一种载有2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的医用无菌胶原蛋白产品的制备的制作方法

1.本发明涉及医用材料技术领域，尤其涉及一种载有2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的医用无菌胶原蛋白产品的制备。


背景技术：

2.2-氧杂环庚烷酮的均聚物(polycaprolactone，pcl，cas号：24980-41-4)又称聚ε-己内酯，是通过ε-己内酯单体在金属阴离子络合催化剂催化下开环聚合而成的高分子聚合物，通过控制聚合条件，可以获得不同的分子量。其外观为白色固体粉末或颗粒，无毒，不溶于水，易溶于多种极性有机溶剂。2-氧杂环庚烷酮的均聚物具有良好的生物相容性、良好的有机高聚物相容性，以及良好的生物降解性，可用作细胞生长支持材料，可与多种常规塑料互相兼容，自然环境(6-12个月)及体内(12-24个月)可完全降解。2-氧杂环庚烷酮的均聚物降解后的产物为co2和h2o，对人体无毒。2-氧杂环庚烷酮的均聚物用作医美填充剂作为体内植入材料的，可刺激体内胶原蛋白的生成。基于2-氧杂环庚烷酮的均聚物的含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶注射后可提供即时和持续的丰盈效果。
3.作为填充剂原料的2-氧杂环庚烷酮的均聚物通常被制成微球，已证明其大小、形状、光滑度对组织反应有很大影响，并可以决定反应的程度。具有光滑表面的、规则球形状的2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球，可以最大限度地减少炎症的发生；2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的球体越光滑，越有利于皮下注射，光滑度高的2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球不仅可刺激皱纹下成纤维细胞逐一包裹，同时还能够减少异物反应的发生。
4.重组ⅲ型人源胶原蛋白是由dna重组技术制备的人胶原蛋白特定型别基因编码的全长或部分氨基酸序列片段，或是含人胶原蛋白功能片段的组合。其氨基酸序列的重复单元与人胶原蛋白氨基酸序列特定功能区相同，生物相容性好；并且特有高细胞粘附性的164.88
°
柔性三螺旋结构，可形成网状纤维结构，具有良好的修复特性。
5.作为修复填充原料的重组ⅲ型人源胶原蛋白，注射到体内后，可直接发挥作用，使皱纹消逝。
6.1～3个月后，当植入的胶原蛋白逐步被人体吸收时，2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球也开始发挥作用，刺激人体内本身的胶原蛋白再生，取代被吸收的植入胶原蛋白，继续坚持祛皱填充效果，以使得皮肤长期保持刚施打时的效果。
7.因为通常注射美容产品的给药方式是直接注射入人体的皮下组织，若产品表面或内部携带病原体可导致患者的感染，引起严重的不良反应，因此用于人体植入的生物医学填充剂需要灭菌。灭菌不仅需要杀灭或除去微生物繁殖体和芽孢，最大限度提高注射剂的安全性和有效性，还需要保证注射美容产品的形态、性状、稳定性以及临床疗效，因此选择适宜的灭菌方法对保证美容产品质量具有重要意义。过去几十年来，在医疗器械产品和医美注射产品领域已经采用了多种灭菌方法，包括高压蒸汽灭菌、环氧乙烷灭菌、等离子体灭菌以及β射线辐照、γ射线辐照或x射线辐照。应根据植入材料的特性选择适宜的灭菌方法，
从而避免灭菌过程的无效性，同时降低其对产品的破坏性。
8.2-氧杂环庚烷酮的均聚物的熔点较低(60-63℃)，不能耐受高温。在超过50℃的情况下，2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球会融化，因此2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球不适合经受高压蒸汽灭菌，此种灭菌方法会损坏2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的结构。cassan等人评估了有关于2-氧杂环庚烷酮的均聚物灭菌的三种低温技术，包括β射线辐照灭菌，γ射线辐照灭菌和x射线辐照灭菌，发现辐照会导致分子量降低，结晶度升高，同时微球也会受到辐照的影响，产生形态辐照效应是剂量依赖性的，较高的辐照剂量导致更强的变化。其中发现γ辐照似乎是最不合适的方法，而β辐照的影响较小。
9.此外，具有规则球形状及高表面光滑度的2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球，在可以提高凝胶的流动性同时，还可以防止不良异物反应，因为真皮填充物的总体生物相容性是由填充微粒的规则形状和光滑度决定的。若填充微粒表面光滑，则会刺激胶原蛋白生长；若其形状不规则且表面粗糙，则会被巨噬细胞和多核巨细胞包围，导致包膜纤维化，抑制胶原蛋白的产生，同时可能导致不良异物反应。
10.另外，含有2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的注射医用无菌胶原蛋白产品中的含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶也需要灭菌。因cmc-na凝胶中含有重组ⅲ型人源胶原蛋白，不适宜高压蒸汽灭菌等湿热灭菌方法，上述方法可能会大程度地破坏胶原蛋白的活性。需采用γ辐照或β辐照灭菌法。
11.已知注射器材料如聚丙烯材料在接受辐照灭菌时会变色且变得发脆，因此不适合通过γ辐照或β辐照进行灭菌，而注射器一旦装填了凝胶注射剂，由于环氧乙烷等气体无法穿过注射器，因此组装后的注射医用无菌胶原蛋白产品，无法再使用环氧乙烷灭菌。
12.目前授权公告号为cn114146220b，申请的名为“一种包含无菌pcl微球的美容产品”以及公开号为cn114796602a，申请的名为“一种注射凝胶复合微球及其制备方法”，
13.现有技术的缺点；
14.(1)现有公开发布的发明中无包含重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶具体制备流程以及后续灭菌方法的介绍；
15.(2)现有公开发布的发明中针对2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球灭菌方法筛选介绍不够详尽；
16.(3)现有公开发布的发明中部分含有胶原蛋白的凝胶内成分复杂，可能含有对肌肤有刺激性成分。
17.综上所述，本发明通过设计一种载有2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的医用无菌胶原蛋白产品的制备来解决存在的问题。


技术实现要素：

18.本发明的目的在于提供一种载有2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的医用无菌胶原蛋白产品的制备，以解决上述背景技术中提出的问题。
19.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
20.一种载有2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的医用无菌胶原蛋白产品的制备，包括以下步骤：
21.s1,制备无菌2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球，即为经辐照灭菌处理得到无菌2-氧
杂环庚烷酮的均聚物微球，其步骤具体如下：
22.步骤1：称取适量2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球放置于离心管中，并在离心管上做好辐照剂量与微球种类的标记；
23.步骤2：为保证无菌状态和检测中不泄露，使用封口膜对离心管进行密封；
24.步骤3：把离心管装入包装箱内，并在箱外贴上标签，标注灭菌剂量信息；
25.步骤4：接受γ射线或β射线辐照；
26.s2,制备含有无菌2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的医用无菌胶原蛋白产品，包括将无菌2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球与通过β射线辐照灭菌后得到的含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶混匀的步骤；
27.如上所述混匀过程采用真空搅拌脱泡机。
28.制备含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶的具体步骤如下：
29.步骤1：向凝胶中加入甘油、丙二醇搅拌至混合均匀；
30.步骤2：称取重组ⅲ型人源胶原蛋白粉末，使用少量水将其溶解后加入到步骤(1)的混合凝胶中，搅拌至混合均匀；
31.步骤3：称取适量含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶放置于ep管中，并在ep管上做好辐照剂量与凝胶种类的标记；
32.步骤4：为保证无菌状态和检测中不泄露，使用封口膜对ep管进行密封；
33.步骤5：把ep管装入包装箱内，并在箱外贴上标签，标注灭菌剂量信息；
34.步骤6：接受β射线辐照；
35.s3,制备医用无菌胶原蛋白产品，其具体步骤如下：
36.步骤1：通过辐照灭菌得到无菌2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球；通过辐照灭菌得到的含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶；对注射器采用环氧乙烷灭菌；
37.步骤2：将灭菌后的所述无菌2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球加入到含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶中进行混匀；
38.步骤3：将混匀的负载有无菌2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶封装于所述注射器中。
39.作为本发明优选的方案，所述s1中辐照剂量为12kgy、18kgy或22kgy。
40.作为本发明优选的方案，所述s2中辐照剂量为5kgy、8kgy或10kgy。
41.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
42.1、本发明中，通过提供的一种载有2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的医用无菌胶原蛋白产品，在注射使用初期通过重组ⅲ型人源胶原蛋白起作用，后期通过2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球刺激胶原生长起到长效塑形，保持肌肤活力的作用，最终达到长效可持续的效果。
43.2、本发明中，通过设计该产品中含有的重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶这部分内除添加了重组ⅲ型人源胶原蛋白作为主要活性成分外，还添加了注射用甘油、1,3-丙二醇作为辅助保湿剂及维稳剂，进一步增大产品保湿效果，同时降低产品对肌肤的刺激性。
44.3、本发明中，通过提供的一种载有2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的医用无菌胶原蛋白产品，其中涉及的2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球、含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶、以及装载的注射器均采用不同灭菌方式灭菌，产品生物安全性高。
45.4、本发明中，通过设计2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球在含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶中分散均匀，大幅降低了因微球团聚而产生的副反应，产品生物安全性高。
具体实施方式
46.下面将结合本发明实施例中，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例,基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
47.本发明提供一种技术方案：
48.一种载有2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的医用无菌胶原蛋白产品的制备，包括以下步骤：
49.s1,制备无菌2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球，即为经辐照灭菌处理得到无菌2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的步骤具体如下：
50.步骤1：称取适量2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球放置于离心管中，并在离心管上做好辐照剂量与微球种类的标记；
51.步骤2：为保证无菌状态和检测中不泄露，使用封口膜对离心管进行密封；
52.步骤3：把离心管装入包装箱内，并在箱外贴上标签，标注灭菌剂量信息；
53.步骤4：接受γ射线或β射线辐照，对2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球采用γ射线或β射线辐照灭菌，给与不同的灭菌剂量，观察灭菌前后微球形状、粒径、圆整度方面的变化，筛选出最优辐照灭菌方式及灭菌剂量；
54.其中辐照剂量为12kgy、18kgy或22kgy；
55.s2,制备含有无菌2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的医用无菌胶原蛋白产品，包括将无菌2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球与通过β射线辐照灭菌后得到的含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶混匀的步骤；
56.如上所述混匀过程采用真空搅拌脱泡机；
57.制备含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶的具体步骤如下：
58.步骤1：向凝胶中加入甘油、丙二醇搅拌至混合均匀，其中甘油在含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶内作为辅助保湿剂及维稳剂；
59.步骤2：称取重组ⅲ型人源胶原蛋白粉末，使用少量水将其溶解后加入到步骤(1)的混合凝胶中，搅拌至混合均匀；
60.步骤3：称取适量含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶放置于ep管中，并在ep管上做好辐照剂量与凝胶种类的标记；
61.步骤4：为保证无菌状态和检测中不泄露，使用封口膜对ep管进行密封；
62.步骤5：把ep管装入包装箱内，并在箱外贴上标签，标注灭菌剂量信息；
63.步骤6：接受β射线辐照，给与不同的灭菌剂量，观察灭菌前后胶原蛋白活性、浓度变化情况，筛选出最优辐照灭菌方式及灭菌剂；
64.其中辐照剂量为5kgy、8kgy或10kgy；
65.s3,制备医用无菌胶原蛋白产品的具体步骤如下：
66.步骤1：通过辐照灭菌得到无菌2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球；通过辐照灭菌得到
的含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶；对注射器采用环氧乙烷灭菌，其中胶原蛋白为重组ⅲ型人源胶原蛋白，其氨基酸序列的重复单元与人胶原蛋白氨基酸序列特定功能区相同，生物相容性好；
67.步骤2：将灭菌后的所述无菌2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球加入到含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶中进行混匀；
68.步骤3：将混匀的负载有无菌2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶封装于所述注射器中；
69.综上本方案通过设计达到以下效果：
70.(1)本方案提供的一种载有2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的医用无菌胶原蛋白产品，在注射使用初期通过重组ⅲ型人源胶原蛋白起作用，后期通过2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球刺激胶原生长起到长效塑形，保持肌肤活力的作用，最终达到长效可持续的效果。
71.(2)本方案中含有的重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶这部分内除添加了重组ⅲ型人源胶原蛋白作为主要活性成分外，还添加了注射用甘油、1,3-丙二醇作为辅助保湿剂及维稳剂，进一步增大产品保湿效果，同时降低产品对肌肤的刺激性。
72.(3)本方案提供的一种载有2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球的医用无菌胶原蛋白产品，其中涉及的2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球、含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶、以及装载的注射器均采用不同灭菌方式灭菌，产品生物安全性高。
73.(4)本方案涉及到的2-氧杂环庚烷酮的均聚物微球在含有重组ⅲ型人源胶原蛋白的cmc-na凝胶中分散均匀，大幅降低了因微球团聚而产生的副反应，产品生物安全性高。
74.以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。