一种抗虫基因和耐草甘膦基因表达载体及其应用的制作方法

技术特征：
1.一种抗虫基因和耐草甘膦基因的表达载体，其特征在于所述表达载体含有抗虫基因cry1ab、抗虫基因cry2ae和耐草甘膦基因cp4。2.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述抗虫基因cry1ab核苷酸序列为seq id no：1所示；所述抗虫基因cry2ae核苷酸序列为seq id no：3所示；所述耐草甘膦基因cp4核苷酸序列为seq id no：5所示。3.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述表达载体包含玉米泛素启动子pzmubi或复合启动子；所述复合启动子由camv35s启动子与玉米actin2的第二个内含子组成。4.如权利要求3所述的表达载体，其特征在于所述玉米泛素启动子pzmubi核苷酸序列如seq id no：11所示；所述复合启动子核苷酸序列如seq id no：7所示。5.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述表达载体包含根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因的终止子tnos或camv35s终止子t35s。6.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述表达载体包括玉米epsps基因的叶绿体信号肽或水稻epsps基因的叶绿体信号肽；所述玉米epsps基因的叶绿体信号肽核苷酸序列如seq id no：10所示；所述水稻epsps基因的叶绿体信号肽核苷酸序列如seq id no：8所示。7.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述表达载体包括烟草mar序列，核苷酸序列为seq id no：13所示。8.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述表达载体包含启动抗虫基因cry1ab表达的玉米泛素启动子pzmubi，终止该基因表达的根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因的终止子tnos；启动抗虫基因cry2ae表达的玉米泛素启动子pzmubi，玉米epsps基因的叶绿体信号肽，终止该基因表达的根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因的终止子tnos；启动耐草甘膦基因cp4表达的camv35s启动子p35s与基因内含子组成的复合启动子p35s-intron，水稻epsps基因的叶绿体信号肽，终止该基因表达的camv35s终止子t35s。9.一种权利要求1所述表达载体在制备转基因植物细胞中的应用。10.如权利要求9所述的应用，其特征在于所述植物包括：玉米、水稻、大豆、油菜或棉花。

技术总结
本发明公开了一种抗虫基因和耐草甘膦基因表达载体及其应用，所述表达载体含有抗虫基因cry1Ab、抗虫基因cry2Ae和耐草甘膦基因cp4。本发明在cry2Ae基因前面加了叶绿体信号肽序列，一方面增加了Cry2Ae蛋白的表达量，增加幅度为20％-100％；另一方面，降低了高表达量的Cry2Ae蛋白对植物生长发育造成的干扰。同时，本发明载体同时表达Cry1Ab、Cry2Ae和Cp4蛋白，用该载体转化农作物获得的转基因作物能够同时抗草地贪夜蛾、棉铃虫、甜菜夜蛾、玉米螟、二化螟等农作物的主要鳞翅目害虫，扩宽了转基因作物的抗虫范围，而且能有效延缓害虫抗性的产生，同时使转基因作物具有抗草甘膦的能力。同时使转基因作物具有抗草甘膦的能力。


技术研发人员：王东芳 张意红
受保护的技术使用者：杭州芳韵生物科技有限公司
技术研发日：2021.06.09
技术公布日：2022/12/8