一种红精灵北美冬青组培苗的培育方法与流程

1.本发明属于种植技术领域，尤其涉及一种红精灵北美冬青组培苗的培育方法。


背景技术：

2.北美冬青又名轮生冬青、美洲冬青，为冬青科冬青属多年生灌木，原产美国东北部，多生长在沼泽、潮湿灌木区和池塘边。北美冬青与冬青科大多常绿树种不同，其特点是冬季落叶。落叶后，密集、亮丽的红果挂满枝头，十分耀眼和喜庆。北美冬青在园林上有着广泛的用途，既可作为切枝观赏，也可作居室盆栽，以及庭院美化；
3.北美冬青切枝红果艳丽，水插期长达2个月，观赏价值高。在花卉市场上单枝售价达数十元。切枝栽培在第3年后即可投产，每树可剪切枝5-8枝，并逐年增加，剪取年限达30年以上，经济效益显著，回报期长。
4.国内每年从荷兰等国家大量进口北美冬青成品切枝，投放花卉市场，销售价格昂贵。为满足市场需求本技术提出一种红精灵北美冬青组培苗的培育方法。


技术实现要素：

5.为了解决上述问题，本发明的首要目的在于提供一种红精灵北美冬青组培苗的培育方法。
6.通过以下制备工艺来实现上述目的：
7.本发明提供了一种红精灵北美冬青组培苗的培育方法，包括以下步骤：
8.(1)外植体的建立：选择无病虫害生长健壮的北美冬青嫩枝条作为外植体，对外植体进行前处理脱毒，处理完毕后晾干备用；
9.(2)初代培养：将步骤(1)处理过的北美冬青嫩枝条在无菌条件下接种到初代培养基初代培养，得到无菌苗后切成长2cm的茎段，随后在红光和绿光共同照射下对茎段进行愈伤组织诱导；
10.(3)生根培养：从步骤(2)扩繁的增殖苗中挑选高度为2-4cm，培养周期35-40天的植株，切去基部愈伤及丛生芽，转入生根培养基快速繁殖得到生根苗；
11.(4)炼苗：将步骤(3)得到的生根苗移栽在草炭土与珍珠岩配比为3:1的营养土壤基质中，保持相对空气湿度50-60％，光照强度为8000lux；
12.(5)移栽：炼苗15d后移栽到露天培养，建立北美冬青组培苗生产基地。
13.作为本发明的进一步优化方案，所述步骤(1)中，对外植体进行前处理脱毒即去除外植体多余的叶片，并在流水下清洗干净，然后将外植体放入质量浓度75％乙醇溶液中浸泡30s，再使用无菌水冲洗一次，再用质量浓度0.1％的hgcl2浸泡6-15min，无菌水冲洗3-4次，每次3min。
14.作为本发明的进一步优化方案，所述步骤(2)中，所述红光强度比为40-90μmol
·
m-2
·
s-1
，所述绿光强度为10-60μmol
·
m-2
·
s-1
。
15.作为本发明的进一步优化方案，所述步骤(2)中，生根苗进行炼苗前先利用处理液
3g/l 芦荟冻干粉2-6g/l 白糖20g/l，ph值为5.8；
31.其中，wpm培养基含有成分为：
32.mgso4370mg/l；kso4950mg/l；kh2po4170mg/l；nh3no3400mg/l；ca(no3)2·
4h2o556mg/l；cacl272mg/l；mnso416.9mg/l；znso4·
7h2o8.6mg/l；h3bo36.2mg/l；na2moo40.25mg/l；cuso4.5h2o0.25mg/l；na
2-edta37.3mg/l；feso4·
7h2o27.8mg/l；甘氨酸2mg/l；盐酸硫胺素1.0mg/l；盐酸吡哆醇0.5mg/l；烟酸0.5mg/l；肌醇100mg/l；
33.改良1/2ms培养基含有成分为：
34.mgso4·
7h2o185mg/l；kno3950mg/l；nh3no3825mg/l；mnso4·
h2o8.45mg/l；h3bo33.1mg/l；ki0.415mg/l；na2moo40.125mg/l；cuso4·
5h2o0.0125mg/l；kh2po485mg/l；cacl2166mg/l；na
2-edta18.65mg/l；feso4·
7h2o13.9mg/l；cocl2·
6h2o0.0125mg/l；znso4·
7h2o4.3mg/l；肌醇50mg/l盐酸硫胺素0.05mg/l；甘氨酸1.0mg/l；盐酸吡哆醇0.25mg/l；烟酸0.25mg/l；
35.(3)初代培养：将步骤(1)处理过的北美冬青嫩枝条在无菌条件下接种到初代培养基初代培养，培养温度为25-27℃，光照强度为2500lux，光照时间为14h/d，培养时间为5周，得到无菌苗后切成长2cm的茎段，随后茎段在红光和绿光共同照射下对茎段进行愈伤组织诱导，所述红光强度比为30μmol
·
m-2
·
s-1
，所述绿光强度为70μmol
·
m-2
·
s-1
；
36.(4)生根培养：从步骤(2)扩繁的增殖苗中挑选高度为2-4cm，培养周期为35-40天的植株，切去基部愈伤及丛生芽，转入生根培养基快速繁殖得到生根苗；
37.(5)炼苗：生根苗进行炼苗前先利用处理液浸泡2h，所述处理液配方组分为大蒜浓缩粉20g/l、10g/l生姜浓缩粉以及维生素c10g/l，溶剂为水，将步骤(4)得到的生根苗移栽在草炭土与珍珠岩配比为3:1的营养土壤基质中，保持相对空气湿度50-60％，光照8000lux，直至适应外界环境；
38.(6)移栽：炼苗15d后移栽到露天培养，建立北美冬青组培苗生产基地。
39.实施例2
40.本实施例为了验证不同光处理诱导对北美冬青组培苗培育效果的影响，具体试验步骤为：
41.(1)选择无病虫害生长健壮的北美冬青嫩枝条作为外植体，去除外植体多余的叶片，并在流水下清洗干净，然后将外植体放入质量浓度75％乙醇溶液中浸泡30s，再使用无菌水冲洗一次，再用质量浓度0.1％的hgcl2浸泡6-15min，无菌水冲洗3-4次，每次3min，处理完毕后晾干备用；
42.(2)将步骤(1)处理过的北美冬青嫩枝条在无菌条件下接种到初代培养基初代培养；
43.将茎段在8个不同的光质led光源下进行愈伤组织诱导，每个光质led光源下放置10个规格一致的培养皿，每个培养皿中接种10个茎段，调节led灯源与培养皿的距离保持一致，温度控制为25-27℃，并控制总光照强度均为2500lux，光照时间为14h/d，培养时间为5周；
44.其中，光源为市购的led灯，具体技术参数见表1；
45.表1.不同光质led光源的主要技术参数表
[0046][0047][0048]
5周后对每个光处理下的茎段愈伤组织的出愈率和褐变率，结果如表2所示：
[0049]
表2.不同光处理下的茎段愈伤组织培养情况
[0050][0051]
注：出愈率(％)＝(产生愈伤组织的茎段个数/接种的茎段个数)
×
100％。
[0052]
结果分析：led光质对北美冬青茎段愈伤组织诱导影响效果显著，所有处理中，使
用单色红光、绿光及蓝光的出愈率均高于白光处理，单色红光处理与单色绿光处理，红光处理茎段的褐化效果低于绿光处理，但是绿光处理茎段使其出愈率要显著高于单色红光处理。原因在于，红光照射处理茎段可以有效抑制茎段体内多氧化酶的活性，遏制细胞内的酚物质氧化成棕褐色的醌类物质。同时，避免醌类物质于细胞内积聚抑制其他酶的活性，进而保证了后续茎段愈伤组织的形成。但是，单色红光过量照射容易影响茎段对碳源的摄入效果，影响茎段能量的摄入，进而不利于愈合组织的诱导率及质量的提升，进而会影响到最后的成活率。
[0053]
由表2可知，经70％红光 30％绿光处理的茎段均未出现褐化，茎段的出愈率达到100％。原因在于，70％红光照射处理茎段可以有效抑制茎段体内多氧化酶的活性，遏制细胞内的酚物质氧化成棕褐色的醌类物质。同时，避免醌类物质于细胞内积聚抑制其他酶的活性，进而保证了后续茎段愈伤组织的形成。30％的绿光照射茎段可提高其对碳源的摄入效果，保证能量的摄入，促进愈合组织的诱导率及质量的提升，致使出愈率相较于单色红光或绿光处理更加显著。
[0054]
实施例3
[0055]
本实施例为了验证炼苗前处理对北美冬青组培苗培育效果的影响，具体试验步骤为：
[0056]
(1)选择无病虫害生长健壮的北美冬青嫩枝条作为外植体，去除外植体多余的叶片，并在流水下清洗干净，然后将外植体放入质量浓度75％乙醇溶液中浸泡30s，再使用无菌水冲洗一次，再用质量浓度0.1％的hgcl2浸泡6-15min，无菌水冲洗3-4次，每次3min，处理完毕后晾干备用；
[0057]
(2)将步骤(1)处理过的北美冬青嫩枝条在无菌条件下接种到初代培养基初代培养，培养温度为25-27℃，光照强度为2500lux，光照时间为14h/d，培养时间为5周；
[0058]
(3)生根培养：从步骤(2)扩繁的增殖苗中挑选高度为2-4cm，培养周期为35-40天的植株，切去基部愈伤及丛生芽，转入生根培养基快速繁殖得到生根苗；
[0059]
(4)炼苗：准备6个规格大小一致的容器，按照表3的处理液配方组分表依次在6个容器中配制6份处理液，然后在每个容器中浸入100根长势良好的生根苗，浸泡时间为2h，随后，将生根苗移栽在草炭土与珍珠岩配比为3:1的营养土壤基质中，保持相对空气湿度50-60％，光照8000lux，直至适应外界环境；
[0060]
(5)移栽：炼苗15d后移栽到露天培养，期间进行统一的生产管理。
[0061]
表3.处理液配方组分表
[0062][0063]
5周后观察北美冬青组培苗的成活率及成活组培苗的平均株高，结果如表4所示：
[0064]
表4.炼苗前处理对北美冬青组培苗培育效果的影响
[0065][0066][0067]
结果分析：组别1-3与组别6相比，炼苗前对生根苗进行处理液处理有利于生根苗移栽后的成活以及生长效果。原因在于，大蒜浓缩粉及生姜浓缩粉结合使用能够促进根与茎输导系统的连通，保证水分与养分的运输，同时增强生根苗的机械组织结构，对病虫害的抵御性提高，有助于提高移栽的成活率及植株的株高；
[0068]
通过组别1-3可以看出，当处理液组分配方为大蒜浓缩粉20g、生姜浓缩粉10g、维生素c10g及水1000ml时，经其处理的生根苗的成活率最高，且平均株高也较其他试验组别要好。
[0069]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进，这些都属于本发明的保护范围。