一种来源天然的虫草肽组合物、脂质体及其应用的制作方法

1.本发明涉及化妆品领域，特别涉及一种来源天然的虫草肽组合物、脂质体及其应用。


背景技术：

2.皮肤老化的表现是多样的，但皱纹与色素改变是其最具代表性的特征，对皱纹的研究也逐渐深入而系统。
3.正常的皮肤表面有很多沟纹，由深到浅分为4组：一级线是指较宽的且深度(与皮肤部位及年龄有关)在20-100μm之间的沟纹。它们交错形成平行四边形、矩形或方形。毛囊口、汗腺孔常出现于此线处。二级线是指较窄的，深度在5-40μm之间的沟纹。他们是一级线的分支，形成一级线所形成图形的对角线。三级线与角质细胞的边缘一致，四级线则为角质细胞膜上的小梁网络。三级线和四级线肉眼不可见。皱纹比一级线数量少，但更深。小皱纹深度为0.2-1mm，深皱纹大于1mm。
4.皱纹的产生，主要是皮肤老化(自然老化和光老化)的结果，与多种因素有关，包括真皮表皮连接变薄，层粘蛋白5减少，胶原、氨基葡聚糖及皮下脂肪的丢失，重力及肌肉、关节的运动也起到了重要作用。此外，内在因素(如激素、种族、遗传因素、氧化压力及系统性疾病)与外在因素(如温度、空气污染、吸烟、酒精)都与之相关。大量研究已证实吸烟与皱纹产生相关，认为吸烟者面部皱纹代表的是一类特殊类型的早熟皱纹，也有结果显示怀孕及绝经与女性面部皱纹的增长相关，而激素替代疗法可减少绝经妇女面部皱纹的进展，认为低雌激素可能因参加了皮肤胶原减少过程从而促使皱纹的产生(张洁尘.中国女性面部皱纹分级方法的建立及应用研究[d].中国协和医科大学,2010.)。
[0005]
活性生物多肽具有安全稳定、易溶于水、易吸收、分子量小等优点，同时具有清除自由基、抗氧化、抗衰老等多种生物活性，不仅能够促进皮肤细胞的增殖，还可以为皮肤提供营养，延缓皮肤老化，促进皮肤创伤修复，因此被广泛应用于皮肤化妆品和抗衰老化妆品中(王琦,都帅,赵全民, 李庆杰.活性生物多肽对皮肤抗衰老作用的研究进展[j].中国中医药现代远程教育,2018,16(20):152-154.)。
[0006]
但是如果直接将多肽应用在护肤品中，由于化妆品配方体系的复杂性(含有电解质、ph、防腐剂、螯合剂等影响)，多肽可能被提前吸附、降解，另外，多肽容易随着汗液等流失，在皮肤上保留时间不长。因此，控制和减缓活性肽在化妆品中的提前降解，延长活性肽在皮肤的保留时间，促进活性肽的吸收从而提高生物利用度，实现良好的抗皱紧致功效是本行业需要解决的技术问题。


技术实现要素：

[0007]
本发明的主要目的在于提供一种具有良好抗皱紧致功效的虫草肽护肤组合物。
[0008]
一种虫草肽抗皱紧致组合物，通过如下步骤制得：
[0009]
(1)将阿胶、蛹虫草菌丝体粉碎，加入水煮提，过滤获得滤液；
[0010]
(2)将新鲜鸡蛋破壳分离得到蛋清，加水稀释，获得稀释液；
[0011]
(3)将步骤(1)的滤液和步骤(2)的稀释液合并，调ph到1-2，加入胃蛋白酶酶解；
[0012]
(4)高温灭酶，离心取上清液；调节ph到5-6，通过超滤膜，得到分子截留量小于5kda的滤液，即得多肽组合物。
[0013]
优选的，步骤(1)中所述的阿胶为1-10重量份、蛹虫草菌丝体为1-10 重量份。
[0014]
优选的，步骤(1)中所述水的添加量为阿胶、蛹虫草菌丝体总重量的10-20倍；所述的煮提为80-90℃煮提1-2小时；所述的过滤为500-1000 目滤布过滤。
[0015]
优选的，步骤(2)中所述蛋清为1-10重量份，所述水的添加量为蛋清重量的10-50倍。
[0016]
优选的，步骤(3)中所述酶解为：将加酶量e/s(酶/底物)调节为 5000-10000u/g，在30-40度水解3-6小时；
[0017]
优选的，步骤(4)中高温灭酶为100℃高温灭酶5-10分钟；所述的离心为5000rpm离心30分钟。
[0018]
本发明所制得的多肽抗皱紧致组合物可以作为一种活性添加剂应用在化妆品中。
[0019]
根据本发明的另一方面，还提供了一种活性肽脂质体，可以有效减缓活性肽在化妆品中的提前降解，延长活性肽在皮肤的保留时间，促进活性肽的吸收从而提高生物利用度，实现更佳的护肤功效。
[0020]
一种活性肽脂质体，通过如下步骤制得：
[0021]
(1)称取0.5-2质量份的蛋黄卵磷脂、0.1-0.4质量份的胆固醇，1-4 质量份的吐温-80，加入适量的无水乙醇，在35-45℃下超声溶解至透明；减压旋蒸脱去乙醇，形成均匀薄膜；
[0022]
(2)称取前述的10-30份多肽组合物，用3-5倍重量的水稀释，加入旋蒸瓶中旋转水合，获得乳白色液体；然后用高压均质机500-1000bar 处理5-10分钟，即得到活性肽脂质体。
[0023]
本发明实施例还提供了一种抗衰老眼霜，由如下质量百分含量的组分构成：肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯1％、环五聚二甲基硅氧烷2％、碳酸二辛酯3％、异十六烷2％、鲸蜡硬脂醇2％、硬脂酰乳酰乳酸钠0.5％、甘油硬脂酸酯0.5％、山嵛醇0.2％、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物0.5％、聚二甲基硅氧烷3％、甘油5％、1,2-戊二醇3％、对羟基苯乙酮0.5％、黄原胶0.1％、前述的活性肽脂质体5％、水余量。
[0024]
本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：本发明提供了一种虫草肽抗皱紧致组合物，将阿胶、蛹虫草菌丝体、鸡蛋清复配使用，加水煮提、过滤、离心、用胃蛋白酶酶解，然后用超滤膜过滤，获得分子截留量小于5kda的滤液。所述的多肽抗皱紧致组合物具有安全稳定、易溶于水、易吸收、分子量小等优点，同时具有清除自由基、抗氧化、抗衰老等多种生物活性。本发明还提供了一种活性肽脂质体，可以有效减缓活性肽在化妆品中的提前降解，延长活性肽在皮肤的保留时间，促进活性肽的吸收从而提高生物利用度，实现更佳的护肤功效。
附图说明
[0025]
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面对实施例或现有
技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0026]
图1志愿者使用抗衰老眼霜前后变化比较。
具体实施方式
[0027]
现结合具体实施例对本发明进行详细说明，但不限制本发明的范围。
[0028]
本发明实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为市场购得。
[0029]
实施例1
[0030]
一种虫草肽抗皱紧致组合物，通过如下步骤制得：
[0031]
(1)称取1重量份的阿胶，10重量份的蛹虫草菌丝体，混合，用粉碎机粉碎，加入10倍重量的水，90℃煮提1小时，1000目滤布过滤，获得滤液；
[0032]
(2)将新鲜鸡蛋破壳分离得到蛋清，称取1重量份的蛋清，然后加 10倍重量的水稀释，获得稀释液；
[0033]
(3)将步骤(1)的滤液和步骤(2)的稀释液合并，调ph到2，加入胃蛋白酶，加酶量e/s(酶/底物)调节为5000u/g，在40度水解3小时；
[0034]
(4)100℃高温灭酶10分钟，5000rpm离心30分钟，取上清液；调节ph到5，通过超滤膜，得到分子截留量小于5kda的滤液，即得多肽组合物。
[0035]
实施例2
[0036]
一种虫草肽抗皱紧致组合物，通过如下步骤制得：
[0037]
(1)称取10重量份的阿胶，1重量份的蛹虫草菌丝体，混合，用粉碎机粉碎，加入20倍重量的水，80℃煮提2小时，500目滤布过滤，获得滤液；
[0038]
(2)将新鲜鸡蛋破壳分离得到蛋清，称取10重量份的蛋清，然后加 50倍重量的水稀释，获得稀释液；
[0039]
(3)将步骤(1)的滤液和步骤(2)的稀释液合并，调ph到1，加入胃蛋白酶，加酶量e/s(酶/底物)调节为10000u/g，在30度水解6小时；
[0040]
(4)100℃高温灭酶5分钟，5000rpm离心30分钟，取上清液；调节 ph到6，通过超滤膜，得到分子截留量小于5kda的滤液，即得多肽组合物。
[0041]
实施例3
[0042]
一种虫草肽抗皱紧致组合物，通过如下步骤制得：
[0043]
(1)称取5重量份的阿胶，5重量份的蛹虫草菌丝体，混合，用粉碎机粉碎，加入15倍重量的水，85℃煮提1.5小时，800目滤布过滤，获得滤液；
[0044]
(2)将新鲜鸡蛋破壳分离得到蛋清，称取5重量份的蛋清，然后加 30倍重量的水稀释，获得稀释液；
[0045]
(3)将步骤(1)的滤液和步骤(2)的稀释液合并，调ph到1.5，加入胃蛋白酶，加酶量e/s(酶/底物)调节为8000u/g，在35度水解5 小时；
[0046]
(4)100℃高温灭酶8分钟，5000rpm离心30分钟，取上清液；调节 ph到5.5，通过超滤膜，得到分子截留量小于5kda的滤液，即得多肽组合物。
[0047]
对比例1
[0048]
一种虫草肽抗皱紧致组合物，通过如下步骤制得：
[0049]
(1)称取5重量份的阿胶，用粉碎机粉碎，加入15倍重量的水，85℃煮提1.5小时，
800目滤布过滤，获得滤液；
[0050]
(2)将步骤(1)的滤液调ph到1.5，加入胃蛋白酶，加酶量e/s(酶 /底物)调节为8000u/g，在35度水解5小时；
[0051]
(3)100℃高温灭酶8分钟，5000rpm离心30分钟，取上清液；调节 ph到5.5，通过超滤膜，得到分子截留量小于5kda的滤液，即得多肽组合物。
[0052]
对比例2
[0053]
一种虫草肽抗皱紧致组合物，通过如下步骤制得：
[0054]
(1)称取5重量份的蛹虫草菌丝体，混合，用粉碎机粉碎，加入15 倍重量的水，85℃煮提1.5小时，800目滤布过滤，获得滤液；
[0055]
(2)将步骤(1)的滤液调ph到1.5，加入胃蛋白酶，加酶量e/s(酶 /底物)调节为8000u/g，在35度水解5小时；
[0056]
(3)100℃高温灭酶8分钟，5000rpm离心30分钟，取上清液；调节 ph到5.5，通过超滤膜，得到分子截留量小于5kda的滤液，即得多肽组合物。
[0057]
对比例3
[0058]
一种虫草肽抗皱紧致组合物，通过如下步骤制得：
[0059]
(1)将新鲜鸡蛋破壳分离得到蛋清，称取5重量份的蛋清，然后加 30倍重量的水稀释，获得稀释液；
[0060]
(2)将步骤(1)的滤液调ph到1.5，加入胃蛋白酶，加酶量e/s(酶 /底物)调节为8000u/g，在35度水解5小时；
[0061]
(3)100℃高温灭酶8分钟，5000rpm离心30分钟，取上清液；调节 ph到5.5，通过超滤膜，得到分子截留量小于5kda的滤液，即得多肽组合物。
[0062]
试验1体外成纤维细胞ⅰ型胶原蛋白含量测定
[0063]ⅰ型胶原蛋白是真皮细胞外基质的主要成分之一，由真皮成纤维细胞在胞内合成ⅰ型前胶原，分泌至胞外，在末端前胶原肽酶的作用下，端肽分离后，聚合形成胶原纤维。人真皮成纤维细胞可以作为研究化妆品提升ⅰ型胶原含量的细胞模型，通过测定受试物给药后，空白对照与受试物给药后，ⅰ型胶原蛋白含量的上调率，评价受试物在促进胶原蛋白合成方面是否具有功效。ⅰ型胶原蛋白含量的测定采用酶联免疫方法(elisa)，具体原理为：ⅰ型胶原与包被在酶标板上的胶原蛋白抗体特异性结合后，与带有底物标记的抗ⅰ型胶原抗体结合，底物被酶催化后，生成有色产物，ⅰ型胶原蛋白含量与有色产物颜色的深浅呈正相关。用酶标仪450nm波长下测定光密度(od值)，计算ⅰ型胶原蛋白含量。
[0064]
本次试验参照《t/shrh 031-2020化妆品紧致、抗皱功效测试-体外成纤维细胞ⅰ型胶原蛋白含量测定》所记载的方法进行测试。
[0065]
选用人真皮成纤维细胞，分别将实施例1-3、对比例1-3制得的虫草肽抗皱紧致组合物用pbs稀释，通过细胞毒性检测确定受试物的浓度范围，并以100ng/ml tgfβ1作为阳性对照组；将人真皮成纤维细胞接种于96 孔板之中，培养24小时后弃掉96孔板中的培养基，加入含有受试物的培养基，再培养24小时；取细胞培养上清液，采用酶联免疫方法(elisa)测得光密度od值，计算各受试物的i型胶原蛋白上调率如表1。
[0066]
表1各受试物的i型胶原蛋白上调率
[0067][0068]
由上表1可见，本发明实施例1-3所制得的虫草肽抗皱紧致组合物能显著提升人真皮成纤维细胞ⅰ型前胶原的表达。
[0069]
实施例4
[0070]
一种活性肽脂质体，通过如下步骤制得：
[0071]
(1)称取0.5质量份的蛋黄卵磷脂、0.1质量份的胆固醇，1质量份的吐温-80，加入适量的无水乙醇，在45℃下超声溶解至透明；减压旋蒸脱去乙醇，形成均匀薄膜；
[0072]
(2)称取实施例2所制得的10份多肽组合物，用3倍重量的水稀释，加入旋蒸瓶中旋转水合，获得乳白色液体；然后用高压均质机1000bar处理5分钟，即得到活性肽脂质体。
[0073]
实施例5
[0074]
一种活性肽脂质体，通过如下步骤制得：
[0075]
(1)称取2质量份的蛋黄卵磷脂、0.4质量份的胆固醇，4质量份的吐温-80，加入适量的无水乙醇，在35℃下超声溶解至透明；减压旋蒸脱去乙醇，形成均匀薄膜；
[0076]
(2)称取实施例3所制得的30份多肽组合物，用5倍重量的水稀释，加入旋蒸瓶中旋转水合，获得乳白色液体；然后用高压均质机500bar处理10分钟，即得到活性肽脂质体。
[0077]
试验2脂质体的粒径测量
[0078]
分别吸收实施例4、实施例5所制得的活性肽脂质体100μl，加水稀释到1ml，混合均匀，采用激光散射粒径仪测定其粒径和粒径分布(pdi)。
[0079]
表2各实施例粒径和pdi值
[0080][0081]
由表2可见，本发明实施例所制得的脂质体粒径＜100nm，且pdi值＜0.1，说明所制得的脂质体具有良好的储存稳定性。
[0082]
实施例6
[0083]
一种抗衰老眼霜，由如下质量百分含量的组分构成：
[0084]
肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯1％、环五聚二甲基硅氧烷2％、碳酸二辛酯3％、异十六烷2％、鲸蜡硬脂醇2％、硬脂酰乳酰乳酸钠0.5％、甘油硬脂酸酯0.5％、山嵛醇0.2％、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物0.5％、聚二甲基硅氧烷3％、甘油5％、1,2-戊二醇3％、对羟基苯乙酮0.5％、黄原胶0.1％、实施例5所制得的活性肽脂质体5％、水余量。
[0085]
制备工艺：将肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯、环五聚二甲基硅氧烷、碳酸二辛酯、异十六烷、鲸蜡硬脂醇、硬脂酰乳酰乳酸钠、甘油硬脂酸酯、山嵛醇、聚二甲基硅氧烷投入油箱锅，加热溶解至透明；然后加入丙烯酸羟乙酯/ 丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物，搅拌均匀，制得油相；将水、甘油、对羟基苯乙酮投入乳化锅，然后加入预先混匀的1,2-戊二醇、黄原胶，中速搅拌下升温到85度；将油相抽入乳化锅中，高速均质8分钟，85度保温搅拌30分钟；降温到40度，加入实施例5所制得的活性肽脂质体，搅拌均匀，检验合格，出料。
[0086]
试验4消费者试用测试
[0087]
召集30名志愿者，女性，年龄在45-55周岁，眼周由于日晒、工作压力、年龄等造成的皮肤干燥、出现皱纹的。使用时先以温水清洁面部，洁面后将实施例6所制得的抗衰老眼霜均匀涂于眼周，以指腹由内向外轻轻按摩至其吸收。使用频率早晚各一次，坚持使用2个月后观察结果，统计如下表3。
[0088]
表3试用后志愿者评价结果从上表3可见，本发实施例制得的抗衰老眼霜志愿者使用2个月后眼周肌肤干燥状态得到缓解，更加水润有光泽，小细纹得到减少，实现了良好的祛皱效果。
[0089][0090][0091]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。