使用无催化活性RNA指导的内切核酸酶的CRISPR-AID的制作方法

技术特征：
no:130具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性；优选地，该接头多肽包含seq id no:130，基本上由seq id no:130组成，或由seq id no:130组成。12.一种多核苷酸，其编码根据前述权利要求中任一项所述的核碱基编辑复合物。13.一种核酸构建体，其包含根据权利要求12所述的多核苷酸。14.一种表达载体，其包含根据权利要求12所述的多核苷酸和/或根据权利要求13所述的核酸构建体。15.一种宿主细胞，其包含：a)根据权利要求1-11中任一项所述的核碱基编辑复合物；b)根据权利要求12所述的多核苷酸；c)根据权利要求13所述的核酸构建体；和/或d)根据权利要求14所述的表达载体。16.根据权利要求15所述的宿主细胞，其是原核或真核宿主细胞。17.根据权利要求15-16中任一项所述的宿主细胞，其为细菌宿主细胞；优选地该细菌宿主细胞是芽孢杆菌属、埃希氏菌属、乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或链霉菌属细胞；更优选地，该细菌宿主细胞选自由以下组成的组：嗜碱芽孢杆菌、高地芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌植物亚种、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、沙福芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、大肠杆菌、嗜酸乳杆菌、淀粉乳杆菌、短乳杆菌、副干酪乳杆菌、纤维二糖乳杆菌、卷曲乳杆菌、弯曲乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、德氏乳杆菌乳酸亚种、发酵乳杆菌、禾口鸡乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、雷曼氏乳酸杆菌、唾液乳杆菌、韩中大乳球菌、福尔摩沙乳球菌、富士山乳球菌、格氏乳球菌、乳酸乳球菌、鱼乳球菌、植物乳球菌、棉子糖乳球菌、中国台湾乳球菌、似马链球菌、酿脓链球菌、乳房链球菌、马链球菌兽疫亚种、不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌和浅青紫链霉菌细胞；最优选地，该细菌宿主细胞是地衣芽孢杆菌细胞。18.根据权利要求15-16中任一项所述的宿主细胞，其为丝状真菌宿主细胞；优选地，该真菌宿主细胞是枝顶孢霉属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属、隐球菌属、线黑粉菌科、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属、瘤胃壶菌属、侧耳属、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属或木霉属细胞；更优选地，该丝状真菌宿主细胞选自由以下组成的组：泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌、干拟蜡菌、卡内基拟蜡菌、浅黄拟蜡孔菌、潘诺希塔拟蜡菌、环带拟蜡菌、微红拟蜡菌、虫拟蜡菌、狭边金孢子菌、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌、粪状金孢子菌、租金孢子菌、女王杜香金孢子菌、热带金孢子菌、褐薄金孢子菌、灰盖鬼伞、毛革盖菌、杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖孢镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、柔毛腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙链孢菌、产紫青霉、黄孢平革菌、射脉菌、刺芹侧耳、土生梭孢壳霉、长域毛栓菌、变色栓菌、哈茨木霉、康宁
木霉、长枝木霉、里氏木霉、和绿色木霉细胞；最优选地，该丝状真菌宿主细胞是黑曲霉、米曲霉或里氏木霉细胞。19.根据权利要求15-16中任一项所述的宿主细胞，其为酵母宿主细胞；优选地，该酵母宿主细胞是假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁维酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属和耶罗维亚酵母属细胞；更优选地，该酵母宿主细胞选自由以下组成的组：乳酸克鲁维酵母、巴斯德毕赤酵母、卡尔酵母、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母、克鲁弗酵母、诺地酵母、卵形酵母、和解脂耶罗维亚酵母细胞；最优选地，该酵母宿主细胞是巴斯德毕赤酵母细胞。20.根据权利要求15-16中任一项所述的宿主细胞，其为哺乳动物宿主细胞；优选地，该哺乳动物宿主细胞是小鼠、大鼠或人细胞。21.一种修饰dna靶序列中至少一个核碱基的方法，该方法包括：a)提供根据权利要求1-11中任一项所述的核碱基编辑复合物，其与与该dna靶序列互补并能够与该dna靶序列杂交的grna复合；以及b)使该核碱基编辑复合物与该dna靶序列接触；其中该dna靶序列中的至少一个核碱基被转化为不同的核碱基而不在目的dna序列中引入双链断裂。

技术总结
本发明涉及核碱基编辑复合物，以及编码所述核碱基编辑复合物的多核苷酸、包含所述多核苷酸的核酸构建体和表达载体、包含所述核碱基编辑复合物和/或多核苷酸的宿主细胞、以及制备和使用所述核碱基编辑复合物的方法，其中所述核碱基编辑复合物包含a)与SEQ ID NO:126或SEQ ID NO:155具有至少60％序列同一性的无催化活性RNA指导的内切核酸酶以及b)核碱基编辑结构域。结构域。


技术研发人员：M.托马斯 仲西隆志
受保护的技术使用者：诺维信公司
技术研发日：2021.03.10
技术公布日：2022/12/1