一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法

技术特征：
1.一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤s1：外植体选择与预处理：将未成熟的果实用温水加洗洁剂浸泡，然后刷洗干净，再放于流水下冲洗备用，将洗干净的果实放于超净工作台，用无菌水洗涤，之后浸泡于75％的酒精溶液中30s，用无菌水冲洗，然后用0.1％的升汞浸泡10min，用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干果实表面的水分，去除果皮备用；步骤s2：胚性愈伤组织的诱导：在无菌条件下，将消毒处理过的未成熟果实切成薄片放入胚性愈伤组织诱导培养基中培养；所述胚性愈伤组织诱导培养基以改良ms为基本培养基，依次加入60g/l的香蕉泥、50～80g/l的椰乳、0.65％琼脂粉和3％的白砂糖，分别添加0.1～0.25mg/l的6-ba和0.05～0.15mg/l的2,4-d，培养基的ph值为5.8，置于灭菌锅中，取出后，在无菌条件下，利用过滤灭菌的方法加入1ml浓度为20mg/ml的茶皂素溶液，混合均匀后，分装到接种瓶中，接种处理好的栀子果实薄片；步骤s3：体细胞胚胎分化及增殖培养：以改良ms为基本培养基，依次加入60g/l的香蕉泥、50～80g/l的椰乳、0.65％琼脂粉和3％的白砂糖，分别添加0.25～0.5mg/l的6-ba、0.1～0.25mg/l的2,4-d和6mg/l的核黄素vb2，培养基的ph值为5.8，置于灭菌锅中，将诱导出的胚性愈伤组织在无菌条件下接种到体细胞胚胎分化和增殖培养基上；步骤s4：体细胞胚胎萌发培养：以改良ms为基本培养基，依次加入60g/l的马铃薯汁、0.65％琼脂粉和1.5％的白砂糖，添加垂柳浸提液20ml/l和3mg/l的vb2，培养基的ph值为5.8，置于灭菌锅中，将诱导分化出的体细胞胚在无菌条件下转入此培养基中。2.根据权利要求1所述的栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，其特征在于，所述改良ms培养基为：基础ms培养基 0.16～0.18g/l硝酸钙 0.01～0.03g/l硫酸钠。3.根据权利要求1所述的栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，其特征在于，所述灭菌锅的灭菌温度为121℃，灭菌时间为15min。4.根据权利要求1所述的栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，其特征在于，所述步骤s2中，将消毒处理过的未成熟果实切成薄片放入胚性愈伤组织诱导培养基中培养，培养条件为弱蓝光，光照强度为1500lx，培养温度为20～26℃。5.根据权利要求4所述的栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，其特征在于，所述步骤s2中，茶皂素溶液的制备方法为：称取茶皂素5g，用乙醇溶解并用无菌水定容至250ml的容量瓶中待用。6.根据权利要求1所述的栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，其特征在于，所述步骤s4中，将诱导分化出的体细胞胚在无菌条件下转入培养基中，暗培养15d，后转入led光照培养，培养温度为20～26℃，光照12h/d，光照强度为2000lx。7.根据权利要求6所述的栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，其特征在于，所述步骤s4中，垂柳浸提液的制备方法为：取垂柳1年生新鲜枝条，用粉碎机粉碎，取500g垂柳枝粉浸泡于500ml蒸馏水中，浸泡1天，再利用功率为100w的超声波超声浸提2h，之后离心取上清液，备用。

技术总结
本发明适用于植株培育技术领域，提供了一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，包括以下步骤：步骤S1：外植体选择与预处理；步骤S2：胚性愈伤组织的诱导；步骤S3：体细胞胚胎分化及增殖培养；步骤S4：体细胞胚胎萌发培养。本发明使用植物材料少，不受季节限制，可以在较短时间内达到繁殖系数的最大化，不仅能够提高育苗效率，节约生产成本，而且操作简单易行，可重复性强，适宜于周年试验或生产；确保了苗木的移栽成活率，保证了苗木质量；实现了绿色生产，优化了栀子苗木生产流程，值得推广和应用。值得推广和应用。值得推广和应用。


技术研发人员：杨艳 李昌珠 陈景震 李培旺 李党训 吉悦娜 唐洁 曾霞 张翼 李力
受保护的技术使用者：湖南省林业科学院
技术研发日：2022.04.08
技术公布日：2022/7/15