包含活性成分的软明胶胶囊可以使用生理上可降解的组合物例如明胶来制备。此类软胶囊包含活性成分，其可以与水或油性介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
[0144]
本发明的药物组合物的适合于口服给药的液体制剂可以以液体形式或以旨在使用前用水或其他适合的媒介物重构的干燥产品的形式制备、包装和销售。
[0145]
本发明的药物组合物可以以适合于直肠给药的制剂制备、包装或销售。这种组合物可以采取例如栓剂、保留灌肠制剂和用于直肠或结肠灌洗的溶液的形式。
[0146]
栓剂制剂可以通过将活性成分与在通常的室温(即约20℃)下为固体并在受试者的直肠温度(即在健康人类中约37℃)下为液体的非刺激性可药用赋形剂合并来制备。适合的可药用赋形剂包括但不限于可可脂、聚乙二醇和各种不同的甘油酯。栓剂制剂还可以包含各种不同的附加成分，包括但不限于抗氧化剂和防腐剂。
[0147]
保留灌肠制剂或用于直肠或结肠灌洗的溶液可以通过将活性成分与可药用液体载体合并来制备。正如本领域中公知的，灌肠制剂可以使用适应于受试者的直肠解剖学的递送装置给药，或者可以包装在所述递送装置中。灌肠制剂还可以包含各种不同的附加成
分，包括但不限于抗氧化剂和防腐剂。
[0148]
本发明的药物组合物可以以适合于阴道给药的制剂制备、包装或销售。这种组合物可以采取例如栓剂、浸渍或包衣的可阴道插入材料例如卫生棉条、冲洗制剂或凝胶或霜剂或用于阴道灌洗的溶液的形式。
[0149]
用于将材料用化学组合物进行浸渍或包衣的方法在本领域中是已知的，并且包括但不限于将化学组合物沉积或结合在表面上的方法，在材料的合成期间将化学组合物掺入到所述材料的结构中(即例如使用生理上可降解的材料)的方法，以及将水性或油性溶液或悬液吸收在吸收性材料中并随后进行或不进行干燥的方法。
[0150]
适合于肠胃外给药的药物组合物的制剂包含与可药用载体例如无菌水或无菌等渗盐水合并的活性成分。此类制剂可以以适合于快速浓注给药或连续给药的形式制备、包装或销售。可注射制剂可以以单位剂型制备、包装或销售，例如在安瓿中或在含有防腐剂的多剂容器中。用于肠胃外给药的制剂包括但不限于在油性或水性媒介物中的悬液、溶液、乳液、糊剂和可植入持续释放或可生物降解制剂。此类制剂还可以包含一种或多种附加成分，包括但不限于悬浮剂、稳定剂或分散剂。在用于肠胃外给药的制剂的一个实施方式中，活性成分以干燥(即粉末或颗粒)形式提供，用于在肠胃外给药重构的组合物之前用适合的媒介物(例如无菌无热原水)重构。
[0151]
所述药物组合物可以以无菌可注射水性或油性悬液或溶液的形式制备、包装或销售。这种悬液或溶液可以按照已知技术配制，并且除了所述活性成分之外，还可以包含附加成分例如本文描述的分散剂、润湿剂或悬浮剂。例如，此类无菌可注射制剂可以使用无毒性肠胃外可接受的稀释剂或溶剂例如水、盐水或1,3-丁二醇来制备。其他可接受的稀释剂和溶剂包括但不限于林格氏溶液、等渗氯化钠溶液和固定油例如合成的甘油单酯或二酯。有用的其他可肠胃外给药的制剂包括那些包含采取微晶体形式、在脂质体制备物中或作为生物可降解聚合物系统的组分的活性成分的制剂。用于持续释放或植入的组合物可以包含可药用聚合或疏水性材料例如乳液、离子交换树脂、难溶性聚合物或难溶性盐。
[0152]
本发明的药物组合物可以在适合于颊给药的制剂中制备、包装或销售。此类制剂可以例如采取使用常规方法制备的片剂或含片的形式，并且可以含有例如0.1至20％(w/w)的活性成分，其余包含可口腔溶解或降解的组合物和任选的本文描述的一种或多种附加成分。或者，适合于颊给药的制剂可以包括包含活性成分的粉末或气溶胶化或雾化的溶液或悬液。此类粉状、气溶胶化或雾化的制剂在分散时，优选地具有约0.1至约200纳米范围内的平均粒子或液滴尺寸，并且还可以包含本文描述的一种或多种附加成分。
[0153]
当在本文中使用时，“附加成分”包括但不限于下述一者或多者：赋形剂，表面活性剂，分散剂，惰性稀释剂，成粒剂和崩解剂，粘合剂，润滑剂，甜味剂，调味剂，着色剂，防腐剂，生理可降解组合物例如明胶，水性媒介物和溶剂，油性媒介物和溶剂，悬浮剂，分散或润湿剂，乳化剂，缓和剂，缓冲剂，盐类，增稠剂，填充剂，乳化剂，抗氧化剂，抗生素，抗真菌剂，稳定剂，以及可药用聚合或疏水材料。可以包括在本发明的药物组合物中的其他“附加成分”在本领域中是已知的，并描述在例如通过参考并入本文的genaro主编(1985，《remington制药学》(remington’s pharmaceutical sciences)，mack publishing co.,easton,pa.)中。
[0154]
通常，可以给药到动物、优选为人类的本发明的化合物的剂量随着多种因素而变，
包括但不限于动物的类型和所治疗的疾病状态的类型、动物的年龄和给药途径。
[0155]
所述化合物可以以每日几次的频率给药到动物，或者它可以以更低频率给药，例如每日一次、每周一次、每两周一次、每月一次或甚至更低的频率，例如每几个月一次或甚至每年一次或更低的频率。给药的频率对于专业技术人员来说是显而易见的，并且取决于多种因素，例如但不限于所治疗的疾病的类型和严重程度、动物的类型和年龄等。
[0156]
实施例
[0157]
在下面的实施例中，将细胞用已知的细胞因子刺激物即脂多糖(“lps”)或吗啉代果糖刺激。对吗啉代果糖做出响应的il-6产生示出在图7中(与40mm吗啉代果糖温育的人类pbmc与对照细胞相比产生明显更多的il-6)。然后将不同水平的葡甲胺或其盐给药到受刺激的细胞，并测量得到的细胞因子水平。
[0158]
实施例1
[0159]
使用来自于两位供体的外周血单核细胞(“pbmc”)来测量对各种不同的输入做出响应的细胞因子水平。对于每位供体来说，一组pbmc未进行处理。允许一组保留在细胞培养中。将不同的一组用40mm葡甲胺处理。将另一组用浓度为40mm的吗啉代果糖处理。其余三组用浓度为40mm的吗啉代果糖和浓度为20mm、40mm和80mm的葡甲胺处理。允许所述组温育直至50小时。在2、4、6、24和48小时测量由细胞分泌到培养基中的细胞因子。通过流式细胞术确定对il-6阳性的细胞的百分率。结果示出在图2a和2b中。葡甲胺的添加降低了pbmc中的il-6水平。
[0160]
使用同样的方案测量到葡甲胺的添加降低了tnf-α(图3a和3b)、mip-1α(图4a和4b)、mcp-1(图5a和5b)和mcp-1(图6a和6b)的水平。
[0161]
实施例2
[0162]
使用浓度为40mm的脂多糖(lps)作为pbmc中细胞因子产生的阳性对照。葡甲胺以40mm添加，并允许细胞温育4小时，然后分拣。葡甲胺显著降低lps刺激的il-6阳性pbmc的百分率的提高，但是未使细胞返回到正常范围(与未刺激组相比p《0.05，与lps组相比p《0.05)。图8。将同样的方案用于测量il-1α的产生。lps和lps与葡甲胺的组合两者显著提高表达il-1α的pmbc的百分率。图9。
[0163]
实施例3
[0164]
将thp-1细胞(源自于急性单核细胞性白血病患者的单核细胞系)培养至80％合生。然后将所述thp-1细胞用25ng/ml lps处理，以诱导细胞因子分泌。将细胞用各种不同浓度的葡甲胺处理。在24小时时收获组织培养基并确定细胞因子水平。葡甲胺在高浓度下表现出干扰下述细胞因子的分泌的能力：il-1β(图10)，il-8((图11)，il-9(图12)，mip-1α(图13)，mip-1β(图14)和vegf(图15)。在低至10mm的浓度下表现出细胞因子减少，但在较高浓度下减少更加显著。
[0165]
本文中引用的每一份专利、专利申请和出版物的公开内容整体通过参考并入本文。
[0166]
尽管本发明已参考特定实施方式进行了公开，但显然本领域的其他技术人员可以在不违背本发明的真正精神和范围的情况下设计本发明的其他实施方式和变化形式。权利要求书旨在被解释为包括所有此类实施方式和等同的变化形式。