一种原料药中n-烷基吡咯烷酮残留溶剂的检测方法
技术领域
1.本发明涉及分析化学技术领域，具体涉及一种原料药中n-烷基吡咯烷酮残留溶剂的气相色谱检测方法。
背景技术：
2.溶剂n-甲基吡咯烷酮，n-乙基吡咯烷酮，n,n-二甲基甲酰胺，n,n-二甲基乙酰胺等由于存在潜在的生殖毒性，使用已受到越来越多国家药监机构的限制与控制。n-正丁基吡咯烷酮，n-异丁基吡咯烷酮，n-叔丁基吡咯烷酮，n-正戊基吡咯烷酮，环上甲基取代的n-丙基吡咯烷酮，环上甲基取代的n-丁基吡咯烷酮和环上甲基取代的n-戊基吡咯烷酮等被证明是非生殖毒性的。由于它们是高沸点、非腐蚀性且极性的化合物，能够溶解多种其他化合物，因此非常适合作为n-甲基吡咯烷酮等的替代溶剂，它们可以与多种其他溶剂混溶，包括水、乙醇、乙醚、氯仿、苯、乙酸乙酯和二硫化碳。但由于其并无治疗作用，故应尽可能去除，以符合原料药和制剂质量标准或其他质量要求。
3.目前现有技术中尚无针对该类n-烷基吡咯烷酮残留溶剂的定量相关检测方法的报道，因此需建立一种可用于原料药中n-烷基吡咯烷酮残留溶剂检测和控制的分析方法。
技术实现要素：
4.本发明的目的在于提供一种原料药中n-烷基吡咯烷酮残留溶剂的检测方法，其操作简单，结果准确，灵敏度高，有效解决现有技术中缺乏相关检测方法的问题。
5.为解决上述技术问题，本发明采用了以下技术方案：一种原料药中n-烷基吡咯烷酮残留溶剂的检测方法，是采用气相色谱仪进行检测、外标法进行定量分析的，其包括以下步骤：s1.配制供试品溶液：称取供试品于容器中，加入稀释剂搅拌均匀，备用；s2.配制待测物储备液：称取待测物于容器中，加入稀释剂搅拌均匀；之后再配制若干浓度的待测物储备液；s3.气相色谱仪检测：取供试品溶液和若干浓度的待测物储备液，分别注入气相色谱仪，记录各自的色谱图；s4.n-烷基吡咯烷酮含量的分析，以若干浓度的待测物储备液测定获得的色谱图的质量浓度及峰面积进行线性回归，得回归方程和相关系数，制作出标准曲线。然后在供试品溶液测定色谱图中，对n-烷基吡咯烷酮色谱峰进行积分获得峰面积，按外标法计算获得n-烷基吡咯烷酮的含量。
6.其中，步骤s1中供试品溶液的浓度为10-100mg/ml；步骤s2中待测物储备液的浓度分别为0.01mg/ml，0.05mg/ml，0.08mg/ml，0.1mg/ml，0.12mg/ml，0.15mg/ml和0.2mg/ml。
7.待测物为n-正丁基吡咯烷酮，n-异丁基吡咯烷酮，n-叔丁基吡咯烷酮，n-正戊基吡咯烷酮，环上甲基取代的n-丙基吡咯烷酮，环上甲基取代的n-丁基吡咯烷酮和环上甲基取代的n-戊基吡咯烷酮中的一种或多种。
8.且步骤s1和步骤s2中的稀释剂为水、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺，n-甲基吡咯烷酮及1,3-二甲基咪唑啉酮五种中的一种。
9.其中，步骤s3的色谱条件为：色谱柱固定相：35%联苯/65%二甲基聚硅氧烷；检测器：氢火焰离子化检测器；程序升温程序：起始温度60-80℃，保持0-1min，再以15-20℃/min的升温速率升至250-260℃，保持8-10min结束；进样口温度：150-200℃；检测器温度：250-300℃；载气：氮气或氦气；载气流速：1.0-2.5ml/min；分流比：5:1-20:1；进样方式：直接进样；进样体积：0.5-10μl。本发明充分考虑了待测物的沸点，从而设计了适合上述检测方法的直接进样方式，在该条件下可获得更好的峰形以及与其他杂质的分离效果。
10.上述技术方案中提供的原料药中n-烷基吡咯烷酮残留溶剂的检测方法，采用常规气相色谱法，选用聚硅氧烷毛细管柱色谱柱，供试品以及待测物储备液处理过程操作简单，结果准确，灵敏度高，稳定性好，可检测到原料药中含有的0.01mg的n-烷基吡咯烷酮，解决了原料药中n-烷基吡咯烷酮残留溶剂的质量控制问题。
附图说明
11.附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：图1为本发明空白溶液的色谱图；图2为本发明供试品溶液的色谱图；图3为本发明待测物储备液的色谱图；图4为本发明供试品回收率溶液的色谱图。
具体实施方式
12.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
13.（一）仪器和试剂仪器：气相色谱仪：agilent 7820a/7697气相色谱仪；百万分之一分析天平：mettler toledo xse205du；试剂：n,n-二甲基甲酰胺：j&k色谱纯（二）气相色谱检测条件色谱柱：restek rtx-35 amine (30m
×
0.32mm, 1μm)；检测器：氢火焰离子化检测器；程序升温程序：起始温度80℃，保持0min，再以20℃/min的升温速率升至260℃，保持8min结束；进样口温度：200℃；检测器温度：280℃；载气（氦气）流速：2.0ml/min；分流比：15:1；进样体积：1μl。
14.（三）实验部分——溶液配制稀释剂配制：n,n-二甲基甲酰胺作为稀释剂；空白溶液配制：n,n-二甲基甲酰胺作为空白溶液；供试品溶液配制：取原料药样品1000mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，用稀释剂定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；待测物储备液配制：取n-正丁基吡咯烷酮标准品100mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，用稀释剂定容至刻度，摇匀，作为待测物储备液（1mg/ml）；供试品回收率溶液：取原料药样品1000mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，分别加入1ml待测物储备液，用稀释剂定容至刻度，作为100%回收率溶液。
15.（四）方法学考察1）专属性试验取空白溶液，供试品溶液，待测物储备液和供试品回收率溶液，分别进样采集色谱图，结果见图1至图4。试验结果表明，空白溶液无干扰，供试品中其他峰对n-正丁基吡咯烷酮色谱峰无干扰，即本方法专属性较好。
16.2）精密度试验将待测物储备液稀释至0.1mg/ml，在第二部分的气相色谱检测条件下，连续进样5次，进样体积1μl，注入色谱仪，记录保留时间和峰面积，并对结果进行评价，结果见表1。
17.表1 系统精密度试验结果结果表明，该方法系统精密度良好，符合测试要求。
18.3）线性与范围试验精密移取适量n-正丁基吡咯烷酮储备液，用稀释剂稀释至浓度为0.01mg/ml，0.05mg/ml，0.1mg/ml，0.15mg/ml 和0.2mg/ml。分别将上述溶液注入气相色谱仪，进样体积1μl，以质量浓度及峰面积进行线性回归，得到回归方程和相关系数分别为y=534.23x
–
0.5376和0.9995，结果见表2。
19.表2 n-正丁基吡咯烷酮线性与范围试验结果
结果表明，在0.01mg/ml-0.2mg/ml的范围内，n-正丁基吡咯烷酮的线性良好。
20.4）检出限与定量限试验调节仪器灵敏度，取n-正丁基吡咯烷酮储备液适量逐步稀释进样，进样体积1μl，使主峰高为基线噪音的2-3倍，记录色谱图，得n-正丁基吡咯烷酮最小检测限为0.005mg/ml。
21.调节仪器灵敏度，取n-正丁基吡咯烷酮储备液适量逐步稀释进样，进样体积1μl，使主峰高为基线噪音的10倍，记录色谱图，得n-正丁基吡咯烷酮最小检测限为0.01mg/ml。
22.5）加标回收率试验取供试品溶液和供试品回收率溶液，注入气相色谱仪，进样体积1μl，按照外标法计算回收率溶液中各峰的浓度，试验结果见表3。
23.表3 加标回收率试验结果结果表明，该方法准确度高，符合测试要求。
24.6）溶液稳定性试验取供试品回收率溶液（100%）于室温条件下放置26小时，考察其溶液稳定性。按照第二部分的气相色谱条件，分别于0，5，16，20，26小时注入色谱仪，进样体积1μl，记录色谱图，结果见表4。
25.表4 回收率溶液稳定性试验结果表明，回收率溶液室温条件下放置26小时，溶液稳定性良好。
26.上面结合实施例对本发明的实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，对于本技术领域的普通技术人员来说，在获知本发明中记载内容后，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对其作出若干同等变换和替代，这些同等变换和替代也应视为属于本发明的保护范围。
技术领域
1.本发明涉及分析化学技术领域，具体涉及一种原料药中n-烷基吡咯烷酮残留溶剂的气相色谱检测方法。
背景技术：
2.溶剂n-甲基吡咯烷酮，n-乙基吡咯烷酮，n,n-二甲基甲酰胺，n,n-二甲基乙酰胺等由于存在潜在的生殖毒性，使用已受到越来越多国家药监机构的限制与控制。n-正丁基吡咯烷酮，n-异丁基吡咯烷酮，n-叔丁基吡咯烷酮，n-正戊基吡咯烷酮，环上甲基取代的n-丙基吡咯烷酮，环上甲基取代的n-丁基吡咯烷酮和环上甲基取代的n-戊基吡咯烷酮等被证明是非生殖毒性的。由于它们是高沸点、非腐蚀性且极性的化合物，能够溶解多种其他化合物，因此非常适合作为n-甲基吡咯烷酮等的替代溶剂，它们可以与多种其他溶剂混溶，包括水、乙醇、乙醚、氯仿、苯、乙酸乙酯和二硫化碳。但由于其并无治疗作用，故应尽可能去除，以符合原料药和制剂质量标准或其他质量要求。
3.目前现有技术中尚无针对该类n-烷基吡咯烷酮残留溶剂的定量相关检测方法的报道，因此需建立一种可用于原料药中n-烷基吡咯烷酮残留溶剂检测和控制的分析方法。
技术实现要素：
4.本发明的目的在于提供一种原料药中n-烷基吡咯烷酮残留溶剂的检测方法，其操作简单，结果准确，灵敏度高，有效解决现有技术中缺乏相关检测方法的问题。
5.为解决上述技术问题，本发明采用了以下技术方案：一种原料药中n-烷基吡咯烷酮残留溶剂的检测方法，是采用气相色谱仪进行检测、外标法进行定量分析的，其包括以下步骤：s1.配制供试品溶液：称取供试品于容器中，加入稀释剂搅拌均匀，备用；s2.配制待测物储备液：称取待测物于容器中，加入稀释剂搅拌均匀；之后再配制若干浓度的待测物储备液；s3.气相色谱仪检测：取供试品溶液和若干浓度的待测物储备液，分别注入气相色谱仪，记录各自的色谱图；s4.n-烷基吡咯烷酮含量的分析，以若干浓度的待测物储备液测定获得的色谱图的质量浓度及峰面积进行线性回归，得回归方程和相关系数，制作出标准曲线。然后在供试品溶液测定色谱图中，对n-烷基吡咯烷酮色谱峰进行积分获得峰面积，按外标法计算获得n-烷基吡咯烷酮的含量。
6.其中，步骤s1中供试品溶液的浓度为10-100mg/ml；步骤s2中待测物储备液的浓度分别为0.01mg/ml，0.05mg/ml，0.08mg/ml，0.1mg/ml，0.12mg/ml，0.15mg/ml和0.2mg/ml。
7.待测物为n-正丁基吡咯烷酮，n-异丁基吡咯烷酮，n-叔丁基吡咯烷酮，n-正戊基吡咯烷酮，环上甲基取代的n-丙基吡咯烷酮，环上甲基取代的n-丁基吡咯烷酮和环上甲基取代的n-戊基吡咯烷酮中的一种或多种。
8.且步骤s1和步骤s2中的稀释剂为水、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺，n-甲基吡咯烷酮及1,3-二甲基咪唑啉酮五种中的一种。
9.其中，步骤s3的色谱条件为：色谱柱固定相：35%联苯/65%二甲基聚硅氧烷；检测器：氢火焰离子化检测器；程序升温程序：起始温度60-80℃，保持0-1min，再以15-20℃/min的升温速率升至250-260℃，保持8-10min结束；进样口温度：150-200℃；检测器温度：250-300℃；载气：氮气或氦气；载气流速：1.0-2.5ml/min；分流比：5:1-20:1；进样方式：直接进样；进样体积：0.5-10μl。本发明充分考虑了待测物的沸点，从而设计了适合上述检测方法的直接进样方式，在该条件下可获得更好的峰形以及与其他杂质的分离效果。
10.上述技术方案中提供的原料药中n-烷基吡咯烷酮残留溶剂的检测方法，采用常规气相色谱法，选用聚硅氧烷毛细管柱色谱柱，供试品以及待测物储备液处理过程操作简单，结果准确，灵敏度高，稳定性好，可检测到原料药中含有的0.01mg的n-烷基吡咯烷酮，解决了原料药中n-烷基吡咯烷酮残留溶剂的质量控制问题。
附图说明
11.附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：图1为本发明空白溶液的色谱图；图2为本发明供试品溶液的色谱图；图3为本发明待测物储备液的色谱图；图4为本发明供试品回收率溶液的色谱图。
具体实施方式
12.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
13.（一）仪器和试剂仪器：气相色谱仪：agilent 7820a/7697气相色谱仪；百万分之一分析天平：mettler toledo xse205du；试剂：n,n-二甲基甲酰胺：j&k色谱纯（二）气相色谱检测条件色谱柱：restek rtx-35 amine (30m
×
0.32mm, 1μm)；检测器：氢火焰离子化检测器；程序升温程序：起始温度80℃，保持0min，再以20℃/min的升温速率升至260℃，保持8min结束；进样口温度：200℃；检测器温度：280℃；载气（氦气）流速：2.0ml/min；分流比：15:1；进样体积：1μl。
14.（三）实验部分——溶液配制稀释剂配制：n,n-二甲基甲酰胺作为稀释剂；空白溶液配制：n,n-二甲基甲酰胺作为空白溶液；供试品溶液配制：取原料药样品1000mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，用稀释剂定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；待测物储备液配制：取n-正丁基吡咯烷酮标准品100mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，用稀释剂定容至刻度，摇匀，作为待测物储备液（1mg/ml）；供试品回收率溶液：取原料药样品1000mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，分别加入1ml待测物储备液，用稀释剂定容至刻度，作为100%回收率溶液。
15.（四）方法学考察1）专属性试验取空白溶液，供试品溶液，待测物储备液和供试品回收率溶液，分别进样采集色谱图，结果见图1至图4。试验结果表明，空白溶液无干扰，供试品中其他峰对n-正丁基吡咯烷酮色谱峰无干扰，即本方法专属性较好。
16.2）精密度试验将待测物储备液稀释至0.1mg/ml，在第二部分的气相色谱检测条件下，连续进样5次，进样体积1μl，注入色谱仪，记录保留时间和峰面积，并对结果进行评价，结果见表1。
17.表1 系统精密度试验结果结果表明，该方法系统精密度良好，符合测试要求。
18.3）线性与范围试验精密移取适量n-正丁基吡咯烷酮储备液，用稀释剂稀释至浓度为0.01mg/ml，0.05mg/ml，0.1mg/ml，0.15mg/ml 和0.2mg/ml。分别将上述溶液注入气相色谱仪，进样体积1μl，以质量浓度及峰面积进行线性回归，得到回归方程和相关系数分别为y=534.23x
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0.5376和0.9995，结果见表2。
19.表2 n-正丁基吡咯烷酮线性与范围试验结果
结果表明，在0.01mg/ml-0.2mg/ml的范围内，n-正丁基吡咯烷酮的线性良好。
20.4）检出限与定量限试验调节仪器灵敏度，取n-正丁基吡咯烷酮储备液适量逐步稀释进样，进样体积1μl，使主峰高为基线噪音的2-3倍，记录色谱图，得n-正丁基吡咯烷酮最小检测限为0.005mg/ml。
21.调节仪器灵敏度，取n-正丁基吡咯烷酮储备液适量逐步稀释进样，进样体积1μl，使主峰高为基线噪音的10倍，记录色谱图，得n-正丁基吡咯烷酮最小检测限为0.01mg/ml。
22.5）加标回收率试验取供试品溶液和供试品回收率溶液，注入气相色谱仪，进样体积1μl，按照外标法计算回收率溶液中各峰的浓度，试验结果见表3。
23.表3 加标回收率试验结果结果表明，该方法准确度高，符合测试要求。
24.6）溶液稳定性试验取供试品回收率溶液（100%）于室温条件下放置26小时，考察其溶液稳定性。按照第二部分的气相色谱条件，分别于0，5，16，20，26小时注入色谱仪，进样体积1μl，记录色谱图，结果见表4。
25.表4 回收率溶液稳定性试验结果表明，回收率溶液室温条件下放置26小时，溶液稳定性良好。
26.上面结合实施例对本发明的实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，对于本技术领域的普通技术人员来说，在获知本发明中记载内容后，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对其作出若干同等变换和替代，这些同等变换和替代也应视为属于本发明的保护范围。
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