嗜麦芽宅养单胞菌菌株Sma在制备杀死甘蔗黄单胞菌的菌剂中的应用

嗜麦芽宅养单胞菌菌株sma在制备杀死甘蔗黄单胞菌的菌剂中的应用
技术领域
1.本发明属于抗甘蔗白条黄单胞菌的技术领域。


背景技术：

2.由甘蔗白条黄单胞菌(xanthomonas albilineans,xa)引起的甘蔗白条病严重影响甘蔗的产量和糖分，是威胁甘蔗生产安全的重要病害。xa在2007年已被列入《中华人民共和国进口植物检疫性有害生物》名录。
3.甘蔗白条黄单胞菌(xanthomonas albilineans,xa)主要通过甘蔗种苗和砍蔗工具传播，目前对甘蔗白条病尚无有效的治疗技术，因此针对该病害的技术多集中于前期检疫，通过提高对携带病原菌xa的种苗的检测灵敏度，防止xa随甘蔗种苗传播。而对已染病的甘蔗种苗或整片蔗田，一经发现只能采取全部销毁的策略。因此，亟需发展抵抗xa的技术，以保证甘蔗的生产安全，减少经济损失。


技术实现要素：

4.有鉴于此，本发明提供了一种嗜麦芽宅养单胞菌 (stenotrophomonas maltophilia,sma)在制备杀死甘蔗白条黄单胞菌 (xanthomonas albilineans)的菌剂中的应用。
5.同时本发明还提供了一种嗜麦芽宅养单胞菌(stenotrophomonasmaltophilia,sma)在制备免疫甘蔗抗甘蔗白条黄单胞菌(xanthomonasalbilineans)的菌剂中的应用。
6.本发明提供的菌株具有杀死甘蔗白条黄单胞菌的能力，同时能使甘蔗具有免疫甘蔗白条黄单胞菌的能力。
附图说明
7.图1.sma与xa等比例混合后xa的活细胞数逐渐减少图。
8.图2.sma菌液喷洒免疫增强甘蔗本身抗xa的能力图。
9.其中，a是sma分泌的代谢产物不影响xa的存活率图。b是 sma菌液喷洒免疫甘蔗后，甘蔗叶片分泌的代谢产物显著降低xa的存活率图。
具体实施方式
10.从中国普通微生物菌种保藏管理中心(cgmcc)购买获得嗜麦芽宅养单胞菌(stenotrophomonas maltophilia)菌株，其保藏编号为 cgmcc no.1.1788的菌株，简称为sma。
11.甘蔗白条黄单胞菌(xanthomonas albilineans)菌株xa-fj1，其 ncbi菌株信息为xa-fj1，genbank no.16069368，简称为xa。
12.实施例
13.1.菌株sma杀死甘蔗白条黄单胞菌xa
14.麦芽宅养单胞菌(stenotrophomonas maltophilia)，简称为sma。
15.甘蔗黄单胞菌(xanthomonas albilineans)，简称为xa。
16.实验准备：
17.培养基lb(胰蛋白胨10g，酵母粉5g，nacl 10g，ph 7.0)。
18.培养基mw(蔗糖10g，胰蛋白胨5g，磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.25g，亚硫酸钠0.05g，ph 6.8-7.0)。
19.实验步骤：
20.分别用lb培养基和mw培养基28℃摇菌培养sma和xa，分别用各自培养基调至od
600
＝0.2，显微镜下观察调整比例，使二者混合后的细胞个数比例为1:1，混合培养1、2、3小时后分别取样，计数混合液中二者的细胞个数比例，各时间点的细菌细胞个数比分别为：1小时xa:sma＝0.6：1，2小时xa:sma＝0.5：1，3小时xa: sma＝0.2：1。
21.实验结果：
22.如图1所示，起始(0小时)时二者的细胞比例为1:1，随着混合培养时间的延长，混合液中xa的比例逐渐下降，至3小时时，xa：sma＝0.2:1(1:5)，表明sma能有效杀死混合培养液中的xa。
23.2.喷洒免疫甘蔗能有效提高甘蔗本身抗xa的能力
24.实验准备：
25.mgso
4 10mm，液氮，研钵，0.15％琼脂。
26.实验步骤：
27.分别用lb培养基和mw培养基28℃摇菌培养sma和xa，离心收集sma菌体，用10mm mgso4洗涤sma菌体并重悬，用10mmmgso4调菌液od
600
＝0.4，用10mm mgso4稀释菌液100倍后喷洒甘蔗进行免疫，同时喷洒10mm mgso4作为对照组；重复2次，每两次间隔24小时。
28.取甘蔗叶片加入液氮研磨，将研磨物置于无菌培养皿中，在表面加入少量0.15％琼脂(40度左右)制成平整表面，待其凉透后，表面置0.2μm无菌滤膜，备用。
29.同时，在lb固体平板表面涂布sma菌液，待菌液完全干后，表面置0.2μm无菌滤膜，备用。
30.将过夜培养的xa菌液用mw培养基调至od
600
＝0.4，取100μl 小心加到滤膜上方，28度培养。24小时后，用mw培养基从滤膜上洗下xa并对其进行平板计数。
31.实验结果：
32.如图2所示，与对照组(1.000)相比，经sma免疫处理的甘蔗叶片培养基中xa的存活率下降至0.024(表1)，这表明sma免疫处理甘蔗叶片产生的代谢产物透过滤膜杀死xa(图2b)。
33.而sma自身分泌的代谢产物透过滤膜，并没有导致xa存活率的下降(图2a和表2)。
34.因此sma免疫处理可显著增强甘蔗本身抵抗xa的能力。
35.表1.xa的存活数目
[0036][0037]
表2.xa的存活数目
[0038]


技术特征：
1.嗜麦芽宅养单胞菌(stenotrophomonas maltophilia)菌株sma cgmcc no.1.1788在制备杀死甘蔗白条黄单胞菌(xanthomonas albilineans)的菌剂中的应用。2.嗜麦芽宅养单胞菌(stenotrophomonas maltophilia)菌株sma cgmcc no.1.1788在制备免疫甘蔗后使其具有抗或杀死甘蔗黄单胞菌(xanthomonas albilineans)的菌剂中的应用。

技术总结
本发明属于抗甘蔗白条黄单胞菌的技术领域。本发明提供了一种嗜麦芽宅养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)菌株Sma CGMCCNO.1.1788在制备杀死甘蔗黄单胞菌(Xanthomonas albilineans)的菌剂中的应用。本发明提供的菌株具有杀死甘蔗白条黄单胞菌的能力，同时免疫甘蔗后使其具有免疫或杀死甘蔗白条黄单胞菌的能力。蔗白条黄单胞菌的能力。蔗白条黄单胞菌的能力。


技术研发人员：王芳芳 王妍 钱韦
受保护的技术使用者：中国科学院微生物研究所
技术研发日：2022.08.17
技术公布日：2022/11/15