可乐定与Gap26在制备镇痛药物中的应用的制作方法

可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用
技术领域
1.本发明属于镇痛药物技术领域，涉及可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用。


背景技术：

2.目前，疼痛给人类健康带来严重威胁，而且疼痛发生后损伤部位同体节的对侧对称部位往往会出现镜像痛敏，因其表现持续时间长且类型多样，从多方面限制了疼痛的治疗。近年来，尽管相关疼痛调控机制研究和医学转化发展迅猛，但仍缺乏对诸如镜像痛敏等疼痛的有效诊疗手段。alpha2肾上腺素受体激动剂类药物在临床疼痛治疗以及手术麻醉应用广泛，但是其可导致心率过缓及呼吸障碍，使得在应用中有一定阻碍。
3.可乐定(clonidine)是目前临床上使用最多的alpha 2肾上腺素能受体激动剂，它可作为术前用药提供镇静、抗焦虑和增强麻醉的作用，还可以作为辅助用药提高吸入麻醉、静脉麻醉、局部麻醉和术中阿片类用药的麻醉/镇痛效果。可乐定通常用来增强阿片类药和局部麻醉药的镇痛效果，因此可以减少阿片类药物的副作用。小剂量可乐定引起低血压及心动过缓，大剂量时引起过度镇静，因此，它在临床上的使用仍存在一定的限制。那么，探寻新型可乐定组合药物极具研究价值与临床意义。
4.间隙连接通道是相邻细胞之间的，允许分子离子和小分子直接交换的通道。缝隙连接通道主要蛋白连接蛋白43的特异性拟似肽gap26抑制兔动脉平滑肌节律性收缩活动，阻止相邻胞间atp及ca2 的交换。gap26抑制细胞缝隙连接介导的电耦合。此外，鞘内注射gap26显著抑制角叉菜胶诱发的疼痛行为，gap26显著降低snl介导的机械痛敏行为。
5.那么，alpha 2肾上腺素能受体和缝隙连接蛋白43是否协同参与疼痛调控过程，且alpha 2能否成为疼痛诊疗新策略，具有很高的研究意义与临床价值。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用，为治疗疼痛和制备治疗疼痛药物提供了新的思路。
7.本发明所采用的技术方案是，可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用。
8.本发明的特征还在于，
9.药物中含有可乐定与gap26组分。
10.可乐定与gap26的质量比为2:1。
11.每次给药剂量：可乐定为10μg/kg，gap26为5μg/kg。
12.药物的给药方式为鞘内注射。
13.本发明的有益效果是，本发明可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用，通过采用自然蝎蜇构建的bmk i镜像痛模型，模拟临床常见的自发痛、热痛敏、机械痛敏症状，从而可以看出可乐定与gap26对自发痛、热痛敏、机械痛敏均有抑制作用，能够作为新的镇痛药物靶点。
附图说明
14.图1为本发明可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用中缓解蝎毒素诱发的2小时内总自发抬足次数对比图；
15.图2为本发明可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用中缓解蝎毒素诱发的2小时内总舔足时间对比图；
16.图3为本发明可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用中缓解蝎毒素诱发的2小时内每5分钟自发抬足次数对比图；
17.图4为本发明可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用中缓解蝎毒素诱发的2小时内每5分钟舔足时间对比图；
18.图5为本发明可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用中缓解蝎毒素诱发的同侧机械痛敏对比图；
19.图6为本发明可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用中缓解蝎毒素诱发的对侧机械痛敏对比图；
20.图7为本发明可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用中缓解蝎毒素诱发的同侧热痛敏对比图；
21.图8为本发明可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用中缓解蝎毒素诱发的对侧热痛敏对比图。
具体实施方式
22.下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。
23.本发明提供可乐定与gap26在制备镇痛药物中的应用。
24.采用蝎蜇镜像痛模型探究alpha 2肾上腺素能受体激动剂可乐定与连接蛋白43抑制剂gap26对自发痛、机械痛敏和热痛敏相关行为的抑制；蝎蜇镜像痛模型构建参照bai zt,liu t,jiang f,et al.exp.neurol.,226(2010)159
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172.
25.实施例1
26.可乐定与gap26缓解大鼠自发痛相关行为的观察
27.给药方式为：在4组大鼠(每组5只大鼠，体重200
±
10g，编号为1#、2#、3#、4#)注射蝎毒素前30min，给1#大鼠鞘内注射10μl 0.9％无菌生理盐水，给2#大鼠鞘内注射2μg可乐定，给3#大鼠鞘内注射1μg gap26，给4#大鼠鞘内注射2μg的可乐定与1μg gap26。
28.在铺有一面玻璃镜的桌上放高75cm支架，架上置一20
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30cm3透明有机玻璃盒子，有机玻璃盒子中放入大鼠，自桌上的镜中观察大鼠足底给药后的反应。实验前将大鼠置于透明有机玻璃盒子中30min以适应实验环境，再在每只大鼠的足底注射蝎毒素50μg后，放回有机玻璃盒子，持续观测自发痛行为。统计蝎毒素诱发2h内大鼠的总舔足时间及总自发抬足次数、蝎毒素诱发2h内每5min内大鼠的舔足时间及自发抬足次数来评价伤害性自发痛反应。
29.可乐定与gap26对大鼠自发痛及痛觉大发作行为的缓解情况详见图1-图4，由图1可以看出，给药2h内4#大鼠的抬足次数最少，由图2可以看出，给药2h内4#大鼠的舔足时间最短，由图3可以看出，在75min后4#大鼠自发抬足次数明显少于1#-3#大鼠且每5min自发抬足次数平稳，由图4可以看出，4#大鼠每5min内的舔足时间平稳且在90min后4#大鼠舔足时
间少于1#-3#大鼠，综上，可乐定与gap26共同给药相比较单独用药镇痛效果更佳，自发痛相关反应可很好的模拟临床急性痛症状。
30.实施例2
31.可乐定与gap26缓解大鼠双侧机械痛敏反应的观察
32.当实施例1中自发痛基本消失后，将大鼠置于1cm
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1cm钢丝网格上的20
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30cm3透明有机玻璃盒30min以适应实验环境。用von frey纤维(58011,stoelting co.,usa)(0.6-26g)测量机械痛抬足反射阈值。测试方式：从网格下刺激大鼠双侧后肢足底中心皮肤，每两次测量间隔10秒，von frey纤维的刺激强度由小到大，每根纤维弯曲至45度停留2-3秒，如果没有抬足反射，使用更大克数的纤维继续测量，测量最大值为26g，上述测量过程重复5次，取能引起50％抬足反应的最小克数值为机械抬足反射阈值。按此方法，在实验前一天进行基线测试。机械痛足反射阈值取蝎毒素注射后4小时、8小时的时间点进行采集，可乐定与gap26共同给药对大鼠双侧机械痛敏的缓解情况详见图5和图6，由图5可以看出，4#大鼠采用的纤维克数最大，则缓解蝎毒素诱发的同侧机械痛敏效果最佳；有图6可以看出，4#大鼠采用的纤维克数更大，则缓解蝎毒素诱发的同侧机械痛敏效果最佳，因此，可乐定与gap26共同给药对同侧机械痛及对侧机械痛的抑制效果均优于单独用药，诱发的双侧机械痛敏可很好的模拟临床镜像痛的症状。
33.实施例3
34.可乐定与gap26缓解大鼠热痛敏反应的观察
35.当实施例1中自发痛基本消失后，将20
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30cm3有机玻璃罩放置在一块厚度为2毫米的玻璃板上，将大鼠置于其中，玻璃下方是热痛刺激仪的红外光热探头(pl-200，成都泰盟科技有限公司)。辐射热刺激直接施加在大鼠双侧后足的足心处。测量自动切断(cut off)时间为20秒，以免造成组织损伤。同一位点重复测量5次，每两次测量间隔至少10min，不同位点测量每两次间隔5min，测五次，取平均值作为热抬足反射阈值。按此方法，在实验前一天进行基线测试，热痛阈值取蝎毒素注射后4小时、8小时的时间点进行采集，可乐定与gap26对大鼠热痛敏的缓解情况详见图7和图8，由图7和图8可以看出，共同给药可乐定与gap26相比较单独给药可显著抑制蝎毒素诱导的同侧热痛敏，而不影响对侧热痛阈，诱发的热痛敏可以很好的模拟临床热痛觉过敏症状。