一种治疗肺癌的联合用药的制作方法

1.本发明属于制药领域，具体涉及一种治疗肺癌的联合用药物，即芳香烃受体抑制剂sr1和阿法替尼联合使用治疗肺癌。
技术背景
2.肺癌是全球常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均高居恶性肿瘤榜首，严重危害人类的生命健康。在我国，肺癌的发病人数也在逐年增加。根据病理类型，肺癌可分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌。非小细胞肺癌约占肺癌总数的85%以上，是最常见的肺癌类型。化疗是此类肺癌治疗的常用治疗手段，以表皮生长因子受体（egfr）、间变性淋巴瘤激酶（alk）和ros1激酶为代表的靶向治疗已用于临床。阿法替尼是治疗egfr突变阳性晚期非小细胞肺癌的一线药物。然而，肿瘤耐药的存在，导致许多患者化疗后很快复发或者进展，限制了治疗效果，成为肺癌临床治疗的瓶颈，需要尽快突破。
3.芳香烃受体(ahr)是一种配体依赖性的转录因子，当受到内源性和外源性化合物的激活后，细胞质内的芳香烃受体产生变构进入细胞核，最终结合到dna的特定序列上，激活或抑制一系列基因的表达，进而产生多种生物学和毒理学效应。芳香烃受体的配体广泛，包括花生四烯酸，犬尿氨酸等内源性配体。芳香烃受体与配体结合并被其激活后，与芳香烃受体核转位因子形成二聚体，进入细胞核发挥作用，在调控细胞增殖、分化、凋亡方面起着重要作用。芳香烃受体在多种肿瘤里高表达，被认为是肿瘤治疗的潜在靶点。


技术实现要素：

4.本发明目的在于提供一种合用芳香烃受体抑制剂与阿法替尼，以克服对阿法替尼耐药问题。
5.本发明的再一目的在于：提供上述本发明目的通过以下方案实现：一种合用芳香烃受体抑制剂和阿法替尼，抑制肿瘤细胞的增殖。
6.申请人科研中发现：芳香烃受体抑制剂sr1（stem regenin 1）与阿法替尼联用可增强药物敏感性，提高临床疗效。尤其是sr1与阿法替尼联合使用对人原发性肺癌细胞系a549发挥了协同抑制作用。
7.阿法替尼是治疗表皮生长因子受体突变阳性晚期非小细胞肺癌的一线药物。
8.所述芳香烃受体抑制剂为stem regenin 1（sr1）。
9.所述肿瘤细胞为肺癌细胞。
10.所述sr1与阿法替尼的质量比为1：2。
11.本发明首次发现，本发明还提供了一种合用芳香烃受体抑制剂sr1和阿法替尼在治疗肺癌药物中的应用。
12.本发明首次发现，sr1与阿法替尼联合使用对人原发性肺癌细胞系a549发挥了协
同抑制作用。因此，阿法替尼和芳香烃受体抑制剂sr1联合使用在肺癌的药物治疗中具有广阔的应用前景。
附图说明
13.附图1 给药7天后各组对a549细胞的增殖抑制率；附图2 给药7天后各组对a549细胞的克隆形成能力影响。
具体实施方式
14.本发明通过下面的实施例进行详细解释，但不仅限于此。
15.sr1与阿法替尼联合使用对肺癌细胞生长的影响：细胞来源与培养：人原发性肺癌细胞系a549购于上海中科院细胞库。细胞采用含10%胎牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素的dmem培养基培养于37℃、5%co2培养箱中。实验方法：1. cck8实验方法检测sr1与阿法替尼联合使用对肺癌细胞生长的影响。
16.具体操作如下：a549细胞以1000个细胞/孔的密度接种于96孔板中培养，将细胞分为4组：1）单独使用阿法替尼组，阿法替尼的剂量为10μm；2）单独使用sr1组，剂量为5μm；3）阿法替尼和sr1联合使用组，阿法替尼的剂量为10μm，sr1的剂量为5μm；4）对照组:不使用阿法替尼和sr1，即为不加药的dmem培养基组。
17.各组培养基每48小时更换一次，培养7天后使用酶标仪检测，结果如图1所示，单独使用阿法替尼和芳香烃受体抑制剂sr1均能在一定程度上抑制肺癌细胞的增殖，将10μm阿法替尼和5μm sr1联合使用对a549细胞生长的抑制作用均显著增强，取得了协同增效的效果。
18.将10μm 阿法替尼和5μm sr1联合使用对肺癌细胞（a549）增殖的抑制作用最显著，其次依序是单独使用阿法替尼、单独使用芳香烃受体抑制剂sr1，对照组无抑制作用。
[0019] 2. 克隆形成实验方法检测sr1与阿法替尼联合使用对肺癌生长细胞的影响。
[0020]
具体操作如下：a549细胞以500个细胞/孔的密度接种于96孔板中培养，将细胞分为4组：1）单独使用阿法替尼组，阿法替尼的剂量为10μm；2）单独使用sr1组，sr1的剂量为5μm；3）阿法替尼和sr1联合使用组，阿法替尼的剂量为10μm，sr1的剂量为5μm；4）对照组为不加药的dmem培养基组。
[0021]
各组培养基每48小时更换一次，培养14天后固定细胞并染色，拍照并拍摄克隆数目。
[0022]
结果如图2所示，单独使用阿法替尼和芳香烃受体抑制剂sr1均能在一定程度上抑制肺癌细胞的克隆形成能力，将10μm阿法替尼和5μm sr1联合使用更加抑制了a549细胞生长的克隆形成能力。
[0023]
将10μm 阿法替尼和5μm sr1联合使用对肺癌细胞（a549）增殖的抑制作用最显著，其次依序是单独使用阿法替尼、单独使用芳香烃受体抑制剂sr1，对照组无抑制作用。与方法1的结论一致。
[0024]
从方法1和2可以得出：单独使用阿法替尼和芳香烃受体抑制剂sr1均能在一定程度上抑制肺癌细胞的增殖，将10μm 阿法替尼和5μm sr1联合使用对肺癌细胞增殖的抑制作用均显著增强，取得了协同增效的效果。
[0025]
综上，本发明提供了一种治疗肺癌的联合用药物。本发明首次发现，芳香烃受体抑制剂sr1与阿法替尼联合使用对人原发性肺癌细胞系的增殖发挥了协同抑制作用。因此，阿法替尼和芳香烃受体抑制剂sr1联合使用在肺癌的治疗药物中具有广阔的应用前景。


技术特征：
1.一种合用芳香烃受体抑制剂和阿法替尼，抑制肿瘤细胞的增殖。2.根据权利要求1所述合用芳香烃受体抑制剂和阿法替尼抑制肿瘤细胞的增殖，其特征在于：所述芳香烃受体抑制剂为stem regenin 1。3.根据权利要求2所述合用芳香烃受体抑制剂和阿法替尼抑制肿瘤细胞的增殖，其特征在于：所述肿瘤细胞为肺癌细胞。4.根据权利要求3所述合用芳香烃受体抑制剂和阿法替尼抑制肿瘤细胞的增殖，其特征在于：所述sr1与阿法替尼的质量比为1：2。5.一种合用芳香烃受体抑制剂sr1和阿法替尼治疗肺癌药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种阿法替尼是治疗表皮生长因子受体突变阳性晚期非小细胞肺癌的一线药物。本发明发现，SR1与阿法替尼联合用药对肺癌细胞的增殖发挥了协同抑制作用，为临床治疗肺癌提供了一种联合用药方法。肺癌提供了一种联合用药方法。


技术研发人员：崔大祥 崔明青
受保护的技术使用者：上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司
技术研发日：2022.09.30
技术公布日：2022/11/25