包含甲羟戊酸内酯的皮肤护理组合物的制作方法

包含甲羟戊酸内酯的皮肤护理组合物
1.本技术要求于2019年8月28日提交的美国临时申请号62/892760、于2020年4月20日提交的美国临时申请号63/012492的权益，它们中的每一项通过援引以其全文并入本文。
技术领域
2.本披露涉及包含甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物或它们的任何组合的组合物，以及用于皮肤护理、皮肤补充、毛发护理和口腔护理的使用方法。更具体地，本披露涉及包含甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物或它们的任何组合的皮肤护理组合物，用于提供一种皮肤护理有益效果和/或多种皮肤护理有益效果。


背景技术：

3.用于从溶液诸如发酵液中分离和纯化有机酸的已知过程非常复杂，并且通常涉及有机溶剂萃取步骤或固相吸收。
4.通过使用各种微生物发酵含碳水化合物的底物所产生的有机酸诸如羧酸的工业用途的重要方面是从这些水性发酵溶液中除去和纯化有机酸或其盐或内酯的成本效益和效率，这些水性发酵溶液不仅含有有机酸或有机酸盐或内酯，而且还含有另外的有机酸、其他发酵副产物、微生物及它们的组分以及底物的残余物，诸如糖、蛋白质、脂质和其他痕量有机和无机化合物。
5.从发酵液纯化由微生物产生的有机酸的经典方式是通过降低发酵液的ph并使用部分混溶的有机溶剂进行液/液萃取来使目标酸质子化。(organic laboratory techniques[有机实验室技术],第3版,第49-67页.ralph fessenden,joan fessenden,patty feist 2001,布鲁克斯/科尔出版社(brooks/cole))。
[0006]
us 2014/0371486描述了使用固相吸附从发酵液纯化羧酸的方法。该方法包括：从发酵液中除去所存在的生物质和任何固体，通过纳滤精细地清洁无生物质且无固体的发酵液，以及通过吸附到一个或多个具有叔氨基的固相上而从精细地清洁的、无生物质且无固体的发酵液中除去羧酸。kr 20180070117描述了使用磷酸由生物合成的甲羟戊酸产生甲羟戊酸内酯的方法。
[0007]
us 5034105描述了从琥珀酸盐的不饱和溶液中结晶琥珀酸的方法，使所述盐溶液经受电渗析以形成过饱和溶液，随后通过向所述溶液中添加有效量的乙酸以增强琥珀酸的结晶，从而使琥珀酸过饱和溶液结晶。
[0008]
这些方法的缺点是向该过程中提供了另外的物质，这些物质必须不再存在于目标产品中，或者目标产品中痕量的这些物质可能导致产品的质量和适用性受到限制。在一些情况下，这些方法的实际实施也与相当大的技术复杂性和相当大的能源消耗有关。
[0009]
因此，仍然需要开发更有效、可靠、环境友好和/或经济上可行的用于纯化和回收有机酸及其盐和内酯以及用于产生有机酸及其盐或内酯的结晶形式的方法。
[0010]
皮肤起到屏障的作用，使机体不至于干燥，并使机体不受到外部的通常有害的物
质的渗透。
[0011]
人的皮肤由两个主要的细胞层即表皮和真皮组成。表皮构成皮肤的最外层，并且主要由终末分化的角质形成细胞和脂质形成，脂质是位于终末分化的角质形成细胞下面的活的正在分裂的角质形成细胞。表皮的外层(角化层(stratum corneum)或角质层(horny layer))是与环境接触的部分，角质层的特定结构保护皮肤，并通过结合一定量的水来稳定其自身的柔韧性(p.m.elias,structure and function of the stratum corneum permeability barrier[角化层渗透性屏障的结构和功能],drug dev.res.[药物开发研究]13,1988,97-105)。表皮的主要功能是形成抵抗环境挑战(诸如uv辐射、热、化学品、污染)和病原体(诸如细菌、真菌、寄生虫和病毒)的渗透屏障。它还使身体避免水分不受控制地从内向外蒸发，从而维持水合平衡和皮肤代谢。
[0012]
在真皮中，最丰富的细胞类型即真皮成纤维细胞负责通过产生细胞外基质(ecm)而生成结缔组织。该细胞外基质(ecm)由以下两类主要的大分子组成：蛋白聚糖(pg)和纤维状蛋白质；最丰富的纤维状蛋白质是i型胶原原纤维、弹性蛋白、层粘连蛋白和纤连蛋白(frantz c等人,the extracellular matrix at a glance[细胞外基质一览],j.cell sci.[细胞科学杂志]2010；123(24):4195-4200)。在老化期间，胶原原纤维变成碎片，成纤维细胞产生较少的ecm蛋白质和较多的ecm降解性基质金属蛋白酶(mmp)，这导致ecm的不平衡(cole ma等人,extracellular matrix regulation of fibroblast function:redefining our perspective on skin aging[细胞外基质对成纤维细胞功能的调节：重新定义我们对皮肤老化的看法],j cell commun signal.[细胞通信与信号杂志]2018；12(1):35-43)。
[0013]
仍需要找到用于提供皮肤有益效果的方法和组合物，诸如但不限于用于向皮肤提供选自由以下组成的组的皮肤护理有益效果的方法和组合物：皮肤保湿、皮肤剥脱(也称为皮肤剥离、剥落、皮肤脱落)、皮肤表面重修、皮肤再生、皮肤更新、改善表皮细胞更新、防止或延缓皮肤老化迹象的出现(抗老化)、减少皮肤皱纹的出现、皮肤年轻化、加强皮肤屏障功能或它们的任一种组合。


技术实现要素：

[0014]
本披露涉及包含甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物或它们的任何组合的组合物，以及用于局部施加以用于皮肤护理、皮肤补充、毛发护理和口腔护理的方法。更具体地，本披露涉及包含甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物或它们的任何组合的组合物，用于在个体中提供一种皮肤护理有益效果和/或多种皮肤护理有益效果。
[0015]
在一个实施例中，该组合物是用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的皮肤护理组合物，其包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合，其中所述组合物向所述个体的皮肤提供至少一种皮肤护理有益效果。
[0016]
在一个实施例中，该组合物是用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的皮肤护理组合物，其包含一种或多种皮肤病学或美容学上可接受的组分和有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯
一水合物以及它们的任一种组合，其中所述组合物向所述个体的皮肤提供至少一种皮肤护理有益效果。
[0017]
在一个实施例中，该方法是用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的方法，其包括使所述个体的皮肤与皮肤护理组合物接触，该皮肤护理组合物包含选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合。
[0018]
在一个方面，该至少一种皮肤护理有益效果选自由以下组成的组：皮肤保湿、皮肤剥脱(也称为皮肤剥离、剥落、皮肤脱落)、皮肤表面重修、皮肤再生、皮肤更新、改善表皮细胞更新、防止或延缓皮肤老化迹象的出现(抗老化)、减少皮肤皱纹的出现、皮肤年轻化、加强皮肤屏障功能以及它们的任一种组合。
[0019]
还提供了用于从水性溶液中产生有机酸或其盐或内酯的结晶形式的组合物和方法。在一个方面，披露了结晶甲羟戊酸内酯*一水合物(mvl*h2o)以及使甲羟戊酸内酯*一水合物(mvl*h2o)结晶的方法。
[0020]
更具体地，在一个方面，本说明书提供了一种用于从水性溶液中产生甲羟戊酸盐(也称为x-mva)的结晶形式的方法，其包括使包含所述x-mva的水性溶液经受纳滤以产生渗透物，以及通过水溶剂结晶从所述渗透物中结晶所述x-mva。
[0021]
在另一方面，本说明书提供了一种用于从水性溶液中产生水增溶的甲羟戊酸内酯的方法，其中该方法包括：a)通过以下方式从水性溶液中产生甲羟戊酸盐的结晶形式：使包含所述甲羟戊酸盐(x-mva)的水性溶液经受纳滤以产生渗透物，并且通过水溶剂结晶从所述渗透物中结晶所述甲羟戊酸盐以产生所述甲羟戊酸盐的晶体；以及b)将(a)的晶体溶解在水中以产生甲羟戊酸的水增溶的盐，并且使所述液体经受阳离子交换，由此将所述甲羟戊酸的水增溶的盐转化为水增溶的甲羟戊酸内酯。
[0022]
在又一方面，本说明书提供了一种用于从包含甲羟戊酸盐(x-mva)的水性溶液中产生甲羟戊酸内酯的方法，其包括使包含所述甲羟戊酸盐的水性溶液经受阳离子交换，由此将包含甲羟戊酸盐的所述水性溶液转化为包含甲羟戊酸内酯(mvl)的水性溶液，以及任选地通过浓缩所述溶液从所述水性溶液中产生高纯度(》90％纯度)的mvl，从所述浓缩溶液中产生甲羟戊酸内酯*一水合物(mvl*h2o)，并且将甲羟戊酸内酯*一水合物(mvl*h2o)晶体溶解在水中以获得高纯度mvl溶液。
[0023]
在本文中示出了本披露的这些方法和组合物的另外的实施例。
具体实施方式
[0024]
提供了用于局部施加以用于皮肤护理、皮肤补充、毛发护理、口腔护理的组合物和方法，这些组合物包含甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物或它们的任何组合。
[0025]
更具体地，在一个方面，该组合物是用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的皮肤护理组合物，其包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合，其中所述组合物向所述个体的皮肤提供至少一种皮肤护理有益效果。
[0026]
在一个实施例中，该组合物是用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的皮
肤护理组合物，其包含一种或多种皮肤病学或美容学上可接受的组分和有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合，其中所述组合物向所述个体的皮肤提供至少一种皮肤护理有益效果。
[0027]
在一个实施例中，该方法是用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的方法，其包括使所述个体的皮肤与皮肤护理组合物接触，该皮肤护理组合物包含选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合。
[0028]
在一个方面，该至少一种皮肤护理有益效果选自由以下组成的组：皮肤保湿、皮肤剥脱(也称为皮肤剥离、剥落、皮肤脱落)、皮肤表面重修、皮肤再生、皮肤更新、改善表皮细胞更新、防止或延缓皮肤老化迹象的出现(抗老化)、减少皮肤皱纹的出现、皮肤年轻化、加强皮肤屏障功能以及它们的任一种组合。
[0029]
还提供了使用水溶剂结晶从水性溶液中回收有机酸及其盐和内酯的组合物和方法。在一个方面，披露了结晶甲羟戊酸内酯*一水合物(mvl*h2o)以及使甲羟戊酸内酯*一水合物(mvl*h2o)结晶的方法。
[0030]
更具体地，在一个方面，提供了一种用于从含有甲羟戊酸盐(x-mva)的溶液中回收甲羟戊酸盐的方法。在另一方面，提供了一种用于从含有甲羟戊酸盐(x-mva)、甲羟戊酸内酯(mvl)、甲羟戊酸内酯*一水合物(mvl*h2o)或它们的组合的溶液中回收甲羟戊酸内酯(mvl)的方法。用于回收甲羟戊酸盐和/或回收甲羟戊酸内酯的整个过程可优选地在不使用有机溶剂的水性溶液中进行。
[0031]
本文所述的方法可以产生高纯度mvl产物(》90％纯度)，其具有水样外观，具有很少或没有颜色形成。因此，通过本文所述的方法产生的mvl可以按比例放大用于大规模制造并且是个人护理行业是特别感兴趣的，其中高度纯化的mvl产物如果是水透明的，具有很少或没有痕量的有色污染物存在，则具有更大的价值。
[0032]
此具体实施方式仅旨在使本领域的其他技术人员熟悉申请人的发明、其原理以及其实际应用，以使得本领域的其他技术人员可以其多种形式来改编和应用本发明，因为它们可能最适合于特定用途的要求。此具体实施方式及其具体例子在指示某些实施例的同时仅旨在出于说明的目的。因此，本说明书不限于所描述的实施例，并且可进行各种修改。
[0033]
将本文件组织成若干部分以便于阅读；然而，读者将领会的是，在一个部分中进行的陈述可能适用于其他部分。以这种方式，用于本披露的不同部分的标题不应被解释为限制。
[0034]
本文提供的标题并非对本发明的组合物和方法的各个方面或实施例进行限制，这些方面或实施例可通过将说明书作为一个整体来参考而得到。因此，把说明书作为一个整体参考时，以下即将定义的术语得以更全面地定义。
[0035]
除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明组合物和方法所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。虽然类似于或等同于本文描述的那些的任何方法和材料也可以用于本发明组合物和方法的实践或测试中，但现在将对代表性示例方法和材料进行描述。
[0036]
在本说明书中引用的所有出版物和专利都通过援引并入本文，就好像每个单独的
出版物或专利被具体地且单独地指示为通过援引并入并且通过援引并入本文以结合引用的出版物来披露和描述这些方法和/或材料。
[0037]
定义
[0038]
在说明书以及通篇实例和权利要求书中，使用了以下定义：
[0039]
术语“甲羟戊酸(mva)”或“(r)-甲羟戊酸”在本文中可互换使用并且是指化学式为c6h
12
o4且摩尔质量为148.16g/mol的(3r)-3,5-二羟基-3-甲基戊酸。甲羟戊酸的羧酸根阴离子称为甲羟戊酸根。本文所述的甲羟戊酸是具有生物活性的r-对映异构体。
[0040]
术语“甲羟戊酸盐”或“x-mva”在本文中可互换使用，是指甲羟戊酸盐，其中x是甲羟戊酸的阳离子，并且mva是羧酸根阴离子(因此是x-mva)。甲羟戊酸盐可以选自由以下组成的组：甲羟戊酸钠(na-mva)、甲羟戊酸钾(k-mva)、甲羟戊酸铵(nh
4-mva)、甲羟戊酸锂(li-mva)、甲羟戊酸的任何其他单价盐或它们的任一种组合。
[0041]
术语“甲羟戊酸内酯”或“(r)-甲羟戊酸内酯”或“mvl”在本文中可互换使用并且是指(r)-3-羟基-3-甲基-δ-戊内酯。
[0042]
本文所述的水性溶液包括含有有机酸和它们的内酯的溶液，这些有机酸和它们的内酯相互转化以达到平衡浓度。例如，甲羟戊酸和甲羟戊酸内酯趋于相互平衡。在本说明书中，如果没有另外说明，则含有有机酸的溶液也含有内酯形式。
[0043]
甲羟戊酸内酯一水合物也称为mvl*h2o。
[0044]
sac是指强酸阳离子交换树脂。
[0045]
wac是指弱酸阳离子交换树脂。
[0046]
ds是指以重量％表示的干物质含量。干物质可以通过卡尔费休(karl fischer)水滴定法测量。
[0047]
rds是指根据水性糖溶液的折光指数与ds之间的相关性以重量％表示的折光干物质含量。
[0048]
ix或iex指离子交换过程
[0049]
bv/h是指通过柱或操作装置中含有的离子交换材料的体积流速。bv是指床体积，即柱或操作装置中含有的指定离子形式的离子交换材料的体积。
[0050]
纯度是指按ds或rds计的组分(诸如na-mva、mvl、mvl*h2o)含量。面积％计算程序报告色谱图(诸如hplc色谱图)中每个峰的面积占所有峰的总面积的百分比。例如，至少90％的甲羟戊酸内酯纯度是指对应于mvl的峰面积(在这种情况下为90)相对于使用色谱分析的峰的总面积(100)的百分比。可以通过使用hplc(rezex roa-有机酸h (8％)柱)来测量纯度。
[0051]
hplc是指高效液相色谱法。
[0052]
甲羟戊酸钠纯度是指甲羟戊酸钠的量除以干物质的总量，就好像甲羟戊酸、甲羟戊酸酯和甲羟戊酸内酯全部都是甲羟戊酸钠形式一样。
[0053]
甲羟戊酸内酯纯度是指甲羟戊酸内酯的总量除以干物质的总量，就好像甲羟戊酸、甲羟戊酸酯和甲羟戊酸内酯全部都是甲羟戊酸内酯形式一样。
[0054]
甲羟戊酸酯产率是指目标级分(诸如纳滤渗透物或离心饼)中甲羟戊酸酯的量除以进料级分(诸如纳滤进料或离心进料)中甲羟戊酸酯的量，就好像甲羟戊酸、甲羟戊酸酯和甲羟戊酸内酯全部都是甲羟戊酸酯形式一样。
[0055]
甲羟戊酸内酯产率是指目标级分(诸如阳离子交换产物或离心饼)中甲羟戊酸内酯的量除以进料级分(诸如阳离子交换进料或离心进料)中甲羟戊酸内酯的量，就好像甲羟戊酸、甲羟戊酸酯和甲羟戊酸内酯全部都是甲羟戊酸内酯形式一样。
[0056]
颜色是指糖分析统一方法国际委员会(international commission for uniform process of sugar analysis，“icumsa”)糖颜色分级系统规定的颜色值。
[0057]
通过使用mettler toledo dsc822e差示扫描量热仪来测量dsc热谱图。在标准40μl铝坩埚中在流动氮气气氛下以80ml/min的流速进行测量。温度范围为0-50℃，并且加热速率为2℃/min。
[0058]
在20℃的温度下通过使用具有100mm比色皿和na 589光的anton paar mcp 300sucromet从甲羟戊酸内酯浓度为2g/100ml的水性溶液测量旋光度。
[0059]
缩写的含义如下：“sec”意指秒，“min”意指分钟，“h”或“hr”意指小时，“d”意指天，“μl”意指微升，“ml”意指毫升，“l”意指升，“μm”意指微摩尔，μm意指微米，“mm”意指毫摩尔，“m”意指摩尔，“mmol”意指毫摩尔，“μmole”意指微摩尔，“kg”意指千克，“g”意指克，“μg”意指微克，“ng”意指纳克，“u”意指单位，“bp”意指碱基对，并且“kb”意指千碱基。
[0060]
起始材料.
[0061]
在所描述的方法中使用的溶液包括包含有机酸或其盐或内酯的水性溶液。更具体地，在一个方面，起始材料是包含至少mva和/或一种甲羟戊酸盐(x-mva)的水性溶液。在一个方面，起始材料是包含甲羟戊酸内酯(mvl)或甲羟戊酸内酯一水合物(mvl*h2o)的水性溶液。起始材料可选自例如源自发酵的液体和/或选自含有mva、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸内酯一水合物或它们的任一种组合的水溶液。
[0062]
在一些实施例中，水性溶液包含(或者全部或部分地源于)发酵产物。在一些此类实施例中，水性溶液是(或者全部或部分地源于)用于制备待纯化的mva、x-mva和/或mvl的发酵产物。在一些实施例中，发酵包括在包含碳水化合物的水性培养基中培养重组微生物，该重组微生物包含至少一种编码能够产生mva、x-mva和/或mvl的一种酶(或多种酶)的重组多核苷酸序列。发酵过程的产物可称为发酵“产品”或“肉汤”。除了待纯化的x-mva和/或mvl之外，该产物通常还包含许多成分，包括例如单价和二价盐、糖、寡糖、单糖、氨基酸、多肽、蛋白质、有机酸、核酸等。水性溶液可以包括来自发酵的一些醇或其他溶剂。
[0063]
通常可用于产生mva的酶的实例包括mvae(乙酰辅酶a乙酰转移酶/hmg辅酶a还原酶)和mvas(羟甲基戊二酸单酰辅酶a合酶)。mvae基因编码具有硫解酶和hmg辅酶a还原酶活性的多肽(mvae)。mvas基因编码具有hmg辅酶a合酶活性的多肽(mvas)。能够产生mva(和相应的核苷酸序列)的酶可源自但不限于格氏李斯特菌(listeria grayi)、粪肠球菌(enterococcus faecalis)(粪链球菌(streptococcus faecalis))、屎肠球菌(enterococcus faecium)、鹑鸡肠球菌(enterococcus gallinarum)和铅黄肠球菌(enterococcus casseliflavus)。
[0064]
发酵液可以是从能够产生mva或mvl的任何生物体的发酵获得的发酵液。在一些实施例中，发酵液是从大肠杆菌(escherichia coli)发酵获得的发酵液。在一些方面，起始水性溶液可以是ph为中性的发酵液，诸如但不限于从大肠杆菌发酵获得的发酵液，其中所述发酵液包含为盐的甲羟戊酸。起始水性溶液也可以是ph较低(ph 3-5)的发酵液，其中所述发酵液包含部分为酸形式且部分为甲羟戊酸盐的甲羟戊酸。发酵液可以是澄清的发酵液，
其中通过对进料发酵液进行超滤获得澄清。
[0065]
在一些实施例中，待纯化的有机酸是mva，并且mva起始溶液包含(或者全部或部分地源于)发酵过程的产物，其中发酵过程包括在水性培养基中培养重组微生物，该重组微生物包含编码mvae和mvas的重组多核苷酸序列。
[0066]
可以通过预涂层过滤、微滤、离心或超滤中的至少一种从所述发酵液中除去生物质和任何不溶性固体来澄清发酵液。超滤可以有益于例如除去大生物分子，诸如内毒素、蛋白质、核酸和脂多糖。
[0067]
可使用例如过滤、离心、沉降和/或适合于除去细胞生物质的其他过程来从发酵产物中分离细胞生物质。
[0068]
纳滤
[0069]
如本文所述，在一个方面，本发明的目的是一种用于从水性溶液中产生甲羟戊酸盐(也称为x-mva或甲羟戊酸x)的结晶形式的纯化方法，其包括使包含所述甲羟戊酸盐(x-mva)的水性溶液经受纳滤以产生渗透物，以及通过水溶剂结晶从所述渗透物中结晶所述甲羟戊酸盐(也可参见实例1-4)。
[0070]
纳滤(nf)是一种基于压力驱动的膜过滤的过程。纳滤提供两种级分：渗余物和渗透物。
[0071]
在本发明的一个方面，nf过程旨在将甲羟戊酸盐(诸如但不限于甲羟戊酸钠、甲羟戊酸钾、甲羟戊酸锂、甲羟戊酸铵或甲羟戊酸的其他单价盐)纯化为渗透物(也称为滤液)。来自该过程的渗余物(也称为浓缩物)是含有消泡剂、内毒素、颜色组分、二价盐和较大分子的废弃物。在本发明的一个实施例中，将水性溶液用作纳滤的进料以获得具有高含量甲羟戊酸盐(在渗透物中至少60％的甲羟戊酸钠，实例1-4)和仅少量废料的渗透物。
[0072]
起始水性溶液可以是ph为中性的发酵液，诸如但不限于从大肠杆菌发酵获得的发酵液，其中所述发酵液包含为盐的甲羟戊酸。起始水性溶液也可以是ph较低(ph 3-5)的发酵液，其中所述发酵液包含部分为酸形式且部分为甲羟戊酸盐的甲羟戊酸。
[0073]
根据本发明的纳滤可作为间歇过程或连续过程进行。
[0074]
纳滤通常在5℃至80℃、优选30℃至75℃并且最优选50℃至70℃范围内的温度下进行。纳滤中的压力通常在5至60巴、优选10至50巴并且最优选20至45巴的范围内。ph可在1至10、优选3至9并且最优选6至9的范围内。ph取决于起始溶液的组成以及用于纳滤的膜以及待回收的组分的稳定性。如有必要，可在纳滤之前将起始溶液的ph调节至所希望的值。
[0075]
取决于纳滤进料的浓度和粘度，纳滤通常以1至100l/m2h的通量、优选以2至50l/m2h的通量并且最优选以3至12l/m2h的通量进行。
[0076]
在本发明中使用的纳滤膜可以选自mgso4保留率为50％至99％(在25℃下，2g/l浓度，8巴，ph 6)、优选70％至99％(在25℃下，2g/l浓度，8巴，ph 6)、更优选80％至98％(在25℃下，2g/l浓度，8巴，ph 6)、最优选90％至98％(在25℃下，2g/l浓度，8巴，ph 6)的聚合物膜和无机膜。在一个方面，纳滤膜是mgso4保留率为约92％-98％的纳滤膜xn45。
[0077]
mgso4保留率为99％或mgso4保留率更大的纳滤膜具有太高的单价盐保留率和较低的mwco，因此具有太高的x-mva盐保留率。mgso4保留率《90％mgso4保留率的膜不会像较小二价盐通过时那样提供高纯度。
[0078]
在一些实施例中，膜具有约100至约700道尔顿mwco膜范围内的截留分子量
(mwco)，诸如但不限于trisep xn45膜。trisep xn45膜的特征在于300-500道尔顿mwco膜。在一些实施例中，膜具有约150至约400道尔顿范围内的截留分子量(mwco)。在一些实施例中，膜具有约150至约300道尔顿范围内的截留分子量(mwco)，诸如但不限于suez duratherm exl dl和dk膜。suez duratherm exl dl和dk膜的特征在于150-300道尔顿mwco膜。mwco和mgso4保留率都是选择纳滤膜的重要参数。在一个方面，用于所描述的过程的膜是具有高于150da的mwco但也具有较高二价盐排斥率(》90％mgso4)的纳滤膜，诸如但不限于trisep xn45型膜。
[0079]
在一些实施例中，膜具有约100至约900道尔顿范围内的截留分子量(mwco)和在25℃下约50％至99％的mgso4保留率。在一些实施例中，膜具有约150至约500道尔顿范围内的截留分子量(mwco)和在25℃下约80％-99％的mgso4保留率。在一些实施例中，膜具有约150至约300道尔顿范围内的截留分子量(mwco)和在25℃下约98％至99％的mgso4保留率。
[0080]
可用于本发明的纳滤膜可具有负电荷或正电荷。膜可以是离子膜，即它们可含有阳离子或阴离子基团，但即使是中性膜也是有用的。纳滤膜可选自疏水膜和亲水膜。
[0081]
纳滤膜的典型形式包括螺旋缠绕膜。膜构造也可选自例如平板、管和中空纤维。也可以使用“高剪切”膜，诸如振动膜和旋转膜。膜的形状可以是管状、螺旋的或平的。
[0082]
可用于本发明的纳滤设备包括至少一个将起始材料(进料)分成渗余物和渗透物部分的纳滤膜元件。纳滤设备通常还包括用于控制压力和流量的装置，诸如泵和阀以及流量和压力计和控制器。该设备还可包括以不同组合并联或串联布置在一个压力容器中的若干个纳滤膜元件。
[0083]
以起始材料中存在的甲羟戊酸钠计，纳滤中x-mva(甲羟戊酸盐，诸如甲羟戊酸钠)的产率通常大于70％、优选大于80％并且最优选大于90％。
[0084]
渗透物中的甲羟戊酸钠含量按ds计大于50％、优选按ds计大于60％、更优选按ds计大于70％并且最优选按ds计大于80％。
[0085]
可通过蒸发或本领域已知的进一步浓缩甲羟戊酸盐的任何方式(诸如但不限于在减压下蒸发(真空蒸发))使纳滤渗透物经受进一步浓缩，以产生浓缩水性浆液。浓缩水性浆液中的甲羟戊酸钠含量可以按ds计大于60％、优选地按ds计介于65％-95％之间。
[0086]
可使纳滤渗透物经受选自离子交换、蒸发、电渗析和过滤的进一步纯化步骤。这些进一步纯化步骤可在所述膜过滤之前或之后进行。此外，可使回收的甲羟戊酸盐级分经受一个或多个进一步步骤，诸如蒸发、浓缩、过滤、离子交换、活性炭处理、无菌过滤、结晶、中间结晶、纳滤和色谱分级分离。回收的甲羟戊酸盐级分可以不同的方式进行处理，取决于这些级分的纯度。在一些实施例中，使从纳滤收集的渗透物和/或浓缩水性浆液经受随后的结晶步骤。
[0087]
在一个方面，如本文所述，该方法是用于从水性溶液中产生甲羟戊酸盐(x-mva)的结晶形式的方法，其包括使包含所述甲羟戊酸盐的水性溶液经受纯化步骤，其中所述纯化步骤产生包含纯度为至少60％的x-mva的纯化溶液，以及通过水溶剂结晶从所述纯化溶液中结晶所述甲羟戊酸盐，其中所述纯化步骤包括使包含所述甲羟戊酸盐的水性溶液经受纳滤以产生渗透物，其中所述渗透物包含纯度为至少60％的x-mva。
[0088]
替代性地，在一个方面，该方法是用于从水性溶液中产生甲羟戊酸盐(x-mva)的结晶形式的方法，其包括使包含所述甲羟戊酸盐的水性溶液经受纯化步骤，其中所述纯化步
骤产生包含纯度为至少60％的x-mva的纯化溶液，以及通过水溶剂结晶从所述纯化溶液中结晶所述甲羟戊酸盐，其中所述纯化步骤包括使包含所述甲羟戊酸盐的水性溶液经受微滤、电渗析、离子交换、过滤、活性炭处理、蒸发、浓缩、无菌过滤、色谱分级分离或它们的任一种组合。
[0089]
阳离子交换
[0090]
在一个方面，本说明书提供了一种用于从水性溶液中产生水增溶的甲羟戊酸内酯的方法，其中该方法包括：a)通过以下方式从水性溶液中产生甲羟戊酸盐的结晶形式：使包含所述甲羟戊酸盐(x-mva)的水性溶液经受纳滤以产生渗透物，并且通过水溶剂结晶从所述渗透物中结晶所述甲羟戊酸盐以产生所述甲羟戊酸盐的晶体；以及b)将(a)的晶体溶解在水中以产生甲羟戊酸的水增溶的盐，并且使所述液体经受阳离子交换，由此将所述甲羟戊酸的水增溶的盐转化为水增溶的甲羟戊酸内酯(实例9-12)。
[0091]
在另一方面，本说明书提供了一种用于从包含甲羟戊酸盐(x-mva)的水性溶液中产生甲羟戊酸内酯的方法，其包括使包含所述甲羟戊酸盐的水性溶液经受阳离子交换，由此将包含甲羟戊酸盐的所述水性溶液转化为包含甲羟戊酸内酯(mvl)的水性溶液。
[0092]
强酸阳离子交换树脂(sac树脂)
[0093]
sac树脂可具有苯乙烯或丙烯酸骨架。在本发明的一个实施例中，树脂是磺化聚苯乙烯-共-二乙烯基苯树脂。也可以应用其他烯基芳族聚合物树脂，如那些基于像烷基取代的苯乙烯的单体或它们的混合物的树脂。树脂也可与其他合适的芳族交联单体(诸如二乙烯基甲苯、二乙烯基二甲苯、二乙烯基萘、二乙烯基苯)或与脂族交联单体(诸如异戊二烯、二丙烯酸乙二醇酯、二甲基丙烯酸乙二醇酯、n,n
’‑
亚甲基双丙烯酰胺)或它们的混合物交联。树脂的交联度通常为交联剂诸如二乙烯基苯(dvb)的约1％至约20％、优选约3％至约8％。用于本发明的离子交换的sac树脂可以是多价、二价或单价阳离子形式。单价阳离子形式可选自例如h

、na

和k

。二价阳离子形式的实例是ca
2
、mg
2
、zn
2
、sr
2
和ba
2
。三价阳离子形式的实例是al
3
。在本发明的优选实施例中，用于本发明的离子交换的sac树脂是单价h

形式。树脂的典型平均粒度为10至2000μm、优选300至1200μm。
[0094]
在一个实施例中，单价sac树脂用于甲羟戊酸盐(x-mva)的离子交换以产生甲羟戊酸内酯(mvl)，其中单价阳离子是h

形式。弱酸阳离子交换树脂(sac树脂)
[0095]
wac树脂是具有羧基官能团的丙烯酸阳离子交换树脂。丙烯酸wac树脂通常来源于由丙烯酸酯、丙烯腈、丙烯酸以及它们的混合物组成的组。丙烯酸酯选自由甲基丙烯酸甲酯、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯和丙烯酸丁酯组成的组。wac树脂的基质也可以不是丙烯酸。wac树脂的活性官能团也可以不是羧基基团。例如，它们可选自其他弱酸。wac树脂可以是h

、na

、k

、ca
2
或mg
2
形式，优选h

或na

形式。也可使用其他离子形式。
[0096]
wac树脂与芳族交联剂、优选二乙烯基苯(dvb)交联。它也可与脂族交联剂(诸如异戊二烯、1,7-辛二烯、三乙烯基环己烷、二甘醇二乙烯基醚)交联。交联度为1％至20％、优选3％至约8％dvb。wac树脂的平均粒度为10至2000μm、优选300至1200μm。
[0097]
离子交换优选地通过使用阳离子交换树脂(特别是强酸阳离子树脂，特别是h

离子形式)来进行。
[0098]
在一个实施例中，单价wac树脂用于甲羟戊酸盐(x-mva)的离子交换以产生甲羟戊酸内酯(mvl)，其中单价阳离子是h

形式。
[0099]
水溶剂结晶
[0100]
如本文所述，在一个方面，本发明的目的是一种用于从水性溶液中产生甲羟戊酸盐(也称为x-mva或甲羟戊酸x)的结晶形式的方法，其包括使包含所述甲羟戊酸盐(x-mva)的水性溶液经受纯化步骤诸如但不限于纳滤以产生允许结晶所述x-mva的高纯度溶液(渗透物)，以及通过水溶剂结晶从所述渗透物中结晶所述甲羟戊酸盐(实例5-8)。
[0101]
在本发明的另一方面，本说明书提供了一种用于从包含甲羟戊酸盐(x-mva)的水性溶液中产生甲羟戊酸内酯的方法，其包括使包含所述甲羟戊酸盐的水性溶液经受阳离子交换，由此将包含甲羟戊酸盐的所述水性溶液转化为包含甲羟戊酸内酯(mvl)的水性溶液，以及任选地随后浓缩所述mvl溶液并结晶所述溶液以获得mvl*一水合物晶体(实例13-20)。
[0102]
术语“水溶剂结晶”是指使用水性溶剂诸如水而不使用任何有机溶剂进行的结晶。
[0103]
x-mva的水溶剂结晶
[0104]
x-mva的结晶可通过传统方法进行，诸如在10℃至80℃的温度范围内冷却结晶或沉淀结晶。x-mva的结晶也可有利地通过沸腾结晶方法或通过沸腾和冷却结晶方法进行。
[0105]
在本披露的一个实施例中，x-mva的结晶从x-mva纯度按ds计大于60％、优选大于70％、更优选大于80％、最优选大于90％并且尤其大于95％的溶液(进料溶液)进行。结晶通常提供纯度按ds计大于65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、优选大于95％并且最优选大于99％的结晶x-mva产物。
[0106]
取决于溶液的x-mva含量，可以首先将含有x-mva的溶液蒸发至适当的干物质含量(例如，约60％至90％的ds)。浆液ds浓度必须足够高以具有结晶潜力(过饱和)。最小ds含量取决于浆液的温度和纯度。浆液的纯度越高，需要的浆液ds越低。如果ds太高，则结晶会延迟或晶体悬浮液变得太稠而无法进行有效的晶体分离。在本发明的一个实施例中，含有na-mva的浆液具有介于65％-99％之间的纯度。
[0107]
过饱和溶液可用x-mva晶种进行引晶。晶种(如果使用)是干燥形式的晶体或者它们悬浮在溶剂中，优选地在水中，并且优选地例如通过粉碎或碾磨减小晶体尺寸。含有x-mva的溶液的蒸发温度可在30℃至80℃之间的范围内。在引晶后，使结晶块经受冷却，同时混合直至结晶产率和粘度对晶体分离是最佳的。冷却时间优选地为10至60小时。冷却期间的温降优选地为5℃至40℃。可以将包含na-mva的引晶浆液冷却至约25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃、66℃、67℃、68℃、69℃、70℃、71℃、72℃、73℃、74℃至约75℃或更高的温度。冷却可以进行约2hr、3hr、4hr、5hr、6hr、7hr、8hr、9hr、10hr、11hr、12hr、13hr、14hr、15hr、16hr、17hr、18hr或更长的时间。冷却可以在连续搅拌或混合下进行。混合可能有益于控制结晶。混合防止晶体沉降，保持晶体生长并减少自发晶体形成。混合还促进有益的热传递和质量传递。然后可将结晶块在最终温度下混合一段时间，优选0.5-24小时，以达到最大结晶产率。例如通过过滤或离心从母液中分离晶体。
[0108]
在本发明的一个实施例中，具有高纯度的x-mva晶体是含量按ds计超过97％、优选按ds计超过98％、更优选按ds计超过99％的x-mva晶体，这些晶体通过一个结晶步骤(＝单级结晶)从x-mva含量按ds计超过65％的溶液中获得，而没有溶解和重结晶步骤。单级结晶
可包括沸腾和冷却步骤，但不包括重结晶步骤。
[0109]
在本发明的另一个实施例中，x-mva的结晶包括洗涤作为另外的步骤。洗涤通常结合从母液中分离晶体来进行。另外的洗涤可以通过混合水性洗涤溶剂和晶体饼之后分离晶体来进行。洗涤溶剂可以是水。本发明的该实施例通常提供纯度大于98％的x-mva。
[0110]
晶种可以通过各种过程制备。在一些实施例中，碾磨干晶种以获得更小的粒度。晶种的所希望的量可取决于例如晶种的大小。在一些实施例中，在不向过饱和溶液中添加晶种的情况下引发结晶。在一些此类实施例中，例如，使用自发引晶来实现引晶。
[0111]
在一些实施例中，当浆液的干固体含量为至少约60％(按重量计)时，进行结晶的引发(例如，添加晶种)。在一些实施例中，当浆液的干固体含量为至少约70％(按重量计)时，进行结晶的引发(例如，添加晶种)。在一些实施例中，当浆液的干固体含量为至少约80％(按重量计)时，进行结晶的引发(例如，添加晶种)。在一些实施例中，当浆液的干固体含量为约60％至约90％(按重量计)时，进行结晶的引发(例如，添加晶种)。在一些实施例中，当浆液的干固体含量为约70％至约90％(按重量计)时，进行结晶的引发(例如，添加晶种)。在一些实施例中，当浆液的干固体含量为约80％至约90％(按重量计)时，进行结晶的引发(例如，添加晶种)。在一些实施例中，当浆液的干固体含量为约80％至约88％(按重量计)时，进行结晶的引发(例如，添加晶种)。
[0112]
如果晶体生长潜力和粘度允许，则可以在引晶后继续蒸发。蒸发后，使结晶块经受冷却，同时混合直至晶体含量和粘度对于晶体分离是最佳的。通常将结晶块冷却至10℃至75℃的温度。然后可将结晶块在最终温度下混合一段时间，优选0.5小时至24小时，以达到最大结晶产率，之后例如通过过滤或离心分离晶体。本发明的过程通常包括洗涤晶体作为另外的步骤。洗涤通常结合从母液中分离晶体来进行。另外的洗涤可以通过混合洗涤溶剂和晶体饼之后分离晶体来进行。洗涤溶剂可以是水。
[0113]
在一些实施例中，进行一次或多次重结晶以增加x-mva纯度。重结晶可通过例如以下方式进行：将x-mva晶体溶解在水(通常为去离子水)中，使所得溶液相对于x-mva达到过饱和状态(经由例如蒸发)，并且使用上述冷却结晶方法进行引晶和结晶。
[0114]
在一些实施例中，通过对由初始结晶产生的母液进行结晶来增加产率。这种结晶可通过例如以下方式进行：使母液相对于x-mva达到过饱和状态(经由例如蒸发)，并且使用上述冷却结晶方法进行引晶和结晶。
[0115]
本说明书中描述的结晶不需要在溶液中存在有机溶剂。获得不含有机溶剂的结晶x-mva。在结晶步骤中在不添加任何有机溶剂的情况下产生的结晶x-mva基本上不含有机溶剂。
[0116]
尽管可以将有机溶剂添加到水性溶液中以改进结晶和晶体分离性能，但是这样添加有机溶剂具有缺点，诸如但不限于获得包含少量这些有机溶剂的晶体或纯化产物，这在商业组合物诸如个人护理组合物中是不希望的。
[0117]
mvl*一水合物的水溶剂结晶
[0118]
如本文所述，已经令人惊讶且出乎意料地发现，当通过本文所述的方法制备高纯度mvl浆液并且将其在低于23℃的温度下冷却数周时，自发形成了甲羟戊酸内酯一水合物(mvl*h2o)晶体。这些甲羟戊酸内酯一水合物(mvl*h2o)晶体可以用作晶种材料以进一步促进如本文所述的mvl*h2o的结晶。mvl*h2o结晶在低于熔点的温度下(包括在低于23℃、22℃、
21℃、20℃、19℃、18℃、17℃、16℃、15℃、14℃、13℃、12℃、11℃、10℃、9℃、8℃、7℃、6℃、5℃、4℃、3℃、2℃、1℃和低至0℃的温度下)完成。mvl*h2o的结晶可以在0℃以下直至低至溶液的凝固点进行。在本发明的一个实施例中，mvl*一水合物(mvl*h2o)的结晶从mvl纯度按ds计大于55％、优选大于70％、更优选大于80％、最优选大于90％并且尤其大于95％的水性溶液进行。结晶通常提供纯度按ds计大于65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、优选大于95％并且最优选大于99％的结晶mvl*h2o产物。
[0119]
在一个方面，由于实际原因，mvl*h2o的冷却结晶优于恒温结晶。恒温结晶需要非常高的引晶过饱和，这会导致过程的可控性低于冷却。mvl*h2o在结晶过程中释放大量的热，并且必须从系统中除去该热以达到希望的结晶产率。在一些情况下，像具有非常高的引晶过饱和一样，结晶是快速的并且结晶悬浮液的温度可能显著升高。这可以通过具有有效的冷却装置或利用较低的引晶过饱和和受控的冷却来克服。
[0120]
取决于溶液的mvl含量，可以首先将含有mvl的溶液蒸发至适当的干物质含量(例如，约65％至90％的ds)。浆液ds浓度必须足够高以具有结晶潜力(过饱和)。最小ds含量取决于浆液的温度和纯度。浆液的纯度越高，需要的浆液ds越低。如果ds太高，则结晶会延迟或晶体悬浮液变得太稠而无法进行有效的晶体分离。过饱和溶液可用mvl*h2o晶体的晶种进行引晶。晶种(如果使用)是干燥形式的晶体或者它们悬浮在溶剂中，优选地在水中，并且优选地例如通过粉碎或碾磨减小晶体尺寸。在引晶后，使结晶块经受冷却，同时混合直至结晶产率和粘度对晶体分离是最佳的。
[0121]
使mvl*h2o结晶的条件进一步描述于实例13-20中。
[0122]
在一个方面，可以在不添加任何额外水的情况下将甲羟戊酸内酯*一水合物(mvl*h2o)晶体升温到使得晶体变成液体的温度(诸如但不限于约23℃-30℃的室温)。这种液体包含约87％的mvl和13％的水。
[0123]
可以将甲羟戊酸内酯一水合物(mvl*h2o)晶体溶解在水中以产生高度纯化的mvl(》90％纯度)，其具有水样外观和粘度，具有很少或没有颜色。可以通过蒸发进一步浓缩该高度纯化的mvl溶液，同时保持水样外观。
[0124]
包含mva、x-mva、mvl和/或mvl*h2o的组合物
[0125]
结晶x-mva或包含结晶x-mva的组合物可用作例如膳食补充剂、婴儿和人营养品、药物和化妆品的成分。
[0126]
通过本说明书的过程纯化的mva、x-mva、mvl和/或mvl*h2o或包含本文所述的mva、x-mva、mvl和/或mvl*h2o的组合物可以用作例如膳食补充剂、个人护理组合物(诸如但不限于皮肤护理、口腔护理、毛发护理组合物)、药物和化妆品的成分。
[0127]
出于在个人护理行业中使用mva或mvl的目的，如果纯化产物是水透明的，具有很少或没有痕量的有色污染物存在，则具有更大的价值。如本文所述，由本文所述的方法产生的高度纯化的mvl产物具有水透明外观，具有很少或没有剩余颜色。
[0128]
用于局部施加的组合物(皮肤护理组合物)
[0129]
本发明还提供了通过本发明的方法获得的甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐和甲羟戊酸内酯一水合物，以及用于局部施加以用于皮肤护理、皮肤补充、毛发
护理和口腔护理的组合物，这些组合物包含所述甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物或以及它们的任何组合。
[0130]
如本文所用的术语“局部施加”是指对皮肤、粘膜、毛发或头皮的外部施加。
[0131]
如本文所用，术语“皮肤护理组合物”和“用于局部施加的组合物”在本文中可互换使用，并且是指能够为皮肤护理、皮肤补充、毛发护理和口腔护理提供有益效果的组合物，这些组合物包含至少一种选自由以下组成的组的皮肤护理有益剂(活性成分)：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合。
[0132]
在一个方面，术语“皮肤护理组合物”或“用于局部施加的组合物”包括能够提供皮肤护理有益效果的组合物，这些组合物包含有效量的至少一种选自由以下组成的组的皮肤护理有益剂(活性成分)：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合。
[0133]
如本文所用，术语“皮肤护理有益效果”是指用于局部施加的组合物(皮肤护理组合物)(该组合物包含有效量的选自由以下组成的组的皮肤护理有益剂(活性成分)：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合)在局部施加到皮肤、粘膜、毛发或头皮时所提供的有益效果，其中该有益效果选自由以下组成的组：皮肤保湿(维持或增加表皮的含水量，以及通过维持、恢复和/或加强皮肤屏障功能来保护皮肤免于脱水)、皮肤剥脱(也称为皮肤剥离、剥落、皮肤脱落)、皮肤表面重修、皮肤再生、皮肤更新、改善表皮细胞更新、防止或延缓皮肤老化迹象的出现、减少皮肤皱纹的出现、皮肤年轻化、加强皮肤屏障功能以及它们的任一种组合。
[0134]
组合物中有效量的选自由甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物或它们的任一种组合组成的组的活性成分是指有助于为皮肤护理、皮肤补充、毛发护理和口腔护理提供有益效果的活性成分的量。
[0135]
术语“用于局部施加的组合物”或“皮肤护理组合物”包括任何形式的组合物，诸如水性溶液、乳液、精华液、胶冻、膜剂、贴剂、面膜、撕拉式面膜、润肤露、局部保湿剂、乳膏、糊剂、香膏、软膏、润发油、凝胶、液体、喷雾剂、泡沫、套装、口腔护理、毛发护理或它们的任一种组合。
[0136]
可以使皮肤护理组合物与皮肤、粘膜、毛发或头皮的任何表面接触(将其施加到、施用到后者)。可以将皮肤护理组合物局部施加到皮肤上，并且这些组合物在本文中称为用于局部施加的组合物。
[0137]
如本文所用，“施用”或“接触”意指将一种或多种活性成分(包括选自由甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物和它们的任一种组合组成的组的活性成分)或一种或多种皮肤护理组合物引入个体的皮肤的动作。
[0138]
如本文所用，“使皮肤与皮肤护理组合物接触”、“使皮肤与用于局部施加的组合物接触”、“向皮肤施用用于局部施加的组合物”和“向皮肤施用皮肤护理组合物”可互换使用，并且是指将一种或多种选自由甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合组成的组的活性成分引入皮肤或者将一种或多种包含所述活性成分的组合物引入个体的皮肤的动作。
[0139]
施用一种或多种选自由甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合组成的组的活性成分或者将一种或多种包含所
述活性成分的组合物引入有需要的个体的皮肤包括将一种或多种活性成分/包含所述活性成分的组合物施加到或引入头皮、皮肤表面和体外或体内皮肤细胞。
[0140]
如本文所用，术语“加强皮肤屏障功能”、“改善皮肤屏障功能”、“增加皮肤屏障功能”、“改善皮肤屏障”和“增加皮肤屏障”在本文中可互换使用，并且是指由“更紧/更强”的皮肤(诸如但不限于其渗透性屏障)指示的皮肤屏障加强或皮肤屏障增加或者皮肤屏障功能增强或改善，并且其中皮肤限制或避免化合物(诸如微生物、污染物等)进入，而且其中皮肤限制或避免排出的水量，即皮肤屏障功能得到改善。
[0141]
如本文所用的术语“个体”意指具有将动物内部与外部分隔并限定动物内部的皮肤的动物。优选地，个体是哺乳动物，包括例如家畜(包括但不限于牛、马、猪和绵羊)和人类或鸟类诸如鸡。
[0142]
在一个实施例中，个体是人类。
[0143]
在一个实施例中，个体可以是雌性。
[0144]
在一个实施例中，个体可以是雄性。
[0145]
在一个实施例中，个体可以具有非二元性别。
[0146]
在一个实施例中，个体是健康个体。
[0147]
在一个实施例中，个体患有皮肤干燥、皮肤感染或任何其他导致皮肤脱水、皮肤发红、皮肤刺激、皮肤老化或皮肤皱纹的暂时性或慢性病症。
[0148]
在一个方面，该组合物中有效量的选自由甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合组成的组的活性成分是指有助于提供皮肤护理有益效果(诸如但不限于皮肤保湿、皮肤剥脱(也称为皮肤剥离、剥落、皮肤脱落)、皮肤表面重修、皮肤再生、皮肤更新、改善表皮细胞更新、防止或延缓皮肤老化迹象的出现、减少皮肤皱纹的出现、皮肤年轻化或加强皮肤屏障功能)的活性成分的量。
[0149]
在一个方面，相对于用于局部施加的组合物的总重量按重量计，所述组合物中有效量的选自由甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合组成的组的活性成分是介于0.01％至10.0％之间的活性成分。
[0150]
在一个方面，相对于所述组合物的总重量按重量计，有效量的选自由甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合组成的组的活性成分为至少约0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％直至10％。
[0151]
在一个实施例中，该组合物是用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的皮肤护理组合物，其包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合，其中所述组合物向所述个体的皮肤提供至少一种皮肤护理有益效果。
[0152]
在一个实施例中，该组合物是用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的皮肤护理组合物，其包含一种或多种皮肤病学或美容学上可接受的组分和有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合，其中所述组合物向所述个体的皮肤提供至少一种皮肤护理有益效果。
[0153]
在一个实施例中，该组合物是用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的皮肤护理组合物，其包含有效量的甲羟戊酸内酯，其中所述组合物向所述个体提供至少一种皮肤护理有益效果。所述组合物还可以包含一种或多种皮肤病学或美容学上可接受的组分。
[0154]
在一个实施例中，该组合物是用于加强皮肤屏障功能的皮肤护理组合物。加强皮肤屏障功能是改善或增加皮肤屏障功能或者增强或增加皮肤屏障的同义词。
[0155]
在一个实施例中，该组合物是用于提供皮肤保湿(增加皮肤含水量)的皮肤护理组合物。
[0156]
在一个实施例中，该组合物是用于提供皮肤剥脱的皮肤护理组合物。
[0157]
皮肤病学上可接受的组分可以是皮肤病学上可接受的载体，其相对于皮肤护理产品的总重量按重量计占约10％至约99％。
[0158]
本文所述的用于局部施加的组合物还可包含已知或以其他方式有效用于皮肤护理的一种或多种皮肤病学或美容学上可接受的组分，条件是这些任选的组分与本文所述的必要组分在物理上和化学上相容，或不会以其他方式不适当地损害产品稳定性、美观性或性能。此类任选组分的非限制性实例披露于international cosmetic ingredient dictionary[国际化妆品成分词典],第9版,2002和ctfa cosmetic ingredient handbook[ctfa化妆品成分手册],第10版,2004中。
[0159]
在一个方面，皮肤病学或美容学上可接受的组分是皮肤病学可接受的载体，其包含约10重量％至约99.9重量％、替代性地约50重量％至约95重量％以及替代性地约75重量％至约95重量％的皮肤病学上可接受的载体。适合与组合物一起使用的载体可包括例如在摩丝、滋补剂、凝胶、皮肤保湿剂和润肤露的配制中使用的那些。载体可包括水；有机油；有机硅，诸如挥发性有机硅、氨基或非氨基有机硅胶或油以及它们的混合物；矿物油；植物油，诸如橄榄油、蓖麻油、菜籽油、椰子油、小麦胚芽油、甜杏仁油、鳄梨油、澳洲坚果油、杏油、红花油、烛果油、假亚麻油、琼崖海棠油、柠檬油以及它们的混合物；蜡；以及有机化合物，诸如c2-c10烷烃、丙酮、甲基乙基酮、挥发性有机c1-c12醇、c1-c20酸和c1-c8醇的酯(诸如乙酸甲酯、乙酸丁酯、乙酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯)、二甲氧基乙烷、二乙氧基乙烷、c10-c30脂肪醇(诸如月桂醇、鲸蜡醇、硬脂醇和山嵛醇)；c10-c30脂肪酸，诸如月桂酸和硬脂酸；c10-c30脂肪酰胺，诸如月桂酸二乙醇酰胺；c10-c30脂肪烷基酯，诸如c10-c30脂肪烷基苯甲酸酯；羟丙基纤维素以及它们的混合物。在一个方面，载体包括水、脂肪醇、挥发性有机醇以及它们的混合物。其他载体可以由本领域普通技术人员配制。
[0160]
本文所述的用于局部施加的组合物还可包含约0.1％至约10％以及替代性地约0.2％至约5.0％的胶凝剂，以帮助向组合物提供希望的粘度。合适的任选胶凝剂的非限制性实例包括交联的羧酸聚合物；未中和的交联羧酸聚合物；未中和的改性交联羧酸聚合物；交联的乙烯/马来酸酐共聚物；未中和的交联乙烯/马来酸酐共聚物；未中和的交联烷基醚/丙烯酸酯共聚物；聚丙烯酸钠、矿物油和peg-1十三烷醇聚醚-6的未中和的交联共聚物；甲基乙烯基醚和马来酸酐的未中和的交联共聚物；疏水改性的非离子纤维素聚合物；疏水改性的乙氧基化氨基甲酸酯聚合物；以及它们的组合。在本文中，术语“未中和”意指任选的聚合物和共聚物胶凝剂材料含有未中和的酸单体。
[0161]
美容学上可接受的介质可含有脂肪物质，相对于产品的总重量，其比例通常为约
10重量％至约90重量％，其中脂肪相含有至少一种液体、固体或半固体脂肪物质。脂肪物质包括但不限于油、蜡、树胶和所谓的糊状脂肪物质。替代性地，产品可以是稳定分散体的形式，诸如油包水或水包油乳液。另外，皮肤护理产品可含有一种或多种常规美容学或皮肤病学添加剂或佐剂，包括但不限于抗氧化剂、防腐剂、填料、表面活性剂、uva和/或uvb防晒剂、芳香剂、增稠剂、润湿剂和阴离子、非离子或两性聚合物以及染料或颜料(着色剂)。
[0162]
皮肤病学上可接受的载体可以是含有至少一种乳化剂或至少一种表面活性剂或它们的任何组合的保湿剂制剂。
[0163]
用于局部施加的组合物还可以包含皮肤护理活性成分材料，包括防晒剂、保湿剂、润湿剂、皮肤有益剂、沉积剂诸如表面活性剂、闭塞剂、水分屏障、润滑剂、润肤剂、抗老化剂、抗静电剂、研磨剂、抗菌剂、调理剂、剥脱剂、芳香剂、增粘剂、盐、脂质、磷脂、维生素、泡沫稳定剂、ph调节剂、防腐剂、悬浮剂、硅油、硅酮衍生物、精油、油、脂肪、脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪醇、蜡、多元醇、烃以及它们的混合物。
[0164]
本文所述的皮肤护理组合物还可以是用于提供一种或多种皮肤护理有益效果的套装(诸如但不限于用于增加皮肤保湿的套装、用于增加皮肤剥脱的套装或用于提供抗老化的套装)的一部分。
[0165]
在一个方面，套装是包括以下项的套装：至少一种用于局部施加的组合物，该组合物包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合，其中所述组合物提供至少一种皮肤护理有益状况；以及向有需要的个体施用的书面说明。
[0166]
本发明还提供了用于提供诸如皮肤护理、皮肤补充、毛发护理、口腔护理的有益效果的方法，其中所述方法包括局部施加组合物，该组合物包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任何组合。
[0167]
更具体地，本发明披露了用于提供选自由以下组成的组的皮肤护理有益效果的方法：皮肤保湿、皮肤剥脱(也称为皮肤剥离、剥落、皮肤脱落)、皮肤表面重修、皮肤再生、皮肤更新、改善表皮细胞更新、防止或延缓皮肤老化迹象的出现(延缓或减少皮肤老化、抗老化)、减少皮肤皱纹的出现、皮肤年轻化、加强皮肤屏障功能以及它们的任一种组合。
[0168]
在一个实施例中，该方法是用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的方法，其包括使所述个体的皮肤与皮肤护理组合物接触，该皮肤护理组合物包含选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合。
[0169]
在一个实施例中，该方法是用于改善个体的皮肤的皮肤屏障功能(提供增加的皮肤屏障功能)的方法，所述方法包括使所述个体的皮肤与皮肤护理组合物接触，该皮肤护理组合物包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸内酯一水合物或它们的任一种组合，其中相对于与缺少所述有效量的所述活性成分的安慰剂组合物接触的对照皮肤，与所述组合物接触的皮肤的皮肤屏障功能增加(加强)。
[0170]
在一个实施例中，该方法是用于向个体的皮肤提供增加的皮肤剥脱的方法，所述方法包括使所述个体的皮肤与皮肤护理组合物接触，该皮肤护理组合物包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸内酯一水合
物或它们的任一种组合，其中相对于与缺少所述有效量的所述活性成分的安慰剂组合物接触的对照皮肤，所述有效量的所述活性成分导致增加的皮肤剥脱。
[0171]
在一个实施例中，该方法是用于增加个体的皮肤的皮肤保湿(皮肤的含水量)的方法，所述方法包括使所述个体的皮肤与皮肤护理组合物接触，该皮肤护理组合物包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分以及一种或多种皮肤病学或美容学上可接受的组分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸内酯一水合物或它们的任一种组合，其中相对于与缺少所述有效量的所述活性成分的安慰剂组合物接触的皮肤，与所述组合物接触的皮肤的皮肤保湿增加。
[0172]
在一个方面，本披露涉及由内在和外在因素引起的皮肤老化，这些因素诸如但不限于氧化性损伤、dna损伤、dna修复受损、细胞分裂受损、过度炎症、免疫疾病、过度细胞死亡、阳光、晒伤、胶原损伤、弹性蛋白损伤、衰老、端粒缩短、抗氧化剂酶的表达受损、抗氧化剂酶的活性受损、红外辐射、热、激素原因、营养差、温度、吸烟、应激、睡眠剥夺、污染或饮酒。
[0173]
在一个实施例中，个体的皮肤的皮肤护理有益效果是通过向皮肤施用有效量的甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合来实现所述个体的皮肤的脂质分布变化而获得的。
[0174]
在另一个实施例中，个体的皮肤的皮肤护理有益效果是通过向所述个体的皮肤施用有效量的甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合来实现选自由以下组成的组的至少一种脂质分布变化而获得的：己糖基神经酰胺(hexcer)增加、胆固醇酯(ce)增加、三酰基甘油(tag)增加、磷脂酰胆碱(pc)增加、磷脂酸酯(pa)增加、磷脂酰胆碱-醚(pc-o)增加、二酰基甘油(dag)减少、pg/cl减少、磷脂酰乙醇胺-醚(lpe、lpe-o、pe-o)减少、磷脂酰肌醇(pi)减少以及它们的任何组合。
[0175]
在一个实施例中，个体的皮肤的皮肤护理有益效果是通过向皮肤施用有效量的甲羟戊酸内酯来实现所述个体的皮肤的脂质分布变化而获得的。
[0176]
在另一个实施例中，个体的皮肤的皮肤护理有益效果是通过向所述个体的皮肤施用有效量的甲羟戊酸内酯来实现选自由以下组成的组的至少一种脂质分布变化而获得的：己糖基神经酰胺(hexcer)增加、胆固醇酯(ce)增加、三酰基甘油(tag)增加、磷脂酰胆碱(pc)增加、磷脂酸酯(pa)增加、磷脂酰胆碱-醚(pc-o)增加、二酰基甘油(dag)减少、pg/cl减少、磷脂酰乙醇胺-醚(lpe、lpe-o、pe-o)减少、磷脂酰肌醇(pi)减少以及它们的任何组合。
[0177]
本文披露的组合物和方法的非限制性实例如下：
[0178]
1.一种用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的皮肤护理组合物，其包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合，其中所述组合物向所述个体的皮肤提供至少一种皮肤护理有益效果。
[0179]
1b.一种皮肤护理组合物，其包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合，用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果。
[0180]
1c.一种用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的皮肤护理组合物，其包含有效量的甲羟戊酸内酯，其中所述组合物向所述个体提供至少一种皮肤护理有益效果。
[0181]
1d.一种用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的皮肤护理组合物，其包含有效量的甲羟戊酸，其中所述组合物向所述个体提供至少一种皮肤护理有益效果。
[0182]
1e.一种用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的皮肤护理组合物，其包含有效量的甲羟戊酸盐，其中所述组合物向所述个体提供至少一种皮肤护理有益效果。
[0183]
1f.一种用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的皮肤护理组合物，其包含有效量的甲羟戊酸内酯一水合物，其中所述组合物向所述个体提供至少一种皮肤护理有益效果。
[0184]
1g.一种组合物，其包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合，用于治疗个体的皮肤障碍，其特征在于，该组合物用于局部施用。
[0185]
1h.一种组合物，其包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合，用于在个体中提供至少一种皮肤有益效果，其特征在于，该组合物用于局部施用。
[0186]
1i.如实施例1h所述的组合物，其中该皮肤护理有益效果选自由以下组成的组：皮肤保湿、皮肤剥脱(也称为皮肤剥离、剥落、皮肤脱落)、皮肤表面重修、皮肤再生、皮肤更新、改善表皮细胞更新、防止或延缓皮肤老化迹象的出现(抗老化)、减少皮肤皱纹的出现、皮肤年轻化、加强皮肤屏障功能或它们的任一种组合。
[0187]
1j.一种用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的皮肤护理组合物，其包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合，其中所述组合物向所述个体的皮肤提供至少一种皮肤护理有益效果，并且其中所述活性成分通过本文所述的方法中的任一种产生。
[0188]
2.如实施例1-1i中任一项所述的组合物，其进一步包含一种或多种皮肤病学或美容学上可接受的组分。
[0189]
2b.如实施例1-1i中任一项所述的组合物，其进一步包含至少一种选自由以下组成的组的另外的化合物：防腐剂、ph调节剂和一种或多种皮肤病学或美容学上可接受的组分。
[0190]
3.如实施例1-1i中任一项所述的组合物，其中相对于所述组合物的总重量按重量计，所述有效量的选自由甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸盐、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合组成的组的活性成分介于0.01％至10.0％之间。
[0191]
3b.如实施例1c所述的皮肤护理组合物，其中相对于所述组合物的总重量按重量计，所述有效量的甲羟戊酸内酯介于0.01％至10.0％之间。
[0192]
3c.如实施例1d所述的皮肤护理组合物，其中相对于所述组合物的总重量按重量计，所述有效量的甲羟戊酸介于0.01％至10.0％之间。
[0193]
3d.如实施例1e所述的皮肤护理组合物，其中相对于所述组合物的总重量按重量计，所述有效量的甲羟戊酸盐介于0.01％至10.0％之间。
[0194]
3e.如实施例1f所述的皮肤护理组合物，其中相对于所述组合物的总重量按重量计，所述有效量的甲羟戊酸内酯一水合物介于0.01％至10.0％之间。
[0195]
3f.一种皮肤护理组合物，相对于所述组合物的总重量按重量计，该组合物包含介
于0.01％至10.0％之间的甲羟戊酸内酯。
[0196]
3g.一种皮肤护理组合物，相对于所述组合物的总重量按重量计，该组合物包含介于0.01％至10.0％之间的甲羟戊酸。
[0197]
4.如实施例1-3g中任一项所述的皮肤护理组合物，其中该至少一种皮肤护理有益效果选自由以下组成的组：皮肤保湿、皮肤剥脱(也称为皮肤剥离、剥落、皮肤脱落)、皮肤表面重修、皮肤再生、皮肤更新、改善表皮细胞更新、防止或延缓皮肤老化迹象的出现(抗老化)、减少皮肤皱纹的出现、皮肤年轻化、加强皮肤屏障功能或它们的任一种组合。
[0198]
5.如实施例4所述的皮肤护理组合物，其中该至少一种皮肤护理有益效果是增加(加强)皮肤屏障功能。
[0199]
6.如实施例4所述的皮肤护理组合物，其中该至少一种皮肤护理有益效果是皮肤保湿(增加皮肤含水量)。
[0200]
7.如实施例4所述的皮肤护理组合物，其中该至少一种皮肤护理有益效果是皮肤剥脱。
[0201]
7b.一种用于个体的皮肤的皮肤剥脱治疗的皮肤护理组合物，其包含皮肤病学上可接受的载体以及浓度为至少0.01％、0.1％、0.2％、0.3％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％至至少10％的甲羟戊酸内酯和/或甲羟戊酸。
[0202]
8.如实施例1或实施例4所述的皮肤护理组合物，其中该组合物改变皮肤的脂质分布(相对于用缺乏所述甲羟戊酸内酯的相同组合物处理的对照皮肤)。
[0203]
8b.如实施例1或8所述的皮肤护理组合物，其中相对于用缺乏所述甲羟戊酸内酯的相同组合物处理的对照皮肤，用所述有效量的甲羟戊酸内酯处理的所述皮肤显示出选自由以下组成的组的至少一种脂质分布变化：己糖基神经酰胺(hexcer)增加、胆固醇酯(ce)增加、三酰基甘油(tag)增加、磷脂酰胆碱(pc)增加、磷脂酸酯(pa)增加、磷脂酰胆碱-醚(pc-o)增加、二酰基甘油(dag)减少、pg/cl减少、磷脂酰乙醇胺-醚(lpe、lpe-o、pe-o)减少、磷脂酰肌醇(pi)减少以及它们的任何组合。
[0204]
8c.如实施例1或实施例4所述的皮肤护理组合物，其中该组合物保持或增加皮肤机械和生物学特性，从而改善健康外观，也称为抗老化作用。
[0205]
8d.如实施例1-8b中任一项所述的皮肤护理组合物，其中所述组合物是透明的水性溶液。
[0206]
8e.如前述实施例中任一项所述的皮肤护理组合物，其中所述甲羟戊酸内酯由甲羟戊酸内酯一水合物源或甲羟戊酸源制备。
[0207]
9.如实施例1-8d中任一项所述的皮肤护理组合物，其中该组合物选自由以下组成的组：水性溶液、乳液、精华液、胶冻、膜剂、贴剂、面膜、撕拉式面膜、润肤露、局部保湿剂、乳膏、糊剂、香膏、软膏、润发油、凝胶、液体、喷雾剂、泡沫、套装、防晒霜、婴儿护理品、毛发护理品或它们的任一种组合。
[0208]
10.一种用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的方法，其包括使所述个体的皮肤与皮肤护理组合物接触，该皮肤护理组合物包含选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合。
[0209]
10b.一种用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的方法，其包括向所述个体的皮肤施用皮肤护理组合物，该皮肤护理组合物包含有效量的选自由以下组成的组的活
性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合。
[0210]
10c.一种用于在个体中提供至少一种皮肤护理有益效果的方法，其包括使所述个体的皮肤与一种或多种皮肤病学或美容学上可接受的组分以及选自以下组成的组的活性成分接触：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合。
[0211]
10d.有效量的选自由甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸内酯一水合物以及它们的任一种组合组成的组的活性成分在皮肤护理中的用途，其中所述组合物提供至少一种皮肤护理有益效果。
[0212]
10e.如实施例10d所述的用途，其中该至少一种皮肤护理有益效果选自由以下组成的组：皮肤保湿、皮肤剥脱(也称为皮肤剥离、剥落、皮肤脱落)、皮肤表面重修、皮肤再生、皮肤更新、改善表皮细胞更新、防止或延缓皮肤老化迹象的出现、减少皮肤皱纹的出现、皮肤年轻化、加强皮肤屏障功能或它们的任一种组合。
[0213]
11.如实施例10所述的方法，其中该至少一种皮肤护理有益效果选自由以下组成的组：皮肤保湿、皮肤剥脱(也称为皮肤剥离、剥落、皮肤脱落)、皮肤表面重修、皮肤再生、皮肤更新、改善表皮细胞更新、防止或延缓皮肤老化迹象的出现(抗老化)、减少皮肤皱纹的出现、皮肤年轻化、加强皮肤屏障功能以及它们的任一种组合。
[0214]
12.一种用于改善(增加)个体的皮肤的皮肤屏障功能(提供改善的(增加的)皮肤屏障功能)的方法，所述方法包括使所述个体的皮肤与皮肤护理组合物接触，该皮肤护理组合物包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸内酯一水合物或它们的任一种组合。
[0215]
12a.一种用于改善(增加)个体的皮肤的皮肤屏障功能(提供改善的(增加的)皮肤屏障功能)的方法，所述方法包括使所述个体的皮肤与皮肤护理组合物接触，该皮肤护理组合物包含有效量的甲羟戊酸内酯。
[0216]
12b.一种用于改善(增加)个体的皮肤的皮肤屏障功能(提供改善的(增加的)皮肤屏障功能)的方法，所述方法包括使所述个体的皮肤与皮肤护理组合物接触，该皮肤护理组合物包含有效量的甲羟戊酸。
[0217]
12c.如实施例12所述的方法，其中相对于与缺少所述有效量的所述活性成分的安慰剂组合物接触的对照皮肤，与所述组合物接触的该皮肤的该皮肤屏障功能增加(加强)。
[0218]
12d.如实施例12所述的方法，其中该皮肤护理组合物进一步包含一种或多种皮肤病学或美容学上可接受的组分。
[0219]
13.一种用于向个体的皮肤提供增加的皮肤剥脱的方法，所述方法包括使所述个体的皮肤与皮肤护理组合物接触，该皮肤护理组合物包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸内酯一水合物或它们的任一种组合，其中相对于与缺少所述有效量的所述活性成分的安慰剂组合物接触的对照皮肤，所述有效量的所述活性成分导致增加的皮肤剥脱。
[0220]
13b.一种用于向个体提供改善的皮肤剥落的方法，所述方法包括使所述个体的皮肤与皮肤护理组合物接触，该皮肤护理组合物包含有效量的选自由以下组成的组的活性成分：甲羟戊酸内酯、甲羟戊酸、甲羟戊酸酯、甲羟戊酸内酯一水合物或它们的任一种组合，其中相对于与缺少所述有效量的所述活性成分的安慰剂组合物接触的对照皮肤，所述有效量的所述活性成分导致增加的皮肤剥落。
8巴、25℃、ph 6-8和10％-25％回收率条件下。
[0233]
来自基于大肠杆菌的甲羟戊酸钠发酵的超滤渗透物用作进料。目的是使甲羟戊酸钠通过，同时保留杂质(其他盐、颜色、消泡剂、蛋白质)。
[0234]
将63.4kg进料进给到70升进料罐中。基于蔗糖rds，干进料浓度为6.8g/100g，电导率为17.7ms/cm，并且ph为7.8。从dl膜收集渗透物，并将来自xn45膜的渗透物再循环回到进料罐。进料的组成如表1所示，其中hplc和ic分析基于％/蔗糖rds给出。
[0235]
表1.进料组成(％)
[0236]
甲羟戊酸钠，％66.4葡萄糖，％*0.6乙酸盐，％**2.1磷酸盐，％**1.6硫酸盐，％**0.5其他，％28.8
[0237]
*hplc(rezex roa-有机酸h (8％)柱)。
[0238]
**离子色谱法
[0239]
将进料保持在50℃-68℃，并使用水进行渗滤。过滤压力为20-33巴，并控制浓缩物ds(干物质)浓度以保持通量高于7kg/m2/h(观察到的最小通量点)。
[0240]
分批过滤后，收集三种渗透物级分和最终浓缩物级分。渗透物级分和最终浓缩物的结果(包括基于％/蔗糖rds的hplc和ic分析)示于表2中。
[0241]
表2.hplc分析
[0242] 总渗透物1总渗透物2总渗透物3最终浓缩物质量，kg31.031.64.517.1干固体，g/100g2.03.63.413.9电导率，ms/cm8.111.310.926.2甲羟戊酸钠，％*52.186.986.263.3葡萄糖，％*1.22.00.90.4乙酸盐，％**7.62.70.70.3磷酸盐，％**0.50.81.12.0硫酸盐，％**0.10.10.10.8其他，％38.67.511.033.2
[0243]
*hplc(rezex roa-有机酸h (8％)柱)。
[0244]
**离子色谱法
[0245]
计算的甲羟戊酸酯总产率为49.9％。平均渗透物甲羟戊酸钠纯度为75.6％。
[0246]
根据进料和浓缩物样品计算的硫酸盐去除为78.1％，磷酸盐去除为71.0％。从dl膜的5个点测量甲羟戊酸钠保留率，平均值为76.7％。收集41kg渗透物后，从第4个取样点平行测量dl和xn45甲羟戊酸酯保留率，dl和xn45的保留率分别为71.0％和41.8％。
[0247]
实例2
[0248]
利用开放纳滤(nf)膜的甲羟戊酸钠液体纳滤
[0249]
该实例描述了包含有机酸或其盐的水性溶液的纳滤，诸如使用开放纳滤膜的甲羟
戊酸钠液体纳滤。
[0250]
工艺设备包括板框式过滤单元(alfa laval labstak m20)、进料泵和渗滤泵、热交换器、冷却单元、100升进料箱以及入口和出口压力计和压力控制阀。总膜面积为0.72m2。安装的膜为xn45(/迈纳德公司，截留分子量为约300-500道尔顿，在25℃下mgso4保留率为90％-96％)。mgso4保留率被指定在1-2g/l浓度、7-8巴、25℃、ph 6-8和10％-25％回收率条件下。
[0251]
来自基于大肠杆菌的甲羟戊酸钠发酵的超滤渗透物用作进料。目的是使甲羟戊酸钠通过，同时保留杂质(其他盐、颜色、消泡剂、蛋白质)。
[0252]
将80.0kg进料进给到100升进料罐中。基于蔗糖rds，进料浓度为6.6g/100g。用naoh将ph调节至8.8。测得消泡剂foamblast 882浓度为1337mg/l。进料的组成如表3所示，其中hplc和ic分析基于％/蔗糖rds给出。
[0253]
表3.进料组成(％)
[0254]
甲羟戊酸钠，％*55.6葡萄糖，％*0.8乙酸盐，％**2.2磷酸盐，％**1.1硫酸盐，％**0.5其他，％39.8
[0255]
*hplc(rezex roa-有机酸h (8％)柱)。
[0256]
**离子色谱法
[0257]
将进料保持在46℃-51℃。过滤压力为10-25巴，用于控制通量高于7kg/m2/h(观察到的最小通量点)。
[0258]
分批过滤后，收集两种渗透物级分和最终浓缩物级分。渗透物级分和最终浓缩物的结果(包括基于％/蔗糖rds的hplc和ic分析)示于表4中。
[0259]
表4.hplc分析
[0260] 总渗透物1总渗透物2最终浓缩物质量，kg67.39.55.3干固体，g/100g4.18.616.3甲羟戊酸钠，％*65.369.335.1葡萄糖，％*1.00.70.6乙酸盐，％**3.41.30.3磷酸盐，％**0.40.62.3硫酸盐，％**0.20.10.9其他，％29.728.060.8
[0261]
*hplc(rezex roa-有机酸h (8％)柱)。
[0262]
**离子色谱法
[0263]
计算的甲羟戊酸酯总产率为82.1％。从29.5％浓度的蒸发渗透物样品测量的消泡剂浓度为84.4mg/l，意味着从产物渗透物级分中除去99％的消泡剂。测得的最终浓缩物消
泡剂浓度为13230.0mg/l。从3个点测量甲羟戊酸钠保留率，平均值为23.6％。
[0264]
实例3
[0265]
利用开放纳滤(nf)膜的甲羟戊酸钠液体纳滤
[0266]
该实例描述了包含有机酸或其盐的水性溶液的纳滤，诸如使用开放纳滤膜的甲羟戊酸钠液体纳滤。
[0267]
工艺设备包括板框式过滤单元(alfa laval labstak m20)、进料泵和渗滤泵、热交换器、冷却单元、100升进料箱以及入口和出口压力计和压力控制阀。总膜面积为0.72m2。安装的膜为xn45(/迈纳德公司，截留分子量为约300-500道尔顿，在25℃下mgso4保留率为90％-96％)。mgso4保留率被指定在1-2g/l浓度、7-8巴、25℃、ph 6-8和10％-25％回收率条件下。
[0268]
来自基于大肠杆菌的甲羟戊酸钠发酵的超滤渗透物用作进料。目的是使甲羟戊酸钠通过，同时保留杂质(其他盐、颜色、消泡剂、蛋白质)。
[0269]
将79.7kg进料进给到100升进料罐中。进料浓度为7.0g/100g。用50克30％naoh将ph调节至8.25。进料的组成如表5所示，其中hplc分析基于％/蔗糖rds给出(表6)。
[0270]
表5.进料组成(％)
[0271]
甲羟戊酸钠，％*65.1葡萄糖，％*0.0乙酸盐，％**1.8磷酸盐，％**0.3硫酸盐，％**0.5其他，％32.3
[0272]
*hplc(rezex roa-有机酸h (8％)柱)。
[0273]
**离子色谱法
[0274]
将进料保持在46℃-51℃。过滤压力为10-25巴，用于控制通量高于7kg/m2/h(观察到的最小通量点)。
[0275]
分批过滤后，收集渗透物级分和最终浓缩物级分。将部分总渗透物蒸发至28.7％干固体。渗透物级分和最终浓缩物的结果(包括基于％/蔗糖rds的hplc分析)示于表6中。
[0276]
表6.hplc分析
[0277] 总渗透物最终浓缩物蒸发渗透物质量，kg75.04.7-干固体，g/100g6.117.630.2甲羟戊酸钠，％*69.347.675.1乙酸盐，％**2.10.42.5磷酸盐，％**0.10.50.2硫酸盐，％**0.30.90.4其他，％28.350.521.8
[0278]
*hplc(rezex roa-有机酸h (8％)柱)，**ic
[0279]
计算的甲羟戊酸酯总产率为86.8％。
[0280]
实例4
[0281]
利用开放螺旋缠绕纳滤(nf)膜的甲羟戊酸钠液体纳滤
[0282]
该实例描述了包含有机酸或其盐的水性溶液的纳滤，诸如使用开放螺旋缠绕纳滤膜的甲羟戊酸钠液体纳滤。
[0283]
工艺设备包括板框式过滤单元(alfa laval labstak m20)、进料泵和渗滤泵、热交换器、冷却单元、1000升进料箱以及入口和出口压力计和压力控制阀。总膜面积为14.8m2。安装的膜为具有31密耳垫片的4040xn45(/迈纳德公司，截留分子量为约300-500道尔顿，在25℃下mgso4保留率为90％-96％)。mgso4保留率被指定在1-2g/l浓度、7-8巴、25℃、ph 6-8和10％-25％回收率条件下。
[0284]
来自基于大肠杆菌的甲羟戊酸钠发酵的超滤渗透物用作进料。目的是使甲羟戊酸钠通过，同时保留杂质(其他盐、颜色、消泡剂、蛋白质)。
[0285]
将600kg进料进给到1000升进料罐中。进料浓度为6.7g/100g。用30％naoh将ph调节至8.5。进料的组成如表7所示，其中hplc分析基于％/蔗糖rds给出。
[0286]
表7.进料组成(％)
[0287]
甲羟戊酸钠，％64.5乙酸盐，％1.2其他，％34.3
[0288]
将进料保持在45℃-52℃。过滤压力为10-25巴，用于控制通量高于5kg/m2/h(观察到的最小通量点)。
[0289]
分批过滤后，收集渗透物级分和最终浓缩物级分。将总渗透物蒸发至39.1％干固体。渗透物级分和最终浓缩物的结果(包括基于％/蔗糖rds的hplc分析)示于表8中。
[0290]
表8.hplc分析
[0291] 总渗透物最终浓缩物蒸发渗透物质量，kg606.045-干固体，g/100g5.516.739.1甲羟戊酸钠，％68.852.275.5乙酸盐，％1.80.71.9其他，％29.447.122.6
[0292]
计算的甲羟戊酸酯总产率为87.5％。
[0293]
实例5
[0294]
甲羟戊酸钠(na-mva)的水溶剂结晶
[0295]
该实例描述了有机酸或其盐的水溶剂结晶(诸如甲羟戊酸钠(na-mva)的水溶剂结晶)以及甲羟戊酸钠晶种的制备。
[0296]
结晶进料材料是包含甲羟戊酸钠的水性浆液。浆液的甲羟戊酸钠纯度按ds计为96％。包含按ds计为≥95％的甲羟戊酸钠的水性浆液可以通过将已知的可商购获得的甲羟戊酸钠盐溶解在去离子水中或通过将已知的可商购获得的甲羟戊酸钠盐与根据实例1-4制备的包含甲羟戊酸钠的纳滤渗透物混合来产生。
[0297]
在70℃的温度下蒸发进料浆液(rotavapor r-151)。当ds(干物质)为约54％时，通
过自发成核形成晶体。成核后在70℃下继续蒸发2hr，直至晶体块的ds为81.8％。
[0298]
将蒸发的晶体块移至2升冷却结晶器中。将晶体块在70℃下保持1hr，然后在连续搅拌下在20hr内冷却至40℃的温度。
[0299]
将930g所得晶体块与20ml洗涤水(分批式离心机，篮直径22.5cm，3500rpm，5min)一起离心。离心中的甲羟戊酸酯产率为45％，离心饼的甲羟戊酸钠纯度按ds计为≥98％，并且离心母液的甲羟戊酸钠纯度按ds计为94％。
[0300]
将晶体饼在加热室中在60℃下干燥19hr。干燥饼的含水量为≤0.2重量％。
[0301]
根据该过程制备的甲羟戊酸钠晶体在实例6、7和8中用作晶种。在使用之前，在瓷磨机中研磨晶体。
[0302]
实例6
[0303]
甲羟戊酸钠(na-mva)的水溶剂结晶
[0304]
该实例描述了有机酸或其盐的水溶剂结晶，诸如甲羟戊酸钠(na-mva)的水溶剂结晶。
[0305]
结晶进料材料是根据实例4制备的蒸发纳滤渗透物。在结晶之前，用活性炭粉末处理浆液以除去颜色。通过将600g norit dx 1碳粉配量到76kg蒸发后浆液(约20g碳粉/1kg ds)中进行碳处理。将浆液加热至50℃的温度，并在恒温下保持搅拌45min。然后用助滤剂过滤(seitz深度过滤器，1.1kg kenite 300助滤剂)将碳粉与浆液分离。所得浆液的甲羟戊酸钠纯度按ds计为73％，颜色为6300icumsa，并且ds为24.1％。
[0306]
将41kg经碳处理的进料浆液蒸发至86.0％的ds(luwa薄膜蒸发器nl3-210/1600/10和rotavapor r-153蒸发器)。在蒸发过程中添加4g10％struktol j 650消泡剂以避免起泡。将11.6kg所得浆液移至10升冷却结晶器中，并在70℃的温度下引晶两次：首先，用0.3g甲羟戊酸钠干晶种(根据实例5制备)引晶，然后在第一次引晶0.6hr后用2.0g甲羟戊酸钠干晶种引晶。第一次引晶引起非常少的晶体形成。
[0307]
将引晶的浆液在连续搅拌下在16hr内冷却至48℃的温度。在冷却至48℃后，将晶体块在48℃下保持2hr。
[0308]
将10.7kg所得晶体块与170ml洗涤水(分批式离心机，篮直径40.5cm，2050rpm，10min)一起离心。离心中甲羟戊酸酯的收率为33％。离心饼的甲羟戊酸钠纯度按ds计为94％，未干燥饼的含水量为5.3重量％，并且颜色为5200icumsa。离心母液的甲羟戊酸钠纯度按ds计为68％，并且颜色为82000icumsa。
[0309]
实例7
[0310]
甲羟戊酸钠(na-mva)的水溶剂结晶
[0311]
该实例描述了有机酸或其盐的水溶剂结晶，诸如甲羟戊酸钠(mva)的水溶剂结晶。
[0312]
结晶进料材料是根据实例4制备的蒸发纳滤渗透物，根据实例6中所述的程序用活性炭对其进行处理(20g norit dx 1碳粉/1kg ds，接触时间45min，接触温度50℃，通过使用seitz深度过滤器利用kenite 300助滤剂分离碳粉)。进料的甲羟戊酸钠纯度按ds计为73％，并且颜色为6300icumsa。
[0313]
将进料浆液蒸发至86.2％的ds(luwa薄膜蒸发器nl3-210/1600/10蒸发器和rotavapor r-153蒸发器)。将11.7kg所得浆液移至10升冷却结晶器中，并在69℃的温度下用2.0g甲羟戊酸钠干晶种(根据实例5制备)引晶。将引晶的浆液在连续搅拌下在16hr内冷
却至44℃的温度。然后通过添加去离子水将晶体块稀释至85.4％的ds。将稀释的晶体块在3hr内冷却至40℃的温度，并在40℃下保持2hr。
[0314]
将10.9kg所得晶体块与170ml洗涤水(分批式离心机，篮直径40.5cm，2050rpm，10min)一起离心。离心中甲羟戊酸酯的收率为37％。离心饼的甲羟戊酸钠纯度按ds计为95％，未干燥饼的含水量为7.0重量％，并且颜色为1100icumsa。离心母液的甲羟戊酸钠纯度按ds计为67％，并且颜色为14000icumsa。
[0315]
实例8
[0316]
甲羟戊酸钠(na-mva)的水溶剂结晶
[0317]
该实例描述了有机酸或其盐的水溶剂结晶，诸如甲羟戊酸钠(na-mva)从通过将晶体饼溶解在去离子水中制备的浆液中的水溶剂结晶。
[0318]
将来自实例6和实例7的甲羟戊酸钠晶体合并，并溶解在去离子水中。根据实例6中所述的程序用活性炭处理所得溶液(20g norit dx 1碳粉/1kg ds，接触时间45min，接触温度50℃，通过使用buchner过滤利用kenite 300助滤剂分离碳粉)，通过0.2μm无菌过滤器过滤，并且蒸发至83.5％的ds(rotavapor r-151蒸发器)。浆液的甲羟戊酸钠纯度按ds计为96％，并且颜色为1300icumsa。
[0319]
将5.6kg蒸发后浆液移至6升冷却结晶器中，并在68℃的温度下用1.6g甲羟戊酸钠干晶种(根据实例5制备)引晶。将引晶的浆液在连续搅拌下在18hr内冷却至40℃的温度。在冷却至40℃后，将晶体块在40℃下保持4hr。
[0320]
将5.1kg所得晶体块与150ml洗涤水(分批式离心机，篮直径40.5cm，2050rpm，10min)一起离心。离心中甲羟戊酸酯的收率为42％。离心饼的甲羟戊酸钠纯度按ds计为≥98％，未干燥饼的含水量为1.5重量％，并且颜色为100icumsa。离心母液的甲羟戊酸钠纯度按ds计为94％，并且颜色为3400icumsa。
[0321]
实例9.
[0322]
结晶na-mva到甲羟戊酸内酯(mvl)的阳离子交换
[0323]
该实例描述了溶解的na-mva晶体的液体溶液的阳离子交换以产生包含甲羟戊酸酯(mvl)的稀液体，其可以任选地通过蒸发而浓缩。
[0324]
工艺设备包括内径为45mm且总长度为1000mm的夹套玻璃柱、置于柱上方的进料容器、柱出口的蠕动泵和b
ü
chi旋转蒸发器r200旋转实验室蒸发器。将1升dowex 88强酸阳离子离子交换树脂装入柱中，得到约700mm的床长。通过在25℃温度下使用4升(4倍床体积)的5％h2so4以2bv/h的流速将树脂反洗并再生为h

形式。
[0325]
将来自基于水的结晶过程的纯度为约98％/ds的甲羟戊酸钠晶体溶解在水中以形成24.2％的溶液。目的是交换钠阳离子并产生纯的甲羟戊酸或甲羟戊酸内酯浆液。
[0326]
使957克进料溶液在室温(约25℃)下以1bv/h的速率通过柱，并且使用水继续洗脱。进料的ph为9.78，并且电导率为39.4ms/cm。当柱输出白利糖度为0.4％时开始产物收集，并且当输出白利糖度为1.2％时结束产物收集。收集到1322克轻微着色的产物。将柱再次再生为h

形式，并使材料以1bv/h的速率在室温(约25℃)下通过柱。当柱输出白利糖度为3.0％时开始产物收集，并且当输出白利糖度为1.4％时结束产物收集。收集到1641克无色的产物。将材料在旋转蒸发器中蒸发至99.1％kf-ds，mvl纯度为95.5％/ds。
[0327]
进料和离子交换(iex)产物的结果(包括基于％/干物质的hplc分析)示于表9中。
[0328]
表9.hplc分析
[0329][0330]
计算的iex过程的总甲羟戊酸内酯产率为95.6％。
[0331]
根据该过程产生的包含甲羟戊酸内酯的浆液的比旋光度为-34.7
°
(水，c＝1，20℃)。
[0332]
实例10.
[0333]
na-mva溶液到甲羟戊酸内酯(mvl)的阳离子交换
[0334]
该实例描述了含有na-mva的水性溶液的阳离子交换以产生包含甲羟戊酸酯(mvl)的水性溶液，其可以任选地通过蒸发而浓缩。
[0335]
工艺设备包括100升罐、seitz深度过滤器、三个内径为130mm且总长度为1500mm的夹套玻璃柱、置于柱上方的进料容器、柱出口的蠕动泵和luwa刮膜蒸发器。将13升dowex 88强酸阳离子离子交换树脂(陶氏公司(dow))装入每个柱中，得到约1000mm的床长。通过在25℃温度下使用130升(约3.3倍床体积)的5％h2so4以2bv/h的流速将树脂连续反洗并再生为h

形式。
[0336]
目的是交换钠阳离子并产生甲羟戊酸或甲羟戊酸内酯浆液以进行进一步纯化。使用粉状活性炭从iex进料中除去可能沉淀的颜色。
[0337]
将na-mva纯度为75.5％/ds且颜色为10986icumsa单位的纳滤渗透物蒸发至39.1％白利糖度。将76.2kg溶液加热至50℃-60℃的温度，并添加2％/ds的norit dx1粉状活性炭且混合45min。使用过滤面积为0.56m2的t2600过滤片(颇尔公司(pall))和1kg/m2的kenite 300(英格瓷过滤公司(imerys filtration))硅藻土助滤剂作为预涂层来过滤悬浮液。将110升白利糖度为24.1％的滤液蒸发成颜色为6496icumsa单位的53％白利糖度溶液。将14.8kg该材料稀释至39.8％白利糖度用于iex进料并加热至50℃。
[0338]
使20.05kg进料溶液在50℃下以2bv/h的速率通过柱，并使用水继续洗脱。当最后的柱输出白利糖度为0.5％时开始产物收集，并且当输出白利糖度为4.0％并且ph为2.5时结束产物收集。将产物收集成两个级分。合并级分并蒸发。蒸发的合并iex产物的颜色为2362icumsa单位，并且mvl纯度为约76％/ds。
[0339]
进料和iex产物的结果列于表10中。
[0340]
表10.进料和iex产物
[0341] 进料iex产物1iex产物2质量，kg20.118.117.9干燥固体，(kf-ds)39.812.022.7
电导率，ms/cm32.34.13.9ph8.51.91.8
[0342]
实例11.
[0343]
na-mva溶液到甲羟戊酸内酯(mvl)的阳离子交换
[0344]
该实例描述了含有na-mva的水性溶液的阳离子交换以产生包含甲羟戊酸酯(mvl)的水性溶液，其可以任选地通过蒸发而浓缩。
[0345]
工艺设备包括100升罐、seitz深度过滤器、三个内径为130mm且总长度为1500mm的夹套玻璃柱、置于柱上方的进料容器、柱出口的蠕动泵和luwa刮膜蒸发器。将13升dowex 88强酸阳离子离子交换树脂(陶氏公司)装入每个柱中，得到约1000mm的床长。通过在25℃温度下使用130升(约3.3倍床体积)的5％h2so4以2bv/h的流速将树脂连续反洗并再生为h

形式。
[0346]
目的是交换钠阳离子并产生甲羟戊酸或甲羟戊酸内酯浆液以进行进一步纯化。使用粉状活性炭从iex进料中除去可能沉淀的颜色。
[0347]
将na-mva纯度为78.8％/ds且颜色为8887icumsa单位的纳滤渗透物蒸发至42.0％白利糖度。将41.4kg溶液加热至55℃-58℃的温度，并添加2.2％/ds的norit dx1粉状活性炭且混合70min。使用过滤面积为0.28m2的t2600过滤片(颇尔公司)和1kg/m2的kenite 300(英格瓷过滤公司)硅藻土助滤剂作为预涂层来过滤悬浮液。将56升白利糖度为23.8％且颜色为2124icumsa单位的滤液材料蒸发至31.1％白利糖度用于iex进料。
[0348]
使35.7kg进料溶液在25℃下以2bv/h的速率通过柱，并使用水继续洗脱。当最后的柱输出白利糖度为0.5％时开始产物收集，并且当输出白利糖度为2.0％并且ph达到2.5时结束产物收集。收集产物和残余级分。蒸发的iex产物的mvl纯度为约78％-83％/ds。进料和iex产物的结果列于表11中。
[0349]
表11.进料和iex产物
[0350] 进料iex产物残余级分质量，kg35.734.114.3干燥固体，(kf-ds)31.118.016.4电导率，ms/cm42.86.96.8ph7.61.73.6
[0351]
实例12.
[0352]
na-mva溶液到甲羟戊酸内酯(mvl)的阳离子交换
[0353]
该实例描述了含有na-mva的水性溶液的阳离子交换以产生包含甲羟戊酸酯(mvl)的水性溶液，其可以任选地通过蒸发而浓缩。
[0354]
工艺设备包括三个内径为130mm且总长度为1500mm的夹套玻璃柱、置于柱上方的进料容器、柱出口的蠕动泵。将13升dowex 88强酸阳离子离子交换树脂(陶氏公司)装入每个柱中，得到约1000mm的床长。通过在25℃温度下使用130升(约3.3倍床体积)的5％h2so4以2bv/h的流速将树脂连续反洗并再生为h

形式。
[0355]
目的是交换钠阳离子并产生甲羟戊酸或甲羟戊酸内酯浆液以进行进一步纯化。
[0356]
将na-mva纯度为68.2％/ds且颜色为82952icumsa单位的na-mva结晶最终母液稀释至39.4％白利糖度。
[0357]
使17.0kg进料溶液在25℃下以2bv/h的速率通过柱，并使用水继续洗脱。当最后的柱输出白利糖度为0.8％时开始产物收集，并且当输出白利糖度为2.0％时结束产物收集。将产物收集成三个级分。合并级分并蒸发。蒸发的合并iex产物的mvl纯度为约70％-73％/ds
[0358]
进料和iex产物的结果列于表12中。
[0359]
表12.进料和iex产物
[0360][0361]
实例13
[0362]
甲羟戊酸内酯一水合物的水溶剂结晶和mvl*h2o晶种的制备
[0363]
该实例描述了甲羟戊酸内酯一水合物的水溶剂结晶和甲羟戊酸内酯一水合物晶种的制备。
[0364]
通过本文(实例1-9)所述的方法制备高纯度的mvl浆液。出乎意料且令人惊讶的是，观察到当将此高mvl纯度浆液冷储存(在约6℃下)数周时，甲羟戊酸内酯一水合物(mvl*h2o)晶体自身自发形成。
[0365]
浆液的mvl纯度(98％的ds(hplc，h 形式的树脂，面积％))和含水量(约6％w/w)足够高以使mvl*h2o结晶成为可能。
[0366]
过滤晶体并在过滤管中离心(在约15℃下以570g离心2min)，以从晶体表面除去母液。然后分析这些晶体和母液。由于结晶条件的原因，晶体的含水量为10.8％(通过卡尔费休法得到)，略低于理论值12.1％。母液的含水量为3.2％，这意味着母液在一水合物晶体形成过程中一直在浓缩。晶体的mvl纯度为98.8％的ds，并且母液的mvl纯度为97.7％/ds。这些mvl*h2o晶体用作实例14中的晶种。在使用之前，在瓷磨机中研磨晶体。
[0367]
实例14
[0368]
甲羟戊酸内酯一水合物的水溶剂结晶
[0369]
该实例描述了甲羟戊酸内酯一水合物从通过使甲羟戊酸钠结晶母液经受阳离子交换产生的甲羟戊酸内酯浆液中的水溶剂结晶。
[0370]
根据实例12用阳离子交换处理来自实例6的包含甲羟戊酸钠的离心母液，以获得包含甲羟戊酸内酯的液体。所得浆液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为71％，并且颜色为34000icumsa。
[0371]
将进料浆液蒸发至93.7％的ds(rotavapor r-153蒸发器)。将2.1kg所得浆液移至2升冷却结晶器中，并在11℃的温度下用0.4g甲羟戊酸内酯一水合物干晶种(根据实例13制备)引晶。将引晶的浆液在连续搅拌下在16hr内冷却至7℃的温度。在冷却至7℃后，在7℃下继续搅拌50hr。在恒温期间添加去离子水，按以下三个部分稀释晶体块：(1)引晶后23hr添加40g，(2)引晶后43hr添加50g，以及(3)引晶后47hr添加10g。所得晶体块的ds为89.1％。
[0372]
在不使用洗涤水的情况下将1.7kg晶体块在分批式离心机中离心(篮直径22.5cm，4000rpm，3min)。离心中甲羟戊酸内酯的收率为52％。离心饼的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为94％，未干燥饼的含水量为10.8重量％，并且颜色为5200icumsa。离心母液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为56％，并且颜色为52000icumsa。
[0373]
根据该过程制备的甲羟戊酸内酯一水合物晶体用作实例15中的晶种。在使用之前，在瓷磨机中研磨晶体。
[0374]
实例15
[0375]
甲羟戊酸内酯一水合物的水溶剂结晶
[0376]
该实例描述了甲羟戊酸内酯一水合物从包含通过使用纳滤和随后的阳离子交换步骤产生的甲羟戊酸内酯的浆液中的水溶剂结晶。
[0377]
根据实例10用阳离子交换处理根据实例4制备的包含甲羟戊酸钠的纳滤渗透物，以获得包含甲羟戊酸内酯的液体。所得浆液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为76％，并且颜色为2400icumsa。
[0378]
将进料浆液蒸发至90.7％的ds(rotavapor r-153蒸发器)。将6.3kg所得浆液移至6升冷却结晶器中，并在12℃的温度下用0.5g甲羟戊酸内酯一水合物干晶种(根据实例14制备)引晶。将引晶的浆液在连续搅拌下在17hr内冷却至6℃的温度。在冷却至6℃后，在6℃下继续搅拌5hr。在6℃的恒温期间添加去离子水，按以下三个部分稀释晶体块：(1)引晶后18hr添加50g，(2)引晶后19hr添加40g，以及(3)引晶后20hr添加70g。所得晶体块的ds为88.1％。
[0379]
使用等于27-33ml/kg晶体块ds的洗涤水量将5.2kg所得晶体块分4批离心(分批式离心机，篮直径22.5cm，3500rpm，3min)。从第一次离心收集晶体饼样品和母液样品。第一次离心中甲羟戊酸内酯的收率为71％。第一次离心饼的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为93％，未干燥饼的含水量为12.7重量％，并且颜色为560icumsa。第一次离心母液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为55％，并且颜色为5700icumsa。
[0380]
根据该过程制备的甲羟戊酸内酯一水合物晶体用作实例16和17中的晶种。在使用之前，在瓷磨机中研磨晶体。
[0381]
实例16
[0382]
甲羟戊酸内酯一水合物的水溶剂结晶
[0383]
该实例描述了甲羟戊酸内酯一水合物从包含通过使用纳滤和随后的阳离子交换步骤产生的甲羟戊酸内酯的浆液中的水溶剂结晶。
[0384]
根据实例11用阳离子交换处理根据实例3制备的包含na-mva的纳滤渗透物，以产生包含mvl的液体。所得浆液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为81％，并且颜色为1200icumsa。
[0385]
将进料浆液蒸发至84.1％的ds(rotavapor r-153蒸发器)。将6.2kg所得浆液移至6升冷却结晶器中，并在16℃的温度下用1.0g甲羟戊酸内酯一水合物干晶种(根据实例15制备)引晶。将引晶的浆液在16℃下保持3hr，然后在连续搅拌下在11hr内冷却至6℃的温度。在冷却至6℃后，在6℃下继续搅拌7hr。
[0386]
使用等于72-79ml/kg晶体块ds的洗涤水量将5.5kg所得晶体块分5批离心(分批式离心机，篮直径22.5cm，3500rpm，3min)。从第一次离心收集晶体饼样品和母液样品。第一次离心中甲羟戊酸内酯的收率为62％。第一次离心饼的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为≥97％，
未干燥饼的含水量为11.6重量％，并且颜色为61icumsa。第一次离心母液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为64％，并且颜色为2700icumsa。
[0387]
实例17
[0388]
甲羟戊酸内酯一水合物的水溶剂结晶
[0389]
该实例描述了甲羟戊酸内酯一水合物从离心母液和稀释的晶体块的混合物中的水溶剂结晶。
[0390]
结晶进料材料是包含甲羟戊酸内酯的水性浆液。它是通过将来自实例16的离心母液和从用去离子水洗涤设备中回收的稀释晶体块合并而获得的。所得浆液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为70％，并且颜色为2400icumsa。
[0391]
将进料蒸发至85.3％的ds(rotavapor r-153)，并将2.8kg所得浆液移至2升冷却结晶器中。将浆液引晶两次：首先，在13℃的温度下用1.0g甲羟戊酸内酯一水合物干晶种(根据实例15制备)引晶，然后在10℃的温度下用1.0g甲羟戊酸内酯一水合物干晶种引晶。第一次引晶引起非常少的晶体形成。
[0392]
将引晶的浆液在10℃下保持35min，然后在连续搅拌下在16hr内冷却至4℃的温度。在冷却至4℃后，在4℃下继续搅拌2hr。
[0393]
将2.5kg所得晶体块分2批离心(分批式离心机，篮直径22.5cm，3500rpm，3min)。第一次离心中洗涤水的量等于90ml/kg ds。离心中所得甲羟戊酸内酯的收率为42％。离心饼的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为≥97％，未干燥饼的含水量为14.7重量％，并且颜色为33icumsa。离心母液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为58％，并且颜色为4200icumsa。
[0394]
在不使用洗涤水的情况下进行第二次离心。离心中所得甲羟戊酸内酯的收率为54％。离心饼的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为≥97％，未干燥饼的含水量为11.7重量％，并且颜色为120icumsa。离心母液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为53％，并且颜色为4600icumsa。
[0395]
根据该过程制备的甲羟戊酸内酯一水合物晶体用作实例18和19中的晶种。在使用之前，在瓷磨机中研磨晶体。
[0396]
实例18
[0397]
甲羟戊酸内酯一水合物的水溶剂结晶
[0398]
该实例描述了溶解在去离子水中的甲羟戊酸内酯一水合物晶体的水溶剂重结晶。
[0399]
结晶进料材料是包含甲羟戊酸内酯的水性浆液。它是通过添加去离子水溶解和稀释来自实例15的2.2kg离心饼而获得的。所得浆液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为92％，并且颜色为560icumsa。
[0400]
将进料浆液蒸发至80.8％的ds(rotavapor r-153蒸发器)，并将2.3kg所得浆液移至2升冷却结晶器中。按以下两个步骤在不引晶的情况下在连续搅拌下冷却浆液：(1)在2hr内从20℃冷却至15℃，以及(2)在10hr内从15℃冷却至10℃。在冷却至10℃后，在10℃下继续搅拌6hr。这不会引起任何自发晶体形成。
[0401]
在10℃的温度下用0.5g甲羟戊酸内酯一水合物干晶种(根据实例17制备)对浆液进行引晶。将结晶器夹套中的冷却水温度保持恒定在7℃。晶体形成在引晶后立即开始。由于结晶热的原因，晶体块的温度首先在引晶后50min内从10℃升高至16℃，然后在3hr内从16℃降低至12℃。在冷却至12℃后，将冷却水温度从7℃升高至12℃，并在12℃下继续搅拌1hr。
[0402]
使用等于65-66ml/kg晶体块ds的洗涤水量将2.2kg所得晶体块分2批离心(分批式离心机，篮直径22.5cm，3500rpm，3min)。从第一次离心收集晶体饼样品和母液样品。第一次离心中甲羟戊酸内酯的收率为52％。第一次离心饼的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为≥98％，未干燥饼的含水量为13.6重量％，并且颜色为35icumsa。第一次离心母液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为87％，并且颜色为1100icumsa。
[0403]
实例19
[0404]
甲羟戊酸内酯一水合物的水溶剂结晶
[0405]
该实例描述了溶解在去离子水中的甲羟戊酸内酯一水合物晶体的水溶剂重结晶。
[0406]
结晶进料材料是包含甲羟戊酸内酯的水性浆液。它是通过将2.0kg来自实例16的离心饼与320g来自实例17的离心饼合并而获得的。在混合之前，用去离子水将来自实例16的甲羟戊酸内酯产物稀释至80.9％的ds，并根据实例6中所述的程序用活性炭处理所得浆液(20g norit dx1碳粉/1kg ds，接触时间1hr，接触温度50℃，通过使用buchner过滤利用kenite 300助滤剂分离碳粉)。结晶进料浆液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为≥97％，并且颜色为34icumsa。
[0407]
将进料浆液蒸发至78.3％的ds(rotavapor r-151蒸发器)。将2.6kg所得浆液移至5升冷却结晶器中，并在17℃的温度下用0.4g甲羟戊酸内酯一水合物干晶种(根据实例17制备)引晶。将引晶的浆液在17℃下保持1.5hr，然后在连续搅拌下在15hr内冷却至13℃的温度。在冷却至13℃后，在13℃下继续搅拌5hr。
[0408]
使用等于65-71ml/kg晶体块ds的洗涤水量将2.4kg所得晶体块分2批离心(分批式离心机，篮直径22.5cm，3500rpm，3min)。从第一次离心收集晶体饼样品和母液样品。第一次离心中甲羟戊酸内酯的收率为50％。第一次离心饼的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为≥98％，未干燥饼的含水量为12.1重量％，并且颜色为3icumsa。第一次离心母液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为96％，并且颜色为70icumsa。
[0409]
根据该过程制备的甲羟戊酸内酯一水合物晶体用作实例20中的晶种。在使用之前，在瓷磨机中研磨晶体。
[0410]
实例20
[0411]
甲羟戊酸内酯一水合物的水溶剂结晶
[0412]
该实例描述了甲羟戊酸内酯一水合物的水溶剂结晶和水性高纯度甲羟戊酸内酯浆液的制备。
[0413]
结晶进料材料是包含甲羟戊酸内酯的水性浆液。它是通过将来自实例17的第二次离心饼与来自实例18和19的离心母液合并而获得的。通过添加去离子水将浆液稀释至51.2％的ds，并根据实例6中所述的程序用活性炭处理所得溶液(20g norit dx 1碳粉/1kg ds，接触时间1hr，接触温度50℃，通过使用buchner过滤利用kenite 300助滤剂分离碳粉)。所得浆液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为93％，并且颜色为170icumsa。
[0414]
将经碳处理的进料浆液蒸发至80.3％的ds(rotavapor r-153蒸发器)。将2.6kg所得浆液移至2升冷却结晶器中，并在18℃的温度下用0.6g甲羟戊酸内酯一水合物干晶种(根据实例19制备)引晶。将引晶的浆液在18℃下保持1hr，然后在连续搅拌下在15hr内冷却至13℃的温度。在冷却至13℃后，在13℃下继续搅拌4hr。
[0415]
使用等于67-68ml/kg晶体块ds的洗涤水量将2.3kg晶体块分2批离心(分批式离心
机，篮直径22.5cm，3500rpm，3min)。从第一次离心收集晶体饼样品和母液样品。第一次离心中甲羟戊酸内酯的收率为51％。第一次离心饼的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为≥98％，未干燥饼的含水量为12.3重量％，并且颜色为3icumsa。第一次离心母液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为87％，并且颜色为370icumsa。
[0416]
根据该过程制备的甲羟戊酸内酯一水合物晶体的dsc分析产生在22.6℃处具有峰最大值的吸热峰。
[0417]
合并离心饼并通过添加去离子水将其稀释至57.4％的ds，以获得液体甲羟戊酸内酯产物。将所得浆液蒸发至≥97％的ds(rotavapor r-153蒸发器)。蒸发后浆液的甲羟戊酸内酯纯度按ds计为≥98％，并且颜色为2icumsa。
[0418]
使mvl*h2o结晶的典型条件示于表13a-13e中。
[0419]
表13a.使进料纯度介于50％-100％的ds之间和介于55％-99％的ds之间的mvl*h2o结晶的条件
[0420][0421]
表13b.使mvl*h2o结晶的条件。进料纯度介于55％-70％的ds之间。
[0422] 最小值-最大值优选温度(℃)0-200-14ds含量(％)82-9584-88
[0423]
表13c.使mvl*h2o结晶的条件。进料纯度介于70％-80％的ds之间。
[0424] 最小值-最大值优选温度(℃)0-220-16ds含量(％)79-9481-88
[0425]
表13d.使mvl*h2o结晶的条件。进料纯度介于80％-93％的ds之间。
[0426] 最小值-最大值优选温度(℃)0-243-20ds含量(％)72-9074-86
[0427]
表13e.使mvl*h2o结晶的条件。进料纯度介于93％-98％的ds之间。
[0428] 最小值-最大值优选温度(℃)0-243-20ds含量(％)65-9070-86
[0429]
另外，如果冷却设备有能力并且晶体块的粘度是可以接受的，则可以使mvl*h2o在低于0℃低至母液凝固点的温度下结晶。
[0430]
实例21
[0431]
甲羟戊酸内酯一水合物(mvl*h2o)的表征
[0432]
如下进一步表征具有式c6h
10
o3*h2o的结晶甲羟戊酸内酯一水合物(mvl*h2o)。
[0433]
a.x射线晶体结构
[0434]
测量mvl*h2o的x射线衍射。
[0435]
b.熔点
[0436]
mvl一水合物(mvl*h2o)的熔点(m.p.)介于20℃-25℃之间，优选21℃-24℃之间，具体取决于晶体纯度。只有在m.p.以下才可能结晶。通过使用差示扫描量热仪(dsc)峰值温度来测定熔点。通过使用mettler toledo dsc822e差示扫描量热仪来测量dsc热谱图。在标准40μl铝坩埚中在流动氮气气氛下以80ml/min的流速进行测量。温度范围为0-50℃，并且加热速率为2℃/min。
[0437]
c.结晶含水量
[0438]
当根据分子量计算时，mvl一水合物的理论含水量为12.15％(ds含量为87.85％)。(mvl*h2o的分子量为148.16g/mol)。这对应于在具有过量水的条件下结晶的晶体。如果结晶浆液中的水比晶体含水量少，则结晶时母液浓缩，正形成的晶体的结晶含水量低于理论值。如实例13中所述观察到形成10.8％的mvl一水合物晶体的结晶含水量(通过卡尔费休法得到)。对于具有高浆液ds(96和89)的浆液，还观察到形成10％-11％的mvl一水合物晶体的结晶含水量。
[0439]
d.水中的溶解度
[0440]
溶解度是表征结晶化合物的一种性质。只有高于过饱和浆液中的溶解度浓度才可能结晶。溶解度决定在给定温度下结晶的最小ds浓度。通过标准方法(如分析晶体悬浮液的平衡浓度)来测定溶解度。
[0441]
通过使用纯度为93％的晶体来测定mvl*h2o在水中的溶解度，计算得到纯度100。在0-20℃范围内测量并计算平衡ds含量(表14)。
[0442]
表14.mvl*h2o溶解度
[0443][0444]
实例22
[0445]
甲羟戊酸内酯对皮肤剥脱的影响
[0446]
剥脱(也称为化学剥离)属于一组用于治疗光老化、炎性皮肤病、表皮增生、色素障碍和疤痕的皮肤表面重修程序(o’conner等人.2018,australian journal of dermatology[澳大利亚皮肤病学杂志]59:171-181)。化学剥离包括将一种或多种化学消融剂施加到皮肤表面以诱导角质松解或角膜凝固。该过程使得受控地破坏全部或部分表皮或真皮，导致这些层随后剥脱。这使得经处理的皮肤的外观和质地得到改善。pka是化学剥离中的一个重要概念。它是一半溶液为游离酸形式时的ph。pka值低表明游离酸的可用性更
高，因此剥离更强。α羟基酸(aha)剥离可引起刺痛、皮肤发红、轻微的皮肤刺激和干燥(o’conner等人.2018,australian journal of dermatology[澳大利亚皮肤病学杂志]59:171-181)。在较低浓度下，aha会导致角质层细胞粘附减少(matarasso sl,glogau rg,markey ac.wood’s lamp for superficial chemical peels.j.am.acad.dermatol.[美国皮肤病学会杂志]1994；30:988-92)。在较高浓度下，它会促进表皮松解(matarasso sl,glogau rg,markey ac.wood’s lamp for superficial chemical peels.j.am.acad.dermatol.[美国皮肤病学会杂志]1994；30:988-92)。aha需要中和才能终止其作用，这可以用水、碳酸氢钠、氢氧化钠或铵盐溶液来实现。
[0447]
该实例描述了与对照化合物的作用相比，甲羟戊酸内酯对皮肤剥脱(剥离)的作用。
[0448]
进行研究(诸如但不限于临床研究)以与至少一种对照化合物(参考化合物)相比评价甲羟戊酸内酯在改善表皮更新(也称为细胞更新或皮肤再生)中的化学剥脱作用和功效。对照化合物包括但不限于α羟基酸(aha)(诸如苹果酸、酒石酸、柠檬酸、乙醇酸、乳糖酸、乳酸、苹果酸)、β羟基酸(诸如水杨酸)和类视黄醇家族化合物(诸如视黄醇)或它们的任何组合。
[0449]
将测试的活性成分(甲羟戊酸内酯或对照化合物)以受控的百分比(例如，介于总组合物的0.0001％至80％之间)配制在相同的标准化妆品基料中，得到化妆品组合物(诸如但不限于化妆品乳膏)。还包括安慰剂组合物(其为不含任何活性成分的化妆品基料)，其将用作其他活性成分的参考。基础乳膏配方可以是本领域技术人员熟知的任何配方。
[0450]
该研究分2个阶段进行，分别为约3周和2周。阶段1的目的是基于通过受过训练的评估员、tewametric和corneometric测量进行临床评价来评估和比较化妆品组合物(包含甲羟戊酸内酯或对照组合物)在重复施加3周后对皮肤发红、保湿和皮肤屏障功能的功效。
[0451]
阶段2的目的是基于比色测量评估和比较化妆品组合物(包含甲羟戊酸内酯或对照组合物)在重复施加约2周(施加3周之前)后对由酸诸如但不限于二羟基丙酮(dha)诱导的有色皮肤的细胞更新(剥脱)的功效。
[0452]
通过局部施加将包含测试的活性成分(甲羟戊酸内酯或对照化合物)的化妆品制剂施加于个体。在个体的前臂上划定四个区域(2个处理区域，1个未处理区域作为对照区域，1个未使用区域)。每个区域的表面为约4
×
5cm(20cm2)。
[0453]
在约5周内，每名个体在正常使用条件下(在清洁皮肤上，通过轻微按摩直至完全渗透)在他们前臂上的划定区域上随机施加2种产品，每天两次(早上和晚上)。
[0454]
在重复施加化妆品组合物之前和之后，并且与对照区域(未处理)和与任何化妆品组合物施加之前获得的值相比，通过受过训练的评估员对与皮肤发红、保湿、皮肤屏障功能、细胞更新(剥脱)以及它们的任一种组合相关的标准进行临床评分，从而对处理功效进行评价。
[0455]
实例23
[0456]
甲羟戊酸内酯对皮肤屏障功能的影响
[0457]
该实例描述了与对照化合物的作用相比，甲羟戊酸内酯对皮肤屏障功能和皮肤屏障加强的作用。
[0458]
在一个方面，该实例包括但不限于在重复施加后评价甲羟戊酸内酯对表皮上层保
湿的功效和/或甲羟戊酸内酯对皮肤屏障功能的功效的影响。
[0459]
皮肤屏障加强或皮肤屏障增加或者皮肤屏障功能增强或改善是指皮肤(诸如但不限于其渗透性屏障)以某种方式“更紧/更强”，并且其限制或避免化合物进入(诸如微生物、污染物等)，而且其还限制或避免排出的水量，即皮肤屏障功能得到改善。检查皮肤屏障是否得到加强的一种方式是确定从皮肤出来的水量(例如，如果皮肤屏障受损，则更多的水出来)。
[0460]
进行研究(诸如但不限于临床研究)以与至少一种对照化合物(参考化合物)相比评价和比较甲羟戊酸内酯的皮肤保湿和皮肤屏障功能。对照化合物包括但不限于神经酰胺、胆固醇、脂肪酸、羊毛甾醇、角鲨烯、α羟基酸(aha)、β羟基酸、类视黄醇家族化合物(诸如视黄醇)或它们的任何组合。神经酰胺以及胆固醇和脂肪酸是角质层的脂质组分，并且可以加强皮肤屏障以及提供感觉有益效果(rogers等人.1996arch dermatol res.[皮肤病学研究档案]288(12):765-770)，因此可以在本研究中用作阳性对照。可以阻碍皮肤屏障功能的化合物可以用作阴性对照。
[0461]
将测试的活性成分(甲羟戊酸内酯或对照化合物)以受控的百分比(例如，介于总组合物的0.0001％至80％之间)配制在相同的标准化妆品基料中，得到化妆品组合物(诸如但不限于化妆品乳膏)。还包括安慰剂组合物(其为不含任何活性成分的化妆品基料)，其将用作其他活性成分的参考。基础乳膏配方可以是本领域技术人员熟知的任何配方。
[0462]
通过局部施加将包含测试的活性成分(甲羟戊酸内酯或对照化合物)的化妆品制剂施加于个体。在个体的前臂上划定四个区域(2个处理区域，1个未处理区域作为对照区域，1个未使用区域)。每个区域的表面为约4
×
5cm(20cm2)。
[0463]
在约2-3周内，每名个体在正常使用条件下(在清洁皮肤上，通过轻微按摩直至完全渗透)在他们前臂上的划定区域上随机施加2种产品，每天两次(早上和晚上)。
[0464]
通过测量皮肤的失水和/或化妆品组合物对皮肤的保湿效果来评价处理功效。可以通过本领域技术人员已知的任何方法来测量皮肤的失水和保湿。
[0465]
在一个方面，通过测量经表皮失水(t.e.w.l.g/m2/h)来测定皮肤的失水，该方法是一种非侵入性方法，通过量化皮肤与环境之间的水交换来评估角质层屏障功能的完整性(loden m.等人,1992,british j of dermatol[英国皮肤病学杂志]1992；126:137-141)。角质层的损坏会导致t.e.w.l.增加，从而导致皮肤更容易渗透。该方法能够在重复施加后并且与对照区域(未处理)和在任何产品施加之前获得的值相比，评估和比较化妆品研究组合物之间对皮肤屏障的保护作用。
[0466]
在一个方面，通过测量皮肤电容并量化皮肤保湿来测量表皮上层含水量，从而测定化妆品组合物的保湿效果。(korstanje c.等人,1992,j.of dermatol.treatment[皮肤病治疗杂志]1992；2:137-139；vilaplana j等人,1992,acta derm.venereol.[皮肤性病学学报]1992；72:28-33)。
[0467]
实例24
[0468]
甲羟戊酸内酯对皮肤屏障功能和皮肤保湿的影响
[0469]
该实例描述了甲羟戊酸内酯(mvl)对皮肤屏障功能和皮肤保湿的影响。
[0470]
在一个方面，该实例包括但不限于在重复施加后评价甲羟戊酸内酯对表皮上层保湿的功效和/或甲羟戊酸内酯对皮肤屏障功能的功效的影响。
[0471]
皮肤屏障加强是指皮肤以某种方式“更紧/更强”，并且其限制或避免化合物进入(诸如微生物、污染物等)，而且其还限制或避免排出的水量。检查皮肤屏障是否得到加强的一种方式是确定从皮肤出来的水量(例如，如果皮肤屏障受损，则更多的水出来)。
[0472]
进行研究以与安慰剂处理相比评价和比较甲羟戊酸内酯的皮肤保湿和皮肤屏障功能。
[0473]
如本文所述获得并纯化甲羟戊酸内酯，并且将其按重量计以总组合物的1％配制在标准化妆品基料中，得到化妆品组合物(诸如但不限于化妆品乳膏)。研究中还包括安慰剂化妆品组合物(其为不含任何活性成分(例如，不含任何mvl)的化妆品基料)，其用作mvl活性成分的参考。基础乳膏配方可以是本领域技术人员熟知的任何配方。
[0474]
进行两项单独的研究。研究1包括在局部施加以ph＝5.5(皮肤生理ph)配制的化妆品乳膏(具有按重量计总组合物的1％的mvl的乳膏，称为“mvl乳膏”；以及对照乳膏，其为不含mvl的相同乳膏，称为“安慰剂”)后测量皮肤经表皮失水。
[0475]
研究2包括在局部施加以ph＝3.5配制的化妆品乳膏(“mvl乳膏”和“安慰剂”)后测量与皮肤上层中的皮肤含水量相关的皮肤电容。该ph可以被描述为酸性ph，并且是剥脱产品用于诱导加速皮肤剥落从而使得加快表皮细胞更新的ph。
[0476]
mvl对皮肤经表皮失水(tewl)(皮肤屏障功能)的影响
[0477]
通过局部施加将包含mvl作为活性成分的化妆品制剂和安慰剂处理施加于6名皮肤干燥(电容《50a.u.)的女性高加索个体。在个体的前臂上划定三个区域(1个用“mvl乳膏”处理的区域，1个用“安慰剂”处理的区域，1个未处理区域作为对照区域)。每个区域的表面为约4
×
5cm(20cm2)。施加的乳膏的ph＝5.5。
[0478]
在2周内，每名个体在正常使用条件下(在清洁皮肤上，通过轻微按摩直至完全渗透)在他们前臂上的划定区域上随机施加含mvl制剂和安慰剂制剂，每天两次(早上和晚上)。
[0479]
通过测量由化妆品组合物在皮肤上诱导的皮肤经表皮失水的演变来评价处理功效。通过测量经表皮失水(t.e.w.l.g/m2/h)来测定皮肤的失水，该方法是一种非侵入性方法，通过量化皮肤与环境之间的水交换来评估角质层屏障功能的完整性(loden m.等人,1992,british j of dermatol[英国皮肤病学杂志]1992；126:137-141)。角质层的损坏会导致t.e.w.l.增加，从而导致皮肤更容易渗透。该方法能够在重复施加后并且与对照区域(未处理)和在任何产品施加之前获得的值相比，评估和比较化妆品研究组合物之间对皮肤屏障的保护作用。
[0480]
在本研究中，在5个不同时间点(第0天(产品施加前的基线)、第1天、第3天、第7天、第14天；也称为d0、d1、d3、d7和d14)评估tewl(g/m2/h)。
[0481]
表15：3个区域上2周内的经表皮失水演变
[0482][0483]
δtewl＝(处理区域的tewl值，单位为g/m2/h)-(对照区域的tewl值，单位为g/m2/h)绝对值
[0484]
表16：2周内mvl对经表皮失水演变的影响。
[0485]
天数δtewl mvld02.06d11.79d31.32d70.95d151.02
[0486]
将用来自表15的数据获得的结果归一化至对照和安慰剂。
[0487]
δtewl
mvl
＝(“mvl乳膏”区域的δtewl值)-(“安慰剂乳膏”区域的δtewl值)。
[0488]
表17：2周内mvl对经表皮失水演变的时间效应
[0489][0490][0491]
将用来自表16的数据获得的结果归一化至对照、安慰剂和初始时间基线d0。δtewl＝(δtewl
mvl dx)-(δtewl
mvl d0)无单位
[0492]
表17表明，mvl在作为活性成分局部施加到皮肤时，在重复施加2周后减少了皮肤经表皮失水。3天后已经可以观察到皮肤经表皮失水减少。因此，tewl减少表明局部施加mvl可以增加(加强)皮肤屏障功能，如通过失水减少所证明。
[0493]
mvl对皮肤电容(皮肤保湿)的影响
[0494]
通过局部施加将包含mvl作为活性成分的化妆品制剂和安慰剂处理施加于5至11名皮肤正常非敏感的女性高加索个体。在个体的前臂上划定三个区域(1个用“mvl乳膏”处理的区域，1个用“安慰剂”处理的区域，1个未处理区域作为对照区域)。每个区域的表面为约4
×
5cm(20cm2)。施加的乳膏的ph＝3.5。
[0495]
在3周内，每名个体在正常使用条件下(在清洁皮肤上，通过轻微按摩直至完全渗透)在他们前臂上的划定区域上随机施加mvl制剂和安慰剂制剂，每天两次(早上和晚上)。
[0496]
通过测量皮肤的含水量(即化妆品组合物对皮肤的保湿效果)来评价mvl处理的功效。可以通过本领域技术人员已知的任何方法来测量皮肤的保湿。
[0497]
通过利用corneometer
tm
测量皮肤电容并量化皮肤保湿来测量表皮上层含水量，从而测定化妆品组合物的保湿效果。(korstanje c.等人,1992,j.of dermatol.treatment[皮肤病治疗杂志]1992；2:137-139；vilaplana j等人,1992,acta derm.venereol.[皮肤性病学学报]1992；72:28-33)。
[0498]
在本研究中，在2个不同时间点评估电容：在产品施加前的基线处和21天后；分别命名为d0和d21。电容以任意单位(a.u.)表示。
[0499]
表18：mvl对皮肤电容的影响。mvl施加前和3周后3个区域的电容；计算每个区域3周内的演变δ(d21-d0)
[0500][0501]
#统计学显著概率：p《0.05
[0502]
#相对于d0的变化
[0503]
表18清楚地表明，局部施加含mvl的化妆品乳膏随时间显著增加了皮肤电容，如通过在重复施加3周后增加15％所证明。因此，该数据表明mvl有助于增加皮肤的含水量，并通过改善保水性来保湿皮肤，从而提供增加的皮肤保湿。相比之下，安慰剂乳膏的时间效应与初始时间相比并不显著。mvl乳膏对皮肤电容的时间效应显著高于安慰剂乳膏的时间效应，这证明随时间的保湿效果是由于mvl本身作为成分。
[0504]
表19：随时间的电容变化δ(d21-d0)，归一化至对照区域
[0505]
电容变化(任意单位)对照区域安慰剂乳膏mvl乳膏d0(初始时间)0-2.27-0.43d21(3周后)0-1.523.21δ(d21-d0)乳膏00.753.64
[0506]
表19的数据如下获得：基线时安慰剂区域的电容(a.u.)归一化至对照＝d0安慰剂-d0对照区域。
[0507]
基线时mvl乳膏区域的电容(a.u.)归一化至对照＝d0 mvl乳膏-d0对照区域。
[0508]
3周后安慰剂区域的电容(a.u.)归一化至对照＝d21安慰剂-d21对照区域。
[0509]
3周后mvl乳膏区域的电容(a.u.)归一化至对照＝d21 mvl乳膏-d21对照区域。
[0510]
随时间的电容变化归一化至对照：δ(d21-d0)乳膏＝[δ(d21-d0)乳膏]-[δ
(d21-d0)对照区域]＝mvl乳膏或安慰剂乳膏区域随时间的电容变化-对照区域随时间的电容变化。
[0511]
归一化的目的是除去在对照区域上测量的“噪声”结果，以计算从相同基线开始的“处理”结果，并允许在志愿者组中公平地比较产品效果(mvl效果)。通过这样做，确实可以从测量的含水量中除去已经自然存在于皮肤中的水量，而无需施加任何产品。因此，我们可以测量施加乳膏(安慰剂或mvl)后带入、保留或产生的水量。由于皮肤中的含水量可能因小组成员而异，因此需要进行归一化以消除由于小组成员皮肤独特性引起的变化。
[0512]
δ(d21-d0)乳膏：3周内乳膏区域的电容变化
[0513]
3周后安慰剂乳膏的效果：δ(d21-d0)安慰剂＝d21安慰剂-d0安慰剂
[0514]
3周后mvl乳膏的效果：δ(d21-d0)mvl乳膏＝d21 mvl乳膏-d0 mvl乳膏
[0515]
表19表明mvl乳膏的保湿效果高于安慰剂乳膏。因此，mvl增加了皮肤含水量，这与表17中描述的观察到皮肤屏障功能增加(tewl减少)一致。
[0516]
实例25
[0517]
甲羟戊酸内酯对皮肤屏障功能的影响
[0518]
进行被称为“咖啡因扩散测试”的测试，其包括测量化合物甲羟戊酸内酯(mvl)对皮肤屏障强化的影响。这是一种测量皮肤屏障功能(强度)的方法，因为当皮肤屏障得到加强时，渗透性示踪剂分子的量会减少(即，如果皮肤受损越严重，示踪剂越容易渗透皮肤)。在本研究中，评估了甲羟戊酸内酯对[
14
c]-咖啡因在基础条件下通过重建人类表皮(rhe)扩散的影响，以评价皮肤屏障功能。咖啡因扩散与屏障功能成反比。在以下条件下培养rhe(rhe，0日龄，bioalternatives参考物：epi-ba，批号01015-515)：37℃，5％co2，并且培养基为bioalternatives维持培养基。测试的mvl浓度以系统方式(添加到培养基中)计为测定培养基重量的0.001％、0.005％和0.01％。
[0519]
培养和处理
[0520]
将第0天的rhe置于含有或不含(对照)测试化合物、它们的结合物或参考物(200μg/ml的维生素c)(系统施加)的培养基中的气/液界面处。然后将rhe孵育7天，在第3天和第5天更新处理。所有实验条件以n＝3进行。
[0521]
咖啡因扩散
[0522]
在孵育结束时(d7)，将放射性咖啡因([
14
c]-咖啡因)施加到每个表皮的表面上。根据以下动力学通过液体闪烁法测量下清液中包含的放射性：30分钟、1小时和2小时。
[0523]
数据管理
[0524]
使用microsoft软件和graphpad软件分析原始数据。通过未配对的学生t检验进行组间比较。如果n≥5，则可以解释统计分析，但是对于n《5，统计值仅供参考。本报告中使用的公式：
[0525]
平均值标准误差：sem＝sd/√n；屏障功能：
[0526][0527]
结果
[0528]
咖啡因在未处理条件下通过对照重建人类表皮(rhe)扩散在整个动力学过程中是渐进的。用以200μg/ml测试的维生素c系统处理rhe显著降低了这种扩散，因此突出了表皮屏障功能的增加。这些结果是预期的并且验证了该测定。
[0529]
表20：化合物甲羟戊酸内酯对rhe的屏障功能的影响。在孵育30分钟、1小时和2小时后测量[
14
c]-咖啡因通过rhe的扩散。
[0530][0531]
*：0.01至0.05，显著，**：0.001至0.01
[0532]
如表20中所示，用以0.001％测试的甲羟戊酸内酯系统处理rhe显示出咖啡因通过rhe的扩散减少的趋势(mvl 0.001％：30min后开始为对照的128％，1小时后为对照的106％，然后为对照的99％)，表明mvl对皮肤屏障改善有效果。
[0533]
这也可以通过改善皮肤剥落效果来解释，实际上，剥落过程是自下而上的过程，而咖啡因扩散是自上而下的(咖啡因沉积在皮肤模型表面上)。剥落改善往往将通过促进细胞更新和从表皮基底层更新到上表皮层来减缓活性物质(咖啡因)渗透。
[0534]
实例26
[0535]
甲羟戊酸内酯对皮肤脂质组成的影响
[0536]
该实例描述了与未处理的皮肤模型的效果相比，局部施加的甲羟戊酸内酯对皮肤模型组织的皮肤脂质组成的影响。
[0537]
通过使用商业全厚(ft)皮肤模型(德国汉高股份有限公司(henkel ag&company,germany))来评估甲羟戊酸内酯(mvl)对皮肤的脂质组学分布的影响。在体外用局部mvl处理ft皮肤模型，并将其与用不含mvl的对照溶液处理的ft皮肤模型进行比较，处理24小时后，裂解皮肤组织，并从组织中萃取脂质。利用lc-ms进行总脂质组学(总脂质分布)分析，并将用mvl处理的组织的脂质分布与未用mvl处理的组织的脂质分布进行比较。
[0538]
组织
[0539]
全厚皮肤模型含有表皮角化细胞和真皮成纤维细胞。将组织置于气液相间培养基(ali培养基，ali cm-250，德国汉高股份有限公司)浸泡过的滤纸(在培养皿中的过滤垫上)上，该滤纸在预加热的ali-培养基中，用于随后在气液相间处进行培养。将组织在 37℃、5％co2气氛中放置过夜。用于该模型中的组织是ft皮肤模型组织，其分化状态为气液相间(ali)第10天，生产批次为phe-hm-18-23，基质批次为phe-mx-18-11，并且细胞批次为phe-fb-12-06(德国汉高股份有限公司)。
[0540]
测试物质
[0541]
如本文所述产生并纯化mvl＝mvl为含有小于5％水的液体浆液形式。通过在dbps中稀释mvl来制备测试溶液。mvl与皮肤模型一起用作13％溶液(组织体积为20μl，组织尺寸为1.56cm2)。
[0542]
用50％naoh(fluka)调节mvl测试溶液的ph，使其匹配细胞/组织培养基的ph，以保持细胞/组织活力，并在使用前用0.2μm过滤器进行无菌过滤。
[0543]
实验设置
[0544]
实验进行三次重复。用不含镁和钙且不含mvl的dulbecco磷酸盐缓冲盐水(dpbs)局部处理对照样品。
[0545]
通过在实验开始前在dpbs溶液中稀释mvl来制备mvl样品，并将其以20μl体积局部施加于组织上，并置于 37℃、5％co2气氛的培养箱中24小时。在测试物质暴露后，将组织置于培养皿上，并用填充和排空组织的dpbs冲洗10次以除去任何残留的测试材料。然后将组织裂解并冷冻，用于以后的蛋白质浓度测量和运输，以进行脂质组学分析。
[0546]
将对照样品组织切成两半，并用镊子将每一半转移到填充有750μldpbs溶液的precellys珠管(ck14&ck28混合物，目录号03961-1-009.2，法国蒙蒂尼勒布勒托讷的贝尔丹技术公司(bertin technologies,montigny-le-bretonneux,france))中。用precellys 24匀浆器(法国蒙蒂尼勒布勒托讷的贝尔丹技术公司)以5000rpm处理样品3轮，每轮30秒，并在各轮之间将试管保持在冰中2分钟。
[0547]
如下处理经mvl处理的样品：用700μl dpbs填充珠管，将组织分成两半，并将两半转移到单独的管中。用precellys 24匀浆器以5000rpm匀浆组织3次，每次30秒(在各轮之间将样品保持在冰上2min)。然后将来自分开样品的组织裂解物合并到一个管中。对照样品的总裂解体积为1.5ml，其余样品为1.4ml。
[0548]
从匀浆的细胞裂解物中分离出少量子样品用于蛋白质浓度测量，并在-20℃下短时间储存。将组织裂解物的1ml等分试样在-80℃下短时间储存，然后将其送至lipotype股份有限公司进行脂质组学分析。
[0549]
根据制造商的说明，用pierce bca蛋白测定试剂盒(23225，赛默飞世尔科技公司(thermo fisher scientific))测定细胞裂解物的蛋白质浓度。每个样品一式三份进行分析。用紫外光谱法并使用牛血清白蛋白作为校准标准来测定未知样品的蛋白质浓度。
[0550]
lipotype股份有限公司(德国德累斯顿(dresden,germany))如sampaio jl等人,proc natl acad sci usa[美国国家科学院院刊]2011,108:1903-7中所述进行基于质谱的脂质分析。使用两步氯仿/甲醇程序萃取脂质(ejsing cs等人,proc natl acad sci usa[美国国家科学院院刊]2009；106:2136-41)。样品中掺入有含有以下物质的内部脂质标准混合物：心磷脂16:1/15:0/15:0/15:0(cl)、神经酰胺18:1；2/17:0(cer)、二酰基甘油17:0/
17:0(dag)、己糖基神经酰胺18:1；2/12:0(hexcer)、溶血磷脂酸酯17:0(lpa)、溶血磷脂酰胆碱12:0(lpc)、溶血磷脂酰乙醇胺17:1(lpe)、溶血磷脂酰甘油17:1(lpg)、溶血磷脂酰肌醇17:1(lpi)、溶血磷脂酰丝氨酸17:1(lps)、磷脂酸酯17:0/17:0(pa)、磷脂酰胆碱17:0/17:0(pc)、磷脂酰乙醇胺17:0/17:0(pe)、磷脂酰甘油17:0/17:0(pg)、磷脂酰肌醇16:0/16:0(pi)、磷脂酰丝氨酸17:0/17:0(ps)、胆固醇酯20:0(ce)、鞘磷脂18:1；2/12:0；0(sm)、三酰基甘油17:0/17:0/17:0(tag)和胆固醇d6(chol)。萃取后，将有机相转移至灌注板并在高速真空浓缩器中干燥。将第1步的干萃取物重悬于7.5mm乙酸铵的氯仿/甲醇/丙醇(1:2:4，v:v:v)溶液中，并将第2步的干萃取物重悬于33％乙醇的甲胺/氯仿/甲醇(0.003:5:1；v:v:v)溶液中。使用hamilton robotics starlet机器人平台进行所有液体处理步骤，该平台具有用于有机溶剂移液的防滴控制功能。
[0551]
通过在配备有triversa nanomate离子源(阿德文生物科学公司(advion biosciences))的qexactive质谱仪(赛默科技公司(thermo scientific))上直接注入来分析样品。在单次采集中，以正离子和负离子模式分析样品，ms的分辨率为rm/z＝200＝280000，msms实验的分辨率为rm/z＝200＝17500。msms由包含以1da增量扫描的相应ms质量范围的包含列表触发(surma ma等人,european journal of lipid science and technology:ejlst[欧洲脂质科学与技术杂志]2015；117:1540-1549)。合并ms和msms数据以监测作为铵加合物的ce、dag和tag离子；作为乙酸盐加合物的pc、pc o-；以及作为去质子化阴离子的cl、pa、pe、pe o-、pg、pi和ps。ms仅用于监测作为去质子化阴离子的lpa、lpe、lpe o-、lpi和lps；作为乙酸盐加合物的cer、hexcer、sm、lpc和lpc o-，以及作为乙酰化衍生物的铵加合物的胆固醇(liebisch g等人,biochim biophys acta[生物化学与生物物理学学报]2006；1761:121-128)。
[0552]
用lipotype股份有限公司内部开发的基于lipidxplorer的脂质鉴定软件分析数据(herzog r等人,genome biology[基因组生物学]2011；12:r8；herzog r等人.lipidxplorer:a software for consensual cross-platform lipidomics.plos one[公共科学图书馆：综合]2012；7:e29851)。使用lipotype股份有限公司内部开发的数据管理系统进行数据后处理和归一化。只有信噪比》5且信号强度比相应空白样品高5倍的脂质鉴定才被考虑用于进一步的数据分析。用r版本3.5.1(2018-07-02)(team rc[rc团队].r:a language and environment for statistical computing.vienna,austria:r foundation for statistical computing[r：统计计算的语言和环境，奥地利维也纳：r统计计算基础],2017)，使用tidyverse软件包(版本1.2.1)(wickham h.tidyverse:easily install and load the’tidyverse’[tidyverse：轻松安装和加载’tidyverse’],2017)和bioconductor pcamethods(stacklies w等人,bioinformatics[生物信息学]2007；23:1164-1167)来分析数据。
[0553]
对于成对比较，将非参数wilcoxon检验(mann-whitney检验)应用于每个脂质特征。用benjamini&hochberg(1995)方法对p值进行调整以进行多次测试，如果p(benjamini&hochberg方法)《0.05，则视为显著。
[0554]
mvl处理对特定皮肤脂质类别的影响示于表21中。mvl增加了脂质类别的量用“ ”表示，mvl减少了脂质类别的量用
“‑”
表示，如果观察到经mvl处理的皮肤与对照之间没有差异，则用“＝”表示。“*”表示在显著概率p《0.05时在统计学上显著增加或减少。
[0555]
表21.mvl处理对皮肤脂质组别和类别的影响。
[0556]
[0557][0558]
皮肤组织样品的初始脂质类别组成显示，组织样品中的主要脂质类别是三酰基甘油(tag)、磷脂酰胆碱(pc)和胆固醇(chol)。
[0559]
如表21中所示，与对照样品相比，经mvl处理的皮肤组织显示己糖基神经酰胺(hexcer)、胆固醇酯(ce)、三酰基甘油(tag)、磷脂酰胆碱(pc)、磷脂酸酯(pa)、磷脂酰胆碱-醚(pc-o)显著增加；而经mvl处理的皮肤组织显示二酰甘油(dag)、pg/cl、磷脂酰乙醇胺-醚(lpe、lpe-o、pe-o)和磷脂酰肌醇(pi)显著减少。胆固醇、胆固醇/硫酸胆固醇比率、神经酰胺、鞘磷脂(sm)、磷脂酰丝氨酸(ps)水平不变。
[0560]
局部施加mvl诱导了tag增加(表21)。表皮三酰基甘油(tag)在皮肤屏障功能中形成功能性渗透屏障的过程中在代谢方面起重要作用(radner f.p.w.和j.fisher,biochim biophys acta[生物化学与生物物理学学报],2014年3月:1841(3):409-15)。总之，用mvl在皮肤上进行局部处理观察到的tag增加(表21)进一步提供了对皮肤屏障功能的积极影响。当皮肤屏障功能得到改善时，可以更好地保护皮肤使其免受外部侵害，如有害物质(生物异源物质，即污染物颗粒)、微生物、病菌和病毒的渗透。还可更好地保护皮肤使其免于失水，从而增加皮肤的含水量，因此增加皮肤保湿。
[0561]
如表21所示，局部施加mvl诱导了线粒体内膜所必需的脂质(心磷脂，cl)减少，但没有增加也没有减少胆固醇生物合成，表明葡萄糖可优选地转化为dhap，而不是乙酰辅酶a(hmg辅酶a、甲羟戊酸酯和胆固醇的前体)，并在脂质代谢途径中向下移动(lipid metabolism in mammals[哺乳动物的脂质代谢](isbn 978-1-4684-2832-2)，作者：snyder fred，1977年，第1-33页，introduction:general pathways in the metabolism of lipids in mammalian tissues[引言：哺乳动物组织中脂质代谢的一般途径]，golde,l.m.g等人)，从而导致pa、tag和pc增加，以及dag(tag的前体)和pe(pc的前体)减少。这表明mvl对线粒体的能量产生有优选影响。在胞质溶胶中，hmg辅酶a被转化为甲羟戊酸酯，而在线粒体中，其被转化为乙酰辅酶a和乙酰乙酸酯。在这两种途径之间存在竞争，并且局部施加mvl似乎将代谢推向一种优选途径：发生在线粒体中的途径。这会导致产生coq10(泛醌)而不是胆固醇。coq10是一种强抗氧化剂，可保护细胞结构免受细胞在线粒体呼吸和能量产生过程中产生的ros的影响。线粒体在皮肤老化中起着重要作用，并且coq10是一种个人护理成分，以其皮肤激活和抗老化特性而闻名。
[0562]
总之，如上所述，在全层皮肤模型上局部施加mvl会引起皮肤脂质分布发生变化。不受理论束缚，据信对人体皮肤中脂质代谢途径进行的这项研究显示，这些变化表明脂质代谢途径指向似乎与线粒体代谢和泛醌产生有关的优选方向。这进一步表明对线粒体能量/抗氧化剂产生平衡具有积极影响，这也可能对皮肤细胞(角化细胞和成纤维细胞)代谢的全球改善具有积极影响。在皮肤中，角化细胞主要存在于表皮中。角化细胞像所有其他类型的细胞一样会消耗氧气、水和氨基酸(以及其他简单元素)，以产生蛋白质、能量和co2。这种能量产生发生在角化细胞的线粒体内。如果线粒体代谢得到改善，则角化细胞将因更高的能量和蛋白质生产水平而获益，它们可能会产生更多的角质，并更快地分化为角质层细胞。这被称为细胞更新。角化细胞分化为角质层细胞的过程包括脂质产生和外生以形成使皮肤成为防水屏障的角质层细胞间脂质层的步骤。如果角化细胞的代谢得到改善(如上所述)，它们还将从丝聚蛋白产生更多的参与皮肤内水分保留的天然保湿因子。当皮肤保湿良好、脂质屏障形成良好且细胞更新优化时，这对皮肤机械和生物学特性具有积极影响，从而改善健康外观，也称为抗老化效果。
[0563]
通过到达真皮并刺激真皮细胞代谢，mvl还可以刺激成纤维细胞产生真皮基质蛋白和糖胺聚糖。这对皮肤真皮和真皮表皮连接密度具有积极影响，并支持更高的机械强度和抵抗随年龄增长的重力影响。避免皮肤随着老化而松弛，并因此提供了有益效果，如改善皮肤弹性、皮肤紧致度、更好限定的面部椭圆形、减少松垂、减少外观皱纹，以总体改善更健康和更年轻的皮肤外观。
[0564]
结合我们在实例27中描述的结果，这些结果表明局部施加mvl和/或mva可以导致皮肤中发生脂质变化，这些变化可以产生皮肤有益效果，如：皮肤保湿(维持或增加表皮的含水量，以及通过维持、恢复和/或加强皮肤屏障功能来保护皮肤免于脱水)、皮肤再生、皮肤更新、改善表皮细胞更新、防止或延缓皮肤老化迹象的出现、减少皮肤皱纹的出现、皮肤年轻化、加强皮肤屏障功能以及它们的任一种组合。
[0565]
实例27
[0566]
甲羟戊酸和甲羟戊酸内酯对皮肤脂质组成和皮肤剥脱(剥落)的影响
[0567]
在与实例26所述完全相同的测试条件下局部施加甲羟戊酸(mva)显示胆固醇/硫酸胆固醇比率降低，这会直接影响角化细胞剥落(剥脱)过程(表22)。
[0568]
表22.mva处理对皮肤脂质组别和类别的影响。
[0569][0570]
局部施加的mvl在皮肤中代谢成na-mva，其在水溶液中与mva平衡。因此，局部施加的mvl可以具有与局部施加的mva相同的效果，但在分子生物利用度方面具有不同的动力学(分子在皮肤结构内被处理的时间)。mva和mvl在正常成人皮肤phenion
tm
模型的脂质种类或脂质类别中引入了相似的效果。发现mva处理降低了胆固醇与硫酸胆固醇比率(表22)。由于发现处理后胆固醇的量保持稳定，这表明经mva处理的皮肤中硫酸胆固醇的量增加。
[0571]
硫酸胆固醇少量存在于角质层中，从sc下层中总脂质含量的5％下降到最表层中的仅1％(starr等人,analytical chemistry[分析化学],2016；elias等人,mol.cell biol.lipids[分子与细胞生物学脂质]2014,1841,353-361)。尽管如此，它已经成为一种非
常重要组分，sato等人提出它通过抑制促进角质层细胞损失的蛋白酶而在调节剥落中发挥作用(sato,denda,j.invest.dermatol.[皮肤病研究杂志]1998,111,189-193)。williams和elias之前已证明这种分子在隐性x连锁鱼鳞病患者中增加5倍(williams,elias等人,j.clin.invest.[临床研究杂志]1981,68,1404-10)。这种遗传性疾病是由类固醇硫酸酯酶缺乏引起的，会导致皮肤发生严重鳞屑，并且elias等人(elias等人,j.clin.invest.[临床研究杂志]1984,74,1414-21)和sato等人(sato,denda等人,j.invest.dermatol.[皮肤病研究杂志]1998,111,189-193)已经通过局部施加硫酸胆固醇诱导了小鼠皮肤发生鳞屑。还已知的是，这种甾醇在角质化膜中的含量比在粘膜中高得多，这进一步支持了它涉及剥落调节(elias等人,mol.cell biol.lipids[分子与细胞生物学脂质]2014,1841,353-361)。硫酸胆固醇的增加与导致剥落加剧(从而产生鳞屑和剥离皮肤的症状)的疾病有关。这些症状也常见于老年人皮肤和长期暴露于紫外线的皮肤。
[0572]
通过局部施加mva和间接施加mvl来增加硫酸胆固醇的量可能对调节皮肤剥落过程具有积极影响。实际上，已经注意到硫酸胆固醇随着年龄增长降低(de paepe k,weerheim a,houben e等人,skin pharmacology&physiology[皮肤病理学和生理学]2004；17:23-30)。同时，硫酸胆固醇诱导皮肤屏障蛋白丝聚蛋白在正常人表皮角化细胞中表达。表皮分化是皮肤的关键过程。基底细胞在向上移动到皮肤表面的同时分化成不同的皮肤层：棘层、颗粒层、透明层、角质层。这被称为细胞更新。改善细胞分化和调节细胞剥落会产生适当的皮肤功能和外观(即健康外观)。皮肤功能是多重的：机械保护、免疫保护、抵御环境侵害、紫外线保护、感官保护(经由传感器的热、冷)。丝聚蛋白同时是角化细胞分化的标志物，并且是将水分保留在皮肤上层中的n.m.f.(天然保湿因子)元素的前体蛋白。随着年龄增长，丝聚蛋白的表达减少。由此，mvl显示出抗老化效果。
[0573]
mvl对皮肤剥落(细胞更新)的影响
[0574]
通过局部施加将包含1％mvl(按重量计)作为活性成分的化妆品制剂和安慰剂处理施加于5至11名年龄为30-60岁的皮肤正常非敏感的女性高加索个体。在个体的前臂上划定三个区域(1个用“mvl乳膏”处理的区域，1个用“安慰剂”处理的区域，1个未处理区域作为对照区域)。每个区域的表面为约4
×
5cm(20cm2)。施加的乳膏的ph＝3.5。
[0575]
在5周内，每名个体在正常使用条件下(在清洁皮肤上，通过轻微按摩直至完全渗透)在他们前臂上的划定区域上随机施加mvl制剂和安慰剂制剂，每天两次(早上和晚上)。
[0576]
在重复施加测试产品(乳膏)3周的初始阶段后，通过施加将皮肤染成橙红色的二羟基丙酮(半封闭贴剂)对小组成员的皮肤着色，然后重复施加相同的测试产品(乳膏)额外2周。如下在贴剂下施加和除去dha。在位于之前划定的左前臂和右前臂(内侧)的3个20cm2(5
×
4cm)区域中的2个区域上，用含有150μl dha(10％溶液)的制剂对每个区域着色，在半封闭贴剂下施加该制剂(在约3小时内且每3小时连续施加2次)。
[0577]
通过在施加dha贴剂之前(d0t0)和施加贴剂之后立即(d0t3h，d0t9h)以及在施加贴剂后2周期间的限定时间点(d2、d4、d8、d9、d11、d14)测量皮肤的颜色来评价mvl处理的功效。可以通过本领域技术人员已知的任何方法来测量皮肤的颜色。通过在之前在前臂上划定的3个区域中的2个区域的中心用chromameter
tm
cr400(开口8mm)基于比色测量结果测量皮肤颜色来确定化妆品组合物的细胞更新效果。每个区域进行2次测量。分析的参数是光变量l*、色度坐标a*(在绿红轴上)、个体类型角i.t.a.(计算参数)。如下计算i.t.a.：ita＝
[arc tan((l*-50)/b*)]x 180/π。
[0578]
通过pi
é
rard和pi
é
rard-franchimont描述的方法对皮肤染色后，基于色度测量结果对皮肤细胞更新进行评价(pi
é
rard g.e,pi
é
rard-franchimont c.,dihydroxyacetone test as a substitute for the dansyl chloride test,dermatology[皮肤病学]1993；186:133-137)，其允许在重复施加后在它们之间并与对照区域(未处理)相比客观地评估和比较化妆品产品的功效。与着色但未用任何产品处理的区域相比，由施加dha引起的皮肤染色强度降低确实可能与表皮表层的细胞更新速率相关。
[0579]
在重复施加化妆品研究产品后的比色测量结果(chromameter
tm
)给出了与皮肤色素沉着状态相关的比色信息，因此能够在它们之间并与对照区域(未处理)相比客观地评估和比较对这些参数的影响。
[0580]
根据获得的数据进行统计分析。通过计算个体数据的仪器评价的平均值和平均值标准误差(s.e.m.)以及临床评价的标准偏差(sd)来确定关注区域上在研究的每个时间点的不同标准/参数的平均值。时间效应：对于每个区域，将每个区域上在考虑的时间点获得的数据与初始值进行比较。
[0581]
产品效应：
[0582]
将以下项在考虑的时间点获得的数据与初始值进行比较：每个区域(对照和处理区域)上；在研究的每个时间点，在它们之间的所有区域(对照和处理区域)中；在时间差δ(tx-t0)，在它们之间的所有区域(对照和处理区域)中。在统计学显著演变的情况下，根据平均值计算相应的变化百分比，显著性阈值为5％。
[0583]
在dha着色区域上重复施加测试产品期间，皮肤颜色逐渐褪去。该测试旨在比较皮肤颜色恢复到与施加贴剂之前的初始皮肤颜色相同的浅色皮肤的速度。当测得的颜色显著不同于初始皮肤颜色时，这意味着细胞更新不完全。当差异不再显著时，这意味着皮肤颜色回到施加贴剂之前的样子，因此细胞更新完成。
[0584]
表23：光变量l*值(平均值和平均值标准误差(s.e.m.))
[0585][0586]
#相对于d0t0的变化
[0587]
表24：色度坐标a*值(平均值和平均值标准误差(s.e.m.))
[0588][0589]
#相对于d0t0的变化
[0590]
表25：个体类型角i.t.a.(平均值和平均值标准误差(s.e.m.))
[0591]
[0592][0593]
#相对于d0t0的变化
[0594]
在以下方面进行比较：与除去dha贴剂之后没有施加产品的对照区域(表26)相比，测试产品(mvl乳膏和安慰剂乳膏)使自然颜色完全恢复的速度(表27和28)。
[0595]
表23、24和25的数据根据表26、27和28中测量和报告的值计算。表26-28各列中命名为δd2、δd4、δd7、δd11和δd14的变化百分比分别根据表23-25的数据如下计算：δd2＝d2-d0 t0；δd4＝d4-d0t0；δd7＝d7-d0t0；δd11＝d11-d0t0；δd14＝d14-d0t0。
[0596]
d2处的dha效果(表26、27和28)δd2
dha
：与初始值(施加dha之前，d0t0)相比，在除去dha贴剂后2天(d2)，对于所有测量区域，光变量l*和i.t.a.在统计学上显著降低，并且a*在统计学上显著增加，表明dha对皮肤着色有影响。
[0597]
时间效应：与初始值(施加dha之前)相比，在使用4天和7天后，对于所有区域(对照和处理)，l*、a*和i.t.a.在统计学上有显著变化。与初始值(dha之前)相比，在9、11和14天后，对于乳膏安慰剂和mvl乳膏，一些分析参数在统计学上没有显著变化。与初始值(施加dha之前)相比，褪色将引起a*参数降低(红色减少)，l*参数(光)增加和i.t.a角增加，以及测量的差异减小。
[0598]
表26-与初始测量结果(在d0t0施加dha前)相比皮肤对照区域的比色参数的变化百分比
#
及其显著性
[0599][0600]
相对于在d0t0获得的值，表23中的所有数据在概率p《0.05时具有统计学显著性。
[0601]
表27-与初始测量结果(在d0t0施加dha前)相比“mvl乳膏”区域的比色参数的变化
百分比
#
及其显著性
[0602][0603]“*”表示在概率p《0.05时具有统计学显著性；接近显著性的概率：0.05≤p《0.10；ns：不显著，p≥0.10；#相对于在d0t0获得的值的变化。
[0604]
表28-与初始测量结果(在d0t0施加dha前)相比“安慰剂乳膏”区域的比色参数的变化百分比
#
及其显著性
[0605][0606]“*”统计学显著概率p《0.05；接近显著性的概率：0.05≤p《0.10；ns：不显著，p≥0.10；#相对于在d0t0获得的值的变化。
[0607]
最初(d0t0)，皮肤为白色。施加dha后，皮肤被着色成(染成)橙红色。在该点(d2)，在d2测量的颜色(红色皮肤颜色)与在dha之前在d0t0测量的颜色(白色皮肤)之间存在很大的颜色变化。观察到d2与d0t0的颜色值之间存在高度显著的差异(表27)。在除去dha片剂后，随着时间的推移，皮肤的颜色会逐渐恢复到最初的白色，使得在dx与d0t0测量的颜色之间的颜色变化减小。皮肤颜色恢复的速度与细胞更新速率直接相关。我们评估了在染色皮肤上施加产品是否比在未施加任何产品的区域(自然皮肤更新过程)或者与没有活性成分的安慰剂相比更快地减小颜色变化。从d2开始，随着时间的推移，颜色变化越来越小，直到与初始颜色d0t0的差异不再显著，这意味着皮肤颜色完全恢复到初始状态。在该测试中，我们确定了在哪个时间点颜色差异(变化dx-d0)不再显著。
[0608]
达到非显著差异越早，产品对皮肤细胞更新的效率就越高。
[0609]
表26-28表明，与初始时间(d0t0，dha之前)相比，通过重复施加mvl乳膏产生的颜色差异在d11和d14在2个参数(a*和i.t.a.)上不显著，而对于安慰剂和对照区域，在d11和d14差异仍然显著。安慰剂从d9开始比对照区域和mvl更有效，但在d11和d14差异再次显著。总之，这些结果表明mvl乳膏对褪色、细胞更新的影响比安慰剂乳膏更快且更可持续。
[0610]
结合我们在实例23-25中描述的结果，这些结果表明局部施加mvl可以使得皮肤表皮中细胞更新得到改善，这中改善可以产生皮肤有益效果，如：皮肤表面和凹凸面光滑(也称为皮肤表面重修(经由更好地调节皮肤剥落))、皮肤再生、皮肤更新、改善表皮细胞更新、防止或延缓皮肤老化迹象的出现、减少皮肤皱纹的出现、皮肤年轻化、加强皮肤屏障功能以及它们的任一种组合。当细胞更新减少时，改善皮肤剥落有助于除去随着年龄增长往往积聚在皮肤表面的死细胞。角质层厚度减小，使得皮肤表面不那么粗糙，皮肤看起来更漂亮。
皮肤表面重修效果使皮肤表面更光滑，参与更好且更均质的光反射，并提供更明亮且更光泽和均匀的肤色。