一种抗病毒马铃薯植株的制备方法及其应用

技术特征：
1.一种抗病毒马铃薯植株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以phse401为骨架，构建载体，以在stpcap1基因的第762位至第781位核苷酸引入插入、缺失或替换突变；(2)将获得的载体转化农杆菌，将筛选出的农杆菌阳性转化子利用农杆菌介导的叶盘转化法转化马铃薯，筛选stpcap1基因敲除的马铃薯植株；(3)摩擦接种马铃薯病毒至stpcap1基因敲除的马铃薯植株，检测其抗病毒能力，得到抗病毒马铃薯植株。2.根据权利要求1所述的一种抗病毒马铃薯植株的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述载体含有guide rna，所述guide rna的核苷酸序列如seq id no.5所示。3.根据权利要求1或2所述的一种抗病毒马铃薯植株的制备方法，其特征在于，得到的抗马铃薯植株中，stpcap1基因的第775位-778位核苷酸缺失。4.根据权利要求1或2所述的一种抗病毒马铃薯植株的制备方法，其特征在于，得到的抗马铃薯植株中，stpcap1基因的第773位-777位核苷酸缺失。5.根据权利要求1-4任意一项所述的一种抗病毒马铃薯植株的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，检测抗病毒能力的方法包括：stpcap1基因敲除的马铃薯植株培养至适龄，摩擦接种马铃薯病毒，接种12天后，观察病毒侵染情况，并采集系统发病叶片进行病毒积累量检测，确定植株具有抗病性。6.根据权利要求1-5任意一项所述的一种抗病毒马铃薯植株的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，摩擦接种的病毒为马铃薯y病毒属病毒；优选的，摩擦接种的病毒为马铃薯y病毒。7.一种在制备抗病毒马铃薯植株中使用的guide rna序列，其特征在于，所述guide rna的核苷酸序列如seq id no.5所示。8.一种载体，所述载体以phse401为骨架，并含有guide rna，所述guide rna的核苷酸序列如seq id no.5所示。9.一种重组菌，其特征在于，含有如权利要求8所述的载体；优选的，所述重组菌为重组农杆菌。10.一种如权利要求1-6任意一项所述的制备方法制备的抗病毒马铃薯植株，或权利要求7所述的guide rna序列，或权利要求8所述的载体，或权利要求9所述的重组菌在防治病毒侵染植物方面的应用；优选的，在防治马铃薯y病毒属病毒侵染植物方面的应用；优选的，在防治马铃薯y病毒侵染植物方面的应用。

技术总结
本发明属于植物抗病毒基因工程领域，公开了一种抗病毒马铃薯植株的制备方法及其应用。制备方法包括：(1)以pHSE401为骨架，构建载体，以在StPCaP1基因的第762位至第781位核苷酸引入插入、缺失或替换突变；(2)将获得的载体转化农杆菌，将筛选出的农杆菌阳性转化子利用农杆菌介导的叶盘转化法转化马铃薯，筛选StPCaP1基因敲除的马铃薯植株；(3)摩擦接种马铃薯病毒至StPCaP1基因敲除的马铃薯植株，检测其抗病毒能力，得到抗病毒马铃薯植株。采用本发明的制备方法制备得到的抗病毒马铃薯植株，能够明显抑制马铃薯病毒，尤其是马铃薯Y病毒的侵染，显著减轻植物受马铃薯Y病毒感染后的伤害，能够显著减少损失。能够显著减少损失。能够显著减少损失。


技术研发人员：耿超 李向东 房乐 田延平
受保护的技术使用者：山东农业大学
技术研发日：2021.02.05
技术公布日：2022/8/4