一种瓜蒌子与变质瓜蒌子的快速鉴别方法

1.本发明属于中药鉴别技术领域，尤其涉及一种瓜蒌子与变质瓜蒌子的鉴别方法。


背景技术：

2.瓜蒌子，为葫芦科植物栝楼trichosanthes kirilowii maxim.的干燥成熟种子。表面浅棕色至棕褐色，平滑，沿边缘有一圈沟纹。顶端较尖，有种脐，基部钝圆或较狭。种皮坚硬；内种皮膜质，灰绿色，子叶2，黄白色，富油性。气微，味淡。变质瓜蒌子在贮藏过程中内种皮膜质出现灰绿色转变为青绿色、最后变成黄棕色，并伴有刺鼻难闻的“哈喇味”，饮片破损时，瓜蒌子变质进程更迅速，变质现象更明显。
3.瓜蒌子属于果实种子类部分，富含油脂等亲脂性化合物，贮藏过程中易出现酸败、泛油、霉变、变色等现象，造成药材质量下降甚至产生毒性，从而影响临床疗效。如脂肪酸败过程产生的大量高活性自由基，对维生素a、d、e、k具有极大破坏性，同时影响b族维生素的吸收。脂肪酸败产生的醛或酮氧化产物易对机体的细胞色素氧化酶和琥珀酸氧化酶等重要酶系统有损害，从而造成机体代谢紊乱。同时脂肪酸败过程产生的副产物会对机体免疫活性细胞等有毒害作用，油脂过氧化产物还可诱发dna破坏，从而产生致畸致癌。因此对瓜蒌子饮片及其中药制剂变质前后的中药鉴别至关重要。
4.薄层鉴别技术作为一种中药鉴别手段，与显微鉴别、红外鉴别、指纹图谱鉴别等多种中药鉴别技术相比，具有高效、快速、准确的优点。在本发明之前，对瓜蒌子饮片、瓜蒌子配方颗粒变质前后的薄层色谱鉴别未见报道。针对上述情况，本发明对瓜蒌子饮片、配方颗粒的变质前后薄层色谱鉴别进行研究，严格把控瓜蒌子饮片的质量，使其资源更合理的应用，为该饮片的深入研究开发提供科学依据。


技术实现要素：

5.针对现阶段无法快速区别瓜蒌子与变质瓜蒌子的问题，本发明提供了一种瓜蒌子与变质瓜蒌子的鉴别方法。该方法包括饮片、配方颗粒供试品溶液制备，薄层点样，展开和显色；
6.本发明的技术方案如下
7.一种瓜蒌子与变质瓜蒌子的鉴别方法，包括如下步骤：
8.(1)饮片供试品溶液的制备
9.取瓜蒌子饮片、变质瓜蒌子饮片，分别加甲醇进行超声提取(40khz，30min)，过滤，分别得到瓜蒌子饮片供试品溶液、变质瓜蒌子饮片供试品溶液；
10.所述瓜蒌子饮片或者变质瓜蒌子饮片与甲醇的料液比为1(g)：5～15(ml)；
11.(2)配方颗粒供试品溶液的制备
12.取瓜蒌子配方颗粒、变质瓜蒌子配方颗粒，分别加甲醇进行超声提取(40khz，30min)，过滤，分别得到瓜蒌子配方颗粒供试品溶液、变质瓜蒌子配方颗粒供试品溶液；
13.所述瓜蒌子配方颗粒或者变质瓜蒌子配方颗粒与甲醇的料液比为0.3(g)：5～15
(ml)；
14.(3)对照品溶液的制备
15.称取3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇对照品，用甲醇溶解，得到对照品溶液；
16.所述3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇与甲醇的料液比为0.25(mg)：1(ml)；
17.(4)点样、展开、显色
18.将瓜蒌子饮片供试品溶液、变质瓜蒌子饮片供试品溶液、对照品溶液点于同一薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：冰乙酸体积比为8：1：0.2的混合溶液为展开剂进行薄层色谱层析，之后取出，晾干，喷以显色剂溶液，105℃加热至斑点显色清晰；
19.将瓜蒌子配方颗粒供试品溶液、变质瓜蒌子配方颗粒供试品溶液、对照品溶液点于同一薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：冰乙酸体积比为8：1：0.2的混合溶液为展开剂进行薄层色谱层析，之后取出，晾干，喷以显色剂溶液，105℃加热至斑点显色清晰；
20.所述瓜蒌子饮片供试品溶液或变质瓜蒌子饮片供试品溶液的点样量为5～15μl；
21.所述瓜蒌子配方颗粒供试品溶液或变质瓜蒌子配方颗粒供试品溶液的点样量为5～15μl；
22.所述对照品溶液的点样量为5μl；
23.所述显色剂溶液为10％硫酸乙醇溶液，由浓硫酸与乙醇按体积比1：9混合而得；
24.相比于瓜蒌子饮片供试品色谱，变质瓜蒌子饮片供试品色谱在rf值为0.31～0.42处黄色斑点、rf值为0.45～0.58处橙红色斑点(对照品薄层色谱斑点处)、rf值为0.75～0.90处棕色斑点明显变小；
25.相比于瓜蒌子配方颗粒供试品色谱，变质瓜蒌子配方颗粒供试品色谱在rf值为0.31～0.42处黄色斑点、rf值为0.45～0.58处橙红色斑点(对照品薄层色谱斑点处)、rf值为0.75～0.90处棕色斑点明显变小。
26.本发明中，所述瓜蒌子饮片、瓜蒌子配方颗粒可通过常规途径商购获得；
27.所述变质瓜蒌子饮片制备如下：取瓜蒌子饮片适量，破碎，置于温度为65℃，湿度为75％条件下的恒温恒湿干燥箱中，放置5天，即得变质瓜蒌子饮片。
28.所述变质瓜蒌子配方颗粒制备如下：取瓜蒌子配方颗粒，置于常温条件下储存10个月，即得变质瓜蒌子配方颗粒。
29.本发明具有以下有益效果：
30.(1)本发明采用甲醇提取瓜蒌子饮片与变质瓜蒌子饮片、瓜蒌子配方颗粒与变质瓜蒌子配方颗粒中的大极性成分，以特定种类及比例的展开剂、显色剂进行薄层展开、显色，利用薄层色谱差异进行区分，弥补瓜蒌子与变质瓜蒌子鉴别技术领域的一项空缺，可作为瓜蒌子与变质瓜蒌子饮片及其配方颗粒等制剂的专属鉴别方法。
31.(2)本发明准确、快速、重现性好，提供了一种快速鉴别瓜蒌子与变质瓜蒌子的方法。
附图说明
32.图1：实施例3所得瓜蒌子饮片与瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图(1-瓜蒌子饮片薄层色谱，2-瓜蒌子配方颗粒薄层色谱，3-对照品薄层色谱图)。
33.图2：实施例3所得变质瓜蒌子饮片与变质蒌子配方颗粒薄层色谱图(1-变质瓜蒌
子饮片薄层色谱，2-变质瓜蒌子配方颗粒薄层色谱，3-对照品薄层色谱图)。
34.图3：实施例3所得瓜蒌子饮片与变质蒌子饮片薄层色谱图(1-变质瓜蒌子饮片薄层色谱，2-瓜蒌子饮片薄层色谱，3-对照品薄层色谱图)。
35.图4：实施例3所得瓜蒌子配方颗粒与变质蒌子配方颗粒薄层色谱图(1-变质瓜蒌子配方颗粒，2-蒌子配方颗粒薄层色谱，3-对照品薄层色谱图)。
36.图5：实施例3所得不同产地三批瓜蒌子饮片与变质瓜蒌子饮片薄层色谱图(1,2,3-分别为河北、河南、浙江变质瓜蒌子饮片薄层色谱图，4,5,6-分别为河北、河南、浙江瓜蒌子饮片薄层色谱图，7-对照品薄层色谱图)。
37.图6：实施例4所得不同产地三批瓜蒌子配方颗粒与变质瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图(1,2,3-分别为河北、河南、浙江变质瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图，4,5,6-分别为河北、河南、浙江瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图，7-对照品薄层色谱图，8-阴性薄层色谱图)。
38.图7：实施例5所得不同产地三批瓜蒌子配方颗粒与变质瓜蒌子配方颗粒薄层色谱重复性图2(1,2,3-分别为河北、河南、浙江变质瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图，4,5,6-分别为河北、河南、浙江瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图，7-对照品薄层色谱图)。
39.图8：实施例5所得不同产地三批瓜蒌子配方颗粒与变质瓜蒌子配方颗粒薄层色谱重复性图3(1,2,3-分别为河北、河南、浙江变质瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图，4,5,6-分别为河北、河南、浙江瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图，7-对照品薄层色谱图)。
40.图9：实施例5所得不同产地三批瓜蒌子配方颗粒与变质瓜蒌子配方颗粒薄层色谱温湿度耐用性图(1,2,3-分别为河北、河南、浙江变质瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图，4,5,6-分别为河北、河南、浙江瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图，7-对照品薄层色谱图)。
41.图10：实施例5所得不同产地三批瓜蒌子配方颗粒与变质瓜蒌子配方颗粒薄层色谱薄层板耐用性图-青岛海洋化工硅胶g板(1,2,3-分别为河北、河南、浙江变质瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图，4,5,6-分别为河北、河南、浙江瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图，7-对照品薄层色谱图)。
42.图11：实施例5所得不同产地三批瓜蒌子配方颗粒与变质瓜蒌子配方颗粒薄层色谱薄层板耐用性图-烟台江友硅胶g板(1,2,3-分别为河北、河南、浙江变质瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图，4,5,6-分别为河北、河南、浙江瓜蒌子配方颗粒薄层色谱图，7-对照品薄层色谱图)。
具体实施方式
43.下面通过具体实施例进一步描述本发明，但本发明的保护范围并不仅限于此。
44.在以下实施例中：
45.仪器包括：sqp电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)，kq-250db超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，薄层板为硅胶g板；
46.试剂包括：甲醇(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)，甲苯(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)，乙酸乙酯(西陇科学股份有限公司，分析纯)，冰乙酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)，3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇(111931-201804中国食品药品检定研究院)。
47.实施例1
48.(1)饮片供试品溶液的制备
49.取瓜蒌子饮片、变质瓜蒌子饮片各1g，分别加甲醇5ml，超声提取30min，过滤，分别得到瓜蒌子饮片供试品溶液、变质瓜蒌子饮片供试品溶液。
50.(2)配方颗粒供试品溶液的制备
51.取瓜蒌子配方颗粒、变质瓜蒌子配方颗粒各0.3g，分别加甲醇5ml，超声提取30min，过滤，分别得到瓜蒌子配方颗粒供试品溶液、变质瓜蒌子配方颗粒供试品溶液。
52.(3)对照品溶液的制备
53.精密称取3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇对照品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成浓度为0.25mg/ml的对照品溶液，即得对照品溶液；
54.(4)点样、展开、显色
55.吸取饮片供试品溶液5μl、配方颗粒供试品溶液5μl、对照品溶液5μl，点于同一德国默克硅胶g薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：冰乙酸体积比为8:1:0.2的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10wt％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。
56.相比于瓜蒌子饮片供试品色谱，变质瓜蒌子饮片供试品色谱在rf值为0.36处黄色斑点、rf值为0.50处橙红色斑点、rf值为0.85处棕色斑点明显变小。
57.相比于瓜蒌子配方颗粒供试品色谱，变质瓜蒌子配方颗粒供试品色谱在rf值为0.36处黄色斑点、rf值为0.50处橙红色斑点、rf值为0.86处棕色斑点明显变小。
58.实施例2
59.(1)饮片供试品溶液的制备
60.取瓜蒌子饮片、变质瓜蒌子饮片各1g，分别加甲醇10ml，超声提取30min，过滤，分别得到瓜蒌子饮片供试品溶液、变质瓜蒌子饮片供试品溶液。
61.(2)配方颗粒供试品溶液的制备
62.取瓜蒌子配方颗粒、变质瓜蒌子配方颗粒各0.3g，分别加甲醇10ml，超声提取30min，过滤，分别得到瓜蒌子配方颗粒供试品溶液、变质瓜蒌子配方颗粒供试品溶液。
63.(3)对照品溶液的制备
64.精密称取3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇对照品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成浓度为0.25mg/ml的对照品溶液，即得对照品溶液；
65.(4)点样、展开、显色
66.吸取饮片供试品溶液10μl、配方颗粒供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，点于同一德国默克硅胶g薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：冰乙酸体积比为8:1:0.2的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10wt％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。
67.相比于瓜蒌子饮片供试品色谱，变质瓜蒌子饮片供试品色谱在rf值为0.35处黄色斑点、rf值为0.49处橙红色斑点、rf值为0.85处棕色斑点明显变小。
68.相比于瓜蒌子配方颗粒供试品色谱，变质瓜蒌子配方颗粒供试品色谱在rf值为0.35处黄色斑点、rf值为0.50处橙红色斑点、rf值为0.85处棕色斑点明显变小。
69.实施例3
70.(1)饮片供试品溶液的制备
71.取瓜蒌子饮片、变质瓜蒌子饮片各1g，分别加甲醇15ml，超声提取30min，过滤，分别得到瓜蒌子饮片供试品溶液、变质瓜蒌子饮片供试品溶液。
72.(2)配方颗粒供试品溶液的制备
73.取瓜蒌子配方颗粒、变质瓜蒌子配方颗粒各0.3g，分别加甲醇15ml，超声提取30min，过滤，分别得到瓜蒌子配方颗粒供试品溶液、变质瓜蒌子配方颗粒供试品溶液。
74.(3)对照品溶液的制备
75.精密称取3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇对照品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成浓度为0.25mg/ml的对照品溶液，即得对照品溶液；
76.(4)点样、展开、显色
77.吸取饮片供试品溶液15μl、配方颗粒供试品溶液15μl、对照品溶液5μl，点于同一德国默克硅胶g薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：冰乙酸体积比为8:1:0.2的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10wt％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。
78.相比于瓜蒌子饮片供试品色谱，变质瓜蒌子饮片供试品色谱在rf值为0.37处黄色斑点、rf值为0.52处橙红色斑点、rf值为0.86处棕色斑点明显变小。
79.相比于瓜蒌子配方颗粒供试品色谱，变质瓜蒌子配方颗粒供试品色谱在rf值为0.37处黄色斑点、rf值为0.52处橙红色斑点、rf值为0.86处棕色斑点明显变小。
80.实施例4
81.(1)饮片供试品溶液的制备
82.分别取产地为河北、河南、浙江的瓜蒌子饮片、变质瓜蒌子饮片各1g，分别加甲醇15ml，超声提取30min，过滤，分别得到产地为河北、河南、浙江瓜蒌子饮片供试品溶液、变质瓜蒌子饮片供试品溶液。
83.(2)对照品溶液的制备
84.精密称取3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇对照品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成浓度为0.25mg/ml的对照品溶液，即得对照品溶液；
85.(3)点样、展开、显色
86.吸取饮片供试品溶液15μl、对照品溶液5μl，点于同一德国默克硅胶g薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：冰乙酸体积比为8:1:0.2的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10wt％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。
87.相比于瓜蒌子饮片供试品色谱，变质瓜蒌子饮片供试品色谱在rf值为0.34处黄色斑点、rf值为0.5处橙红色斑点、rf值为0.76处棕色斑点明显变小。
88.实施例5
89.基于实施例3，本实施例对薄层色谱鉴别过程进行如下方法学考察，具体如下：
90.(1)重复性考察
91.分别制备三份产地为河北、河南、浙江瓜蒌子配方颗粒、变质瓜蒌子配方颗粒供试品溶液，制备一份对照品溶液。吸取配方颗粒供试品溶液15μl、对照品溶液5μl，点于同一德国默克硅胶g薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：冰乙酸体积比为8:1:0.2的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10wt％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。
92.相比于瓜蒌子配方颗粒供试品色谱，变质瓜蒌子配方颗粒供试品色谱在rf值为0.34～0.36处黄色斑点、rf值为0.49～0.52处橙红色斑点、rf值为0.75～0.76处棕色斑点明显变小。
93.(2)温湿度耐用性考察
94.分别制备一份产地为河北、河南、浙江瓜蒌子配方颗粒、变质瓜蒌子配方颗粒供试品溶液，制备一份对照品溶液。吸取配方颗粒供试品溶液15μl、对照品溶液5μl，在环境温度为10℃，湿度为45％rh条件下，点于同一德国默克硅胶g薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：冰乙酸体积比为8:1:0.2的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10wt％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。
95.相比于瓜蒌子配方颗粒供试品色谱，变质瓜蒌子配方颗粒供试品色谱在rf值为0.31处黄色斑点、rf值为0.45处橙红色斑点、rf值为0.84处棕色斑点明显变小。
96.(2)薄层板耐用性考察
97.分别制备一份产地为河北、河南、浙江瓜蒌子配方颗粒、变质瓜蒌子配方颗粒供试品溶液，制备一份对照品溶液。吸取配方颗粒供试品溶液15μl、对照品溶液5μl，点于同一青岛海洋化工硅胶g薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：冰乙酸体积比为8:1:0.2的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10wt％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。
98.相比于瓜蒌子配方颗粒供试品色谱，变质瓜蒌子配方颗粒供试品色谱在rf值为0.34处黄色斑点、rf值为0.49处橙红色斑点、rf值为0.88处棕色斑点明显变小。
99.分别制备一份产地为河北、河南、浙江瓜蒌子配方颗粒、变质瓜蒌子配方颗粒供试品溶液，制备一份对照品溶液。吸取配方颗粒供试品溶液15μl、对照品溶液5μl，点于同一烟台江友硅胶开发有限公司硅胶g薄层板，以甲苯：乙酸乙酯：冰乙酸体积比为8:1:0.2的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10wt％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。
100.相比于瓜蒌子配方颗粒供试品色谱，变质瓜蒌子配方颗粒供试品色谱在rf值为0.42处黄色斑点、rf值为0.58处橙红色斑点、rf值为0.90处棕色斑点明显变小。
101.以上实施例并非仅限于本发明的保护范围，所有基于本发明的基本思想而进行的修改或变动都属于本发明的保护范围。