苏云金芽孢杆菌菌株的制作方法

技术特征：
1.一种苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis)菌株，其特征在于：所述菌株是菌株svbs-1801，其保藏在colecci
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nde cultivos tipo(cect)，保藏参考号为cect 9753。2.一种制备包含权利要求1的svbs-1801菌株的晶体和孢子的混合物的组合物的方法，其包括以下步骤：a)培养sbvs-1801细菌，直到超过50％的细菌细胞已经发生孢子形成、已经裂解并将其晶体和孢子释放到培养基中；b)通过引起晶体和孢子从它们悬浮的培养基中沉降来纯化晶体和孢子，优选地通过离心来纯化，并收集沉淀物；c)任选地，用蛋白酶抑制溶液洗涤沉淀物并再次引起晶体和孢子的沉降；d)在以下条件储存纯化的晶体和孢子：a.在室温，在已经将步骤b)或c)中获得的沉淀物冻干后，或b.在-18
°
至-20℃或更低的间隔的温度，在已经将b)或c)中获得的沉淀物重新悬浮在水或水溶液中后。3.一种获得权利要求1的苏云金芽孢杆菌菌株的纯化的晶体的方法，其包括以下步骤：i)用1m nacl洗涤权利要求1的菌株的晶体和孢子的混合物，并以9000g离心10min，ii)收集团块并将其重新悬浮在pbs中，iii)向步骤ii)中获得的悬浮液中加入己烷并涡旋；iv)将iii)的悬浮液以6000g，4℃，离心10min，v)重复步骤ii)至iv)至少三次，vi)收集在v)中获得的晶体团块并在冷蒸馏水中洗涤3次。4.一种组合物，其包含权利要求1的苏云金芽孢杆菌菌株的：a)营养细胞，b)含有孢子的细菌细胞，c)孢子，d)晶体，e)孢子、晶体和晶体蛋白的混合物，f)不包含在晶体中的cry蛋白，g)至少一种vip蛋白，或其组合，其中，当a)至e)中定义的组中的成员不存在时，a.组合物包含至少一种不包含在晶体中的cry蛋白，并且至少seq id no:8的蛋白质存在于组合物中，和/或b.seq id no:14、seq id no:16和seq id no:18的蛋白质的组中的所有三种vip蛋白质都存在于组合物中。5.根据权利要求4的组合物，其中组合物另外包含在权利要求2的方法的步骤b)中获得的部分上清液。
6.根据权利要求4或5的组合物，其至少包含权利要求1的苏云金芽孢杆菌菌株的以下之一：a)孢子和晶体的混合物，b)在权利要求2的方法的步骤b)中获得的孢子、晶体和部分上清液的混合物，c)晶体，d)在权利要求2的方法的步骤b)中获得的晶体和部分上清液。7.根据权利要求6的组合物，其包含权利要求2的方法的步骤b)中获得的晶体或晶体和部分上清液的混合物，其中晶体已经通过权利要求3的方法预先纯化并且组合物基本上不含权利要求1的苏云金芽孢杆菌菌株的孢子。8.根据权利要求4的组合物，其至少包含权利要求1的苏云金芽孢杆菌菌株的孢子、晶体和晶体蛋白的混合物。9.根据权利要求4的组合物，其包含不包含在晶体中的cry蛋白，并且其中组合物包含不包含在晶体中的seq id no:4、seq id no:6和seq id no:8的组中的至少所有cry蛋白。10.权利要求4至8中任一项的组合物，其另外包含孢子萌发的抑制剂。11.权利要求4至10中任一项的组合物，其另外包含至少一种农业上可接受的赋形剂。12.权利要求1的苏云金芽孢杆菌菌株或权利要求4至11任一项的组合物作为杀虫剂或制备杀虫剂的用途。13.权利要求12的用途，用于控制草地贪夜蛾(spodoptera frugiperda)物种的昆虫害虫。14.权利要求12至13中任一项的用途，以保护植物。15.一种鉴定权利要求1的苏云金芽孢杆菌菌株存在的方法，其包括确定以下任一者的步骤：a)所述菌株的基因组包括：i)其序列选自seq id no:1或seq id no:7，或其组合的至少一个基因或dna区域；和/或ii)seq id no:1、seq id no:3、seq id no:5、seq id no:7、seq id no:9和seq id no:11的组中的至少所有基因或dna区域，和/或iii)seq id no:13、seq id no:15和seq id no:17的组中的至少所有基因或dna区域；和/或iv)seq id no:1、seq id no:3、seq id no:5、seq id no:7、seq id no:9、seq id no:11、seq id no:13、seq id no:15和seq id no:17的组中的所有基因或dna区域；或者b)所述菌株表达i)其氨基酸序列为seq id no:2或seq id no:8，或其组合的至少一种多肽，和/或ii)其氨基酸序列为seq id no:2、seq id no:4、seq id no:6、seq id no:8、seq id no:10或seq id no:12的多肽的组中的至少所有多肽，或iii)其氨基酸序列为seq id no:14、seq id no:16或seq id no:18的多肽的组中的至少所有多肽，
iv)其氨基酸序列为seq id no:2,seq id no:4,seq id no:6,seq id no:8,seq id no:10,seq id no:12、seq id no:14、seq id no:16或seq id no:18的多肽的组中的所有多肽。

技术总结
本发明提供了一种苏云金芽孢杆菌(Bt)菌株，其不产生β-外毒素，并且对草地贪夜蛾表现出杀虫活性，草地贪夜蛾是一种用目前市场上可用的基于Bt的产品控制很差或无效的昆虫。因此，基于该菌株的组合物可用作杀虫剂或用于制备杀虫剂，优选地使用的组合物是该菌株的孢子和晶体蛋白的组合。该菌株的基因组包含至少6个不同的cry基因和至少3个不同的vip基因的组合，尚未在其他Bt菌株中描述过并可用于对其进行鉴定。行鉴定。


技术研发人员：J
受保护的技术使用者：生物昆虫有限公司
技术研发日：2020.06.14
技术公布日：2022/8/11