一种永生化的牦牛瘤胃成纤维细胞系及其构建和应用

技术特征：
1.一种永生化的牦牛瘤胃成纤维细胞系，其特征在于，所述细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no.c2021253。2.一种如权利要求1所述永生化的牦牛瘤胃成纤维细胞系的构建方法，其特征在于，包含如下步骤：s1.样本预处理：将牦牛瘤胃上皮组织用含抗生素的洗液清洗干净并剪碎；s2.酶消化及培养：用消化酶处理组织，收集上层消化液并进行终止消化，离心收集细胞沉淀，用完全培养基分散细胞沉淀并接种到培养瓶中进行常规细胞培养；同时，将酶消化后的组织于培养瓶中间隔放置，加入完全培养基进行培养；待细胞长至70％～80％时进行传代培养，用胰蛋白酶-edta溶液消化1～2min，终止消化后离心收集细胞沉淀，再用含碱性成纤维细胞生长因子的完全培养基重悬细胞沉淀，所得的细胞为成纤维细胞；s3.慢病毒感染：当传代的成纤维细胞长至40％～50％时，将慢病毒用聚凝胺和含10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子的完全培养基进行稀释，并加入细胞中进行感染并过夜，每2天更换培养基，持续培养4d；s4.细胞系筛选：待细胞长到20％～30％时，加入嘌呤霉素进行筛选，每2天更换含嘌呤霉素的完全培养基，持续培养4d；s5.扩大培养和传代：将筛选的细胞经20代以上的常规传代培养，所获得的细胞系为牦牛瘤胃成纤维细胞系；其中，所述的完全培养基包含基础培养基、10％胎牛血清、100u/ml青霉素和100u/ml链霉素。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述的消化酶为2％胰蛋白酶和分散酶以10:1的体积比混合的混合液。4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述的基础培养基为rpmi 1640或dmem/f-12。5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述的慢病毒为sv40t慢病毒载体。6.一种如权利要求1所述的细胞系在生命科学领域中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，该应用包含疫苗的研究和生产。

技术总结
本发明公开了一种永生化的牦牛瘤胃成纤维细胞系及其构建和应用。采用胰蛋白酶与分散酶消化牦牛瘤胃上皮组织，获得原代牦牛瘤胃成纤维细胞，采用携带SV40T的慢病毒感染原代成纤维细胞，再用嘌呤毒素筛选出稳定转入SV40T基因的永生化牦牛瘤胃成纤维细胞系并保种。该细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO.C2021253。该细胞系的建立解决了原代瘤胃成纤维细胞培养难、传代次数有限的缺陷，丰富了牦牛源细胞系库，填补了牦牛成纤维细胞相关研究试验材料的空白，也为牦牛成纤维细胞系诱导分化成为牦牛脂肪细胞、成骨细胞等提供细胞模型，也可为生命科学相关领域以及疫苗生产等科研研究提供主要原材料。苗生产等科研研究提供主要原材料。苗生产等科研研究提供主要原材料。


技术研发人员：王之盛 王俊梅 胡瑞 邹华围
受保护的技术使用者：四川农业大学
技术研发日：2022.06.02
技术公布日：2022/8/12