交联重组胶原蛋白凝胶的制备方法与流程

1.本发明属于交联重组胶原蛋白凝胶技术领域，尤其涉及交联重组胶原蛋白凝胶的制备方法。


背景技术：

2.胶原蛋白，是主要结构蛋白在胞外基质中的各种结缔组织在体内，作为结缔组织的主要成分，它是哺乳动物中含量最高的蛋白质，占全身蛋白质含量的25％至35％，胶原蛋白由结合在一起的氨基酸组成，形成三重螺旋状的原纤维，称为胶原螺旋，主要在结缔组织中发现例如软骨、骨头、肌腱、韧带和皮肤。
3.胶原蛋白是具有很好的相容性和降解性的，在整形外科领域经常用到，经常用于填充和去除皱纹，但是没有经过交联和物理交联的胶原蛋白凝胶强度低，使用效果差，因此提出本申请来解决上述问题。


技术实现要素：

4.针对现有技术存在的问题，本发明提供了交联重组胶原蛋白凝胶的制备方法，解决了现有强度低和使用效果差的问题。
5.本发明是这样实现的，交联重组胶原蛋白凝胶的制备方法，包括如下步骤：
6.s1：将重组胶原蛋白放入生理盐水中进行溶解，将溶解后的溶液ph值调制碱性；
7.s2：在溶液中加入交联剂，温度在55-65℃，时间为9-18h，形成凝胶；
8.s3：将形成的凝胶切块；
9.s4：在切块以后进行酸洗、缓冲溶液清洗；
10.s5：在清洗到一定值以后，加入肽，然后利用搅拌器进行搅拌，搅拌至均匀状态，从而得到重组后凝胶。
11.作为本发明优选的，所述步骤s1中重组胶原蛋白质量为生理盐水质量的10wt％～20wt％，使用0.5mol/l～1.5mol/l的氢氧化钠溶液调节ph至10
±
0.1。
12.作为本发明优选的，所述步骤s3中凝胶切块的体积为1-3cm3，最理想为1cm3。
13.作为本发明优选的，所述步骤s4中缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液。
14.作为本发明优选的，所述步骤s4中的清洗总时长为12-24h，酸洗时间为2.5h以上，缓冲溶液清洗的时间为8.5h以上。
15.作为本发明优选的，所述步骤s5中的肽为蓝铜肽，且蓝铜肽的含量为0.1wt％～0.5wt％。
16.与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
17.1、本发明通过交联从组胶原蛋白反应后，采用酸洗凝胶的方式，一方面能够胶原蛋白自身降解快的问题，另一方面能够很好的降低交联剂的残留。
18.2、本发明通过在原有胶原蛋白的基础上加入蓝铜肽，这样就能够很好的促进胶原蛋白的再生和紧致，二者相结合，这样就能够实现胶原蛋白再生的基础上，能够有效的去除
皱纹。
具体实施方式
19.实施例一
20.将2g重组的胶原蛋白凝胶充分溶解到20g生理盐水的内部，然后采用0.5mol/l氢氧化钠溶液调节ph＝10.1，得到重组的胶原蛋白碱性溶液，然后加入交联剂，放到55℃的环境下，放置9h得到凝胶，然后切成1cm3大小，经过酸洗2.5h，在利用磷酸盐缓冲溶液冲洗8.5h，在达到均匀后，加入蓝铜肽，搅拌至均匀状态，从而得到成品凝胶。
21.实施例二
22.将2.5g重组的胶原蛋白凝胶充分溶解到20g生理盐水的内部，然后采用1mol/l氢氧化钠溶液调节ph＝0.99，得到重组的胶原蛋白碱性溶液，然后加入交联剂，放到60℃的环境下，放置14h得到凝胶，然后切成2cm3大小，经过酸洗3.5h，在利用磷酸盐缓冲溶液冲洗9.5h，在达到均匀后，加入蓝铜肽，搅拌至均匀状态，从而得到成品凝胶。
23.实施例三
24.将3g重组的胶原蛋白凝胶充分溶解到20g生理盐水的内部，然后采用1mol/l氢氧化钠溶液调节ph＝10，得到重组的胶原蛋白碱性溶液，然后加入交联剂，放到65℃的环境下，放置18h得到凝胶，然后切成3cm3大小，经过酸洗4.5h，在利用磷酸盐缓冲溶液冲洗10h，在达到均匀后，加入蓝铜肽，搅拌至均匀状态，从而得到成品凝胶。
25.需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
26.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。


技术特征：
1.交联重组胶原蛋白凝胶的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：s1：将重组胶原蛋白放入生理盐水中进行溶解，将溶解后的溶液ph值调制碱性；s2：在溶液中加入交联剂，温度在55-65℃，时间为9-18h，形成凝胶；s3：将形成的凝胶切块；s4：在切块以后进行酸洗、缓冲溶液清洗；s5：在清洗到一定值以后，加入肽，然后利用搅拌器进行搅拌，搅拌至均匀状态，从而得到重组后凝胶。2.如权利要求1所述的交联重组胶原蛋白凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤s1中重组胶原蛋白质量为生理盐水质量的10wt％～20wt％，使用0.5mol/l～1.5mol/l的氢氧化钠溶液调节ph至10
±
0.1。3.如权利要求1所述的交联重组胶原蛋白凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤s3中凝胶切块的体积为1-3cm3，最理想为1cm3。4.如权利要求1所述的交联重组胶原蛋白凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤s4中缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液。5.如权利要求1所述的交联重组胶原蛋白凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤s4中的清洗总时长为12-24h，酸洗时间为2.5h以上，缓冲溶液清洗的时间为8.5h以上。6.如权利要求1所述的交联重组胶原蛋白凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤s5中的肽为蓝铜肽，且蓝铜肽的含量为0.1wt％～0.5wt％。7.一种重组胶原蛋白双相凝胶，其特征在于，采用权利要求1-7任一项所述的制备方法制备而成。

技术总结
本发明公开了交联重组胶原蛋白凝胶的制备方法，包括如下步骤：S1：将重组胶原蛋白放入生理盐水中进行溶解，将溶解后的溶液pH值调制碱性；S2：在溶液中加入交联剂，温度在55-65℃，时间为9-18h，形成凝胶；S3：将形成的凝胶切块；S4：在切块以后进行酸洗、缓冲溶液清洗；S5：在清洗到一定值以后，加入肽，然后利用搅拌器进行搅拌，搅拌至均匀状态，从而得到重组后凝胶。该发明通过交联从组胶原蛋白反应后，采用酸洗凝胶的方式，一方面能够胶原蛋白自身降解快的问题，另一方面能够很好的降低交联剂的残留。另一方面能够很好的降低交联剂的残留。


技术研发人员：杜晨波
受保护的技术使用者：圣言私密生命科技(上海)有限公司
技术研发日：2022.08.04
技术公布日：2022/11/8