一种适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂及其制备方法与流程

1.本发明属于水产养殖饲料领域，具体涉及一种适用于泥鳅养殖的生物制剂及其制备方法。


背景技术：

2.近年来，泥鳅高密度养殖技术的兴起带来良好经济效益的同时，也产生了泥鳅疾病高发和养殖水体污染的问题，这两个问题制约着泥鳅高密度养殖技术的推广和经济效益的提升。因此，寻找绿色安全的可提高泥鳅自身免疫力和净化水体的添加剂成为研究的重要方向。其中生物制剂以无毒副作用、可通过调节动物肠道健康提升机体自身免疫力，其残饵还可以净化水质等优点被人们广泛关注，但在实际应用中，由于产品特性及制作工艺的不同，使得这些生物制剂在实践应用上效果不理想，稳定性差，差异化明显。因此，有必要开发一种效果稳定且绿色环保的泥鳅养殖用生物制剂，增强泥鳅抵抗力，减少泥鳅疾病，增加泥鳅养殖收益，同时实现绿色养殖。


技术实现要素：

3.针对现有泥鳅养殖制剂存在的问题，本发明旨在提供一种适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂及其制备方法，本发明请求保护的生物制剂采用对益生菌及活性成分进行包埋后与其它有效成分混合，解决了现有泥鳅养殖用生物制剂效果差、不稳定以及对水体产生污染的问题，具有良好的推广应用价值。
4.基于上述目的，本发明采用的技术方案如下：
5.第一方面，本发明提供一种适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂，以重量份计，包括如下重量份的原料：
6.益生菌12～30份、包埋物6～23份、中草药提取物1～10份、溶菌酶0.1～2份、维生素c 0.1～1.5份、蚯蚓粉2～8份、β-葡聚糖0.5～2份、中性蛋白酶0.5～2份、核苷酸0.1～1.5份、鱼膏5～20份、dmpt 0.1～2份。
7.益生菌具有促消化、抑制有害菌、提高肠道有益菌群、提供重要营养物质等功能，应用到泥鳅上，其残饵还可抑制养殖水体中的有害菌，达到净化水体目的；中草药提取物具有抑菌、抗氧化、保肝、抗应激、提高免疫功能等功能。
8.由于泥鳅饲料中粗蛋白含量高，中性蛋白酶可降解泥鳅饲料中的植物蛋白，如菜粕、棉粕中的蛋白，将其降解为小分子，更有助于泥鳅的消化吸收，减少氮排放，避免水体中过多的氮堆积造成水体污染，并且中性蛋白酶适宜泥鳅肠道中性的内环境；β-葡聚糖有助于促进泥鳅肠道益生菌的增殖，同时还有助于促进微量元素铁和钙的吸收。
9.溶菌酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用，主要抑制革兰氏阳性菌如微球菌等；维生素c能显著提高血清中溶菌酶的活性，从而具有消炎、抗菌、抗病毒的作用，对营养免疫具有重要作用，可避免机体组织出血。
10.包埋物主要用于对益生菌、维生素c、中性蛋白酶等活性成分进行包埋，提高上述
活性成分在生物制剂中的稳定性，避免活性成分失活失效。
11.蚯蚓粉可提高机体溶菌酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和碱性磷酸酶活性，从而提高机体免疫力，同时也是一种良好的诱食剂；核苷酸可改善肠道形态结构和增强抗氧化能力，同时其独特的风味对泥鳅嗅觉神经、味觉及化学感受器有特定作用，对其他诱食剂有增效的作用并使其更稳定；鱼膏是为水产自体制成的饲料原料，添加到泥鳅料中自喂营养更好吸收，鱼膏还是一种优质的诱食剂，含有丰富的氨基酸和小肽，是一种营养补充原料，还可以作为丰富的蛋白源；dmpt是泥鳅优质的诱食剂，且对泥鳅具有促进营养代谢作用。
12.本发明通过上述组分复配制得的生物制剂从抑菌、调节肠道健康、提高免疫力、易吸收、促采食等多方面对泥鳅进行全方位保护，具有改善泥鳅肠道环境、提高免疫力、抑制病原菌等效果，并且通过包埋剂对活性成分以及益生菌的包埋，提高益生菌、活性成分的稳定性，达到长效维持泥鳅健康以及水体净化、绿色养殖的目的。
13.本发明生物制剂不仅能够调节泥鳅肠道健康，其残饵还可抑制养殖水体中的有害菌，净化水质，生物制剂本身无毒、无害、无残留，能够达到绿色健康养殖的效果。
14.优选地，以重量份计，所述益生菌包括枯草芽孢杆菌2～10份和粪肠球菌10～20份。
15.枯草芽孢杆菌和粪肠球菌可维持消化道微生态平衡，促进营养物质吸收，提高机体免疫力，以及净化养殖水环境的作用，两者复配具有更优的效果。
16.优选地，以重量份计，所述包埋物包括β-环糊精5～15份和海藻酸钠1～8份。
17.本发明利用β-环糊精、海藻酸钠对益生菌进行包被，使得益生菌能够有效抵达肠道，提高肠道利用率，减少损失，提高肠道有益菌群，改善肠道环境。β-环糊精、海藻酸钠对维生素c和中性蛋白酶进行包埋，有助于保持两者的生物活性，避免失活失效，降低其使用效果。
18.优选地，以重量份计，所述中草药提取物包括黄芪多糖0.5～5份和刺五加提取物0.5～5份。
19.黄芪多糖有抑菌、抗氧化、保肝、抗应激、提高免疫功能等功能，刺五加提取物能够提高机体体液免疫，通过黄芪多糖和刺五加提取物的复配达到更优的提高泥鳅机体免疫力，提高其存活率，并促进其生长。
20.优选地，以重量份计，所述生物制剂还包括蒙脱石40～60份。
21.蒙脱石不仅可补偿动物养分，而且可以调节动物体内cp流动，对预防消化道疾病也有一定作用。
22.第二方面，本发明提供一种适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂的制备方法，包括如下步骤：
23.s1：利用包埋物将益生菌进行包埋并干燥，制得益生菌微胶囊；
24.s2：利用包埋物将维生素c和中性蛋白酶进行包埋并干燥，制得vc 蛋白酶微胶囊；
25.s3：将益生菌微胶囊、vc 蛋白酶微胶囊与其它组分混匀，制得适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂。
26.本发明利用包埋物预先将益生菌、维生素c和中性蛋白酶进行包埋，一方面，有助于益生菌在使用时能够有效抵达肠道，提高肠道利用率，减少损失，提高肠道有益菌群，改善肠道环境，另一方面，有助于维持维生素c和中性蛋白酶的生物活性，避免其在使用或存
储过程中失活失效。
27.此外，本发明益生菌微胶囊、vc 蛋白酶微胶囊的粒径小，具有良好的分散性，对于易失活的活性成如益生菌和对光敏感的成分如vc起到良好的保护作用，并阻止活性成分之间相互发生反应，确保使用效果的稳定性，并具有便于储存和运输的优势。
28.优选地，所述步骤s1中益生菌微胶囊的制备方法如下：
29.(1)将β-环糊精5～15份、海藻酸钠1～8份加入水中，配制成质量浓度为2wt％的包埋液；
30.(2)将枯草芽孢杆菌2～10份、粪肠球菌10～20份加入包埋液中，搅拌均匀后，加入到含ca
2
水溶液中，经凝固、洗涤、干燥制得益生菌微胶囊。
31.优选地，所述步骤s2中vc 蛋白酶微胶囊的制备方法如下：
32.(1)将β-环糊精5～15份、海藻酸钠1～8份加入水中，配制成质量浓度为2wt％的包埋液；
33.(2)将维生素c 0.1～1.5份、中性蛋白酶0.5～2份加入包埋液中，搅拌均匀后，加入到含ca
2
水溶液中，经凝固、洗涤、干燥制得益生菌微胶囊。
34.优选地，所述步骤s3中将益生菌微胶囊、vc 蛋白酶微胶囊与其它组分混匀的方法如下：
35.(1)将中草药提取物1～10份、溶菌酶0.1～2份、dmpt 0.1～2份、β-葡聚糖0.5～2份、核苷酸0.1～1.5份混匀得到药物混合物；
36.(2)将蚯蚓粉2～8份、鱼膏5～20份、蒙脱石40～60份混匀得到诱食剂混合物；
37.(3)将益生菌微胶囊、vc 蛋白酶微胶囊、药物混合物、诱食剂混合物混匀，制得适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂。
38.与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
39.本发明提供的适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂，通过多种功能活性物质复配，从抑菌、调节肠道健康、提高免疫力、促采食、易吸收、抑制病原菌等多方面对泥鳅进行全方位保护，并且通过包埋剂对活性成分以及益生菌的包埋，提高益生菌、活性成分的稳定性，达到长效维持泥鳅健康以及水体净化、绿色养殖的目的。
具体实施方式
40.为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
41.实施例中所用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
42.实施例1
43.本实施例提供一种适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂及其制备方法，以重量份计，本实施例生物制剂的制备原料如下：
44.枯草芽孢杆菌2份、粪肠球菌10份、β-环糊精5份、海藻酸钠1份、黄芪多糖0.5份、刺五加提取物0.5份、溶菌酶0.1份、维生素c 0.1份、蚯蚓粉2份、β-葡聚糖0.5份、中性蛋白酶0.5份、核苷酸0.1份、鱼膏5份、dmpt 0.1份、蒙脱石40份。
45.本发明适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂的制备方法如下：
46.s1：包埋液的配制
47.将β-环糊精5份、海藻酸钠1份加入水中，配制成质量浓度为2wt％的包埋液，等量分为两份备用。
48.s2：益生菌微胶囊的制备
49.将枯草芽孢杆菌2份、粪肠球菌10份加入步骤s1中的一份包埋液中，搅拌均匀制得益生菌预包埋液，将益生菌预包埋液按照体积比1:10缓慢加入氯化钙溶液中，氯化钙溶液的质量浓度为2wt％，搅拌1h，使益生菌预包埋液充分凝固，随后用蒸馏水充分洗涤三次，制得湿微胶囊，将湿微胶囊置于-60℃、真空冷冻干燥3h，制得益生菌微胶囊。
50.s3：vc 蛋白酶微胶囊的制备
51.将vc 0.1份、中性蛋白酶0.5份加入步骤s1中的另一份包埋液中，搅拌均匀制得vc 蛋白酶预包埋液，将vc 蛋白酶预包埋液按照体积比1:10缓慢加入氯化钙溶液中，氯化钙溶液的质量浓度为2wt％，搅拌1h，使vc 蛋白酶预包埋液充分凝固，随后用蒸馏水充分洗涤三次，制得湿微胶囊，将湿微胶囊置于-60℃、真空冷冻干燥3h，制得vc 蛋白酶微胶囊。
52.s4：生物制剂的制备
53.将黄芪多糖0.5份、刺五加提取物0.5份、溶菌酶0.1份、dmpt 0.1份、β-葡聚糖0.5份、核苷酸0.1份置于卧式混合搅拌机中搅拌，混合时间为5min，混合均匀制得药物混合物。
54.将蚯蚓粉2份、鱼膏5份、蒙脱石40份置于卧式混合搅拌机中搅拌，混合时间为10min，混合均匀制得诱食剂混合物。
55.将上述制得的益生菌微胶囊、vc 蛋白酶微胶囊、药物混合物、诱食剂混合物置于卧式搅拌机中搅拌混匀3min，制得适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂。
56.实施例2
57.本实施例提供一种适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂及其制备方法，以重量份计，本实施例生物制剂的制备原料如下：
58.枯草芽孢杆菌5份、粪肠球菌15份、β-环糊精12份、海藻酸钠4份、黄芪多糖2.5份、刺五加提取物2.5份、溶菌酶1份、维生素c 0.8份、蚯蚓粉5份、β-葡聚糖0.8份、中性蛋白酶1.2份、核苷酸0.9份、鱼膏15份、dmpt 1.1份、蒙脱石50份。
59.本发明适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂的制备方法如下：
60.s1：包埋液的配制
61.将β-环糊精12份、海藻酸钠4份加入水中，配制成质量浓度为2wt％的包埋液，等量分为两份备用。
62.s2：益生菌微胶囊的制备
63.将枯草芽孢杆菌5份、粪肠球菌15份加入步骤s1中的一份包埋液中，搅拌均匀制得益生菌预包埋液，将益生菌预包埋液按照体积比1:10缓慢加入氯化钙溶液中，氯化钙溶液的质量浓度为2wt％，搅拌1h，使益生菌预包埋液充分凝固，随后用蒸馏水充分洗涤三次，制得湿微胶囊，将湿微胶囊置于-60℃、真空冷冻干燥3h，制得益生菌微胶囊。
64.s3：vc 蛋白酶微胶囊的制备
65.将vc 0.8份、中性蛋白酶1.2份加入步骤s1中的另一份包埋液中，搅拌均匀制得vc 蛋白酶预包埋液，将vc 蛋白酶预包埋液按照体积比1:10缓慢加入氯化钙溶液中，氯化钙
溶液的质量浓度为2wt％，搅拌1h，使vc 蛋白酶预包埋液充分凝固，随后用蒸馏水充分洗涤三次，制得湿微胶囊，将湿微胶囊置于-60℃、真空冷冻干燥3h，制得vc 蛋白酶微胶囊。
66.s4：生物制剂的制备
67.将黄芪多糖2.5份、刺五加提取物2.5份、溶菌酶1份、dmpt 1.1份、β-葡聚糖0.8份、核苷酸0.9份置于卧式混合搅拌机中搅拌，混合时间为8min，混合均匀制得药物混合物。
68.将蚯蚓粉5份、鱼膏15份、蒙脱石50份置于卧式混合搅拌机中搅拌，混合时间为15min，混合均匀制得诱食剂混合物。
69.将上述制得的益生菌微胶囊、vc 蛋白酶微胶囊、药物混合物、诱食剂混合物置于卧式搅拌机中搅拌混匀5min，制得适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂。
70.实施例3
71.本实施例提供一种适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂及其制备方法，以重量份计，本实施例生物制剂的制备原料如下：
72.枯草芽孢杆菌10份、粪肠球菌20份、β-环糊精15份、海藻酸钠8份、黄芪多糖5份、刺五加提取物5份、溶菌酶2份、维生素c1.5份、蚯蚓粉8份、β-葡聚糖2份、中性蛋白酶2份、核苷酸1.5份、鱼膏20份、dmpt 2份、蒙脱石60份。
73.本发明适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂的制备方法如下：
74.s1：包埋液的配制
75.将β-环糊精15份、海藻酸钠8份加入水中，配制成质量浓度为2wt％的包埋液，等量分为两份备用。
76.s2：益生菌微胶囊的制备
77.将枯草芽孢杆菌10份、粪肠球菌20份加入步骤s1中的一份包埋液中，搅拌均匀制得益生菌预包埋液，将益生菌预包埋液按照体积比1:10缓慢加入氯化钙溶液中，氯化钙溶液的质量浓度为2wt％，搅拌1h，使益生菌预包埋液充分凝固，随后用蒸馏水充分洗涤三次，制得湿微胶囊，将湿微胶囊置于-60℃、真空冷冻干燥3h，制得益生菌微胶囊。
78.s3：vc 蛋白酶微胶囊的制备
79.将vc 1.5份、中性蛋白酶2份加入步骤s1中的另一份包埋液中，搅拌均匀制得vc 蛋白酶预包埋液，将vc 蛋白酶预包埋液按照体积比1:10缓慢加入氯化钙溶液中，氯化钙溶液的质量浓度为2wt％，搅拌1h，使vc 蛋白酶预包埋液充分凝固，随后用蒸馏水充分洗涤三次，制得湿微胶囊，将湿微胶囊置于-60℃、真空冷冻干燥3h，制得vc 蛋白酶微胶囊。
80.s4：生物制剂的制备
81.将黄芪多糖5份、刺五加提取物5份、溶菌酶2份、dmpt 2份、β-葡聚糖2份、核苷酸1.5份置于卧式混合搅拌机中搅拌，混合时间为12min，混合均匀制得药物混合物。
82.将蚯蚓粉8份、鱼膏20份、蒙脱石60份置于卧式混合搅拌机中搅拌，混合时间为20min，混合均匀制得诱食剂混合物。
83.将上述制得的益生菌微胶囊、vc 蛋白酶微胶囊、药物混合物、诱食剂混合物置于卧式搅拌机中搅拌混匀7min，制得适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂。
84.对比例1
85.本对比例提供一种适用于泥鳅养殖的生物制剂及其制备方法，与实施例3的区别在于，本对比例生物制剂中不含益生菌和黄芪多糖，其余组分及其重量份以及制备方法均
同实施例3。
86.本对比例生物制剂的制备原料如下：
87.β-环糊精15份、海藻酸钠8份、刺五加提取物5份、溶菌酶2份、维生素c 1.5份、蚯蚓粉8份、β-葡聚糖2份、中性蛋白酶2份、核苷酸1.5份、鱼膏20份、dmpt 2份、蒙脱石60份。
88.生物制剂的制备方法如下：
89.s1：包埋液的配制
90.将β-环糊精15份、海藻酸钠8份加入水中，配制成质量浓度为2wt％的包埋液。
91.s2：vc 蛋白酶微胶囊的制备
92.将vc 1.5份、中性蛋白酶2份加入步骤s1中的包埋液中，搅拌均匀制得vc 蛋白酶预包埋液，将vc 蛋白酶预包埋液按照体积比1:10缓慢加入氯化钙溶液中，氯化钙溶液的质量浓度为2wt％，搅拌1h，使vc 蛋白酶预包埋液充分凝固，随后用蒸馏水充分洗涤三次，制得湿微胶囊，将湿微胶囊置于-60℃、真空冷冻干燥3h，制得vc 蛋白酶微胶囊。
93.s3：生物制剂的制备
94.将刺五加提取物5份、溶菌酶2份、dmpt 2份、β-葡聚糖2份、核苷酸1.5份置于卧式混合搅拌机中搅拌，混合时间为12min，混合均匀制得药物混合物。
95.将蚯蚓粉8份、鱼膏20份、蒙脱石60份置于卧式混合搅拌机中搅拌，混合时间为20min，混合均匀制得诱食剂混合物。
96.将上述制得的vc 蛋白酶微胶囊、药物混合物、诱食剂混合物置于卧式搅拌机中搅拌混匀7min，制得适用于泥鳅高养殖的生物制剂。
97.对比例2
98.本对比例提供一种适用于泥鳅养殖的生物制剂及其制备方法，与实施例3的区别在于，本对比例生物制剂中不含黄芪多糖和中性蛋白酶，并且不含包埋物，其余组分及重量份同实施例3。
99.本对比例生物制剂的制备原料如下：
100.枯草芽孢杆菌10份、粪肠球菌20份、刺五加提取物5份、溶菌酶2份、维生素c 1.5份、蚯蚓粉8份、β-葡聚糖2份、核苷酸1.5份、鱼膏20份、dmpt 2份、蒙脱石60份。
101.适用于泥鳅高密度养殖的生物制剂的制备方法如下：
102.将枯草芽孢杆菌10份、粪肠球菌20份、刺五加提取物5份、溶菌酶2份、维生素c1.5份、dmpt 2份、β-葡聚糖2份、核苷酸1.5份置于卧式混合搅拌机中搅拌，混合时间为12min，混合均匀制得药物混合物。
103.将蚯蚓粉8份、鱼膏20份、蒙脱石60份置于卧式混合搅拌机中搅拌，混合时间为20min，混合均匀制得诱食剂混合物。
104.将上述制得的药物混合物、诱食剂混合物置于卧式搅拌机中搅拌混匀7min，制得适用于泥鳅养殖的生物制剂。
105.对比例3
106.本对比例与实施例3的区别仅在于，本对比例中不含枯草芽孢杆菌，粪肠球菌为30份，其余组分及生物制剂的制备方法均同实施例3。
107.对比例4
108.本对比例与实施例3的区别仅在于，本对比例中不含粪肠球菌，枯草芽孢杆菌为30
份，其余组分及生物制剂的制备方法均同实施例3。
109.对比例5
110.本对比例与实施例3的区别仅在于，本对比例中不含枯草芽孢杆菌和粪肠球菌，其余组分及生物制剂的制备方法均同实施例3。
111.对比例6
112.本对比例与实施例3的区别仅在于，本对比例中不含黄芪多糖，其余组分及生物制剂的制备方法均同实施例3。
113.对比例7
114.本对比例与实施例3的区别仅在于，本对比例中不含刺五加提取物，其余组分及生物制剂的制备方法均同实施例3。
115.对比例8
116.本对比例与实施例3的区别仅在于，本对比例不含包埋物β-环糊精和海藻酸钠，其余组分均同实施例3。
117.本对比例生物制剂的制备方法如下：
118.枯草芽孢杆菌10份、粪肠球菌20份、黄芪多糖5份、刺五加提取物5份、溶菌酶2份、维生素c1.5份、蚯蚓粉8份、β-葡聚糖2份、中性蛋白酶2份、核苷酸1.5份、鱼膏20份、dmpt 2份、蒙脱石60份。
119.将枯草芽孢杆菌10份、粪肠球菌20份、黄芪多糖5份、刺五加提取物5份、溶菌酶2份、维生素c1.5份、dmpt 2份、β-葡聚糖2份、中性蛋白酶2份、核苷酸1.5份置于卧式混合搅拌机中搅拌，混合时间为12min，混合均匀制得药物混合物。
120.将蚯蚓粉8份、鱼膏20份、蒙脱石60份置于卧式混合搅拌机中搅拌，混合时间为20min，混合均匀制得诱食剂混合物。
121.将上述制得的药物混合物、诱食剂混合物置于卧式搅拌机中搅拌混匀7min，制得适用于泥鳅养殖的生物制剂。
122.对比例9
123.本对比例与实施例3的区别仅在于，本对比例不含中性蛋白酶，其余组分及生物制剂的制备方法均同实施例3。
124.对比例10
125.本对比例所用生物制剂为市售的泥鳅生物制剂菌酶宝，购自中信生物科技有限公司。
126.养殖试验
127.根据实施例1～3、对比例1～9的制备方法制备了适用于泥鳅养殖的生物制剂产品以及对比例10市售生物制剂，进行泥鳅养殖试验。
128.试验在广东怀集基地进行，选用体重为0.17
±
0.01g的大鳞副泥鳅84000尾，随机分为14个处理，每个处理6个重复，每个重复1000尾。以常规饲料为空白组，将实施例1～3、对比例1～10的生物制剂产品按1000g/吨分别加入到常规饲料中作为试验组1～3以及对照组1～10的饲料，各组每天表观饱食投喂3次，分别为8:00、13:00、19:00。每3天监测水质、水温、统计泥鳅的死亡数量和摄食行为。试验60天的结果如表1和2所示。
129.表1为泥鳅养殖试验结果，由表1可以看出，试验组1～3中泥鳅的终末体重及饲料
系数显著高于空白组和对照组，试验组1～3中泥鳅的成活率优于对照组，并高于空白对照组。
130.表2为泥鳅养殖水质检测结果，由表2可以看出，相对于空白组和对照组，试验组1～3在试验60天泥鳅养殖水中的氨氮值及亚硝酸态的增加量明显低于对照组和空白组，表明，本发明适用于泥鳅养殖的生物制剂相对来说对水体污染更小，更加绿色环保。
131.表1泥鳅养殖试验结果
[0132][0133]
表2泥鳅养殖水质检测结果
[0134]
[0135][0136]
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。