一种鼠源IgM亚型单克隆抗体纯化方法与流程

技术特征：
1.一种鼠源igm亚型单克隆抗体纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、鼠源igm亚型腹水的深层过滤，得到浊度低于40ntu的溶液；s2、取步骤s1溶液，加入饱和硫酸铵至其浓度为33%，充分搅拌，使其沉淀，低温高速冷冻离心机离心；s3、得到步骤s2上清溶液，添加饱和硫酸铵溶液至其浓度达到45%，充分搅拌，使其沉淀，低温高速冷冻离心机离心，弃去上清，留沉淀；s4、用平衡缓冲液重悬步骤s3的沉淀，使其溶解，溶解后的溶液透析在平衡缓冲液中；s5、装填 q柱填料至中空层析柱中，安装完后将层析柱连接akta设备，用0.1m naoh冲洗q柱2-3个柱体积，再用纯化水洗涤，最后用平衡缓冲液平衡q柱；s6、将步骤s4得到的溶液过滤后，上步骤s5的q柱，上样结束后使用平衡缓冲液平衡，再用解离缓冲液进行解离；s7、步骤s6解离完成的样品用0.22-0.45μm滤膜过滤后，添加防腐剂长期保存。2.根据权利要求1所述的鼠源igm亚型单克隆抗体纯化方法，其特征在于，所述步骤s1中，深层过滤的方法是：将腹水先用脱脂棉过滤去除油脂；然后使用孔径为0.04-9μm的深层过滤器过滤并收集滤液，收集的滤液为浊度低于40ntu的溶液。3.根据权利要求1所述的鼠源igm亚型单克隆抗体纯化方法，其特征在于，所述步骤s2中，低温高速冷冻离心机的设置参数为9000rpm、4℃、10分钟。4.根据权利要求1所述的鼠源igm亚型单克隆抗体纯化方法，其特征在于，所述步骤s3中，低温高速冷冻离心机的设置参数为9000rpm、4℃、10分钟。5.根据权利要求1所述的鼠源igm亚型单克隆抗体纯化方法，其特征在于，所述步骤s4中，透析去除饱和硫酸铵，并置换成平衡缓冲液10mm pb 30mm nacl，透析比例1:50，每次透析时间不短于4h，不超过24h，透析两次。6.根据权利要求1所述的鼠源igm亚型单克隆抗体纯化方法，其特征在于，所述步骤s6中，s4透析好的溶液进行上样，使溶液中的目的蛋白充分与q柱结合，杂蛋白则不和q柱结合从而流出，在线监测uv值，上样结束后并用平衡缓冲液平衡至uv为0保持不变。7.根据权利要求1所述的鼠源igm亚型单克隆抗体纯化方法，其特征在于，所述步骤s6中，所述解离缓冲液为10mm pbs，解离与q柱结合的目的蛋白，得到igm亚型单克隆抗体，在线监测uv值，当uv值升至200mau时，开始收集，降至200mau以下，收集结束。8.根据权利要求1所述的鼠源igm亚型单克隆抗体纯化方法，其特征在于，所述步骤s6解离结束后，使用10mm pb 1.4m nacl清洗q柱，洗干净q柱中其他杂蛋白，至uv值显示为0，再用纯化水洗涤5个柱体积；q柱长期不使用则柱内填充20%乙醇，4-8℃保存。9.根据权利要求1所述的鼠源igm亚型单克隆抗体纯化方法，其特征在于，所述pb和pbs的ph=7.4。

技术总结
本发明公开了一种鼠源IgM亚型单克隆抗体纯化方法，依次包括如下步骤：（1）鼠源IgM亚型腹水的深层过滤；（2）硫酸铵分级沉淀；（3）阴离子交换层析。本方法可以稳定有效的从腹水中纯化出IgM亚型单抗。本发明提供的方法步骤简化、提取纯度高、抗体收率高且抗体稳定等优点，对于实现鼠源IgM亚型单克隆抗体纯化具有重要意义。义。义。


技术研发人员：李永刚 吴德风 詹文悦
受保护的技术使用者：南京京达生物技术有限公司
技术研发日：2022.08.03
技术公布日：2022/10/25