合成聚(3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯)的菌株及其构建方法和应用与流程

技术特征：
1.一种合成聚(3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯)的菌株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：s1：体外扩增gadb*、gabt、yqhd三个基因序列；s2：将s1所述的gadb*、gabt、yqhd三个基因序列插入载体中，得到载体质粒；s3：将s2得到的载体质粒转入halomonas lutescens mdf-9感受态细胞中；所述halomonas lutescens mdf-9的保藏编号为gdmcc no.61850。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤s1中目的基因的扩增体系为：3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤s1中目的基因的扩增程序为：4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤s2中通过重叠延伸pcr得到gadb*基因，将gadb*与大肠杆菌中的gabt和yqhd通过酶切一起插入pcs27载体的一个操纵子中，得到载体质粒。5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述酶切体系为：6.一种合成聚(3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯)的工程菌株，其特征在于，由权利要求1～5任一项所述的构建方法得到。7.一种使用权利要求6所述的工程菌株生产聚(3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯)的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)平板种子培养：菌种活化；(2)摇瓶种子培养；
(3)溶氧和ph电极校正；(4)发酵参数的设定；(5)接种；(6)发酵过程控制；(7)菌体中pha的提取。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)中控制发酵罐温度36～38℃。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)中控制ph为7.5～9.5。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，控制ph为8.2～8.5。

技术总结
本发明公开了一种合成聚(3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯)的菌株及其构建方法和应用。所述构建方法包括如下步骤：S1：体外扩增gadB*、gabT、yqhD三个基因序列；S2：将三个基因序列插入载体中，得到载体质粒；S3：将S2得到的载体质粒转入Halomonas lutescens MDF-9感受态细胞中。本发明提出了一种新的P34HB的合成途径，在MDF-9菌株本身具有合成P3HB途径的基础上，再利用基因工程加入一条以使用谷氨酸作为前体化合物合成P4HB的代谢途径，达成生产P34HB的目的。该工程菌能够在PHA领域生产P34HB工艺中有效地降低原料价格，降低毒害风险，提高生产效率。提高生产效率。提高生产效率。


技术研发人员：孙磊 沈宏伟 吕金艳 叶秀生 田道贺 张恒文
受保护的技术使用者：珠海麦得发生物科技股份有限公司
技术研发日：2022.03.28
技术公布日：2022/7/29