用于人多能干细胞制造的端到端平台的制作方法

技术特征：
1.一种用于制造多能干细胞的方法，其包含将多个微载体置于生物反应器中；用多能干细胞接种所述生物反应器；在所述生物反应器中孵育所述多能干细胞达足以产生约50倍或更大的倍数扩增以产生扩增的多能干细胞的一段时间；浓缩所述扩增的多能干细胞；以及冻存所述扩增的多能干细胞；其中所述多能干细胞以约0.2
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106个细胞/ml或更少的接种密度接种，并且其中所述方法是封闭和/或自动化方法。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述多能干细胞在孵育期间不传代。3.根据权利要求1所述的方法，其中用于接种所述生物反应器的所述多能干细胞作为冻存的多能干细胞接种到所述生物反应器中。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述多能干细胞在接种所述生物反应器之前不在2d过程中孵育。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个微载体具有约125μm或更大的粒度。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个微载体在置于所述生物反应器中之前用生长基质包被。7.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含孵育后的收获步骤。8.根据权利要求7所述的方法，其中使用非酶传代溶液将所述微载体与所述扩增的多能干细胞分离。9.根据权利要求8所述的方法，其中，在用所述非酶传代溶液传代后，使所述多能干细胞和多个微载体通过筛网，所述筛网的筛孔尺寸足以允许所述多能干细胞通过，同时限制所述微载体的通过。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述筛孔尺寸为约10μm至约100μm。11.根据权利要求1所述的方法，其中通过连续离心装置进行浓缩。12.根据权利要求11所述的方法，其中选择进入所述连续离心装置的流速，使得在约15分钟或更短时间内形成流化床。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述流化床中的细胞保留率为约80％或更高。14.根据权利要求1所述的方法，其中冻存后的细胞保留率为约70％或更高。15.根据权利要求1所述的方法，其中在孵育期间，所述微载体和多能干细胞经受搅拌。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述搅拌具有初始速度，并且其中所述初始速度在约1至5天后增加至第二速度。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述第二速度在约1至5天后增加至第三速度。18.根据权利要求15所述的方法，其中所述搅拌具有初始速度，并且其中当细胞密度达到约1
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105个细胞/cm2至约10
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105个细胞/cm2时，所述初始速度增加至第二速度。19.根据权利要求15所述的方法，其中，在接种后的头24小时或更短时间期间，所述搅拌是不连续搅拌。20.根据权利要求19所述的方法，其中所述生物反应器是灌注生物反应器。

技术总结
本文提供了一种能够维持hPSC的高倍数扩增的封闭的、自动化的和可扩展的搅拌釜式生物反应器平台。使用灌注的无异源培养基在受控生物反应器中扩增hPSC。在封闭步骤中进行细胞收获和浓缩。所述hPSC可以冻存以生成细胞库或根据需要进一步处理。冻存细胞可以解冻到2D组织培养平台或3D生物反应器中以启动新的扩增阶段或分化为临床相关的细胞类型。扩增的hPSC表达hPSC特异性标志物，具有正常核型和分化成三个胚层的细胞的能力。这种端到端平台允许高质量hPSC的大量扩增，其可以支持各种临床适应症所需的细胞需求。所需的细胞需求。所需的细胞需求。


技术研发人员：I
受保护的技术使用者：伦萨沃克斯维尔股份有限公司
技术研发日：2020.11.20
技术公布日：2022/7/9