海参酵解素在抑菌护肤组合物中的应用的制作方法

1.本发明涉及一种海参酵解素在抑菌护肤组合物中的应用，属于天然化妆品技术领域。


背景技术：

2.脸上起的痘痘学名叫痤疮，其产生的原因有：雄激素分泌旺盛，皮脂分泌旺盛，毛囊导管过度角化导致的堵塞，以及痤疮丙酸杆菌过度增殖等。部分痤疮患者，如不加以治疗，痤疮会反复发作，严重者会持续几年，严重影响了患者的正常生活，患者深受痘痘反复发作的痛苦。痊愈后，在长过痘痘的位置，会留下疤痕，严重影响美观。
3.痤疮丙酸杆菌（学名propionibacterium acnes）是痤疮最主要的致病菌，属于亲脂的革兰氏阳性厌氧菌，是人类毛囊皮脂腺内数量最多的微生物。致病机制是促进皮脂腺分泌，毛囊皮脂腺导管过度角化，导致皮脂腺导管堵塞，厌氧菌大量繁殖，激活体内免疫，诱导炎症反应，产生炎症因子，导致痤疮发生。表现为炎性的丘疹、结节、囊肿等。现阶段，对于痤疮的治疗常用口服四环素类的抗生素或维a酸类的药物，如果痤疮非常严重，使用上述药物不能彻底治疗的话，还可加服皮脂类固醇激素进行治疗，减轻痤疮的严重反应。由于痤疮可能会反复发作，因此，用药时间较长。
4.如果能提供一种安全有效的护肤品，使得患有痤疮的群体，在护理皮肤的同时，避免痤疮的发生，减少或避免抗生素或激素的使用，将是患有痤疮群体的福音。
5.在祛痘类护肤品（原料）中曾经出现违规添加抗生素的情况，随着市场规范监管的常态化，这种情况有明显好转。但在一些不正规的祛痘产品中，特别是各种自制产品中依然大量存在。
6.据报道，茶树精油等植物精油和某些植物提取物也具有一定程度的抑菌功能，可以用于祛痘，但是精油的气味过于强烈，且植物提取物起效浓度高，一方面不利于配伍，另一方面也导致成本居高不下。
7.另一方面，随着生活水平的提高，以及拒绝各种传染病的侵袭，人们对护肤品的需求不仅仅是护肤，日常生活中，人们会选择同时具有抑菌和美白功能等多功能绿色护肤品，以防止病菌的污染和侵害，同时又有一定的美白作用。
8.申请人在先申请的cn 109251954 a，披露了利用微生物发酵法对海参肠进行发酵制备得到一种海参肠发酵产品（下称海参酵解素），该海参酵解素含有丰富的海参多肽等多种营养成分；cn 111568799 a披露了cn 109251954 a所获得的海参肠发酵产品，具有很好的美白功能。


技术实现要素：

9.发明目的：提供一种抑菌护肤组合物，安全且无不良副反应，达到既护肤又抑菌的效果，满足人们对现代生活的需求。
10.实验发现，cn 109251954 a所获得的海参酵解素产品，具有cn 111568799 a所述
美白作用外，还具有优异的抑制痤疮丙酸杆菌性能。
11.技术方案:一种海参酵解素在抑菌护肤组合物中的应用。
12.本发明所述抑菌护肤组合物，其中，含有质量百分含量为0.8-2%的海参酵解素。
13.所述抑菌护肤组合物，优选的，含有1.2-1.8%的海参酵解素，进一步优选的为含有1.4-1.7%的海参酵解素。
14.本发明所述抑菌护肤组合物，当海参酵解素质量百分含量低于0.8时，抑菌效果不理想；当海参酵解素质量百分含量高于2.0后，抑菌效果增长不明显。
15.优选的，所述抑菌护肤组合物，为抑制痤疮丙酸杆菌的护肤组合物。
16.本发明所述抑菌护肤组合物，可以根据现有技术制备为任何化妆品的形态，如护肤霜或护肤乳。
17.优选的，本发明所述海参酵解素中，粗蛋白含量大于65%，且游离氨基酸与海参多肽质量比在1:（6-13）范围，优选的是1:（6.5-8）范围。
18.优选的，本发明所述海参酵解素，其中，分子量小于200da海参肽与分子量200da-500da海参肽、分子量500da-1000da海参肽的质量比为1:（2-4）:（0.2-1.3）。
19.优选的，所述海参酵解素在抑菌护肤组合物，含有海参酵解素、保湿剂，润肤剂等。
20.所述保湿剂，选自多元醇类化合物中的一种或两种及以上与三甲基甘氨酸的组合。
21.所述润肤剂选自双-peg-18甲基醚二甲基硅烷、双-peg-15甲基醚聚二甲基硅氧烷、peg-7甘油椰油酸酯、peg-75羊毛脂、琥珀酸二乙氧基乙酯、巴巴苏籽油甘油聚醚-8酯类、霍霍巴蜡peg-80酯类、peg-59牛油树脂、霍霍巴油peg-150酯类等中的一种或两种及以上。
22.优选的，所述润肤剂选自辛酸/葵酸甘油三酯、甘油三（乙酸己酸）酯、橄榄油、杏仁油、霍霍巴油、菜籽油、椰子油、鳄梨油、米糠油、山茶油、澳洲坚果油、小麦胚芽油等。
23.优选的，本发明所述海参酵解素在抑菌护肤组合物，含有海参酵解素0.8-2%、霍霍巴油1.5-2.5%、骨胶原2-4%、戊二醇0.5-1.5%、三甲基甘氨酸0.5-1%、对羟基苯甲酸甲酯0.5-2%、透明质酸钠0.6-1.5%、甘油0.06-0.1%、硬脂酸柠檬酸甘油酯1.0-2.0%、余量为超纯水。
24.本发明所述抑菌护肤组合物，可以按现有公知护肤乳制备技术制备。
25.本发明所述海参酵解素按照cn 109251954 a提供的方法制备，具体包括如下步骤：步骤1.取海参肠(湿肠)，清洗、经匀浆机打碎后，制备成肠浆液，固形物浓度为8-15％，调整ph为7-8；步骤2.将步骤1所得溶液加热煮沸；步骤3.按每千克海参肠(以干重计)添加微生物培养液0 .1l的比例向步骤2所得溶液中添加微生物培养液，在温度35℃的条件下，发酵12小时，然后升温至45℃，保持30分钟；步骤4.将步骤3所得溶液固液分离后，通过冷冻干燥工艺，得海参酵解素粉剂。
26.所述微生物为枯草芽孢杆菌(bacillus natto)，编号为cicc 10023，源自中国工
业微生物菌种保藏管理中心；所述微生物培养液的制备方法如下：将枯草芽孢杆菌cicc 10023按照2％接种量接种于培养基中，在35℃、200rpm的条件下发酵培养72小时，制得微生物培养液；培养基组分按重量百分比为：葡萄糖2％，蛋白胨1％，酵母粉1％，豆粕粉3％，麸皮3％，硝酸钠0.1％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.25％，氯化钠0.5％，余量为超纯水。
27.有益效果：本发明提供了一种抑菌护肤组合物，所述抑菌护肤组合物，既有美白作用，又能抑制痤疮丙酸杆菌的感染，预防或治疗痤疮，另一方面，海参肽能营养肌肤，增加皮肤的免疫能力。本发明为爱美人士提供了一种绿色健康的护肤品，同时，为痤疮患者提供了适宜的护肤品。解决了痤疮患者的难言之隐。
28.实施例1. 海参酵解素的制备：步骤1.取海参肠(湿肠)，清洗、经匀浆机打碎后，制备成肠浆液，固形物浓度约8％，调整ph为7；步骤2.将步骤1所得溶液加热煮沸；步骤3.按每千克海参肠(以干重计)添加微生物培养液0 .1l的比例向步骤2所得溶液中添加微生物培养液，在温度35℃的条件下，发酵12小时，然后升温至45℃，保持30分钟；步骤4.将步骤3所得溶液室温固液分离后，其中的二分之一通过冷冻干燥工艺，得海参酵解素粉剂；另二分之一按现有文献公开的海参肽制备工艺经脱脂纯化、吸附脱色后，过离子交换树脂脱钠、再浓缩干燥，得固体海参肽样品。
29.分别测定海参酵解素粉剂中粗蛋白量、游离氨基酸、多肽的含量；以及海参肽中，各分子量多肽的分布，记录于表1和表2。
30.说明：步骤3中微生物培养液的制备方法如下：枯草芽孢杆菌按照2％接种量接种于培养基中，在35℃、200rpm的条件下发酵培养72小时，制得微生物培养液。
[0031] 培养基组分如下： 葡萄糖2％，蛋白胨1％，酵母粉1％，豆粕粉3％，麸皮3％，硝酸钠0 .1％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.25％，氯化钠0.5％，余量为超纯水。所述百分比均为质量百分比。
[0032]
表1. 海参酵解素粉剂中粗蛋白量、游离氨基酸、多肽的含量。
[0033]
表2. 海参肽中，各分子量多肽的分布。
[0034]
实施例2. 海参酵解素的制备：步骤1.取海参肠(湿肠)，清洗、经匀浆机打碎后，制备成肠浆液，固形物浓度约为15％，调整ph为8；步骤2.将步骤1所得溶液加热煮沸；
步骤3.按每千克海参肠(以干重计)添加微生物培养液1l的比例向步骤2所得溶液中添加微生物培养液，在温度45℃的条件下，发酵4小时，然后升温至60℃，保持10分钟；所述微生物培养液同实施例1。
[0035]
步骤4.将步骤3所得溶液室温固液分离后，其中的二分之一通过冷冻干燥工艺，得海参酵解素粉剂；另二分之一按现有文献公开的海参肽制备工艺经脱脂纯化、吸附脱色后，过离子交换树脂脱钠、再浓缩干燥，得固体海参肽样品。
[0036]
分别测定海参酵解素粉剂中粗蛋白量、游离氨基酸、多肽的含量；以及海参肽中，各分子量多肽的分布，记录于表3和表4。
[0037]
表3.参酵解素粉剂中粗蛋白量、游离氨基酸、多肽的含量：。
[0038]
表4.海参肽中，各分子量多肽的分布。
[0039]
实施例3. 海参酵解素的制备：步骤1.取海参肠(湿肠)，清洗、经匀浆机打碎后，制备成肠浆液，固形物浓度约为12％，调整ph为7.5；步骤2.将步骤1所得溶液加热煮沸；步骤3.按每千克海参肠(以干重计)添加微生物培养液0.5l的比例向步骤2所得溶液中添加微生物培养液，在温度40℃的条件下，发酵6小时，然后升温至50℃，保持20分钟；所述微生物培养液同实施例1。
[0040]
步骤4.将步骤3所得溶液室温固液分离后，其中的二分之一通过冷冻干燥工艺，得海参酵解素粉剂；另二分之一按现有文献公开的海参肽制备工艺经脱脂纯化、吸附脱色后，过离子交换树脂脱钠、再浓缩干燥，得固体海参肽样品。
[0041]
分别测定海参酵解素粉剂中粗蛋白量、游离氨基酸、多肽的含量；以及海参肽中，各分子量多肽的分布，记录于表5和表6。
[0042]
所得粉剂的成分如下：表5. 海参酵解素粉剂中粗蛋白量、游离氨基酸、多肽的含量。
[0043]
表6. 海参肽中，各分子量多肽的分布。
[0044]
实施例4.利用实施例1制备的海参酵解素，制备抑菌护肤组合物。
[0045]
实施例1制备的海参酵解素2g、霍霍巴油1.5g、骨胶原4g、戊二醇0.5g、三甲基甘氨酸1g、对羟基苯甲酸甲酯0.5g、透明质酸钠0.6g、甘油0.06g、硬脂酸柠檬酸甘油酯1g、余量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0046]
实施例5.利用实施例1制备的海参酵解素，制备抑菌护肤组合物。
[0047]
实施例1制备的海参酵解素0.8g、霍霍巴油2.5g、骨胶原2g、戊二醇1.5g、三甲基甘氨酸0.5g、对羟基苯甲酸甲酯2g、透明质酸钠1.5g、甘油0.1g、硬脂酸柠檬酸甘油酯2.0g、余量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0048]
实施例6. 利用实施例1制备的海参酵解素，制备抑菌护肤组合物。
[0049]
实施例1制备的海参酵解素1.5g、霍霍巴油2g、骨胶原3g、戊二醇1g、三甲基甘氨酸0.8g、对羟基苯甲酸甲酯1.5g、透明质酸钠1.0g、甘油0.08g、硬脂酸柠檬酸甘油酯1.5g，余量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0050]
实施例7.利用实施例2制备的海参酵解素，制备抑菌护肤组合物。
[0051]
实施例2制备的海参酵解素1.5g、霍霍巴油2g、骨胶原3g、戊二醇1g、三甲基甘氨酸0.8g、对羟基苯甲酸甲酯1.5g、透明质酸钠1.0g、甘油0.08g、硬脂酸柠檬酸甘油酯1.5g，余量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0052]
实施例8.利用实施例3制备的海参酵解素，制备抑菌护肤组合物。
[0053]
实施例3制备的海参酵解素1.5g、霍霍巴油2g、骨胶原3g、戊二醇1g、三甲基甘氨酸0.8g、对羟基苯甲酸甲酯1.5g、透明质酸钠1.0g、甘油0.08g、硬脂酸柠檬酸甘油酯1.5g，余量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0054]
对照例1.利用实施例1制备的海参肽样品，制备抑菌护肤组合物。
[0055]
实施例1制备的酵解素0.4g、霍霍巴油2g、骨胶原3g、戊二醇1g、三甲基甘氨酸0.8g、对羟基苯甲酸甲酯1.5g、透明质酸钠1.0g、甘油0.08g、硬脂酸柠檬酸甘油酯1.5g，余量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0056]
对照例2.利用实施例1制备的海参肽样品，制备抑菌护肤组合物。
[0057]
实施例1制备的酵解素3.5g、霍霍巴油2g、骨胶原3g、戊二醇1g、三甲基甘氨酸0.8g、对羟基苯甲酸甲酯1.5g、透明质酸钠1.0g、甘油0.08g、硬脂酸柠檬酸甘油酯1.5g，余量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0058]
对照例3.利用实施例2制备的海参肽样品，制备抑菌护肤组合物。
[0059]
实施例2制备的酵解素0.4g、霍霍巴油2g、骨胶原3g、戊二醇1g、三甲基甘氨酸0.8g、对羟基苯甲酸甲酯1.5g、透明质酸钠1.0g、甘油0.08g、硬脂酸柠檬酸甘油酯1.5g，余量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0060]
对照例4. 利用实施例2制备的海参酵解素，制备抑菌护肤组合物。
[0061]
实施例2制备的海参酵解素3.8g、霍霍巴油2g、骨胶原3g、戊二醇1g、三甲基甘氨酸0.8g、对羟基苯甲酸甲酯1.5g、透明质酸钠1.0g、甘油0.08g、硬脂酸柠檬酸甘油酯1.5g，余量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0062]
对照例5. 利用实施例3制备的海参酵解素，制备抑菌护肤组合物。
[0063]
实施例3制备的海参酵解素3.5g、霍霍巴油2g、骨胶原3g、戊二醇1g、三甲基甘氨酸0.8g、对羟基苯甲酸甲酯1.5g、透明质酸钠1.0g、甘油0.08g、硬脂酸柠檬酸甘油酯1.5g，余
量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0064]
对照例6. cn 109251954 b实施例2所得粉剂（即海参酵解素）：其中粗蛋白量、游离氨基酸、多肽的含量，以及海参多肽中，各分子量多肽的分布分别见表7和表8。
[0065]
表7. 海参酵解素粉剂中粗蛋白量、游离氨基酸、多肽的含量。
[0066]
表8. 海参多肽中，各分子量多肽的分布。
[0067]
cn 109251954 b实施例2制备的海参酵解素1.5g、霍霍巴油2g、骨胶原3g、戊二醇1g、三甲基甘氨酸0.8g、对羟基苯甲酸甲酯1.5g、透明质酸钠1.0g、甘油0.08g、硬脂酸柠檬酸甘油酯1.5g，余量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0068]
对照例7. 利用实施例1制备的海参肽，制备抑菌护肤组合物实施例1制备的海参肽1.5g、霍霍巴油2g、骨胶原3g、戊二醇1g、三甲基甘氨酸0.8g、对羟基苯甲酸甲酯1.5g、透明质酸钠1.0g、甘油0.08g、硬脂酸柠檬酸甘油酯1.5g，余量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0069]
对照例8. 利用实施例2制备的海参肽，制备抑菌护肤组合物实施例2制备的海参肽1.5g、霍霍巴油2g、骨胶原3g、戊二醇1g、三甲基甘氨酸0.8g、对羟基苯甲酸甲酯1.5g、透明质酸钠1.0g、甘油0.08g、硬脂酸柠檬酸甘油酯1.5g，余量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0070]
对照例9. 利用实施例3制备的海参肽，制备抑菌护肤组合物实施例3制备的海参肽1.5g、霍霍巴油2g、骨胶原3g、戊二醇1g、三甲基甘氨酸0.8g、对羟基苯甲酸甲酯1.5g、透明质酸钠1.0g、甘油0.08g、硬脂酸柠檬酸甘油酯1.5g，余量为超纯水，制备100g润肤乳。
[0071]
实施例7. 参考中华人民共和国国家卫生健康委员会发布的 ws/t 650—2019《抗菌和抑菌效果评价方法》第5.1.1规定的悬液定量抑菌试验，分别测定实施例4-8、对照例1-9润肤乳的抑菌能力。
[0072]
试验菌株：痤疮丙酸杆菌试剂：稀释液： 0.03 mol/l 磷酸盐缓冲液（pbs）（ph7.2～7.4）。
[0073]
样品溶液制备：分别取实施例4-8、对照例1-9润肤乳各20g，分别用0.03 mol/l 磷酸盐缓冲液（pbs）（ph7.2～7.4）制备为100ml溶液。
[0074]
试验步骤：分别取试验菌24h新鲜斜面培养物用pbs洗下，用pbs分别稀释至约5.0
×ꢀ
10
5 cfu/ml试验菌悬液备用。
[0075]
取无菌试管，加入5.0 ml样品溶液，置20℃
±
1℃ 水浴中5min后，再加入0.1 ml试验菌悬液，迅速混匀并立即计时。
[0076]
12小时后，分别吸取1.0 ml试验菌与样品混合液接种2个平皿，倾注培养基。以pbs做10倍系列稀释，选适宜稀释度分别吸取1.0 ml接种2个平皿，做活菌培养计数。同时用pbs
代替样品，进行平行试验，作为阳性对照。阳性对照回收菌落数在1.0
×ꢀ
10
4 cfu/ml～9.0
×ꢀ
10
4 cfu/ml之间。取同批次pbs、培养基作阴性对照。所有试验样本和对照样本均在36℃
±
1℃培养，细菌繁殖体培养48h观察最终结果。试验重复3次，计算抑菌率。抑菌率记录于表9。
[0077]
抑菌率x=[(a
0-a1)/ a0]
ꢀ´
100%式中：x—抑菌率， %；a0—阳性对照组回收菌量，单位为 cfu/ml；a1—试验组回收菌量，单位为 cfu/ml。表9. 实施例4-8、对照例1-6产品的抑菌能力测定。
[0078]
表9数据说明： 实施例4-8产品相对于对照例有很好的抑痤疮丙酸杆菌能力。说明本发明技术方案提供了一种有效的抑痤疮丙酸杆菌组合物。对照例2、4、5润肤乳的抑菌能力低于实施例6、7、8，说明当海参酵解素中游离氨基酸的含量过高时，润肤乳的抑痤疮丙酸杆菌能力不呈正相关。对照例7、8、9润肤乳的抑菌能力明显低于实施例4-8，说明海参酵解素的抑痤疮丙酸杆菌能力明显强于海参肽。