SARS-COV-2快速检测测试的制作方法

技术特征：
1.一种诊断主体样本中严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2)感染的方法，所述方法包括使所述样本与包含检测sars-co-v2病毒的3cl-蛋白酶的试剂的组合物接触，其中所述样本中所述3cl-蛋白酶的存在指示sars-co-v2感染。2.一种在疑似患有covid-19的主体的样本中检测sars-cov-2病毒的方法，所述方法包括使所述样本与包含监测sars-cov-2病毒的3cl蛋白酶的活性的试剂的组合物接触，其中所述样本中所述3cl蛋白酶的活性水平指示所述样本中sars-cov-2的存在。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述样本选自由以下部分组成的组：粘液、唾液、咽喉洗液、鼻洗液、脊髓液、痰液、尿液、精液、汗液、粪便、血浆、血液、支气管肺泡液、阴道液、泪液和组织活检，以及鼻咽、口咽、鼻中鼻甲、前鼻和颊拭子。4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述样本是唾液、颊或鼻咽样本。5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述试剂监测所述3cl蛋白酶的活性。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述试剂是所述3cl蛋白酶的底物肽，所述肽连接到至少一个部分，所述至少一个部分在所述3cl蛋白酶切割所述底物肽时产生可检测信号。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，还包括用适用于读取所述信号的设备记录或读取所述可检测信号的步骤。8.根据权利要求6或7所述的方法，其中，所述可检测部分是供体和受体部分的福斯特共振能量转移(fret)对，并且其中所述底物肽的切割产生或调节来自所述fret对的信号。9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述供体荧光团部分选自由以下部分组成的组：calgold 540、calorange 560、670、705、5-fam(也称为5-羧基荧光素；也称为螺(异苯并呋喃-1(3h))、9'-(9h)氧杂蒽)-5-羧酸、3',6'-二羟基-3-氧代-6-羧基荧光素)、5-六氯-荧光素([4,7,2',4',5',7'-六氯-(3',6'-二戊酰基-荧光素基)-6-羧酸])、6-六氯-荧光素([4,7,2',4',5',7'-六氯-(3',6'-二戊酰荧光素基)-5-羧酸])、5-四氯-荧光素([4,7,2',7'-四氯-(3',6'-二戊酰荧光素基)-5-羧酸])、6-四氯-荧光素([4,7,2',7'-四氯-(3',6'-二戊酰荧光素基)-6-羧酸])、5-tamra(5-羧基四甲基罗丹明、9-(2,4-二羧基苯基)-3,6-双(二甲基-氨基))、6-tamra(6-羧基四甲基罗丹明、呫吨鎓(xanthylium)、9-(2,5-二羧基苯基)-3,6-双(二甲基氨基))、edans(5-((2-氨基乙基)氨基)萘-1-磺酸))、1,5-iaedans(5-((((2-碘乙酰基)氨基)乙基)氨基)萘-1-磺酸)、dabcyl(4-((4-(二甲基氨基)苯基)偶氮)苯甲酸)、cy5(吲哚二羰花青-5)、cy3(吲哚-二羰花青-3)，以及bodipy fl(2,6-二溴-4,4-二氟-5,7-二甲基-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s-茚-3-丙酸)、rox，及其合适的衍生物；另外的示例包括但不限于荧光素、荧光素氯三嗪基、罗丹明绿、罗丹明红、四甲基罗丹明、fitc、俄勒冈绿、alexa 488(例如af488)、fam、joe、hex、德克萨斯红、tet、tritc、花青基染料和硫代二羰花青染料。10.根据权利要求8所述的方法，其中，所述供体部分是量子点。11.根据权利要求8所述的方法，其中，所述供体和受体部分以允许能量从所述供体转移到所述受体的构型连接到所述肽上，从而通过fret过程淬灭荧光。12.根据权利要求8所述的方法，其中，所述供体部分和受体部分间隔不超过3或5个氨基酸残基。
13.根据权利要求8所述的方法，其中，所述供体和受体部分间隔不超过10个氨基酸残基。14.根据权利要求8所述的方法，其中，所述供体和受体部分间隔不超过15个氨基酸残基。15.根据权利要求8所述的方法，其中，所述供体和受体部分间隔不超过20个氨基酸残基。16.根据权利要求8所述的方法，其中，所述受体部分是放射性的。17.根据权利要求8所述的方法，其中，所述受体部分选自由以下部分组成的组：四甲基-6-羧基罗丹明(tamra)和黑洞淬灭剂(bhq)，所述黑洞淬灭剂包括黑洞淬灭剂-1(bhq-1)、黑洞淬灭剂-2(bhq-2)、黑洞淬灭剂-3(bhq-3)。18.根据权利要求8所述的方法，其中，所述fret对选自：alexa488(af488)(供体)/bhq1(受体)、af488(供体)/qsy9(受体)、edans(供体)/dabcyl(受体)，19.根据权利要求8所述的方法，其中，所述肽的c-末端与所述受体部分连接，所述肽的n-末端与所述供体部分连接。
20.根据权利要求8所述的方法，其中，所述肽的c-末端与所述受体部分连接，所述供体部分与来自n末端的不超过3个氨基酸连接。21.根据权利要求8所述的方法，其中，所述供体部分与分离部分连接。22.根据权利要求6或7所述的方法，其中，所述可检测部分是连接到所述底物肽切割区一侧的化学发光信号部分，受体部分连接到所述底物肽切割区的另一侧。23.根据权利要求22所述的方法，其中，所述化学发光信号部分是1,2-二氧杂环丁烷化合物。24.根据权利要求6或7所述的方法，其中，所述可检测部分是酶原，其在底物肽切割时被活化并通过检测其催化活性来检测。25.根据权利要求24所述的方法，其中，所述酶原是凝血酶原(因子ii)或该级联中的其它酶。26.根据权利要求6至25中任一项所述的方法，其中，所述底物肽包含8至12个氨基酸的序列。27.根据权利要求26所述的方法，其中，所述底物肽包含氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由seq id no：13-23组成的组。28.根据权利要求27所述的方法，其中，所述底物肽包含seq id no：13中列出的氨基酸序列。29.根据权利要求28所述的方法，其中，所述底物肽的所述氨基酸序列由选自由seq id no：24-33组成的组的序列组成。30.根据权利要求28所述的方法，其中，所述底物肽是选自由seq id no：1-10组成的组中列出的序列。31.根据权利要求30所述的方法，其中，所述底物肽如seq id no：8所示。32.根据权利要求1所述的方法，其中，当所述样本是唾液样本时，所述组合物还包含蛋白酶抑制剂，所述蛋白酶抑制剂选自由以下部分组成的组：抗痛素、ac-devd-cho、抑肽酶、eglin c、gw、pmsf和2,6pda。33.根据权利要求32所述的方法，其中，所述蛋白酶抑制剂包括pmsf和gw。34.根据权利要求1所述的方法，其中，当所述样本是颊样本时，所述组合物包含蛋白酶抑制剂，所述蛋白酶抑制剂选自由以下部分组成的组：pmsf、gw、抑肽酶、eglinc和胃蛋白酶抑制剂。35.根据权利要求34所述的方法，其中，所述蛋白酶抑制剂包括pmsf、gw、抑肽酶和eglinc。36.根据权利要求1所述的方法，还包括使所述样本与不是所述sars-cov-2的病毒的病毒蛋白酶的至少一种底物接触，其中所述至少一种底物不被切割指示所述样本中不存在所述病毒。37.根据权利要求7所述的方法，其中，所述适用于读取信号的设备是光学或光谱设备。38.根据权利要求37所述的方法，其中，所述光学或光谱设备是模块化的。39.根据权利要求37所述的方法，其中，所述光学或光谱设备被配置成成作为便携式的和高灵敏度的荧光分光光度计(荧光计)、光度计、荧光显微镜或其组合来操作，用于测量荧光、发光或磷光。
40.根据权利要求37所述的方法，其中，所述光学或光谱设备方便地放置在公共场所，例如剧院、餐馆和工作场所的入口处。41.根据权利要求37所述的方法，其中，所述光学或光谱设备是小型化的，并用于公共场所、工作场所和家中的快速现场即时诊断。42.根据权利要求37所述的方法，其中，所述光学或光谱设备包括激发模块、样本室和采集和/或检测器模块。43.根据权利要求42所述的方法，其中，所述样本室是荧光多板读数器，用于对多个样本进行实验室高通量和快速的多路分析，用于现场及时诊断。44.根据权利要求42所述的方法，其中，所述光学或光谱设备还包括计算单元。45.根据权利要求44所述的方法，其中，所述采集和/或检测器模块以及所述计算单元被组合在单个单元中，所述单个单元被设计成执行荧光发射的采集、测量其强度、处理荧光发射数据，并且可选地以可读格式显示所述数据和/或将其输出到外部存储器或用户界面。46.根据权利要求42至45中任一项所述的方法，其中，所述采集模块是智能手机或适于执行期望测量的任何其它移动设备或小配件的一部分。47.根据权利要求42至45中任一项所述的方法，其中，所述检测器是电子倍增电荷耦合设备(emccd)成像器、电荷耦合设备(ccd)成像器、雪崩光电二极管(apd)、光电倍增管(pmt)、科学互补金属氧化物半导体(scmos)成像器或智能手机摄像头的cmos成像器、独立照相机，或任何移动设备或配件的照相机，所述检测器可选地具有聚焦装置和计算机链接。48.根据权利要求47所述的方法，其中，所述检测器是智能手机摄像头的cmos成像器。49.根据权利要求1所述的方法，其中，所述适用于读取信号的设备是横向流设备。50.根据权利要求49所述的方法，其中，所述横向流设备是棒或堆的形式。51.根据权利要求49所述的方法，其中，所述横向流设备基于常规硝化纤维素膜或纤维素(纸)膜。52.根据权利要求49至51中任一项所述的方法，其中，所述横向流设备适用于所述病毒的家庭使用或现场检测。53.一种微流体芯片或实验室-芯片，适于实施权利要求1至52中任一项所述的方法。54.一种分离的肽，包含seq id no：25-33所列的氨基酸序列，所述肽长不超过14个氨基酸。55.根据权利要求54所述的分离的肽，还包含可检测部分。56.根据权利要求54或55所述的分离的肽，由seq id no：2-10中任一个所列的氨基酸序列组成。57.一种制品，包含与固体载体连接的权利要求54至56中任一项的所述的分离的肽。58.根据权利要求57所述的制品，其中，所述固体载体是试管、微量滴定板、微量滴定孔、珠粒、试纸、聚合物微粒、磁性微粒、硝化纤维、纤维素或芯片阵列。59.一种用于检测样本中sars-cov-2的诊断试剂盒，所述试剂盒包含权利要求54至56中任一项所述的分离的肽或权利要求57或58所述的制品和用于检测所述肽切割的试剂。60.根据权利要求59所述的诊断试剂盒，还包含至少一种试剂，所述试剂特异性检测所述sars-cov-2以外的病毒的存在。61.一种非均相测定方法，用于生物分子诊断疑似患有covid-19的主体的样本中的
sars-cov-2病毒，其中在测定过程中将固相与另一种测定组分分离，所述方法包括：(a)使所述样本与包含由以下通式表示的切割试剂的组合物接触：x-y-z，其中：i)y是能够被所述sars-cov-2 3cl蛋白酶切割的底物肽；ii)所述3cl蛋白酶对x-y-z的切割形成所述切割的产物x-y'和y"-z，其中y'和y"是所述底物肽y的两个切割片段；iii)z是能够结合至两相分离系统的分离相的可选的分离部分；iv)所述切割试剂x-y-z不形成所述3cl蛋白酶的天然底物的邻接部分；以及v)x是能够在所述3cl蛋白酶切割所述底物肽时产生可检测信号的可检测部分，从而监测所述样本中所述3cl蛋白酶的活性，其中与所述可检测信号相关的所述3cl蛋白酶的活性水平是i)指示所述样本中所述sars-cov-2病毒的存在；以及ii)允许对所述样本中的所述sars-cov-2病毒进行定量；以及(b)用适用于读取这一信号的设备记录或读取所述信号。62.根据权利要求61所述的方法，其中，所述可检测部分x包括标记试剂，所述标记试剂选自由以下部分组成的组：酶、荧光团、发色团、蛋白质、酶原、化学发光物质和放射性同位素。63.根据权利要求61或62所述的方法，其中，所述分离部分z选自由以下部分组成的组：免疫结合试剂、磁性结合部分、肽结合部分、亲和结合部分、核酸部分、生物素/链霉亲和素部分、量子点、超材料、导电聚合物部分、树枝状聚合物部分、冠醚或印迹聚合物部分、适体部分、电化学结合部分和金属纳米颗粒部分。64.根据权利要求61至62中任一项所述的方法，其中，所述可检测部分x是荧光部分。65.一种治疗有需要的主体的sars-cov-2感染的方法，所述方法包括：(a)根据权利要求1所述的方法诊断所述主体中的sars-cov-2感染；以及(b)治疗所述主体。

技术总结
本发明涉及用于测试样本中SARS-CO-V2病毒的方法、组合物和试剂盒。该方法通过将样本与能够被蛋白酶切割形成肽化合物片段的肽化合物接触来确定病毒3CL蛋白酶的存在。肽化合物片段的检测证实了病毒的存在。物片段的检测证实了病毒的存在。物片段的检测证实了病毒的存在。


技术研发人员：多瑞特
受保护的技术使用者：NLC制药有限公司
技术研发日：2021.02.09
技术公布日：2022/11/11