鳗鱼雌性化诱导方法、鳗鱼饲养方法、鳗鱼雌性化剂、及鳗鱼用饲料与流程

1.本发明涉及一种使玻璃鳗鱼到小鳗鱼时期的鳗鱼摄取含有大豆异黄酮的鳗鱼用饲料的鳗鱼雌性化诱导方法、使鳗鱼摄取大豆异黄酮的鳗鱼饲养方法、鳗鱼雌性化剂、鳗鱼用饲料等。


背景技术：

2.鳗鱼是属于鳗鲡科鳗鲡属的鱼类的总称，世界上已知有日本鳗鲡、花鳗鲡、欧洲鳗鲡等19种。自古以来，鳗鱼就在欧洲、东亚地区等地被供以食用，尤其在日本，是一种传统的受欢迎的食材。
3.例如，栖息在包括日本在内的东亚各地的日本鳗鲡(学名“anguilla japonica”)被认为是在太平洋的马里亚纳群岛附近产卵，变成一种叫做柳叶鳗(leptocephalus)的幼体后，蜕变为几乎透明、全长5～6cm、体重0.2～0.3g左右的玻璃鳗鱼，乘着黑潮的潮流到达东亚地区的沿海区域。接着，推测会在内陆水域、沿海区域、半咸水区域等地方定居、成长而变成小鳗鱼(黑仔苗等)，进一步经过五年到十几年成熟，再次向产卵地洄游。关于其他鳗鱼，也有几乎相同的生活方式，尽管产卵场所、定居场所等可能会不同。
4.由于需求量大、利润高等，鳗鱼被广泛养殖，据说总消费量的99％以上是养殖鳗鱼。目前，主流的鳗鱼养殖法是捕获游到沿海区域的天然玻璃鳗鱼作为养殖用种苗，将其释放到养殖池中进行饲养，使其发育的方法。另外，关于使人工孵化得到的鱼苗成长为亲本鳗鱼，进一步获得下一代鱼苗的完全养殖，有报道称在实验室层面已经成功，但在商业层面上还没有实现量产。
5.通常情况下，雄性鳗鱼在体重超过300g后成长会变慢，肉质反而会变得僵硬，品质和味道变差。另一方面，雌性鳗鱼的成长极限比雄性鳗鱼大，即便体重超过300g，成长也不会变慢，且保持肉质软嫩地成长，品质和味道保持不变。然而，如果在从玻璃鳗鱼到小鳗鱼的时期，在养殖环境下进行饲养，则大部分变成了雄性鳗鱼，因此难以获得雌性鳗鱼。
6.已知通过在从玻璃鳗鱼成长为小鳗鱼的时期，在配方饲料中添加雌性荷尔蒙(雌二醇17β)而进行喂食，则可诱导雌性化。另外，作为不使用激素而使鳗鱼雌性化的方法，例如在专利文献1中记载了在配置了覆盖进入到内部的鳗鱼全身的中空收容构件的水槽中饲养性分化前的鳗鱼，由此来促进雌性化的方法。
7.此处，将大豆异黄酮作为本发明的相关事项在以下加以说明。
8.大豆异黄酮是以异黄酮为基本骨架的黄酮类化合物的总称，主要大量含有于大豆胚芽等中。大豆异黄酮分为糖苷型(配糖体；与糖共价结合的结构)、苷元型(非配糖体；配糖体的糖部分脱离的结构)、配糖体的乙酰化体、及配糖体的丙二酰化体这4种。已知各分类中分别有3种化合物，大豆异黄酮已知有合计12种化合物。其中，糖苷型的3种大豆异黄酮是染料木苷、大豆苷、黄豆黄苷，它们的苷元型(糖部分脱离者)分别是染料木黄酮、大豆黄酮、黄豆黄素。各化合物的组成和含量因原料大豆等的种类和提取、纯化、处理方法等而发生变
动。而且，作为分离大豆异黄酮中的特定化合物的方法，例如在专利文献2中公开了使用溶剂从异黄酮混合物中分离高纯度染料木黄酮的方法。
9.大豆异黄酮的化学结构与雌性荷尔蒙(雌激素)相似，也被称为植物性雌激素。而且，苷元型的大豆异黄酮具有类似雌激素的作用，据说能有效预防心脏病、更年期障碍、骨质疏松症、乳癌等。
10.而且，在非专利文献1中记载了，用每条2mg/kg(dry feed)的染料木黄酮对欧洲鳗鲡喂食100天，结果可使55％成为雌性，相对于此，用每条20mg/kg(dry feed)的较高量喂食的情况下，仅有15％成为雌性。[专利文献1]日本专利特开2018-143182号公报[专利文献2]日本专利特开平7-173148号公报[非专利文献1]itai tzchori,et al,”the influence of phytoestrogens and oestradiol-17βon growth and sex determination in the european eel(anguilla anguilla)”,aquaculture research,2004,35,1213-1219.


技术实现要素：

[0011]
如上所述，已知通过在配方饲料中添加雌二醇17β而进行喂食，可诱导鳗鱼雌性化。与其他雌性化技术相比，该技术仍然是最可靠且最高效的可诱导鳗鱼雌性化的方法。
[0012]
然而，已知雌二醇17β是即便微量也具有非常强雌性化作用的物质。尤其是水生生物对外源性激素的敏感性高于陆生动物，已经有多起案例报道，由于环境水中的激素类物质导致生殖功能紊乱等。而且，也有人指出雌二醇17β可能具有致癌性、生殖毒性等。因此，考虑到如果在养殖场使用雌二醇17β，则有可能导致该物质排放到环境水中，因此在养殖场实际使用雌二醇17β时，在环境负荷和安全性这两个方面都存在很大的顾虑。
[0013]
因此，该技术仅停留在以不食用为前提的研究用途或在实验室中等情况下利用，在鳗鱼养殖场还没有使用雌二醇17β进行雌性化诱导，目前，使用雌二醇17β而诱导雌性化的个体还没有在市场上销售。
[0014]
另一方面，如上所述，雌性鳗鱼即便是体重约500g的大型个体，肉质也软嫩，品质和味道也良好。目前，市场上的主流是体重200～250g的鳗鱼，在100％依赖天然资源的情况下，为了有效利用鳗鱼资源，需要流通尺寸的大型化。因此，据推测市场对于易于大型化、且保持高品质的雌性鳗鱼的潜在需求很大，如果能够通过可靠且高效的雌性化诱导技术减少安全性和环境方面的担忧，那么就有可能将雌性化诱导的养殖鳗鱼也作为食材而上市。
[0015]
因此，本发明的课题在于提供可减少安全性和环境方面的担忧，并且可靠且高效地诱导鳗鱼雌性化的新颖方法等。解决问题的方案
[0016]
本发明者等新发现通过对玻璃鳗鱼和小鳗鱼时期的鳗鱼，喂食添加了大豆异黄酮的鳗鱼用饲料，可诱导鳗鱼的雌性化等。
[0017]
因此本发明提供了如下鳗鱼雌性化诱导方法等，该鳗鱼雌性化诱导方法是在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期，使鳗鱼摄取含有以干物质中的比率计为0.05重量％以上的大豆异黄酮的鳗鱼用饲料。
[0018]
通过在从玻璃鳗鱼成长为小鳗鱼时期中的规定期间，例如在未确定性别或具有性
别可塑性的期间，使鳗鱼摄取添加了大豆异黄酮的鳗鱼用饲料，能够可靠且高效地诱导鳗鱼的雌性化。
[0019]
作为人类食品而被日常摄取的多种大豆食品含有大豆异黄酮。因此，即使是在成长阶段摄取了大豆异黄酮(或其中的一种或两种以上的特定化合物)的鳗鱼中，万一残留了极微量的大豆异黄酮等，人类在食用该鳗鱼时，安全性的担忧也较小。而且，大豆异黄酮是植物来源的化合物群，因此即便释放到环境中，与雌二醇17β等相比而言，也很有可能对环境造成的影响较小。因此，与使用雌二醇17β等进行雌性化诱导的情况相比，根据本发明可更加减少安全性和环境方面的担忧。
[0020]
而且，通过减少鳗鱼雌性化诱导中的安全性和环境方面的担忧，有可能将雌性化诱导的养殖鳗鱼作为食材而上市。如上所述，雌性鳗鱼容易大型化，且品质和味道良好，因此推测市场对雌性鳗鱼的潜在需求很大。根据本发明，能够响应该需求而养殖生产雌性鳗鱼，供应市场。
[0021]
另外，在本发明中，所谓“小鳗鱼”是指长得比玻璃鳗鱼更大的鳗鱼苗。为方便起见，以下将体重不到0.5g的鳗鱼称为玻璃鳗鱼，将体重为0.5g以上的鳗鱼称为小鳗鱼。发明效果
[0022]
根据本发明，可减少安全性和环境方面的担忧，且可靠、高效地诱导鳗鱼雌性化。
具体实施方式
[0023]
＜关于本发明的鳗鱼用饲料＞本发明广泛包括：含有以干物质中的比率计为0.05重量％以上的大豆异黄酮的鳗鱼用饲料、含有以干物质中的比率计为0.05重量％以上的大豆异黄酮苷元的鳗鱼用饲料、以及含有以干物质中的比率计为0.006重量％以上的染料木黄酮的鳗鱼用饲料等。
[0024]
通过使鳗鱼用饲料含有大豆异黄酮(或者大豆异黄酮苷元，或它们中的一种或两种以上的特定化合物，例如染料木黄酮等)，在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期的一定期间喂食该饲料，可诱导鳗鱼的雌性化。
[0025]
用作鳗鱼用饲料的配方饲料在很多情况下是加入水、饲料油(鱼油)等，揉成糊状后喂食给鳗鱼。
[0026]
在本发明中，以干物质(dry feed，下同)中的比率计，也就是将用时制备(加入水等)前的饲料重量设为100％的情况下，优选含有0.05重量％以上的大豆异黄酮，更优选含有0.2重量％以上，最优选含有1.0重量％以上。关于大豆异黄酮含有比率的上限，并无特别限定，从饲料效率的观点出发，优选为20重量％以下，更优选为8.0重量％以下，最优选为4.0重量％以下。
[0027]
大豆异黄酮可广泛采用公知者，并无特别限定。例如，可使用现成的产品，或者可以使用通过公知方法自原料大豆等中提取、纯化、处理而制备的大豆异黄酮。
[0028]
从其他角度来看，以干物质中的比率计、也就是将用时制备(加入水等)前的饲料重量设为100％的情况下，优选含有0.05重量％以上的大豆异黄酮苷元，更优选含有0.2重量％以上，最优选含有1.0重量％以上。关于大豆异黄酮苷元含有比率的上限，并无特别限定，从饲料效率的观点等出发，优选为20重量％以下，更优选为8.0重量％以下，最优选为4.0重量％以下。另外，“大豆异黄酮苷元”是大豆异黄酮中的非糖部分(下同)，其含有重量
例如可通过根据所添加的大豆异黄酮的重量，用配糖体与苷元的分子量之比进行换算而获得，而且也可以通过用公知的试验方法进行分析而获得。
[0029]
从另外的其他角度来看，以干物质中的比率计、也就是将用时制备(加入水等)前的饲料重量设为100％的情况下，优选含有0.006重量％以上的染料木黄酮，更优选含有0.02重量％以上，最优选含有0.1重量％以上。关于染料木黄酮含有比率的上限，并无特别限定，从饲料效率的观点等出发，优选为5.0重量％以下，更优选为2.0重量％以下，最优选为1.0重量％以下。
[0030]
使鳗鱼用饲料含有染料木黄酮的方法并无特别限定。例如，可通过将含有染料木黄酮的大豆异黄酮添加到鳗鱼用饲料中，而使鳗鱼用饲料含有染料木黄酮；也可以在鳗鱼用饲料中直接添加染料木黄酮；还可以在饲料的制造阶段预先含有大豆异黄酮或染料木黄酮。
[0031]
染料木黄酮可广泛采用公知者，并无特别限定。例如，可使用现成的产品，也可直接使用含有染料木黄酮的大豆异黄酮，还可以使用通过公知方法自大豆异黄酮等中提取、纯化、处理而分离或高纯度化的染料木黄酮，还可以使用通过公知方法自豆类或其加工品中分离、提取、发酵等而获得的染料木黄酮，还可以使用通过公知方法而合成的染料木黄酮。例如，在所述大豆异黄酮含有10重量％以上的染料木黄酮的情况下，具有如下优点：比较容易获得、制造、制备，且能够可靠且高效地诱导鳗鱼雌性化。
[0032]
另外，在本发明的染料木黄酮中，只要保持对鳗鱼的雌性化诱导作用，则还广泛包括其药理学上可接受的盐、及染料木黄酮的衍生物。
[0033]
本发明的鳗鱼用饲料至少含有大豆异黄酮(或者大豆异黄酮苷元，或它们中的一种或两种以上的特定化合物，例如染料木黄酮)即可，不受其他配方、成分组成等的狭义限定。
[0034]
例如，关于鳗鱼用饲料中的大豆异黄酮(或者大豆异黄酮苷元，或其中的一种或两种以上的特定化合物)以外的配方、成分组成，可与通常使用的配方饲料相同。配方饲料是以适当的比率混合了鳗鱼生长所需营养成分的饲料，例如以干物质中的比率计，含有50重量％以上的鱼粉，且可进一步含有淀粉、磷酸钙、食盐、酵母、草药萃取物等。
[0035]
关于配方饲料中的鱼粉，可广泛采用公知者，并无特别限定，例如可以是对沙丁鱼、鲭鱼、鲱鱼、竹荚鱼等进行加工而获得的粉末。而且，也可以是除此以外的鱼类的鱼粉，还可以是多种鱼类的鱼粉的混合粉末。可考虑鳗鱼的种类、生长状态、成本等而适宜选择。
[0036]
另外，例如还可以适宜含有乳酸菌、丁酸菌、消化酶、干燥蔬菜等提高鳗鱼的生长效率的成分等。
[0037]
＜关于本发明的鳗鱼雌性化诱导剂＞本发明广泛包括：含有每天摄取量为10mg/kg(鳗鱼体重，下同)以上的大豆异黄酮作为有效成分的鳗鱼雌性化诱导剂、含有每天摄取量为10mg/kg以上的大豆异黄酮苷元作为有效成分的鳗鱼雌性化诱导剂、以及含有每天摄取量为1.2mg/kg以上的染料木黄酮作为有效成分的鳗鱼雌性化诱导剂等。
[0038]
本发明的鳗鱼雌性化诱导剂含有大豆异黄酮(或者大豆异黄酮苷元，或其中的一种或两种以上的特定化合物，例如染料木黄酮)作为有效成分。通过在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期，使鳗鱼摄取大豆异黄酮等，能够可靠且高效地诱导鳗鱼雌性化。
[0039]
在配方饲料的情况下，通常的喂食量标准是在玻璃鳗鱼～小鳗鱼(例如体重0.2g～20g的等级)时期为体重的5～8％，根据成长情况，在小鳗鱼(例如体重20g～30g的等级)时期为体重的2～3％。将喂食量设为体重的2％，优选每天摄取10mg/kg以上的大豆异黄酮，更优选每天摄取40mg/kg以上，最优选每天摄取200mg/kg以上。而且，从饲料效率的观点出发，将喂食量设为体重的8％，大豆异黄酮的摄取量优选为每天16g/kg以下，更优选为每天6.4g/kg以下，最优选为每天3.2g/kg以下。
[0040]
从另外的角度来看，将喂食量设为体重的2％，优选每天摄取10mg/kg以上的大豆异黄酮苷元，更优选每天摄取40mg/kg以上，最优选每天摄取200mg/kg以上。而且，从饲料效率的观点出发，将喂食量设为体重的8％，大豆异黄酮苷元的摄取量优选为每天16g/kg以下，更优选为每天6.4g/kg以下，最优选为每天3.2g/kg以下。
[0041]
从另外的其他角度来看，将喂食量设为体重的2％，优选每天摄取1.2mg/kg以上的染料木黄酮，更优选每天摄取4.0mg/kg以上，最优选每天摄取20mg/kg以上。而且，从饲料效率的观点出发，将喂食量设为体重的8％，染料木黄酮的摄取量优选为每天4.0g/kg以下，更优选为每天1.6g/kg以下，最优选为每天0.8g/kg以下。
[0042]
本发明的鳗鱼雌性化诱导剂中，可根据目的、用途、剂型等而适宜添加赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、溶剂、溶解助剂、悬浮剂、缓冲剂、等张化剂、防腐剂、抗菌剂、抗氧化剂、ph调节剂、分散剂、着色剂、消泡剂等。
[0043]
作为赋形剂的优选例，例如可使用乳糖、白砂糖、d-甘露醇、淀粉、结晶纤维素、轻质无水硅酸等。
[0044]
作为润滑剂的优选例，例如可使用硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石、胶体二氧化硅等。
[0045]
作为粘合剂的优选例，例如可使用结晶纤维素、白砂糖、d-甘露醇、糊精、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。
[0046]
作为崩解剂的优选例，例如可使用淀粉、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠等。
[0047]
作为溶剂的优选例，例如可使用注射用水、酒精、丙二醇、聚乙二醇(macrogol)、芝麻油、玉米油等。
[0048]
作为溶解助剂的优选例，例如可使用聚乙二醇、丙二醇、d-甘露醇、苯甲酸苄酯、乙醇、三氨基甲烷、胆固醇、三乙醇胺、碳酸钠、柠檬酸钠等。
[0049]
作为悬浮剂的优选例，例如可使用表面活性剂(硬脂基三乙醇胺、月桂基硫酸钠、月桂基氨基丙酸、卵磷脂、苯扎氯铵、苄索氯铵、单硬脂酸甘油酯等)、亲水性高分子(聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素等)等。
[0050]
作为缓冲剂的优选例，例如可使用磷酸盐、乙酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、三羟甲基氨基甲烷、hepes等的缓冲液等。
[0051]
作为等张化剂的优选例，例如可使用氯化钠、丙三醇、d-甘露醇等。
[0052]
作为以防腐为目的的药剂的优选例，例如可使用硫柳汞、对羟基苯甲酸酯类、苯氧基乙醇、氯丁醇、苄醇、苯乙醇、脱氢乙酸、山梨酸、其他各种防腐剂、抗生素、合成抗菌剂等。
[0053]
作为抗氧化剂的优选例，例如可使用亚硫酸盐、抗坏血酸等。
[0054]
作为ph调节剂的优选例，例如可使用盐酸、碳酸、乙酸、柠檬酸、磷酸、硼酸、硫酸等
酸，氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁等碱金属氢氧化物，碳酸钠等碱金属碳酸盐或碳酸氢盐，乙酸钠等碱金属乙酸盐，柠檬酸钠等碱金属柠檬酸盐，氨丁三醇(trometamol)等碱，单乙醇胺、二异丙醇胺等。
[0055]
作为分散剂的优选例，例如可使用羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚山梨酯(polysorbate)80等。
[0056]
作为着色剂的优选例，例如可使用焦糖色素、栀子色素、花青苷色素、胭脂树橙色素、红辣椒色素、红花色素、红曲色素、胡萝卜素色素、类胡萝卜素色素、类黄酮色素、胭脂虫色素、苋菜红(红色2号)、赤藓红(红色3号)、诱惑红ac(红色40号)、胭脂红(红色102号)、荧光桃红(红色104号)、孟加拉玫瑰红(红色105号)、酸性红(红色106号)、酒石黄(黄色4号)、日落黄fcf(黄色5号)、固绿fcf(绿色3号)、亮蓝fcf(蓝色1号)、靛蓝胭脂红(蓝色2号)、叶绿素铜、叶绿素铜钠等。
[0057]
作为消泡剂的优选例，例如可使用二甲硅油(dimethicone)、西甲硅油(simethicone)、有机硅乳液、失水山梨醇倍半油酸酯、非离子类物质等。
[0058]
除上述以外，本剂还可以适宜含有辅助成分，例如作为保存和功效助剂的光吸收色素(核黄素、腺嘌呤、腺苷等)、用以稳定化的螯合剂和还原剂(维生素c、柠檬酸等)、碳水化合物(山梨糖醇、乳糖、甘露醇、淀粉、蔗糖、葡萄糖、葡聚糖等)、酪蛋白消化物、各种维生素、乳酸菌、丁酸菌、消化酶、干燥蔬菜等。
[0059]
＜关于本发明的鳗鱼雌性化诱导方法＞本发明包含如下鳗鱼雌性化诱导方法的全部：在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期，使鳗鱼摄取含有以干物质中的比率计为0.05重量％以上的大豆异黄酮的鳗鱼用饲料的方法；及使玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期的鳗鱼每天摄取10mg/kg以上的大豆异黄酮的方法等。而且，本发明包含如下鳗鱼雌性化诱导方法的全部：在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期，使鳗鱼摄取含有以干物质中的比率计为0.05重量％以上的大豆异黄酮苷元的鳗鱼用饲料的方法；及使玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期的鳗鱼每天摄取10mg/kg以上的大豆异黄酮苷元的方法等。另外，本发明包含如下鳗鱼雌性化诱导方法的全部：在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期，使鳗鱼摄取含有以干物质中的比率计为0.006重量％以上的染料木黄酮的鳗鱼用饲料的方法；及使玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期的鳗鱼每天摄取1.2mg/kg以上的染料木黄酮的方法等。
[0060]
鳗鱼在从玻璃鳗鱼成长为小鳗鱼期间(例如体重0.2g～30g的生长期间中)的特定时期进行雌雄分化，当成长到体重30g以上的程度时，可以通过性腺的形态观察来进行雌雄判别。而且，在雌雄分化时期的前后，例如其玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期，通过使其摄取含有上述比率的大豆异黄酮(或者大豆异黄酮苷元，或其中的一种或两种以上的特定化合物，例如染料木黄酮)的鳗鱼用饲料，或者从其他观点出发，使其摄取上述摄取量范围的大豆异黄酮(或者大豆异黄酮苷元，或其中的一种或两种以上的特定化合物，例如染料木黄酮)，能够可靠且高效地诱导鳗鱼雌性化。
[0061]
根据鳗鱼的成长程度，例如在玻璃鳗鱼～小鳗鱼(例如体重略0.2g以上且略不足20g)的时期，可以使其每天摄取25mg/kg～16g/kg(鳗鱼体重)的大豆异黄酮，更优选每天摄取100mg/kg～6.4g/kg，最优选每天摄取500mg/kg～3.2g/kg；在小鳗鱼(例如体重略20g以上到略30g)的时期，可以使其每天摄取10mg/kg～16g/kg(鳗鱼体重)的大豆异黄酮，更优选每天摄取40mg/kg～6.4g/kg，最优选每天摄取200mg/kg～3.2g/kg。
[0062]
从另外的角度来看，根据鳗鱼的成长程度，例如在玻璃鳗鱼～小鳗鱼(例如体重略0.2g以上且略不足20g)的时期，可以使其每天摄取25mg/kg～16g/kg(鳗鱼体重)的大豆异黄酮苷元，更优选每天摄取100mg/kg～12g/kg，最优选每天摄取500mg/kg～8g/kg；在小鳗鱼(例如体重略20g以上到略30g)的时期，可以使其每天摄取10mg/kg～16g/kg(鳗鱼体重)的大豆异黄酮苷元，更优选每天摄取40mg/kg～6.4g/kg，最优选每天摄取200mg/kg～3.2g/kg。
[0063]
从另外的其他角度来看，根据鳗鱼的成长程度，例如在玻璃鳗鱼～小鳗鱼(例如体重略0.2g以上且略不足20g)的时期，可以使其每天摄取3mg/kg～4.0g/kg(鳗鱼体重)的染料木黄酮，更优选每天摄取10mg/kg～1.6g/kg，最优选每天摄取50mg/kg～800mg/kg；在小鳗鱼(例如体重略20g以上到略30g)的时期，可以使其每天摄取1.2mg/kg～1.5g/kg(鳗鱼体重)的染料木黄酮，更优选每天摄取4mg～600mg/kg，最优选每天摄取20mg/kg～300mg/kg。
[0064]
使鳗鱼摄取大豆异黄酮等的方法并无特别限定。例如可通过喂食含有大豆异黄酮等的鳗鱼用饲料来进行，也可以与饲料分开地使鳗鱼摄取大豆异黄酮等，还可以将大豆异黄酮等的制剂直接投予给鳗鱼个体等。
[0065]
使鳗鱼摄取大豆异黄酮等的期间只要是雌雄分化的时期及包括其前后的期间即可，并无特别限定。例如，通过在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期的2～6个月之间，不间断地连续使鳗鱼摄取大豆异黄酮等，有很大可能性能够可靠且高效地诱导鳗鱼雌性化。
[0066]
关于使鳗鱼摄取大豆异黄酮等的频率，只要在使鳗鱼摄取的期间中，不间断地连续使鳗鱼摄取即可，并无特别限定。例如，通过在一周内的3～7天，使鳗鱼摄取大豆异黄酮等，有很大可能性能够可靠且高效地诱导鳗鱼雌性化。而且，根据鳗鱼成长的程度，例如在玻璃鳗鱼～小鳗鱼(例如体重0.2g～20g)的时期，将每天摄取量进一步分为2～3次投予，在小鳗鱼(例如体重20g～30g)的时期，可以1次性投予每天摄取量。
[0067]
＜关于本发明的鳗鱼饲养方法＞本发明包含如下鳗鱼饲养方法的全部：在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期，使鳗鱼摄取包含以干物质中的比率计为0.05重量％以上的大豆异黄酮的鳗鱼用饲料的方法；及使玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期的鳗鱼每天摄取10mg/kg以上的大豆异黄酮的方法等。而且，本发明包含如下鳗鱼饲养方法的全部：在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期，使鳗鱼摄取包含以干物质中的比率计为0.05重量％以上的大豆异黄酮苷元的鳗鱼用饲料的方法；及使玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期的鳗鱼每天摄取10mg/kg以上的大豆异黄酮苷元的方法等。另外，本发明包含如下鳗鱼饲养方法的全部：在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期，使鳗鱼摄取包含以干物质中的比率计为0.006重量％以上的染料木黄酮的鳗鱼用饲料的方法；及使玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期的鳗鱼每天摄取1.2mg/kg以上的染料木黄酮的方法等。
[0068]
如上所述，在雌雄分化时期的前后，例如在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期，使鳗鱼摄取含有上述比率的大豆异黄酮(或者大豆异黄酮苷元，或其中的一种或两种以上的特定化合物，例如染料木黄酮)的鳗鱼用饲料而进行饲养，从另外的角度来看，使鳗鱼摄取上述摄取量范围的大豆异黄酮(或大豆异黄酮苷元、或其中的一种或两种以上的特定化合物、例如染料木黄酮)而进行饲养，由此能够可靠且高效地诱导鳗鱼雌性化。
[0069]
大豆异黄酮等的含有比率或摄取量，使鳗鱼摄取的方法、期间、频率、时期等与上述相同。
[0070]
＜关于本发明的雌性鳗鱼生产方法＞本发明包含如下雌性鳗鱼生产方法的全部：包含在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期，使鳗鱼摄取含有以干物质中的比率计为0.05重量％以上的大豆异黄酮的鳗鱼用饲料的工序的方法；及包含使玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期的鳗鱼每天摄取10mg/kg以上的大豆异黄酮的工序的方法等。而且，本发明包含如下雌性鳗鱼生产方法的全部：包含在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期，使鳗鱼摄取含有以干物质中的比率计为0.05重量％以上的大豆异黄酮苷元的鳗鱼用饲料的工序的方法；及包含使玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期的鳗鱼每天摄取10mg/kg以上的大豆异黄酮苷元的工序的方法等。另外，本发明包含如下雌性鳗鱼生产方法的全部：包含在玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期，使鳗鱼摄取含有以干物质中的比率计为0.006重量％以上的染料木黄酮的鳗鱼用饲料的工序的方法；及包含使玻璃鳗鱼及/或小鳗鱼时期的鳗鱼每天摄取1.2mg/kg以上的染料木黄酮的工序的方法等。
[0071]
大豆异黄酮(或者大豆异黄酮苷元，或其中的一种或两种以上的特定化合物，例如染料木黄酮)的含有比率或摄取量，使鳗鱼摄取的方法、期间、频率、时期等与上述相同。
[0072]
另外，本发明广泛包括利用上述鳗鱼雌性化诱导方法、鳗鱼饲养方法、或雌性鳗鱼生产方法所制作/生产的雌性鳗鱼。识别鳗鱼是否为利用本发明的方法所制作/生产的雌性鳗鱼例如可通过雌性的出现频率、及是否具有养殖鳗鱼的特征来判定。
[0073]
另外，作为本发明的对象的鳗鱼种类只要属于鳗鲡科鳗鲡属即可，并无特别限定。例如，日本鳗鲡(学名“anguilla japonica”)、花鳗鲡(学名“anguilla marmorata”)、欧洲鳗鲡(学名“anguilla anguilla”)、美洲鳗鲡(学名“anguilla rostrata”)、双色鳗鲡(学名“anguilla bicolor bicolor”)等也是对象。在本发明中，所述鳗鱼最优选为日本鳗鲡。[实施例1]
[0074]
在实施例1中，研究是否可利用大豆异黄酮诱导鳗鱼雌性化。
[0075]
将性别未定的玻璃鳗鱼(平均体重0.4g)每组70条地放入到150l的frp水槽中，饱腹喂食以各比率添加了大豆异黄酮的配方饲料，将水温设定为28℃而进行饲养。
[0076]
添加了大豆异黄酮的配方饲料的喂食次数为每周5次。最初两个月的每次的喂食量为体重的7～8％，其后为体重的约2.5％。
[0077]
从饲养开始经过约6个月后，对已经成长为体重约30g以上的小鳗鱼的个体适宜采样，进行雌雄判别。
[0078]
雌雄判别是根据性腺的形态观察，将有卵巢的个体判定为雌性，将有精巢的个体判定为雄性。
[0079]
将结果示于表1、2。各表中，“条数”表示所采样的小鳗鱼的个体数，“大豆异黄酮添加比率”表示将大豆异黄酮添加前、用时制备前的配方饲料的重量设为100％的情况下大豆异黄酮添加量的比率(重量％)，“苷元含有比率”表示将大豆异黄酮添加前、用时制备前的配方饲料的重量设为100％的情况下大豆异黄酮苷元含有重量的比率(重量％)，“染料木黄酮含有比率”表示将大豆异黄酮添加前、用时制备前的配方饲料的重量设为100％的情况下染料木黄酮含有重量的比率(重量％)，“雌性的比率”表示所采样的个体数中雌性的比率。另外，“大豆异黄酮苷元含有重量”表示所添加的大豆异黄酮中的非糖部分的重量，使用基于公知的试验方法所获得的分析值。另外，“对照”是代替上述情况，喂食未添加大豆异黄酮的通常配方饲料而进行饲养的情况的结果。
[表1][表1][表2]
[0080]
如表1所示，通过在玻璃鳗鱼～小鳗鱼时期，在鳗鱼用饲料中添加1重量％以上大豆异黄酮而进行饲养，可诱导鳗鱼雌性化。而且，如表2所示，在用苷元相对于饲料重量的含有比率为0～0.040重量％的鳗鱼用饲料进行饲养的情况下，所有个体都分化为雄性，相对于此，在苷元含有比率为0.100重量％以上的情况下，46％的个体被诱导为雌性，在0.336重量％的情况下，95％的个体被诱导为雌性，在1.076重量％以上的情况下，所有个体被诱导为雌性。从另外的观点出发，着眼于通过添加大豆异黄酮而含有于饲料中的染料木黄酮，在玻璃鳗鱼～小鳗鱼时期用染料木黄酮含有比率为0～0.004重量％的鳗鱼用饲料进行饲养的情况下，所有个体都分化为雄性，在染料木黄酮含有比率为0.01重量％的情况下，46％的个体被诱导为雌性，在0.031重量％的情况下，95％的个体被诱导为雌性，在染料木黄酮含有比率为0.155重量％以上的情况下，所有的个体被诱导为雌性。
[0081]
根据本实验中每次的喂食量，在最初两个月为体重的7～8％，其后为体重的约2.5％进行换算，在大豆异黄酮添加比率为1重量％的情况下，最初两个月每次的大豆异黄酮摄取量约为700～800mg/kg体重，其后每次的大豆异黄酮摄取量约为250mg/kg体重。同样地，苷元相对于饲料重量的含有比率为0.100重量％的情况下，最初两个月每次的苷元摄取量约为70.0～80.0mg/kg，其后每次的苷元摄取量约为25.0mg/kg体重；在苷元相对于饲料重量含有比率为0.336重量％的情况下，最初两个月每次的苷元摄取量约为235.2～268.8mg/kg体重，其后每次的苷元摄取量约为84.0mg/kg体重；在苷元相对于饲料重量的含
有比率为1.076重量％的情况下，最初两个月每次的苷元摄取量约为753.2～860.8mg/kg体重，其后每次的苷元摄取量约为269.0mg/kg体重。而且，在染料木黄酮含有比率为0.01重量％的情况下，最初两个月每次的染料木黄酮摄取量约为7～8mg/kg体重，其后每次的染料木黄酮摄取量约为2.5mg/kg体重；在染料木黄酮含有比率为0.031重量％的情况下，最初两个月每次的染料木黄酮摄取量约为21.70～24.8mg/kg体重，其后每次的染料木黄酮摄取量约为7.75mg/kg体重；在染料木黄酮含有比率为0.155重量％的情况下，最初两个月每次的染料木黄酮摄取量约为108.5～1,240mg/kg体重，其后每次的染料木黄酮摄取量约为38.75mg/kg体重。