cap1帽类似物的合成方法与流程

技术特征：
1.一种cap1帽类似物的合成方法，其特征在于其步骤包括：（1）通过多步化学反应合成二核苷酸pnpn；（2）二核苷酸pnpn与gdp或者3'-ome-gdp缩合反应生成g(5')ppp(5')npn或者（3'-ome）g(5')ppp(5')npn；（3）g(5')ppp(5')npn或者（3'-ome）g(5')ppp(5')npn在加帽酶的催化下生成m7g(5')ppp(5')npn或者3'-ome-m7g(5')ppp(5')npn；（4）m7g(5')ppp(5')npn或者3'-ome-m7g(5')ppp(5')npn在2-o甲基转移酶的催化下生成cap1帽类似物m7g(5')ppp(5')(2'-omen)pn或者(3'-ome-m7g)(5')ppp(5')(2'-omen)pn。2.根据权利要求1所述的cap1帽类似物的合成方法，其特征在于步骤（1）具体为：a、化合物1、化合物2与吡啶三氟乙酸盐溶于乙腈中搅拌反应，旋蒸旋掉乙腈，加入二氯甲烷，水洗，饱和氯化钠溶液洗涤，柱层析得到产品1；b、产品1溶解于thf：pyridine：h2o溶剂中，控温至0度，缓慢加入碘单质，室温反应，旋干，加入二氯甲烷，水洗，饱和氯化钠溶液洗涤，旋干，柱层析得到产品2；c、产品2溶解于chcl3中，控温至0度，缓慢加入三氟乙酸，室温反应，旋干，加入二氯甲烷，水洗，碳酸氢钠溶液洗涤，旋干，柱层析得到化合物3；d、化合物3 溶解于乙腈中，加入双(2-氰乙基)-n,n-二异丙基亚磷酰胺，及吡啶三氟乙酸盐，室温搅拌过夜，反应完全后加入二氯甲烷及水，分出有机相，碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，柱层析得到产品3；e、产品3溶解于thf：pyridine：h2o溶剂中，控温至0度，缓慢加入碘单质，室温反应，旋干，加入二氯甲烷，水洗，饱和氯化钠溶液洗涤，旋干，柱层析得到产品4；f、产品4溶解于thf中，加入浓氨水，室温搅拌过夜，反应完全后旋干得到粗品，柱层析得到二核苷酸pnpn；其中化合物1的结构为，或者化合物1的碱基为尿嘧啶；
化合物2的结构为。3.根据权利要求2所述的cap1帽类似物的合成方法，其特征在于步骤（2）具体为将二核苷酸pnpn溶解于dmf中，加入cdi，加热至50℃反应一段时间，再加入gdp 或者3'-ome-gdp，室温搅拌，反应完后经过离子交换树脂纯化，得到g(5')ppp(5')npn或者（3'-ome）g(5')ppp(5')npn。4.根据权利要求2所述的cap1帽类似物的合成方法，其特征在于：步骤（3）和（4）同时进行，即g(5')ppp(5')npn或者（3'-ome）g(5')ppp(5')npn在加帽酶和2-o-甲基转移酶的同时作用下，生成m7g(5')ppp(5')(2'-omen)pn或者(3'-ome-m7g)(5')ppp(5')(2'-omen)pn。5.根据权利要求1或4所述的cap1帽类似物的合成方法，其特征在于：所述加帽酶为牛痘病毒加帽酶，或者加帽酶的甲基转移酶的活性亚基。6.根据权利要求1或4所述的cap1帽类似物的合成方法，其特征在于：所述2-o-甲基转移酶是牛痘病毒来源、黄病毒来源或者冠状病毒来源的2-o-甲基转移酶。

技术总结
本发明公开了一种cap1帽类似物的合成方法，其步骤包括：通过多步化学反应合成二核苷酸pNpN；二核苷酸pNpN与GDP或者3'-OMe-GDP缩合反应生成G-cap结构；G(5')ppp(5')NpN或者（3'-OMe）G(5')ppp(5')NpN在加帽酶的催化下生成cap0结构；m7G(5')ppp(5')NpN或者3'-OMe-m7G(5')ppp(5')NpN在2-O甲基转移酶的催化下生成cap1帽类似物，即m7G(5')ppp(5')(2'-OMeN)pN或者(3'-OMe-m7G)(5')ppp(5')(2'-OMeN)pN。本发明采用化学合成加酶促合成的方法合成cap1帽类似物，简化了传统上的纯化学合成方法。起始原料来源更广泛，更便宜，合成步骤更简单，合成得率更高。合成得率更高。合成得率更高。


技术研发人员：滕以刚 明聪 丁耀洋 宋东亮
受保护的技术使用者：翌圣生物科技（上海）股份有限公司
技术研发日：2022.06.28
技术公布日：2022/8/26