一种脱毒微型甘薯繁殖方法与流程

1.本发明涉及甘薯育种技术领域，尤其是一种脱毒微型甘薯繁殖方法。


背景技术：

2.微型甘薯是指单个薯块质量50-150g，质地细腻，风味浓的小型菜用甘薯。由于微型甘薯营养丰富，种植简单，是现在甘薯种植中的热门研究方向。
3.现有技术中甘薯脱毒种薯的方式主要是多次组织培养，在组织培养基中增加抗病毒因子提高甘薯脱毒效果的研究较为缺乏，而且在种苗培育中缺乏针对性的肥效管理，导致脱毒甘薯培育环节的不完善，没有进行多环节抗病毒干预的研究。


技术实现要素：

4.为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种脱毒微型甘薯繁殖方法，通过在组织培养中进行针对性的培养基处理和土壤肥效管控，有效提高甘薯的脱毒效果。具体技术方案如下：
5.一种脱毒微型甘薯繁殖方法，包括以下步骤：
6.(1)苗株组织培养
7.取带有叶原基的茎尖用酒精浸泡20-30s，再用新洁尔敏浸泡2-5s，将茎尖冲洗1-3次，接种到多糖ms培养基，培养至苗高度2-4cm；再次采集茎尖放入多糖ms培养基中培养3-4周筛选出脱毒苗；
8.(2)炼苗
9.将上述培养的甘薯苗移栽到大棚中，大棚中栽培基质由园土和腐殖土、有机肥按照质量比100:20-30:5-7混合而成；待甘薯长出50-60cm藤蔓，将藤蔓剪断种植到大田中，每亩大田施用600-650kg有机肥，秋季收获种薯即可；
10.所述有机肥的制作方法为：以质量份计，将绿藻10-13份、青苔20-50份、虾蟹壳粉50-70份混合打浆，在浆液中加入1-3份纤维素酶，加入醋酸调节混合溶液ph为5-5.8，将温度升高至40-43℃，密封放置20-30h，加入10-30份玉米芯、5-8份木薯粉混合均匀，调节含水量为85-88％，在38-40℃下静置3-5h；
11.将上述混合物的温度降至25-28℃，接种乳酸菌覆膜发酵20-30h，在混合物中加入4-6份煤矸石粉，覆膜发酵3-5天；
12.将上述发酵物与300-330份牛粪、150-170份猪粪、20-30份麦麸、41-55份油菜粕混合，调节含水量为77-83％，接种枯枝芽孢杆菌在30-33℃下发酵2-3周，接种木霉发酵10-15天。
13.进一步的，步骤(1)中，所述茎尖的叶原基数量为1个。
14.进一步的，步骤(1)中，所述酒精浓度为70％。
15.进一步的，步骤(1)中，所述多糖ms培养基由ms培养基和0.01-0.12mg/l naa、0.2-0.4mg/l香菇多糖、0.1-0.5mg/l黄芪多糖制作而成。
16.进一步的，步骤(2)中，所述虾蟹壳粉细度为100-200目。
17.进一步的，步骤(2)中，所述乳酸菌的接种量为混合物质量的5-8％。
18.进一步的，步骤(2)中，所述枯枝芽孢杆菌的接种量是发酵底物总量的1-3％。
19.进一步的，步骤(2)中，所述木霉的接种量是发酵底物总量的4-7％。
20.与现有技术相比，本发明的技术效果体现在：
21.本发明通过在组织培养中加入香菇多糖、黄芪多糖，诱变种薯培养的组织体，提高其抗病毒效果，使得组织培养中苗期脱毒效率更高、成活率更高。而且在种薯种植中针对性的提高有机肥的锌含量，使得土壤中酶活性和微生物活性进一步增强，使得种薯质量好，产量高。本发明种薯采用全基质高密度保温保湿大棚扩繁，能达到1：9000的繁殖倍数，每亩大棚春季移栽10株试管苗，经多级扩繁，当年可繁育8-10万条微型薯(约800公斤)其中80％为(5-20)克，具有极好的经济发展价值。
附图说明
22.图1为本发明种薯采收图片。
具体实施方式
23.下面结合具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。
24.实施例1
25.一种脱毒微型甘薯繁殖方法，包括以下步骤：
26.(1)苗株组织培养
27.取带有叶原基的茎尖用酒精浸泡20s，再用新洁尔敏浸泡2s，将茎尖冲洗1次，接种到多糖ms培养基，培养至苗高度2cm；再次采集茎尖放入多糖ms培养基中培养3周筛选出脱毒苗；
28.所述茎尖的叶原基数量为1个，所述叶原基来源于贵州紫云迷你小番薯；所述酒精浓度为70％；所述多糖ms培养基由ms培养基和0.01mg/l naa、0.2mg/l香菇多糖、0.1mg/l黄芪多糖制作而成；
29.(2)炼苗
30.将上述培养的甘薯苗移栽到大棚中，大棚中栽培基质由园土和腐殖土、有机肥按照质量比100:20:5混合而成；待甘薯长出50cm藤蔓，将藤蔓剪断种植到大田中，每亩大田施用600kg有机肥，秋季收获种薯即可。
31.所述有机肥的制作方法为：以质量份计，将绿藻10份、青苔20份、虾蟹壳粉50份混合打浆，在浆液中加入1份纤维素酶，加入醋酸调节混合溶液ph为5，将温度升高至40℃，密封放置20h，加入10份玉米芯、5份木薯粉混合均匀，调节含水量为85％，在38℃下静置3h；所述虾蟹壳粉细度为100目；
32.将上述混合物的温度降至25℃，接种乳酸菌覆膜发酵20h，在混合物中加入4份煤矸石粉，覆膜发酵3天；所述乳酸菌的接种量为混合物质量的5％；
33.将上述发酵物与300份牛粪、150份猪粪、20份麦麸、41份油菜粕混合，调节含水量为77％，接种枯枝芽孢杆菌在30℃下发酵2周，接种木霉发酵，接种木霉发酵10天；所述枯枝
芽孢杆菌的接种量是发酵底物总量的1％，所述木霉的接种量是发酵底物总量的4％。
34.实施例2
35.一种脱毒微型甘薯繁殖方法，包括以下步骤：
36.(1)苗株组织培养
37.取带有叶原基的茎尖用酒精浸泡30s，再用新洁尔敏浸泡5s，将茎尖冲洗3次，接种到多糖ms培养基，培养至苗高度4cm；再次采集茎尖放入多糖ms培养基中培养4周筛选出脱毒苗；
38.所述茎尖的叶原基数量为1个，所述叶原基来源于贵州紫云迷你小番薯；所述酒精浓度为70％；所述多糖ms培养基由ms培养基和0.12mg/l naa、0.4mg/l香菇多糖0.5mg/l黄芪多糖制作而成；
39.(2)炼苗
40.将上述培养的甘薯苗移栽到大棚中，大棚中栽培基质由园土和腐殖土、有机肥按照质量比100:30:7混合而成；待甘薯长出60cm藤蔓，将藤蔓剪断种植到大田中，每亩大田施用650kg有机肥，秋季收获种薯即可。
41.所述有机肥的制作方法为：以质量份计，将绿藻13份、青苔50份、虾蟹壳粉70份混合打浆，在浆液中加入3份纤维素酶，加入醋酸调节混合溶液ph为5.8，将温度升高至43℃，密封放置30h，加入30份玉米芯、8份木薯粉混合均匀，调节含水量为88％，在38℃下静置3h；所述虾蟹壳粉细度为100目；
42.将上述混合物的温度降至25℃，接种乳酸菌覆膜发酵20h，在混合物中加入6份煤矸石粉，覆膜发酵5天；所述乳酸菌的接种量为混合物质量的5％；
43.将上述发酵物与330份牛粪、150份猪粪、30份麦麸、55份油菜粕混合，调节含水量为83％，接种枯枝芽孢杆菌在30℃下发酵3周，接种木霉发酵，接种木霉发酵15天；所述枯枝芽孢杆菌的接种量是发酵底物总量的3％，所述木霉的接种量是发酵底物总量的4％。
44.实施例3
45.一种脱毒微型甘薯繁殖方法，包括以下步骤：
46.(1)苗株组织培养
47.取带有叶原基的茎尖用酒精浸泡30s，再用新洁尔敏浸泡2s，将茎尖冲洗3次，接种到多糖ms培养基，培养至苗高度2cm；再次采集茎尖放入多糖ms培养基中培养4周筛选出脱毒苗；
48.所述茎尖的叶原基数量为1个，所述叶原基来源于贵州紫云迷你小番薯；所述酒精浓度为70％；所述多糖ms培养基由ms培养基和0.12mg/l naa、0.2mg/l香菇多糖、0.5mg/l黄芪多糖制作而成；
49.(2)炼苗
50.将上述培养的甘薯苗移栽到大棚中，大棚中栽培基质由园土和腐殖土、有机肥按照质量比100:20-30:7混合而成；待甘薯长出50cm藤蔓，将藤蔓剪断种植到大田中，每亩大田施用650kg有机肥，秋季收获种薯即可。
51.所述有机肥的制作方法为：以质量份计，将绿藻13份、青苔20份、虾蟹壳粉70份混合打浆，在浆液中加入1份纤维素酶，加入醋酸调节混合溶液ph为5.8，将温度升高至40℃，密封放置30h，加入30份玉米芯、5份木薯粉混合均匀，调节含水量为88％，在40℃下静置3h；
所述虾蟹壳粉细度为200目；
52.将上述混合物的温度降至28℃，接种乳酸菌覆膜发酵20h，在混合物中加入6份煤矸石粉，覆膜发酵3天；所述乳酸菌的接种量为混合物质量的8％；
53.将上述发酵物与300份牛粪、170份猪粪、20份麦麸、55份油菜粕混合，调节含水量为77％，接种枯枝芽孢杆菌在33℃下发酵2周，接种木霉发酵，接种木霉发酵13天；所述枯枝芽孢杆菌的接种量是发酵底物总量的3％，所述木霉的接种量是发酵底物总量的4％。
54.对比例设置：
[0055][0056][0057]
试验例
[0058]
1、分别按照实施例1-3和对比例1-3操作，按照常规种植统一管理，统计各组种薯病毒携带率、种薯种植成活率，结果如下：
[0059] 病毒携带率成活率实施例111.93％99.43％实施例210.30％98.02％实施例39.62％99.28％对比例116.03％94.47％对比例218.44％93.17％对比例325.77％84.94％
[0060]
由表可以看出，按照本发明方法的实施例1-3的的病毒携带率低、成活率高，对比例1-3的病毒携带率高、成活率较低，显然本发明中使用黄芪多糖、香菇多糖有效提高了甘薯种苗的脱毒效果和成活率。
[0061]
2、分别按照实施例1-3和对比例4-7操作，检测各组有机肥中锌离子含量，测量方式为：按照检测标准使用盐酸、硝酸、高氯酸消解，通过电感耦合等离子体原子发射光谱法检测。结果如下：
[0062] 锌离子mg/kg实施例141.23
实施例239.44实施例343.86对比例431.01对比例528.48对比例625.36对比例753.96
[0063]
由表可以看出，实施例1-3中有机肥的锌离子含量显著高于对比例4-6。对比例7由于直接在有机肥中添加氯化锌，在加工中存在一定量的损失，但是实际有机肥的锌离子含量是高于实施例1-3的。可见本发明方案显著提高了有机肥中锌离子的含量。
[0064]
3、按照实施例1-3和对比例1-7繁殖，大田种植密度行距为40cm、株距30cm；按照常规方式统一管理，在采收后检测大田土壤中的磷酸酶活性(mg/g)和放线菌数量(
×
104cfu/g)、亩产量(斤)，磷酸酶活性的检测方法按照比色法测定，放线菌数量以平板稀释法测定。结果如下：
[0065] 磷酸酶活性放线菌数量亩产量(斤)实施例19.939.353985.67实施例29.058.964011.32实施例39.439.683834.56对比例19.118.783644.19对比例29.579.223582.33对比例38.939.363544.28对比例47.925.443677.37对比例55.383.213705.81对比例64.152.793468.06对比例75.944.353556.32
[0066]
由表看出，实施例1-3的土壤磷酸酶活性、放线菌数量、亩产量均属于极高水平，对比例1-3的亩产量偏低，主要在于种苗脱毒效果差，后期生长受环境影响大，即使土壤条件好酶活性高、微生物活跃也不能带来高产水准。对比例4-6中由于制作的有机肥锌离子含量低，土壤中酶活性和微生物受到限制，亩产量低。对比例7虽然外源性加入锌离子，但是由于与有机肥本身释放的离子差异与有机肥的原料协同性不好，即使是高水准的锌离子含量，也不能带来土壤酶活性和微生物活性的增强，导致整体产量不高。所以，本发明通过良好的种苗培育和有机肥中锌离子的释放，有效改善土壤环境促进了种薯产量的增加。