一种水飞蓟素提取分离方法与流程

1.本发明涉及生物、医药技术领域,更具体的说是涉及一种水飞蓟素提取分离方法。


背景技术：

2.水飞蓟素，外文名称为silymarin。水飞蓟素是天然的黄酮木脂素类化合物，系从菊科植物水飞蓟的干燥果实中提取而得到的天然活性物质，其主要成分为水飞蓟宾(silybin)、异水飞蓟宾(isosilybim)、水飞蓟宁(silydianin)和水飞蓟亭(silychristin)。水飞蓟素难溶于水，易溶于丙酮、乙酸乙脂、甲醇、乙醇，微溶于氯仿。
3.大量的研究表明水飞蓟素及水飞蓟宾化合物具有广泛的药理活性主要活性归纳为以下几点：
4.清除活性氧
5.直接清除活性氧，对抗脂质过氧化，维持细胞膜的流动性；
6.保肝作用
7.水飞蓟素对于由四氯化碳、半乳糖胺，醇类和其他肝毒素造成的肝损害具有保护作用；
8.抗肿瘤作用
9.各种活性氧能氧化鸟嘌呤形成8一羚基鸟嘌呤，造成dna损伤，进而引起肿瘤，应用抗氧化剂，特别是自由基清除剂可以防止这一过程的发生；
10.抗心血管疾病作用
11.ksoottva等研究了水飞蓟提取物对小鼠抗高胆固醇和低密度脂蛋白氧化作用，用含水飞蓟素提取物的多不饱和脂肪酸和少量饱和脂肪酸食物喂养小鼠，对照于喂养多不饱和脂肪酸和少量饱和脂肪酸食物的小鼠，前者血清中的胆固醇含量明显降低，vldl毛有所降低，hdl一c增加，说明水飞蓟素提高了抗ldl的能力；
12.保护脑缺血损伤作用
13.冯泉等采用四血管阻断法造成大鼠全脑缺血模型探讨水飞蓟素对脑缺血性损伤保护作用的机制，通过观察水飞蓟素对脑匀浆液一氧化氮和一氧化氮合成酶的表达量，显示水飞蓟素在显著降低缺血大鼠脑组织中no、nos含量的同时，明显缩小了梗死面积。因而得出结论水飞蓟素能提高机体抗氧化能力，对脑缺血损伤有显著的保护作用。
14.毒性
15.水飞蓟素毒性低，偏琥珀酸钠盐一次静脉注射ld50(mg/kg)：雌性小鼠1050，雄性小鼠970；雌性大鼠825，雄性大鼠920；家兔最低致死量(mld)约300；犬最大耐受量300。
16.药理作用
17.已经证实在各种毒性肝损害病理模型中.水飞蓟素能中和由毒蕈素、α－鹅膏菌素(在鬼笔鹅膏真菌中发现的毒性物质)、四氯化碳、半乳糖胺、硫代乙酰胺和肝病毒fv3引起的中毒。
18.水飞蓟素的疗效归功于其具备数个作用点和作用机制由于其对自由基的捕获能
力.水飞蓟素具有抗过氧化活性。脂类化合物过氧化的病理生理学过程(造成细胞膜的损坏)，可被水飞蓟素阻断或阻止。并且在已经遭受损伤的肝细胞内，水飞蓟素刺激蛋白质的合成并使磷脂代谢正常化。
19.总之，水飞蓟素最大的贡献是对肝细胞膜有稳定作用，它阻止或避免溶解性细胞成分(例如转氨酶)的流失。水飞蓟素可限制某些肝毒性物质(如α－鹅膏菌素)穿透进入细胞内部。蛋白质合成能力的增强是由于水飞蓟素刺激细胞核中rna聚合酶i的活性，因此帮助肝细胞中核糖体rna的合成，同时导致结构和功能蛋白质(酶)的大量合成。因此水飞蓟素可增强肝细胞的修复能力和再生能力。
20.而现有的提取分离方法主要存在以下缺陷：
21.(1)现有技术主要是从水飞蓟籽中提取水飞蓟素，会造成资源一定的浪费；
22.(2)现有技术的提取分离方法主要是采用超临界萃取的手段，其成本大。


技术实现要素：

23.为解决上述技术问题，本发明提供了一种成本低、水飞蓟素的提取率高等特点的水飞蓟素提取分离方法。
24.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
25.一种水飞蓟素提取分离方法，其特征在于，包括如下步骤：
26.s1、备料：将去油后的水飞蓟籽渣进行粉碎；
27.s2、超声提取：用80～95％的乙醇水溶液超声提取二次，提取温度为30～40℃，提取时间分别为30min、30min；对提取液进行过滤；
28.s3、浓缩：真空浓缩回收乙醇；
29.s4、脱脂：用超临界co2萃取分离脱脂；
30.s5、结晶：放置结晶，滤取结晶并重结晶；
31.s6、干燥：真空干燥或冷冻干燥、粉碎、过筛、包装、入库。
32.优选的，在上述一种水飞蓟素提取分离方法中，所述真空浓缩时其真空度为-0.07mpa～-0.088mpa；浓缩温度：＜60℃。
33.优选的，在上述一种水飞蓟素提取分离方法中，所述超临界co2萃取分离；萃取压力18～30mpa,温度30～50℃，分ⅰ压力10～12mpa，温度30～50℃，分ⅱ压力5～8mpa，温度30～40℃。
34.优选的，在上述一种水飞蓟素提取分离方法中，所述真空干燥时温度≤60℃，真空度为-0.07mpa～-0.088mpa；所述冷冻干燥时，按如下方式进行：首先将物料冷却至-40～-50℃，进行升华干燥，然后升华干燥结束后再进行解析干燥；其中，所述升华干燥的条件是：抽真空至30pa，然后加热升温至-40～30℃；所述解析干燥的条件是：真空度为-0.01mpa～-0.088mpa，加热升温至30～40℃。
35.经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明从水飞蓟油渣中提取水飞蓟素，属废物再利用，避免浪费资源，节省生产成本，本技术能带来较高的经济效益和社会效益。
具体实施方式
36.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
37.实施例1：
38.一种水飞蓟素的提取制作方法，包括如下步骤：
39.s1、备料：将50g水飞蓟榨油渣粉粉碎成粗粉，粉碎后过10-40目筛；
40.s2、超声提取：用95％的乙醇水溶液400ml超声提取二次，提取温度为40℃，提取时间分别为30min、30min；提取液过滤(100-200目)；
41.s3、浓缩：真空浓缩(真空度为-0.07mpa～0.088mpa。浓缩温度：＜60℃；)，回收乙醇后，浓缩物比重为1.15-1.4；
42.s4、脱脂：浓缩物经超临界co2萃取分离脱脂，萃取压力25mpa,温度35℃，分ⅰ压力10mpa，温度40℃，分ⅱ压力6mpa，温度35℃，萃取分离效果好。总水飞蓟素含量为86.6％
43.s5、重结晶：用乙醇溶解s4步粗品并重结晶，
44.s6、真空干燥:真空度为-0.07mpa～0.088mp,温度：＜65℃，粉碎、过80目筛、包装、入库。
45.产品中的水飞蓟素含量，约为98.2％，总水飞蓟素的提取率为90.6％。
46.实施例2：
47.一种水飞蓟素的提取制作方法，包括如下步骤：
48.s1、备料：将100g水飞蓟榨油渣粉粉碎成粗粉，粉碎后过10-40目筛；
49.s2、超声提取：用80％的乙醇水溶液800ml超声提取二次，提取温度为30℃，提取时间分别为30min、30min；提取液过滤(100-200目)；
50.s3、浓缩：真空浓缩(真空度为-0.07mpa～0.088mpa；浓缩温度：＜60℃；)，回收乙醇后，浓缩物比重为1.15-1.4；
51.s4、脱脂：浓缩物经超临界co2萃取分离脱脂，萃取压力23mpa,温度30℃，分ⅰ压力10mpa，温度40℃，分ⅱ压力8mpa，温度35℃，萃取分离效果好。总水飞蓟素含量为89.4％
52.s5、重结晶：用乙醇溶解s4步粗品并重结晶，
53.s6、真空干燥:真空度为-0.07mpa～0.088mp,温度：＜65℃，粉碎、过80目筛、包装、入库。
54.产品中的水飞蓟素含量，约为94.5％，总水飞蓟素的提取率为86.6％。
55.实施例3：
56.一种水飞蓟素的提取制作方法，包括如下步骤：
57.s1、备料：将200g水飞蓟榨油渣粉粉碎成粗粉，并过10-20目筛；
58.s2、超声提取：用90％的乙醇水溶液1600ml超声提取二次，提取温度为30℃，提取时间分别为2h、2h；提取液过滤(200目)；
59.s3、浓缩：真空浓缩(真空度为-0.07mpa～0.088mpa。浓缩温度：＜65℃；)，回收乙醇后，浓缩物比重约为1.15-1.4；
60.s4、脱脂：浓缩物经超临界co2萃取分离脱脂，萃取压力20mpa,温度32℃，分ⅰ压力
10mpa，温度40℃，分ⅱ压力6mpa，温度35℃，萃取分离效果好。总水飞蓟素含量为90.7％
61.s5、重结晶：用乙醇溶解s4步粗品并重结晶，
62.s6、真空干燥:真空度为-0.07mpa～0.088mp,温度：＜65℃，粉碎、过80目筛、包装、入库。
63.产品中的水飞蓟素含量约为96.7％，总水飞蓟素的提取率为88.5％。
64.实施例4：
65.一种水飞蓟素的提取制作方法，超临界脱脂包括如下步骤：
66.取实施例3中s3浓缩物500g，用超临界co2萃取分离脱脂，萃取压力20mpa,温度32℃，分ⅰ压力10mpa，温度40℃，分ⅱ压力6mpa，温度35℃，萃取后得水飞蓟油120.3g，水飞蓟素粗品375.5g(含量98.5％)，由于超临界萃取生产成本较高，这里仅用于提取浓缩物的分离，对最终产品成本增加不大，且在生产工艺中能达到意外的分离效果。
67.实施例5：
68.一种水飞蓟素的提取制作方法，超临界脱脂包括如下步骤：
69.取实施例3中s3浓缩物500g，用超临界co2萃取分离脱脂，萃取压力20mpa,温度30℃，分ⅰ压力8mpa，温度60℃，分ⅱ压力4mpa，温度40℃，萃取后得水飞蓟油118.5g，水飞蓟素粗品370.3g(含量97.2％)，由于超临界萃取生产成本较高，这里仅用于提取浓缩物的分离，对最终产品成本增加不大，且在生产工艺中能达到意外的分离效果。
70.实施例6：
71.一种水飞蓟素的提取制作方法，超临界脱脂包括如下步骤：
72.取实施例3中s3浓缩物500g，用超临界co2萃取分离脱脂，萃取压力22mpa,温度30℃，分ⅰ压力8mpa，温度50℃，分ⅱ压力4mpa，温度40℃，萃取后得水飞蓟油115.5g，水飞蓟素粗品361.5g(含量86.4％)，由于超临界萃取生产成本较高，这里仅用于提取浓缩物的分离，对最终产品成本增加不大，且在生产工艺中能取得意外的分离效果。
73.实施例7：
74.一种水飞蓟素的提取制作方法，超临界脱脂包括如下步骤：
75.取实施例3中s3浓缩物500g，用超临界co2萃取分离脱脂，萃取压力18mpa,温度30℃，分ⅰ压力8mpa，温度50℃，分ⅱ压力4mpa，温度40℃，萃取后得水飞蓟油110.3g，水飞蓟素粗品350.6g(含量85.2％)，由于超临界萃取生产成本较高，这里仅用于提取浓缩物的分离，对最终产品成本增加不大，且在生产工艺中能得到意外的分离效果。
76.实施例8：
77.一种水飞蓟素的提取制作方法，超临界脱脂包括如下步骤：
78.取实施例3中s3浓缩物500g，用超临界co2萃取分离脱脂，萃取压力18mpa,温度30℃，分ⅰ压力10mpa，温度60℃，分ⅱ压力4mpa，温度40℃，萃取后得水飞蓟油105.8g，水飞蓟素粗品343.7g(含量83.6％)，由于超临界萃取生产成本较高，这里仅用于提取浓缩物的分离，对最终产品成本增加不大，却能在生产工艺中达到意外的分离效果。
79.实施例9：
80.一种水飞蓟素的提取制作方法，水飞蓟素的重结晶：取实施例5的产物200g加乙醇(95％)或无水乙醇4-8倍量加热溶解并趁热过滤，将不溶物除去，真空浓缩回收乙醇，浓缩液放冷结晶，抽滤结晶，结晶真空干燥或冷冻干燥。如果含量不够，此方法可重复进行，以便
得到更高纯度的水飞蓟素。
81.最终水飞蓟素含量可达99％以上。
82.本发明中的水飞蓟籽渣和水飞蓟籽的区别是：水飞蓟籽渣是指水飞蓟种籽榨油后剩下的渣料，很多时候由于榨油厂渣料太多，由于自身生产条件限制，根本无法处理，水飞蓟籽渣当废品丢弃了；水飞蓟籽是指刚从农户手中收集的晒干或烘干的水飞蓟含油的种籽；而本发明的保护的重点是如何将废物再利用，从而获取有价值的成分，提高其使用价值，使其更好地造福人类。
83.本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。
84.对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。