068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s和p1-068748_d57k_d100s。这些抗体可含有p1-068744或p1-068748 ab的被修饰来使至少一个h、d或e残基回复成见于p1-061015亲本抗体中的相同位置处的残基的重链cdr。
7.更一般来说，本公开包括包含重链可变区(vh)的抗hvista ab，所述重链可变区包含含有gftfsx1yamh的vh cdr1，其中x1是e或s(seq id no：690)；含有x2iwydgsnkyx3adsvkg的vh cdr2，其中x2是h或i，并且x3是e或y(seq id no：691)；和/或含有dsgfyx4syyfdx5的vh cdr3，其中x4是e或s，并且x5是e或y(seq id no：692)。(也参见图29c。)在ab p1-061015中，这些位置分别是s、i、y、s和y，而在p1-068744中，这些位置分别是e、h、e、e和e。在此类情况下，抗体可包含p1-068744的vh cdr1、cdr2和/或cdr3，但具有向p1-61015的位置的以下指定回复(参见表11和表27)：p1-068744_e31s(即包含p1-068744的cdr，例外之处是x1是s)、p1-68744_h50i(即x2是i)、p1-68744_e59y(即x3是y)、p1-068744_e100s(即x4是s)、p1-068744_e102y(即x5是y)、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y或p1-068744_e59y_e102y。注意以上使用的这些抗体的命名基于kabat编号方案，其部分地通过它们的结构位置而非通过它们的序列位置来对残基编号。因为抗体可具有不同长度的cdr，所以所述编号方案可能未必对应于抗体序列的残基位置编号。在x1、x2、x3、x4和x5处的以上取代位于本文中的seq id no：95和103的重链序列的位置31、50、60、104和110处，如还可易于由审阅表11和表27所见。对于关于抗体残基编号格式的其他信息，参见例如m.dondelinger等人，front.immunol.9：2278(2018)。
8.此外，本公开包括包含重链可变区(vh)的抗hvista ab，所述重链可变区包含含有gftfsx1x2amh的vh cdr1，其中x1是h或s，并且x2是h或y(seq id no：693)；含有iiwydgsnx3x4yadsvkg的vh cdr2，其中x3是d或k，并且x4是d或y(seq id no：694)；和/或含有dsgfyx5syyfdy的vh cdr3，其中x5是d或s(seq id no：695)。(也参见图29c。)在ab p1-061015中，这些位置分别是s、y、k、y和s，而在p1-068748中，这些位置是h、h、d、d和d。在此类情况下，抗体可包含p1-068748的vh cdr1、cdr2和/或cdr3，但具有向p1-61015的位置的以下指定回复(参见表12和表28)：p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748-h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s的vh cdr1、cdr2和/或cdr3。注意本文中的命名基于kabat编号。在x1、x2、x3、x4和x5处的以上取代位于seq id no：95和99的重链序列的位置31、32、58、59和104处，例如如还可由审阅表12和表28以及seq id no：95和99所见。
附图说明
9.本技术要求权益的优先权美国临时申请含有至少一幅彩色附图。如果所述临时申请以后变得可为公众所获得，那么彩色附图的副本将在请求并支付必要费用后可从美国专
利与商标局(united states patent and trademark office)获得。
10.图1a至图1c显示vista的细胞外结构域含有格外高频率的组氨酸残基，这些组氨酸残基中的许多是保守的，并且这些组氨酸残基中的至少一些可参与受体-配体结合。图1a显示含有免疫球蛋白结构域的蛋白质的图，其中每种蛋白质的细胞外结构域氨基酸残基的数目绘制在x轴上，并且每种蛋白质的细胞外结构域内的组氨酸残基的频率绘制在y轴上。每个数据点的大小对应于每种蛋白质的细胞外结构域中组氨酸残基的总数。图1b显示人、食蟹猕猴和小鼠vista的细胞外结构域的比对氨基酸序列。标注了信号肽(sig)和跨膜结构域(tmd)序列位置。在所有三个物种之间保守的组氨酸残基以粗体和加下划线显示；在人和食蟹猕猴之间保守的组氨酸残基仅以粗体显示。图1c显示人vista免疫球蛋白结构域的三维结构的模型。组氨酸残基被描绘为球和棍迹线。
11.图2a至图2b显示其中vista的细胞外结构域中的组氨酸残基赋予对酸性ph而非生理ph的反受体选择性的模型。图2a显示组氨酸残基中吡咯铵基团(nh)的质子化的缺乏与存在之间的平衡。组氨酸在溶液中的pka是6.5，从而指示相比于在较高ph下，组氨酸残基在ph 6.5和更低下更可能是质子化的，因此带正电荷。图2b显示其中vista选择性地在酸性ph下衔接p-选择素糖蛋白配体1(psgl-1)或其他反受体和配体(vista-r)的模型。因此，在酸性ph下而非在生理ph下结合至vista的细胞外结构域的抗体对于抑制或调节vista活性可为关键的。
12.图3显示肿瘤浸润性巨噬细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞、cd4 效应t细胞、cd4 调控性t细胞、cd8 t细胞、天然杀伤(nk)细胞和b细胞上vista表面表达的水平(抗vista抗体染色的平均荧光强度(mfi))。vista在许多肿瘤浸润性白细胞特别是髓样细胞上表达。肿瘤微环境经常是酸性的，从而使得vista能够衔接反受体和配体。
13.图4a至图4g显示vista选择性地在酸性ph下结合至白细胞和psgl-1，在中性ph下具有少许或不具有结合，并且这个结合可由抗vista抗体阻断。图4a在左侧显示荧光缀合的重组vista多聚体与活化的人cd4 t细胞的结合的代表性直方图。从深灰色至浅灰色，填充直方图描绘在ph 7.0、6.5、6.4、6.3、6.1和6.0下的结合。一些直方图用它们的相应ph加以标注。在ph 6.0下非vista对照多聚体结合显示为未填充直方图。在右侧，图示了在不同ph下vista(圆圈)和对照(三角)多聚体与来自两个供者的活化的人cd4 t细胞的结合的平均mfi。图4b显示在ph 6.0和ph 7.4下重组vista多聚体与外周血单个核细胞(pbmc)的结合的代表性直方图。从深灰色至浅灰色，填充直方图描绘在ph 6.0下与cd19 b细胞、cd4 t细胞、cd8 t细胞、cd56 nk细胞和cd14 单核细胞的结合。未填充实线边界和虚线边界直方图分别描绘在ph 7.4下与总pbmc淋巴细胞和单核细胞的结合。图4c显示在抗vista阻断抗体(方块)或非vista特异性同种型匹配的对照抗体(圆圈)存在下，重组vista多聚体与活化的人cd4 t细胞的代表性结合。抗体浓度以对数标度绘制。还显示了非线性回归。三角描绘来自未用重组vista多聚体染色的活化的人cd4 t细胞的背景信号。图4d显示在ph 6.0下重组vista多聚体与被转染来表达人psgl-1的硫酸乙酰肝素缺陷性中国仓鼠卵巢(cho)细胞(株系pgsd-677，美国典型培养物保藏中心(american type culture collection))的结合的代表性二维流式细胞计量术图。多聚体结合在存在和不存在图4c中所示的抗vista阻断抗体下进行。未用重组vista多聚体染色的细胞作为对照加以显示。psgl-1抗体染色绘制在y轴上，并且vista多聚体染色绘制在x轴上。图4e显示在ph 6.0和ph 7.4下重组小鼠
vista-fc融合蛋白与小鼠脾细胞的结合的代表性直方图。从深灰色至浅灰色，填充直方图描绘在ph 6.0下与cd8 t细胞、cd11b 髓样细胞和cd4 t细胞的结合。未填充直方图描绘在ph 7.4下与总脾细胞的结合。图4f和图4g分别显示vista多聚体结合至单核细胞和嗜中性粒细胞，并且相比于在ph 7.4下，在ph 6.0下更强烈地达成此举。
14.图5a至图5d显示vista优先在酸性ph下介导t细胞抑制和细胞：细胞粘附，并且两种作用均可用抗vista阻断抗体逆转。图5a显示在ph 6.0和7.0下在表达hvista或载体对照的293t细胞(绘制在y轴上)与x轴上的内源性表达细胞表面硫酸乙酰肝素的cho细胞之间的代表性细胞：细胞接合物形成。图5b是在抗vista阻断抗体、抗vista非阻断抗体或同种型匹配的非vista特异性对照抗体存在下在ph 6.0下在前述细胞之间形成的细胞接合物的频率的图。图5c显示在各种ph下与表达h vista和抗人t细胞受体激动剂抗体okt3的单链可变片段的293t细胞(“人工抗原呈递细胞”)共培养之后由表达nfkb荧光素酶报告体的jurkat(人t细胞株系)细胞产生的荧光素酶活性的代表性图。将抗vista阻断抗体(方块)或同种型匹配的非vista特异性对照抗体(圆圈)添加至共培养的细胞中。在图5d中，图5a中所示的数据被绘制成相对于对照，在抗vista抗体处理的情况下荧光素酶信号的倍数增加(“效应大小”)。
15.图6a至图6g显示vista可见于细胞内内体特别是rab11 再循环内体中，并且可通过内体运输再循环至细胞表面以及从细胞表面再循环。图6a显示表达人vista的293t细胞内vista、rab5(早期内体标志物)、rab7(晚期内体标志物)和rab11(再循环内体标志物)的共定位。图6b显示人单核细胞内vista和rab11的共定位。细胞内vista与rab11 再循环内体共定位。与vista抗体具有相同同种型的非vista结合对照抗体(“cab”)不以可检测方式结合单核细胞。图6c显示三种抗vista抗体在ph 7.4(黑色)、6.7(深灰色)和6.(浅灰色)下与重组vista的结合。图6d显示vista表达性急性髓样白血病(aml)细胞系对由携带组织蛋白酶b敏感性接头和细胞毒性有效载荷的前述抗vista抗体1(倒三角)、2(圆圈)、3(方块)或非vista特异性对照抗体(三角)达成的杀灭的易感性。细胞活力(celltiter-glo lu)绘制在y轴上，并且抗体浓度绘制在x轴上。图6e比较抗vista抗体3的hvista结合与在酸性ph下不展现结合受损的经工程改造变体(“vista mab 3c”)的hvista结合。图6f显示比较抗vista抗体3(方块)和3c(菱形)的效能的抗体药物缀合物测定。图6g显示内体运输的示意图，其中vista通过早期内体和再循环内体再循环至细胞表面以及从细胞表面再循环。
16.图7a至图7f显示如何设计和筛选抗vista抗体变体文库以获得酸性ph选择性抗体。图7a显示在抗人vista抗体克隆p1-061029(缩写为
‘
029)的vh cdr 3中进行的用于创建供筛选的
‘
029文库的氨基酸取代。为潜在地改善在酸性ph下与vista的富含组氨酸的区域的结合，文库允许取代成带负电荷的氨基酸天冬氨酸和谷氨酸以及ph响应性组氨酸。x＝h、d或e。括号序列从合成移除以避免引入不利因素。合成了具有1-2个突变的p1-061029 hcdr3的总计647种独特序列。图7b显示针对酸性ph选择性抗体变体迭代筛选和选择
‘
029文库所采用的程序。r表示选择轮次。图7c显示代表性二维流式细胞计量术图数据，其显示在9轮选择之后的变体池。vista结合绘制在y轴上，并且变异抗体表达绘制在x轴上。显示了在各种抗体浓度和ph下的结合数据。图7d显示在ph 6.0和7.4下p1-061029和它的子代克隆与人vista的结合的图。图7e显示在ph 6.0下p1-061029和它的子代克隆与人vista的解离速率的图。图7f显示抗体p1-068761、p1-068767和p1-061029在ph 6.0和ph 7.4下与人vista
的spr结合数据。
17.图8a至图8f显示vista抗体p1-068761和p1-068767的酸性ph选择性细胞结合、阻断和效应子活性。图8a和图8b显示酸性ph选择性抗体p1-068761(图8a)和p1-068767(图8b)与异位表达人vista的raji细胞的结合的平均荧光强度。细胞在约ph 6.0(圆圈；图8a中的最高曲线)、6.1(方块；第三高曲线)、6.2(三角；第二高曲线)、6.4(倒三角；接近于ph 6.1曲线的第四高曲线)、6.6(菱形；从下部起第四曲线)、7.0(圆圈；从下部起第三曲线)、7.2(方块；从下部起第二曲线)和8.1(未填充三角；图8a中的下部曲线)下染色。用荧光缀合的抗人igg二级抗体检测结合。图8c显示在各种ph下在3125ng/ml下p1-068767(圆圈)和同种型匹配的非特异性对照抗体(三角)与异位表达人vista的raji细胞的结合。作为丧失50％的p1-068767结合所处的ph的“ph
50”是约6.6。图8d显示同种型匹配的非特异性对照抗体(对于ph 7.0和6.0分别是填充和未填充圆圈)、抗vista mab 2(“对照”，参见图6c，在ph 7.0和6.0下分别是填充和未填充方块)、p1-068761(对于ph 7.0和6.0分别是填充和未填充三角)和p1-068767(对于ph 7.0和6.0分别是填充和未填充倒三角)与人单核细胞的结合的平均荧光强度(mfi)。通过荧光缀合的抗人igg二级抗体检测结合。图8e显示由p1-061029(方块)、p1-068761(三角)和p1-068767(倒三角)在ph 6.0下对重组vista多聚体与活化的人cd4 t细胞的结合的类似阻断，而非vista特异性对照抗体(圆圈)不阻断vista结合。图8f显示p1-068761(三角)和p1-068767(倒三角)在生理ph下在介导抗体依赖性细胞细胞毒性(adcc)方面的降低的效能。还显示了p1-061029(方块)、非vista特异性阳性对照(抗体(圆圈))和非vista特异性阴性对照抗体(菱形)。对靶标细胞的nk细胞特异性溶解以总靶标细胞的百分比形式绘制在y轴上，并且抗体浓度绘制在x轴上。还显示了非线性回归。
18.图9显示酸性ph选择性抗vista抗体在食蟹猕猴中的增强的药物代谢动力学(pk)。该图显示vista抗体2(“对照”，圆圈，参见图6c)、vista抗体3(“酸性ph敏感性”，方块，参见图6c)或p1-068767(三角)处理的食蟹猕猴中随时间的血清抗体浓度。
19.图10a和图10b显示酸性ph选择性抗vista抗体
‘
761和
‘
767中突变的结合影响。图10a显示p1-068761回复突变体在ph 7.4、ph 6.7和ph 6.0下的动力学结合数据以及它们相对于p1-068761的回复突变的位置。图10b显示p1-068767回复突变体在ph 7.4、ph 6.7和ph 6.0下的动力学结合数据以及它们相对于p1-068767的回复突变的位置。
20.图11a至图11c显示各种抗vista抗体的表位划分和定位。图11a显示相较于p1-061029和vista抗体对照，p1-068761和p1-068767的vista表位竞争。图11b和图11c显示相较于非阻断hvista抗体(mab1；图11c)，如表14中所列的关于阻断hvista抗体(图11b)的所有残基的表位的图像。氨基酸残基66(h)和162(a)被指示来表示分子的定向。组氨酸残基呈灰色，并且表位残基呈黑色。
21.图12a至图12c显示以下的成像毛细管等电聚焦(icief)数据：图12a：p1-061029、图12b：p1-068761和图12c：p1-068767。指示了主要种类的等电点(pi主要)以及pi标志。
22.图13a和图13b显示
‘
029和
‘
015子代克隆的可变区的比对。图13a显示
‘
029和它的子代克隆的可变区的氨基酸序列的比对。图13b显示
‘
015和它的子代克隆的可变区的氨基酸序列的比对。
23.图14显示p1-068761的具有以及不具有k16r和t84a取代的vh序列的比对。双下划线残基显示框架区的位置16和84，并且阴影部分显示cdr。
24.图15a至图15o：将野生型c57bl6小鼠用mc38肿瘤植入，并且用非结合同种型匹配的对照抗体(黑色方块)、小鼠vista阻断抗体vista.10(向上三角)、小鼠pd-1阻断抗体(方块)或vista阻断抗体和pd-1阻断抗体的组合(向下三角)治疗。所有抗体都是小鼠igg1-d265a(fc惰性)同种型。(参见图15a至图15d。)这些数据代表三个独立实验。图15a至图15d显示随时间的肿瘤体积。每组n＝10。“tf”表示排斥了它们的肿瘤的小鼠。图15e和图15f显示在开始治疗之后7天，肿瘤内cd8 t细胞和cd4 t细胞的频率。每组n＝5。单因素anova连同邓奈特氏多重比较(dunnett’s multiple comparison)，p＝0.0001。图15g和图15h显示图15a至图15d中所示的单个小鼠的结果。图15i：将vista剔除小鼠和野生型同窝仔畜用mc38肿瘤植入，并且用非结合同种型匹配的对照抗体(上部两个曲线，0/7 tf和0/5 tf，用圆圈和向下三角标注)或用小鼠pd-1阻断抗体(下部两个曲线，0/5 tf和5/8tf，用方块和向下三角标注)治疗。中值肿瘤生长以及在研究结束时无肿瘤(tf)的小鼠的数目相对于小鼠的总数紧挨着每个曲线加以显示(例如0/7 tf)。这些数据代表两个独立实验。误差棒描绘四分位数间距。图15j至图15m显示用mc38肿瘤植入，并且用非结合同种型匹配的对照抗体(图15j)、小鼠pd-1阻断抗体(图15k)、小鼠pd-1阻断抗体和非ph选择性人vista阻断抗体p1-061029的组合(图15l)、或小鼠pd-1阻断抗体和酸性ph选择性人vista阻断抗体p1-068767的组合(图15m)治疗的人vista敲入(ki)小鼠的肿瘤体积。所有抗体都是小鼠igg1-d265a同种型。显示了随时间的肿瘤体积。每组n＝5-8。这些数据代表一个独立实验。图15n显示在静脉内注射5mg/kg的p1-061029(wt，向下三角；ki，方块)或p1-068767(wt，向上三角；ki，菱形)之后的人vista ki和野生型同窝仔畜(wt)小鼠血清抗体浓度。p1-061029和p1-068767在ki小鼠中的计算血清平均滞留时间(mrt)分别估计为4.1和71小时。每种抗体n＝4只ki小鼠和1-2只wt小鼠。这些数据代表单一实验。图15o显示在静脉内注射5mg/kg的vista.4(圆圈)或p1-068767(方块)之后的食蟹猕猴血清抗体浓度。vista.4和p1-061029的计算血清平均滞留时间(mrt)分别估计为7.6小时和717小时。每种抗体n＝1只猕猴。这些数据代表单一实验。当不另外指示时，误差棒描绘平均值标准误差。
25.图16a至图16c显示在开始治疗之后7天，pd-1(图16a)、lag-3(图16b)和tim-3(图16c)的肿瘤内cd8 t细胞表达的代表性直方图。误差棒描绘平均值标准误差。
26.图17a至图17c显示vista在酸性ph下结合至psgl-1，并且这个相互作用由vista抗体p1-061029、p1-068761、p1-068767和vista.4阻断。图17a显示在ph 6.0和ph 7.4下p-选择素-fc和vista-fc与捕集的psgl1的结合的bli结合传感图。图17b是显示抗体p1-061029、p1-068761、p1-068767和vista.4抑制psgl-1与hvista的结合的直方图。图17c显示由vista.4(向上三角)以及由抗psgl-1抗体kpl-1(圆圈)对vista-fc与cho-psgl-1细胞的结合的抗体阻断。这些数据代表两个独立实验。误差棒描绘平均值标准误差。
27.图18a至图18e显示p1-068767fab和hvista或(在图18e中)非阻断抗体vista.5和hvista的共晶体结构的图像。vista igv结构域的特征是它的中心β片层的异乎寻常的富含组氨酸的延伸部分。vista igv结构域与p1-068767抗原结合片段(fab)共结晶。在068767抗原结合片段(fab)共结晶。在分辨率下测定vista p1-068767复合物的晶体结构。图18a显示vista igv结构域：p1-068767 fab共晶体结构。图18a显示与p1-068767 fab(重链，深灰色；轻链，浅灰色)复合的vista igv结构域的总体结构。图18b显示vista和pd-l1igv结构域的叠加。vista组氨酸残基以棍表现形式描绘。图18b显示vista的igv结构域具有异乎寻常的富含组氨酸的β片层延伸部
分。图18c显示如通过vista p1-068767晶体结构揭示的p1-068767表位的分子表面(淡灰色静电表面)。图18c显示阻断抗体结合至vista的富含组氨酸的β片层延伸部分。图18d显示vista(灰色条带卡通，其中表位残基h121、h122和h123以棍表现形式描绘)与p1-068767(描绘为静电表面，其中它的残基e100和d102呈棍表现形式)之间的界面的放大视图。图18d显示酸性ph选择性p1-068767以酸性残基衔接vista组氨酸。图18e显示非阻断抗体vista.5在hvista的与p1-068767的结合区域不同的区域中结合。
28.图19显示如通过ms-hdx(ms迹线)测定的vista.4的表位。
29.图20显示基于图19中的数据，vista.4的表位在hvista的氨基酸序列中的位置。也在图19中突出显示的残基57-68、86-97和148-165以浅灰色本文和加下划线描绘于图20中。
30.图21a和图21b显示在抗体vista.4(三角)、vista.5(方块)和非vista结合抗体(对照，圆圈)存在下在ph 6.0下，vista多聚体与活化的人cd4 t细胞的结合。图21b显示相对于非阻断的t细胞，每种抗体的阻断效率。单因素anova连同邓奈特氏多重比较，***，p＜0.001。这些数据代表超过四个独立实验。误差棒描绘平均值标准误差。
31.图22显示在酸性ph下阻断vista结合的抗体是功能性的。阻断抗体vista.4(方块)、非阻断抗体vista.5(三角)和非vista结合(对照，圆圈)抗体对与被工程改造来表达vista和tcr激动剂的293t细胞(293t-okt3-vista)共培养的人cd4 t细胞的增殖(图22a)和干扰素γ产生(图22b)的影响。单因素anova连同邓奈特氏多重比较，*，p＜0.05。这些数据代表超过四个独立实验。
32.图23显示在不同ph下vista.4阻断对与293t-okt3-vista细胞共培养之后jurkat t细胞活化的影响(通过测量nf-kb抑制)。这些数据代表三个独立实验的复合。
33.图24显示ph对vista抑制人cd4 t细胞的影响。在vista.4(向上三角)、vista.5(向下三角)或非vista结合抗体(抗体对照，方块)存在下，在所指示ph下，用板包被okt3和vista-fc刺激细胞。还显示了用板包被okt3和对照igg(vista对照，黑色圆圈)或在无okt3(无okt3，灰色菱形)的情况下刺激的细胞。这些数据代表一个独立实验。
34.图25a至图25e显示vista：psgl-1结合特异性由组氨酸和磺基酪氨酸残基决定。如图25a中所示，在细胞中产生具有或不具有唾液酸化路易斯x装饰(分别是slx 和slx-)的人psgl-119聚体-fc重组蛋白。如所指示显示了vista-fc和p-选择素-fc的在ph 6.0(白色)和7.4(黑色)下的bli结合量值。数据代表单一独立实验。如图25b中所示，产生的具有唾液酸化路易斯x装饰的人psgl-1 19聚体-fc糖肽被分离成具有大于90％酪氨酸硫酸化(富含sy)和小于1％酪氨酸硫酸化(sy贫乏)的级分。如所指示显示了vista-fc和p-选择素-fc的在ph 6.0(白色)和7.4(黑色)下的bli结合量值。这些数据代表单一独立实验。如图25c至图25d中所提供，产生了在位置153-155处的组氨酸残基保持完整(wt vista)或由丙氨酸(h2a突变体)、天冬氨酸(h2d突变体)或精氨酸(h2r突变体)替换的人vista-fc重组蛋白。图25c显示在ph 6.0和7.4下野生型和突变vista-fc蛋白与捕集的psgl-1的结合的bli结合量值。这些数据代表单一实验。图25d显示wt vista(圆圈)、h2a突变体(方块)、h2d突变体(向下三角)和h2r突变体(灰色向上三角)以及对照(菱形)的在ph 6.0下vista-fc与cho-psgl-1细胞的结合。这些数据代表两个独立实验。图25e显示与vista的富含组氨酸的配体界面(灰色条带，下部)复合的psgl-1 19聚体糖肽(上部)的计算模型。标注了vista残基h98、h100、h153和h154。还标注了psgl-1残基y46、y48、e56、t57和y58。
35.图26a至图26f：图26a显示在所指示ph下gp1ba-his(方块)和psgl-119聚体-fc(圆圈)与捕集的vista-fc的bli结合量值。这些数据代表一个实验。图26b显示vista多聚体与人血小板的结合直方图。在ph 7.4和ph 6.0下在非vista结合对照抗体存在下，或在ph 6.0下在vista.4阻断抗体存在下进行结合。还显示了未染色的血小板(灰色填充直方图)。这些数据代表两个独立实验。图26c显示在所指示ph下vsig-3-fc与捕集的vista-fc的结合的bli结合量值。这些数据代表两个独立实验。图26d显示在ph 6.0下vsig-3-fc在所指示浓度下与捕集的vista-fc的结合的bli结合量值。竞争由单独缓冲液(最左侧棒条)、非结合同种型匹配的对照抗体、人psgl-1 19聚体-fc、p1-061029、p1-061767或vista.5(最右侧)提供。这些数据代表一个独立实验。图26e显示在ph 6.0(圆圈)或ph 7.4(方块)下vsig-3-fc与活化的人pbmc t细胞的结合。还显示了同种型匹配的对照抗体在ph 6.0(黑色菱形)和ph 7.4(灰色三角)下的结合。这些数据代表两个独立实验。误差棒描绘平均值标准误差。图26f显示在所指示ph下vista-fc(左侧)和psgl-1 19聚体-fc(右侧)与捕集的vista-fc的结合的bli结合量值。这些数据代表一个独立实验。
36.图27a至图27f：图27a至图27d显示抗体vista.4和p1-068767在ph 7.4(左侧)和ph 6.0(右侧)下的人和食蟹猕猴传感图。这些数据代表两个独立实验。图27a：vista.4的人vista传感图。图27b：p1-068767的人vista传感图。图27c：vista.4的食蟹猕猴vista传感图。图27d：p1-068767的食蟹猕猴vista传感图。图27e显示经标记p1-061029或p1-068767抗体在用mc38肿瘤植入，并且用相应抗体治疗的人vista敲入小鼠中的各种器官、血液或肿瘤中的水平。图27f显示仅用p1-061029(左侧，向下三角)或仅用p1-068767(右侧，向上三角)治疗的小鼠中的肿瘤生长。每组n＝16。这些数据是两个独立实验的复合。误差棒描绘平均值标准误差。
37.图28显示其中将人vista敲入小鼠用mc38肿瘤植入，并且用经荧光标记的p1-061029(左侧)或p1-068767(右侧)治疗的实验的结果。显示了在注射后51小时，所指示器官中的辐射效率(
×
109)。这些数据代表单一实验。
38.图29a至图29c显示来自抗hvista抗体与hvista的结合的spr测定的结果。图29a显示相较于亲本p1-061015抗体的结合，p1-068744回复突变体的在ph 6.0(黑色棒条)和ph 7.4(灰色棒条)下根据spr的相对hvista结合(r最大％)。图29b显示相较于亲本p1-061015抗体的结合，p1-068748回复突变体的在ph 6.0(黑色棒条)和ph 7.4(灰色棒条)下根据spr的相对hvista结合(r最大％)。图29c显示抗体重链cdr的比对结果的概述。p1-068744和p1-068748的粗体描绘氨基酸残基是其回复成p1-061015中的相应残基维持ph选择性，并且相较于p1-068744或p1-068748抗体，改善在ph 6.0下的kd的那些氨基酸残基。具有双下划线的氨基酸残基是其回复成p1-061015中的相应残基导致p1-068744或p1-068748的ph选择性的丧失的那些氨基酸残基，并且因此是这些抗体中对于与hvista的ph选择性结合重要的残基。具有锯齿状下划线的氨基酸残基是其回复成p1-061015中的相应残基对p1-068744或p1 068748与hvista的动力学和/或结合有害的那些氨基酸残基，并且因此是这些抗体中对于与hvista的结合重要的残基。显示了p1-068744和p1-068748抗体中所描绘氨基酸残基的别名。
39.图30a至图30d显示来自对在处于ph 6.0(黑色棒条)和ph 7.4(白色棒条)下的hbss/mes缓冲液中抗hvista抗体(10μg/ml)与被工程改造来表达hvista细胞外结构域的
293t细胞的结合的测试的结果。结果显示为相对于p1-061029的被设置成100％的结合归一化的结合百分比。图30a、图30b、图30c和图30d各自显示如在每个条形图以下显示的一组具体抗体的结果。
具体实施方式
40.定义
41.在本技术中，除非另外陈述，否则“或”的使用意指“和/或”。在多项从属权利要求的情形下，“或”的使用仅以替代方式回头引用超过一个先前独立或从属权利要求。术语“包含”、“包括”和“具有”在本文中可互换使用。根据本发明，“经分离”分子是已从它的天然环境移除的分子。因此，术语“经分离”未必反映分子已被纯化的程度。
42.术语“多肽”是指氨基酸残基聚合物，并且不限于最小长度。“蛋白质”可包含一个或多个多肽。此类氨基酸残基聚合物可含有天然或非天然氨基酸残基，并且包括但不限于由氨基酸残基组成的肽、寡肽、二聚体、三聚体和多聚体。全长蛋白质与其片段两者均由所述定义涵盖。所述术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化等。此外，出于本发明的目的，“多肽”或“蛋白质”分别是指包括对天然序列的修饰诸如缺失、添加和取代(通常在性质上是保守的)的多肽或蛋白质，只要所述蛋白质维持所需活性即可。这些修饰可为故意的，如通过定点诱变，或可为偶然的，诸如通过产生蛋白质的宿主的突变或归因于pcr扩增的错误。蛋白质可包含两个或更多个多肽。
[0043]“vista”是含有v结构域免疫球蛋白的t细胞活化抑制因子蛋白的缩写，其是b7免疫检查点调控因子家族的成员。vista也被称为pd-1同源物(pd1h)、b7-h5、c10orf54、esc分化-1(dies-1)、血小板受体gi24前体和死亡结构域1α(dd1α)。本文中的术语“hvista”或“huvista”是指人vista蛋白。hvista的包括它的信号肽的氨基酸序列以seq id no：1提供，而不具有信号肽的序列以seq id no：2提供。(参见以下序列表。)vista的细胞外结构域或“ecd”或“vista-ecd”是指vista蛋白的位于细胞外间隙中的部分，在hvista的情况下，其包含seq id no：2的氨基酸1-162。(也参见图1b。)hvista的“igv结构域”部分包含seq id no：2的残基5-135。
[0044]
术语“前导肽”或“前导序列”是指位于多肽的n末端处的有助于多肽从哺乳动物细胞分泌的氨基酸残基序列。前导序列可在多肽从哺乳动物细胞输出后被裂解，从而形成成熟蛋白质。前导序列可为天然的或合成的，并且它们可与它们所附接的蛋白质异源或同源。
[0045]
本文中的术语“抗体”或“ab”在最广泛意义上使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们展现所需抗原结合活性即可。如本文所用，所述术语是指包含重链的至少互补决定区(cdr)1、cdr2和cdr3以及轻链的至少cdr1、cdr2和cdr3的分子，其中所述分子能够结合至抗原。术语抗体包括但不限于能够结合抗原的片段，诸如fv、单链fv(scfv)、fab、fab’和(fab’)2。术语抗体还包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体、人抗体和诸如小鼠、食蟹猴等的各种物种的抗体。
[0046]
术语“重链”或“hc”是指包含至少重链可变区，具有或不具有前导序列的多肽。在一些实施方案中，重链包含重链恒定区的至少一部分。术语“全长重链”是指包含重链可变区和重链恒定区，具有或不具有前导序列，并且具有或不具有c末端赖氨酸(k)的多肽。
[0047]
术语“重链可变区”或“vh”是指包含重链的重链互补决定区(cdr)1、框架区(fr)2、cdr2、fr3和cdr3的区域。在一些实施方案中，重链可变区还包含fr1的至少一部分和/或fr4的至少一部分。如下所指定，在一些实施方案中，重链cdr1包含本文中的vh seq id no的残基26-35；重链cdr2包含本文中的vh seq id no的残基50-66，并且重链cdr3包含本文中的vh seq id no的残基99-110。在其他实施方案中，如果指定，那么重链cdr1对应于kabat残基31至35；重链cdr2对应于kabat残基50至65；并且重链cdr3对应于kabat残基95至102。参见例如kabat sequences of proteins of immunological interest(1987和1991，nih，bethesda，md.)。在一些实施方案中，重链cdr如本文中诸如在以下序列表中或表2中所指定。
[0048]
术语“轻链”或“lc”是指包含至少轻链可变区，具有或不具有前导序列的多肽。在一些实施方案中，轻链包含轻链恒定区的至少一部分。术语“全长轻链”是指包含轻链可变区和轻链恒定区，具有或不具有前导序列的多肽。
[0049]
术语“轻链可变区”或“vl”是指包含轻链cdr1、fr2、hvr2、fr3和hvr3的区域。在一些实施方案中，轻链可变区还包含fr1和/或fr4。如下所指定，在一些实施方案中，轻链cdr1包含本文中的vl seq id no的残基24-35；轻链cdr2包含本文中的vl seq id no的残基51-57，并且轻链cdr3包含本文中的vl seq id no的残基90-98。在其他实施方案中，如果指定，那么轻链cdr1对应于kabat残基24至34；轻链cdr2对应于kabat残基50至56；并且轻链cdr3对应于kabat残基89至97。参见例如kabat sequences of proteins of immunological interest(1987和1991，nih，bethesda，md.)。在一些实施方案中，轻链cdr如本文中诸如在序列表中所指定。
[0050]“嵌合抗体”是指其中重链和/或轻链的一部分源于特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分源于不同来源或物种的抗体。在一些实施方案中，“嵌合抗体”是指包含至少一个来自第一物种(诸如小鼠、大鼠、食蟹猴等)的可变区和至少一个来自第二物种(诸如人、食蟹猴等)的恒定区的抗体。在一些实施方案中，嵌合抗体包含至少一个小鼠可变区和至少一个人恒定区。在一些实施方案中，嵌合抗体包含至少一个食蟹猴可变区和至少一个人恒定区。在一些实施方案中，嵌合抗体的所有可变区都来自第一物种，并且所述嵌合抗体的所有恒定区都来自第二物种。
[0051]“人源化抗体”是指其中非人可变区的框架区中的至少一个氨基酸已用来自人可变区的相应氨基酸替换的抗体。在一些实施方案中，人源化抗体包含至少一个人恒定区或其片段。在一些实施方案中，人源化抗体是fab、scfv、(fab
′
)2等。
[0052]
如本文所用的“人抗体”是指在人中产生的抗体、在包含人免疫球蛋白基因的非人动物诸如中产生的抗体、以及使用体外方法诸如噬菌体展示选择的抗体，其中抗体谱系基于人免疫球蛋白序列。
[0053]
如本文所用的“vista抗体”或“抗vista抗体”是指在至少一些条件诸如酸性ph下特异性结合至vista的抗体。在一些实施方案中，抗体可为“huvista抗体”或“抗huvista抗体”，此指示它在至少一些条件下诸如在酸性ph下特异性结合至人vista蛋白。特异性结合至vista的细胞外结构域(ecd)的vista抗体例如可被称为“vista-ecd抗体”。
[0054]
在一些实施方案中，相较于特定的指定序列，本文中的抗体可含有一个或多个“保守性取代”。本文中的“保守性氨基酸取代”是指氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基
取代。具有类似侧链的氨基酸残基的家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷极性侧链的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、具有β-分支侧链的氨基酸(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)、以及具有芳族侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。在某些实施方案中，本文中的抗体中的预测非必需氨基酸被来自同一侧链家族(例如碱性、酸性、β-分支、芳族、不带电荷极性)的另一氨基酸残基替换。鉴定不消除抗原结合的核苷酸和氨基酸保守性取代的方法已例如在brummell等人，biochem.32：1180-1187(1993)；kobayashi等人protein lng.12(10)：879-884(1999)；以及burks等人proc.natl.acad.sci.usa 94：412-417(1997))中描述。
[0055]
在一些实施方案中，相比于在中性和/或生理ph下，抗体在酸性ph下可以更高亲和力结合至vista。在一些实施方案中，抗体在酸性ph下可以较高亲和力结合至vista，并且在中性和/或生理ph下仅可微不足道地或非特异性地结合。
[0056]
抗体与蛋白质例如vista-ecd蛋白的结合的“k
d”或“解离常数”是所述抗体与所述蛋白质例如vista-ecd蛋白的亲和力或特异性结合的量度。相比于较高kd，较低kd指示改善的结合或亲和力。kd由抗体和多肽的“解离速率”或k
解离
或kd与“缔合速率”或k
缔合
或ka之间的比率构成。解离速率和缔合速率是系统中两个结合配偶体缔合和解离所处的速率。因此，当缔合速率保持大致恒定时，较慢解离速率导致较高总体亲和力，以及因此较低kd。如本文所用，具有特定值“或更小”的k
解离
指示k
解离
或“解离速率”如所指定，或慢于指定速率。
[0057]
术语“特异性结合”或“特异性地结合”或类似术语表示两个多肽诸如抗体和它的多肽靶标的结合的kd小于将在相同条件下存在的在两个随机多肽之间的情况。换句话说，kd小于归因于系统中多肽的非特异性聚集的kd。
[0058]
在一些实施方案中，抗体在特定ph或ph范围下特异性结合至vista-ecd蛋白。本文中的“酸性”ph通常是指小于7.0的ph，“碱性”ph通常是指高于7.0的ph，并且“中性”ph通常是指约7.0的ph。本文中的“生理ph”是指在正常(即非癌性)生理条件下的ph，例如从7.35至7.45，或从7.3至7.4，诸如约7.4。在两个分子诸如vista和vista结合配偶体或vista和t细胞的结合的情形下使用的本文中的诸如“在酸性条件下的结合”或“在生理条件下的结合”等的短语分别是指在酸性ph下的结合和在生理ph下的结合。
[0059]
当提及“阻断配体(或受体)或竞争性抗体与单独或在细胞上的受体(或配体)的结合”或“抑制配体(或受体)或竞争性抗体与单独或在细胞上的受体(或配体)的结合”的抗体时，如果相较于对照存在统计显著的总体减少，例如50％或更大的总体减少，例如75％、80％、85％、90％、95％或更大的总体减少，那么结合被阻断。“抗vista阻断抗体”例如是可在至少一些条件下诸如在酸性ph下阻断vista与psgl-1或另一vista配体或受体或硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合的抗体。
[0060]
当相对于抗体在用所述抗体施用的患者的器官或组织诸如血液中的积累来提及所述抗体在所述患者中的肿瘤中的积累时，“更好地积累”或“优选地积累”是指相对于在器官或组织中的积累，在肿瘤中的积累大至少50％、75％、100％(即是2倍)，是5倍或更大。举例来说，相对于酸性ph选择性结合抗体在血液中的积累，它在受试者的肿瘤中积累达到至少两倍的更高水平。
[0061]
如本文所用的“肿瘤模型”是指体内临床前测定，其可用于研究vista-ecd抗体的生物活性，并且包括异种移植或天然小鼠肿瘤测定系统。在一些情况下，肿瘤模型可允许追踪在用抗体治疗后的肿瘤大小或生长，以及/或者追踪肿瘤中免疫细胞诸如特定类型的t细胞或nk细胞的存在，以确定抗体是否已触发或增强免疫应答。
[0062]
如本文所用的术语“免疫刺激剂”是指通过充当包括共刺激性分子的免疫刺激性分子的激动剂，或充当包括共抑制性分子的免疫抑制性分子的拮抗剂来刺激免疫系统的分子。免疫刺激性分子或免疫抑制性分子可为免疫检查点调控因子诸如vista或另一b7家族成员或如以下进一步描述的另一分子。免疫刺激剂可为生物制剂，诸如抗体或抗体片段、其他蛋白质或疫苗，或可为小分子药物。“免疫刺激性分子”包括起增强、刺激、诱导或以其他方式“开启”免疫应答的作用的受体或配体。如本文定义的免疫刺激性分子包括共刺激性分子。“免疫抑制性分子”包括起降低、抑制、遏制或以其他方式“切断”免疫应答的作用的受体或配体。如本文定义的免疫抑制性分子包括共抑制性分子。此类免疫刺激性分子和免疫抑制性分子可为例如见于免疫细胞诸如t细胞上，或见于涉及于先天免疫性中的细胞诸如nk细胞上的受体或配体。
[0063]
关于肽、多肽或抗体序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同源性”定义为在将序列对准以及必要时引入空位以实现最大序列同一性百分比，并且不将任何保守性取代考虑为序列同一性的一部分之后，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。出于确定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以属于本领域中的技能的各种方式实现，例如使用可公开获得的计算机软件，诸如blast、blast-2、align或megaligntm(dnastar)软件。本领域技术人员可确定适于测量比对的参数，包括为在所比较序列的全长上实现最大对准所需的任何算法。
[0064]
术语“触发”或“增强”是指启动或增加任何事件(诸如蛋白质配体结合)，或启动或增加任何生物活性(诸如免疫应答)或表型特征，或启动或增加所述活性或特征的发生、程度或可能性。“触发”或“增强”是相较于参考使活性、功能和/或数量开始或增加。触发或增强不必是完全的。举例来说，在某些实施方案中，就“增强”来说，其意指能够导致20％或更大的总体增加。在另一实施方案中，就“增强”来说，其意指能够导致50％或更大的总体增加。在另一实施方案中，就“增强”来说，其意指能够导致75％、85％、90％、95％或更大的总体增加。
[0065]
术语“抑制(inhibition/inhibit)”更一般来说是指降低或停止任何事件(诸如蛋白质配体结合)，或降低或停止任何表型特征，或降低或停止所述特征的发生、程度或可能性。“降低”或“抑制”是相较于参照使活性、功能和/或数量减少、降低或遏止。抑制或降低不必是完全的。举例来说，在某些实施方案中，就“降低”或“抑制”来说，其意指能够导致20％或更大的总体减少。在另一实施方案中，就“降低”或“抑制”来说，其意指能够导致50％或更大的总体减少。在另一实施方案中，就“降低”或“抑制”来说，其意指能够导致75％、85％、90％、95％或更大的总体减少。
[0066]
如本文所用的“治疗”涵盖用于人中的疾病的治疗剂的任何施用或施加，并且包括抑制所述疾病或所述疾病的进展或一种或多种疾病症状，抑制或减缓所述疾病或它的进展或它的一种或多种症状，遏止它的发展，部分地或完全地缓解所述疾病或它的一种或多种症状，或预防所述疾病的一种或多种症状的复发。
[0067]
术语“受试者”和“患者”在本文中可互换用于指代人。
[0068]
术语“有效量”或“治疗有效量”是指药物的有效治疗受试者中的疾病或病症，诸如以部分地或完全地缓解一种或多种症状的量。在一些实施方案中，有效量是指在必要剂量下以及持续必要时期，有效实现所需治疗或预防结果的量。
[0069]
术语“癌症”在本文中用于指代展现异常高水平的增殖和生长的一组细胞。癌症可为良性的(也被称为良性肿瘤)，恶化前的，或恶性的。癌细胞可为实体癌细胞或白血病癌细胞。术语“肿瘤生长”在本文中用于指代由构成癌的一个或多个细胞达成的导致所述癌的大小或程度相应增加的增殖或生长。
[0070]
可适用于本文中的治疗方法的癌症的实例包括但不限于上皮癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病。此类癌症的更特定非限制性实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、垂体癌、食道癌、星形细胞瘤、软组织肉瘤、非小细胞肺癌(包括鳞状细胞非小细胞肺癌)、肺腺癌、肺鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝脏癌症、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肾细胞癌、肝脏癌症、前列腺癌、阴门癌、甲状腺癌、肝癌、脑癌、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管癌、胆囊癌、胃癌、黑素瘤以及各种类型的头颈部癌(包括头颈部鳞状细胞癌)。
[0071]
与一种或多种其他治疗剂“组合”施用包括同时(并行)施用和以任何顺序连续(依序)施用。
[0072]“药学上可接受的载体”是指供与治疗剂一起使用，共同构成用于施用至受试者的“药物组合物”的本领域中常规的无毒固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封材料、配制助剂或载体。药学上可接受的载体应在所用剂量和浓度下对接受者无毒，并且可与制剂的其他成分相容。药学上可接受的载体应适于所用制剂。举例来说，如果治疗剂将以口服方式施用，那么载体可为凝胶胶囊。如果治疗剂将以皮下方式施用，那么理想的是，载体对皮肤无刺激，并且不导致注射部位反应。
[0073]“化学治疗剂”是可用于治疗癌症的化合物。可在本文中的方法中施用的化学治疗剂的实例包括但不限于烷基化剂，诸如噻替派(thiotepa)和环磷酰胺；烷基磺酸酯，诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，诸如苯佐替哌(benzodopa)、卡巴醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)和乌瑞替哌(uredopa)；乙烯亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺；多聚乙酰(acetogenins)(尤其是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物拓扑替康(topotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；凯利他汀(callystatin)；cc-1065(包括它的阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；念珠藻素(cryptophycin)(特别是念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物kw-2189和cb1-tm1)；软珊瑚醇(eleutherobin)；潘卡他汀(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑制素(spongistatin)；氮芥，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、氯玛法辛(chlomaphazine)、氯磷酰胺(chlorophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、二氯甲基二乙胺氧化物盐酸盐、美法仑(melphalan)、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、松龙苯芥(prednimustine)、氯乙环磷酰胺
ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；多糖复合物(jhs natural products，eugene，or)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西索菲兰(sizofuran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2，2
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，2
″‑
三氯三乙胺；新月毒素(trichothecene)(尤其是t-2毒素、维拉库林a(verracurin a)、杆孢菌素a(roridin a)和蛇形菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；格塞图辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside)(“ara-c”)；环磷酰胺；噻替派；类紫杉烷(taxoid)，例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)(bristol-myers squibb oncology，princeton，n.j.)、(太平洋紫杉醇的无克列莫佛(cremophor-free)的经白蛋白工程改造纳米粒子制剂)(american pharmaceutical partners，schaumberg，illinois)和多西他赛(doxetaxel)(-poulenc rorer，antony，france)；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；吉西他滨(gemcitabine)；6-硫鸟嘌呤(6-thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤；铂类似物，诸如顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)和卡铂(carboplatin)；长春花碱(vinblastine)；铂；依托泊苷(etoposide)(vp-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱(vincristine)；长春瑞滨(vinorelbine)；诺凡特龙(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素；氨基蝶呤(aminopterin)；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；伊立替康(开普拓沙(camptosar)，cpt-11)(包括伊立替康联合5-fu和甲酰四氢叶酸(leucovorin)的治疗方案)；拓扑异构酶(topoisomerase)抑制剂rfs 2000；二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine)(dmfo)；类视黄醇(retinoid)，诸如视黄酸(retinoic acid)；卡培他滨；考布他汀(combretastatin)；甲酰四氢叶酸(lv)；奥沙利铂，包括奥沙利铂治疗方案(folfox)；pkc-α、raf、h-ras、egfr(例如埃罗替尼(erlotinib))和vegf-a的使细胞增殖降低的抑制剂以及以上中的任一者的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
[0074]
可在本文中的方法中施用的其他非限制性示例性化学治疗剂包括用于调控或抑制激素对癌症的作用的抗激素剂，诸如抗雌激素剂和选择性雌激素受体调节剂(serm)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括也莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、克昔芬(keoxifene)、ly117018、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)；抑制调控肾上腺中的雌激素产生的芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如像4(5)-咪唑、胺鲁米特、乙酸甲地孕酮、浓西美坦(exemestane)、福美司坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、伏氯唑(vorozole)、来曲唑(letrozole)和阿那曲唑(anastrozole)；和抗雄激素剂，诸如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、亮脯利特(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他滨(troxacitabine)(一种1，3-二氧杂环戊烷核苷胞嘧啶类似
物)；反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉于异常细胞增殖中的信号传导通路中的基因的表达的那些，所述基因诸如像pkc-α、ralf和h-ras；核酶，诸如vegf表达抑制剂(例如核酶)和her2表达抑制剂；疫苗，诸如基因疗法疫苗，例如疫苗、疫苗和疫苗；ril-2；拓扑异构酶1抑制剂；rmrh；以及以上中的任一者的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
[0075]“抗血管生成剂”或“血管生成抑制剂”是指直接或间接抑制血管生成、血管发生或不合需要的血管通透性的小分子量物质、多核苷酸(包括例如抑制性rna(rnai或sirna))、多肽、经分离蛋白质、重组蛋白、抗体、或它们的缀合物或融合蛋白。应了解抗血管生成剂包括结合和阻断血管生成因子或它的受体的血管生成活性的那些剂。举例来说，可在本文中的方法中施用的抗血管生成剂可包括针对血管生成剂的抗体或其他拮抗剂，例如针对vegf-a的抗体(例如贝伐珠单抗(bevacizumab))或针对vegf-a受体(例如kdr受体或flt-1受体)的抗体、抗pdgfr抑制剂诸如(甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate))、阻断vegf受体信号传导的小分子(例如ptk787/zk2284、su6668、/su11248(苹果酸舒尼替尼(sunitinib malate))、amg706、或描述于例如国际专利申请wo 2004/113304中的那些)。抗血管生成剂还包括天然血管生成抑制剂例如血管抑素(angiostatin)、内皮抑素(endostatin)等。参见例如klagsbrun和d’amore(1991)annu.rev.physiol.53：217-39；streit和detmar(2003)oncogene 22：3172-3179(例如列出在恶性黑素瘤的情况下的抗血管生成疗法的表3)；ferrara和alitalo(1999)nature medicine 5(12)：1359-1364；tonini等人(2003)oncogene 22：6549-6556(例如列出已知抗血管生成因子的表2)；以及sato(2003)int.j.clin.oncol.8：200-206(例如列出用于临床试验中的抗血管生成剂的表1)。
[0076]
如本文所用的“生长抑制剂”是指在体外或在体内抑制细胞(诸如表达vegf的细胞)的生长的化合物或组合物。因此，可在本文中的方法中施用的生长抑制剂可为显著降低处于s期的细胞(诸如表达vegf的细胞)的百分比的生长抑制剂。生长抑制剂的实例包括但不限于阻断细胞周期进展(在除s期以外的处境时)的剂，诸如诱导g1阻滞和m期阻滞的剂。经典m期阻断剂包括长春类(长春新碱和长春花碱)、紫杉烷和拓扑异构酶ii抑制剂诸如多柔比星、表柔比星、柔红霉素、依托泊苷和博莱霉素。阻滞g1的那些剂还波及s期阻滞，例如dna烷基化剂诸如他莫昔芬、泼尼松、达卡巴嗪、二氯甲基二乙胺、顺铂、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶和ara-c。其他信息可见于mendelsohn和israel编，the molecular basis of cancer，第1章，题为
″
cell cycle regulation，oncogenes，and antineoplastic drugs
″
，由murakami等人所写(w.b.saunders，philadelphia，1995)中，例如第13页。紫杉烷(太平洋紫杉醇和多西他赛)是均源于紫杉树的抗癌药物。源于欧洲紫杉的多西他赛(rhone-poulenc rorer)是太平洋紫杉醇(bristol-myers squibb)的一种半合成类似物。太平洋紫杉醇和多西他赛促进从微管蛋白二聚体组装微管，并且通过防止解聚使微管稳定，此导致对细胞中的有丝分裂的抑制。
[0077]
术语“抗赘生组合物”是指包含至少一种活性治疗剂的可用于治疗癌症的组合物。治疗剂的实例包括但不限于例如化学治疗剂、生长抑制剂、细胞毒性剂、用于放射疗法中的
ecd蛋白。某些ab在ph 6.0-6.5的范围内的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白。
[0083]
本文还提供了在6.5或更小的ph下以10-6
m或更小的kd结合至vista-ecd蛋白诸如hvista-ecd或其片段的ab，所述片段包含vista的igv结构域或来自hvista的包含例如seq id no：2的氨基酸20-95、20-7035-70、35-95、35-127或37-125的区域。在一些实施方案中，ab以10-7
m或更小的kd结合。在一些实施方案中，ab以10-8
m或更小的kd结合。在一些实施方案中，ab以10-9
m的kd结合。在一些实施方案中，ab以10-10
m或更小的kd结合。举例来说，ab可在6.5或更小的ph下以10-8
m或更小的kd结合至vista-ecd蛋白。
[0084]
本文还提供了在6.0-6.5的ph范围内以10-6
m或更小的kd结合至vista-ecd蛋白的ab。在一些实施方案中，ab以10-7
m或更小的kd结合。在一些实施方案中，ab以10-8
m或更小的kd结合。在一些实施方案中，ab以10-9
m的kd结合。在一些实施方案中，ab以10-10
m或更小的kd结合。举例来说，ab可在6.5或更小的ph下，例如在6.0-6.5的ph范围内，以10-7
m或更小的kd结合至vista-ecd蛋白。此外，ab可在6.5或更小的ph下，例如在6.0-6.5的ph范围内，以10-8
m或更小的kd结合至vista-ecd蛋白。ab可在6.5或更小的ph下，例如在6.0-6.5的ph范围内，以10-9
m或更小的kd结合至hvista-ecd。
[0085]
本文还提供了例如在25℃下或在37℃下，在6.5或更小的ph下，以10-5 s-1
或更小的k
解离
特异性结合至vista-ecd蛋白诸如hvista-ecd或其片段的ab，所述片段包含vista的igv结构域或来自hvista的包含例如seq id no：2的氨基酸20-95、20-7035-70、35-95、35-127或37-125的区域。在一些实施方案中，ab在25℃下或在37℃下具有10-4 s-1
或更小的k
解离
。在一些实施方案中，ab在25℃下或在37℃下具有210-4 s-1
或更小的k
解离
。在一些实施方案中，ab在25℃下或在37℃下具有5 10-4 s-1
或更小的k
解离
。在一些实施方案中，ab在25℃下或在37℃下具有7 10-4 s-1
或更小的k
解离
。在一些实施方案中，ab在25℃下或在37℃下具有10-3 s-1
或更小的k
解离
。在一些实施方案中，ab在25℃下或在37℃下具有2 10-3 s-1
或更小的k
解离
。在一些实施方案中，ab在25℃下或在37℃下具有5 10-3 s-1
或更小的k
解离
。在一些实施方案中，ab在25℃下或在37℃下具有7 10-3 s-1
或更小的k
解离
。在一些实施方案中，ab在25℃下或在37℃下具有10-2 s-1
的k
解离
。在一些实施方案中，ab在25℃下或在37℃下具有10-1 s-1
或更小的k
解离
。举例来说，ab可在25℃下或在37℃下，在6.5或更小的ph下，以10-3 s-1
或更小的k
解离
特异性结合至vista-ecd蛋白。ab可在25℃下或在37℃下，在6.5或更小的ph下，以10-3 s-1
或更小的k
解离
特异性结合至hvista-ecd。此外，ab可在25℃下或在37℃下，在6.5或更小的ph下，以10-2 s-1
或更小的k
解离
特异性结合至vista-ecd蛋白。
[0086]
本文提供了例如在6.5或更小的ph下，以(i)10-6
m或更小、10-7
m或更小、10-8
m或更小、10-9
m或更小或10-10
m或更小的kd和(ii)如例如在25℃下或在37℃下测量的10-5 s-1
或更小、10-4
(或2、5或710-4
)s-1
或更小、10-3
(或2、5或7 10-4
)s-1
或更小、10-2 s-1
或更小或10-1 s-1
或更小的k
解离
速率结合至vista-ecd蛋白诸如hvista-ecd或其片段的ab，所述片段包含vista的igv结构域或来自hvista的包含例如seq id no：2的氨基酸20-95、20-7035-70或35-95、35-95、35-127或37-125的区域。举例来说，ab可在6.5或更小的ph下以10-7
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的10-3 s-1
或更小的k
解离
速率结合至vista-ecd蛋白。ab可在6.5或更小的ph下以10-8
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的10-3 s-1
或更小的k
解离
速率结合至vista-ecd蛋白。ab可在6.5或更小的ph下以10-8
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的10-2 s-1
或更小的k
解离
速率结合至vista-ecd蛋白。举例来说，
ab可在6.5或更小的ph下以10-7
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的10-3 s-1
或更小的k
解离
速率结合至hvista-ecd。ab可在6.5或更小的ph下以10-9
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的10-3 s-1
或更小的k
解离
速率结合至hvista-ecd。ab可在6.5或更小的ph下以10-9
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的10-2 s-1
或更小的k
解离
速率结合至hvista-ecd。ab可在6.5或更小的ph下以10-8
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的10-4
(或2、5或710-4
)s-1
或更小的k
解离
速率结合至hvista-ecd。ab可在6.5或更小的ph下以10-8
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的10-5
(或2、5或710-5
)s-1
或更小的k
解离
速率结合至hvista-ecd。ab可在6.5或更小的ph下以10-9
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的10-4
(或2、5或7 10-4
)s-1
或更小的k
解离
速率结合至hvista-ecd。ab可在6.5或更小的ph下以10-9
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的10-5
(或2、5或7 10-5)s-1
或更小的k
解离
速率结合至hvista-ecd。
[0087]
本文提供了例如在25℃下或在37℃下，在6.5或更小的ph下，以104m-1 s-1
或更高的k
缔合
特异性结合至vista-ecd蛋白的ab。在一些此类实施方案中，ab可以105m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合。在一些此类实施方案中，ab可以106m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合。在一些此类实施方案中，ab可以107m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合。举例来说，ab可在6.5或更小的ph下以如例如在25℃下或在37℃下测量的106m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合至vista-ecd蛋白。举例来说，ab可在6.5或更小的ph下以如例如在25℃下或在37℃下测量的106m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合至hvista的ecd。
[0088]
本文提供了例如在6.5或更小的ph下，以(i)10-6
m或更小、10-7
m或更小、10-8
m或更小、10-9
m或更小或10-10
m或更小的kd和(ii)如例如在25℃下或在37℃下测量的104m-1 s-1
或更高、105m-1 s-1
或更高、106m-1 s-1
或更高、107m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合至vista-ecd蛋白的ab。举例来说，ab可在6.5或更小的ph下以10-7
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的106m-1 s-1
或更高的k
缔合
速率结合至vista-ecd蛋白。举例来说，ab可在6.5或更小的ph下以10-8
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的106m-1 s-1
或更高的k
缔合
速率结合至vista-ecd蛋白。举例来说，ab可在6.5或更小的ph下以10-7
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的106m-1 s-1
或更高的k
缔合
速率结合至hvista-ecd。举例来说，ab可在6.5或更小的ph下以10-8
m或更小的kd和如例如在25℃下或在37℃下测量的106m-1 s-1
或更高的k
缔合
速率结合至hvista-ecd。
[0089]
在一些实施方案中，ab可在6.5或更小的ph下以10-7
m或更小的kd，以及以如例如在25℃下或在37℃下测量的10-5 s-1
或更小、2 10-5 s-1
或更小、5 10-5 s-1
或更小、7 10-5 s-1
或更小、10-4 s-1
或更小、2 10-4 s-1
或更小、5 10-4
s-1
或更小、7 10-4 s-1
或更小、10-3 s-1
或更小、2 10-3 s-1
或更小、5 10-3 s-1
或更小、7 10-3 s-1
或更小、10-2 s-1
或更小或10-1 s-1
或更小的k
解离
结合至vista-ecd蛋白。在一些实施方案中，ab可在6.5或更小的ph下以10-9
m或更小的kd，以及以如例如在25℃下或在37℃下测量的10-5 s-1
或更小、10-4 s-1
或更小、10-3 s-1
或更小、10-2 s-1
或更小或10-1 s-1
或更小的k
解离
结合至vista-ecd蛋白。在一些此类实施方案中，ab可在6.5或更小的ph下以10-10
m或更小的kd，以及以如例如在25℃下或在37℃下测量的10-5
s-1
或更小、10-4 s-1
或更小、10-3 s-1
或更小、10-2 s-1
或更小或10-1 s-1
或更小的k
解离
结合至vista-ecd蛋白。
[0090]
在一些实施方案中，ab可在6.5或更小的ph下以10-7
m或更小的kd，以及以如例如在
25℃下或在37℃下测量的104m-1 s-1
或更高、105m-1 s-1
或更高、106m-1 s-1
或更高、107m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合至vista-ecd蛋白。在一些实施方案中，ab可在6.5或更小的ph下以10-8
m或更小的kd，以及以如例如在25℃下或在37℃下测量的104m-1 s-1
或更高、105m-1 s-1
或更高、106m-1 s-1
或更高、107m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合至vista-ecd蛋白。在一些实施方案中，ab可在6.5或更小的ph下以10-9
m或更小的kd，以及以如例如在25℃下或在37℃下测量的104m-1 s-1
或更高、105m-1 s-1
或更高、106m-1 s-1
或更高、107m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合至vista-ecd蛋白。在一些此类实施方案中，ab可在6.5或更小的ph下以10-10
m或更小的kd，以及以如例如在25℃下或在37℃下测量的104m-1 s-1
或更高、105m-1 s-1
或更高、106m-1 s-1
或更高、107m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合至vista-ecd蛋白。
[0091]
在一些实施方案中，ab可在6.5或更小的ph下以10-7
m或更小的kd，以及以如例如在25℃下或在37℃下测量的10-5 s-1
或更小、10-4 s-1
或更小、10-3 s-1
或更小、10-2 s-1
或更小或10-1 s-1
或更小的k
解离
和如例如在25℃下或在37℃下测量的104m-1 s-1
或更高、105m-1 s-1
或更高、106m-1 s-1
或更高、107m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合至vista-ecd蛋白。在一些实施方案中，ab可在6.5或更小的ph下以10-8
m或更小的kd，以及以如例如在25℃下或在37℃下测量的10-5 s-1
或更小、10-4 s-1
或更小、10-3 s-1
或更小、10-2 s-1
或更小或10-1 s-1
或更小的k
解离
和如例如在25℃下或在37℃下测量的104m-1 s-1
或更高、105m-1 s-1
或更高、106m-1 s-1
或更高、107m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合至vista-ecd蛋白。在一些实施方案中，ab可在6.5或更小的ph下以10-9
m或更小的kd，以及以如例如在25℃下或在37℃下测量的10-5 s-1
或更小、10-4 s-1
或更小、10-3 s-1
或更小、10-2 s-1
或更小或10-1 s-1
或更小的k
解离
和如例如在25℃下或在37℃下测量的104m-1 s-1
或更高、105m-1 s-1
或更高、106m-1 s-1
或更高、107m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合至vista-ecd蛋白。在一些此类实施方案中，ab可在6.5或更小的ph下以10-10
m或更小的kd，以及以如例如在25℃下或在37℃下测量的10-5 s-1
或更小、10-4 s-1
或更小、10-3 s-1
或更小、10-2 s-1
或更小或10-1 s-1
或更小的k
解离
和如例如在25℃下或在37℃下测量的104m-1 s-1
或更高、105m-1 s-1
或更高、106m-1 s-1
或更高、107m-1 s-1
或更高的k
缔合
结合至vista-ecd蛋白。
[0092]
如还在以上所指示，在一些以上实施方案中，vista-ecd蛋白是hvista-ecd，或是hvista-ecd的一部分，诸如像igv结构域。在一些以上实施方案中，ab可特异性结合至包含seq id no：2的氨基酸20-95的表位。在一些以上实施方案中，ab可特异性结合至包含seq id no：2的氨基酸20-70的表位。在一些以上实施方案中，ab可特异性结合至包含seq id no：2的氨基酸35-95的表位。在一些以上实施方案中，ab可特异性结合至包含seq id no：2的氨基酸35-70的表位。在一些以上实施方案中，表位是不仅包含seq id no：2的来自残基20-95、20-70、35-95或35-70的以上部分中的一者，而且还包含seq id no：2的另一部分诸如seq id no：2的残基95-105的三维表位。在某些实施方案中，ab结合至hvista的由wo2015/097536中所述的ab结合的表位。举例来说，ab可与wo2015/097536中公开的ab竞争或交叉竞争与hvista的结合。在某些实施方案中，ab结合至人vista的构象性表位。在某些实施方案中，ab结合至人vista的构象性表位，所述构象性表位包含seq id no：2的残基103-111和seq id no：2的残基136-146，或存在于所述残基内。在某些实施方案中，ab结合至人vista的构象性表位，所述构象性表位包含seq id no：2的残基24-36、54-65和100-102，或存在于所述残基内。在某些实施方案中，ab结合至包含人vista的fg环中的氨基酸残基的构象性表位。在一些实施方案中，ab结合至包含seq id no：2的氨基酸残基35至127和/
或37-125的多肽。在一些实施方案中，ab结合至包含seq id no：2的氨基酸残基350-127的vista ecd多肽或其部分，但所述抗体不结合或以降低的亲和力结合至包含氨基酸取代的所述vista ecd多肽或其部分，其中所述取代(1)是对以下氨基酸残基中的一者的取代：t35、y37、k38、t39、y41、r54、t61、f62、q63、l65、h66、l67、h68、h69、f97、l115、v117、i119、h121、h122、s124、e125、r127和seq id no：2，或(2)是对以下氨基酸残基中的一者的取代：y37、t39、r54、f62、q63、h66、l115、v117、i119、s124或e125。在一些实施方案中，抗vista抗体与例如如实施例中以及/或者权利要求中阐述的本文所述的抗体具有相同结合特征(或显著相同的结合特征)。
[0093]
一些以上抗体可显示取决于ph的对vista-ecd蛋白的差异性结合亲和力。在酸性条件下例如在ph 6.5或更小下特异性结合至vista-ecd蛋白的某些ab还在中性和/或碱性ph下以类似亲和力特异性结合所述vista-ecd蛋白(即它们是“全结合剂”)。举例来说，一些此类ab可在ph 6.5下和在ph 7.0下(在例如25℃或在37℃下的恒定温度下)均以10-7
m或更小的kd结合至vista-ecd蛋白，以致ph 6.5下的kd在ph 7.0下的kd的1.5倍内。一些此类ab可在ph 6.5下和在ph 7.0下(在例如25℃或在37℃下的恒定温度下)均以10-8
m或更小的kd结合至vista-ecd蛋白，以致ph 6.5下的kd在ph 7.0下的kd的1.5倍内。一些此类ab可在ph 6.5下和在ph 7.0下(在例如25℃或在37℃下的恒定温度下)均以10-8
m或更小的kd结合至hvista-ecd，以致ph 6.5下的kd在ph 7.0下的kd的1.5倍内。
[0094]
在酸性条件下例如在ph 6.5或更小下特异性结合至vista-ecd蛋白的某些ab可在中性、生理和/或碱性条件下以较低亲和力结合所述vista-ecd蛋白(“ph敏感性结合剂”或“ph敏感性ab”)。在酸性条件下例如在ph 6.5或更小下特异性结合至vista-ecd蛋白的某些ab可在中性、生理和/或碱性条件下具有非显著的例如几乎不可检测的与所述vista-ecd蛋白的结合。举例来说，在一些实施方案中，ab可在ph 6.5下以10-8
m或更小的kd，以及在ph 7.0和/或ph 7.4下以大于10-8
m的kd结合至vista-ecd蛋白。在一些此类实施方案中，ab可在ph 6.5下以10-8
m或更小的kd，以及在ph 7.0和/或ph 7.4下以大于在ph 6.5下的kd的1.5倍的kd结合至vista-ecd蛋白。在某些实施方案中，提供了一种相比于在ph 7.0下，在ph 6.5下以至多1/1.5、1/2、1/5、1/10、1/20、1/50、1/100、1/300、1/500、1/1000或1/5000的kd特异性结合至vista-ecd蛋白的ph敏感性ab(在例如25℃或在37℃下的恒定温度下)。举例来说，在一些情况下，相对于ph 7.0和/或ph 7.4或更高，ab在ph 6.0下以至多1/1.5、1/2、1/5、1/10、1/20、1/50、1/100、1/300、1/500、1/1000或1/5000的kd结合至vista-ecd蛋白(在例如25℃或在37℃下的恒定温度下)。
[0095]
在某些实施方案中，相对于在中性、生理或碱性条件下的k
解离
，ab在酸性条件下以更低的k
解离
特异性结合至vista-ecd蛋白。在某些实施方案中，提供了一种相比于在ph 7.0和/或ph 7.4下的k
解离
，在ph 6.5下以至多1/1.5、1/2、1/5、1/10、1/20、1/50、1/100或1/1000的k
解离
在酸性条件下结合至vista-ecd蛋白的ab，如例如在25℃下或在37℃下所测量。换句话说，相比于在中性ph下，在酸性ph下的解离速率是更慢的。举例来说，在一些实施方案中，如例如在25℃下或在37℃下所测量，相对于ph 7.0和/或ph 7.4，ab在ph 6.0下以至多1/1.5、1/2、1/5、1/10、1/20、1/50、1/100或1/1000的k
解离
速率特异性结合至vista-ecd蛋白。在某些实施方案中，提供了一种相比于在ph 7.4下的k
解离
，在ph 6.5下以至多1/1.5、1/2、1/5、1/10、1/20、1/50、1/100或1/1000的k
解离
结合至vista-ecd蛋白的ab，如例如在25℃下或在37
℃下所测量。在一些实施方案中，如例如在25℃下或在37℃下所测量，相对于ph 7.4，ab在ph 6.0下以至多1/1.5、1/2、1/5、1/10、1/20、1/50、1/100或1/1000的k
解离
速率特异性结合至vista-ecd蛋白。在某些实施方案中，提供了一种相比于在ph 7.0-7.4下的k
解离
，在ph 6.0-6.5下以至多1/1.5、1/2、1/5、1/10、1/20、1/50、1/100或1/1000的k
解离
结合至vista-ecd蛋白的ab，如例如在25℃下或在37℃下所测量。
[0096]
在某些实施方案中，相对于中性、生理或碱性条件，ab在酸性条件下以更高的k
缔合
特异性结合至vista-ecd蛋白。在某些实施方案中，提供了一种相比于在ph 7.0和/或ph 7.4下的k
缔合
，在ph 6.5下以至少2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或1000倍的k
缔合
在酸性条件下结合至vista-ecd蛋白的ab，如例如在25℃下或在37℃下所测量。举例来说，在一些实施方案中，如例如在25℃下或在37℃下所测量，相比于在ph 7.0和/或ph 7.4下，ab在ph 6.0下以至少2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或1000倍的k
缔合
特异性结合至vista-ecd蛋白。
[0097]
在某些实施方案中，ab在seq id no：1中的至少一个组氨酸残基例如his 98是质子化的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白。在某些实施方案中，ab在ecd中的大多数组氨酸残基是质子化的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，预期所述ph是ph 6.5或更小，例如在ph 6.0与ph 6.5之间。
[0098]
本文还涵盖相对于酸性ph，在中性、生理或碱性ph下以更高的亲和力特异性结合至vista-ecd蛋白的ab，前提是在酸性ph下的结合亲和力仍然较高。举例来说，ab可在ph 6.5与ph 7.0两者下均以10-8
m或更小的kd结合至vista-ecd蛋白，但相比于在ph 6.5下，ab在ph 7.0下以至多1/1.5、1/2、1/5、1/10、1/20、1/50、1/100、1/300、1/500、1/1000的kd结合。
[0099]
本文还涵盖共有本章节的以上性质中的一者或多者的ab。以上性质，诸如特定kd、k
解离
、k
缔合
、具体表位不应被孤立对待。因此，ab可结合至包含以上所述的seq id no：2的区域中的一者的表位，并且还可具有如上所述的全结合或ph敏感性或ph选择性结合性质，如通过它在不同ph下的kd、k
解离
或k
缔合
的特性中的一者或多者所显示。
[0100]
在任何以上实施方案中，ab可为例如全长抗体(即包含全长重链(具有或不具有c末端赖氨酸)和全长轻链)，或抗原结合片段，诸如fab片段、fab’片段、(fab’)2片段、scfv片段、fv片段，或ab可为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体，或ab可为双特异性或多特异性抗体。
[0101]
可使用若干不同方法对ab在给定ph下结合至vista-ecd蛋白有多好进行确定。举例来说，通过表面等离子体共振(spr)，诸如通过则定。一示例性spr测定包括用固定化捕集试剂将一种或若干种抗体捕集在cm4传感器芯片上(例如使用抗人fc捕集试剂盒，ge healthcare目录号br-1008-39，或抗小鼠捕集试剂盒，ge healthcare目录号br-1008-39)，以及使vista抗原作为分析物以某一浓度系列流动以测定在具有所需ph的运行缓冲液中的结合动力学和亲和力。在一个实施方案中，将vista在0.1nm至500nm的范围内的两个至五个浓度(例如0.1nm、1nm、10nm、100nm、500nm)下以30ul/min的流速注射，至多四分钟缔合时间和至多十分钟解离时间。在结合循环之间，遵循相应捕集试剂盒的制造商说明书对捕集表面进行再生。所有数据都使用参考流动池和空白注射加以双重参考。使用t200评估软件，将具有简单1∶1动力学的数据相对于具有质
量传递的朗缪尔(langmuir)结合模型加以拟合。还可使用实施例中所述的spr方法。
[0102]
可使用在它们的表面上的表达vista ecd多肽、psgl-1或硫酸乙酰肝素的细胞测定ab对vista ecd多肽的亲和力，所述方法包括流式细胞计量术，并且其中在给定ph例如ph 6.5或更小下测定ab与细胞结合的vista-ecd的结合。一示例性流式细胞计量术测定包括以下：将异位表达hvista ecd的293t细胞或其他细胞再悬浮于调整至合乎需要的ph的由hbss 1％bsa组成的缓冲液中，所述ph例如是用mes调整的ph 6.0或用hepes调整的ph 7.4。将针对hvista的ab(例如人igg)从约20μg/ml连续稀释，并且在4℃下与再悬浮细胞一起孵育30分钟。接着将细胞用相同缓冲液洗涤两次，从而维持所需ph例如在6.0或7.4下的ph，并且与识别初级抗体(例如人igg)，并且在降低的ph下稳定的荧光团缀合二级抗体一起孵育。接着如前所述洗涤细胞，并且立刻在不固定的情况下在bd fortessa或其他流式细胞仪上进行获取。ab对vista ecd多肽的亲和力可如实施例中所述来测定。
[0103]
在某些实施方案中，结合至hvista ecd的ab阻断hvista与它的例如在细胞上的结合配偶体(例如vista受体)的结合。抑制或阻断可为100％或至少99％、95％、90％、85％、80％、75％或50％。在某些实施方案中，ab在酸性ph例如ph 6.5或更小下结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％，诸如至少75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，ab在小于ph 7.0的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。在某些实施方案中，ab在小于ph 6.8的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。在某些实施方案中，ab在小于ph 6.5的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。在某些实施方案中，ab在小于ph 6.3的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。在某些实施方案中，ab在小于ph 6.0的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。在某些实施方案中，ab在小于ph 5.8的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。在某些实施方案中，ab在小于ph 5.5的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。在某些实施方案中，ab在小于ph 5.3的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。在某些实施方案中，ab在小于ph 5.0的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。
[0104]
某些ab在ph 5.0-ph 7.0的范围内的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。某些ab在ph 5.0-ph 6.5的范围内的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。某些ab在ph 5.0-ph 6.0的范围内的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。某些ab在ph 5.5-ph 7.0的范围内的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。某些ab在ph 5.5-ph 6.5的范围内的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。某些ab在ph 6.0-6.5的范围内的ph下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且将vista与它的结合配偶体的结合抑制至少50％。对结合的抑制可如实施例中所述来测定。
[0105]
vista结合配偶体可为psgl-1，诸如人psgl-1。人psgl-1同工型的序列在本文中提
供为seq id no：3-10。vista结合至具有或不具有唾液酸化路易斯x(siayl lewis x)的psgl-1。结合配偶体还可为例如存在于某些细胞上的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖。
[0106]
可通过在抗体存在和不存在下测量对vista(或vista ecd或vista igv结构域或vista阳性细胞)与vista结合的细胞例如t细胞(例如活化的或未活化的cd4 t细胞、cd8 t细胞)、nk细胞或vista结合的其他细胞的结合的抑制来测定对与vista结合配偶体的结合的抑制。可用于确定抗体是否抑制vista与它的结合配偶体或表达结合配偶体的t细胞的结合的一示例性实验是流式细胞计量术测定，例如包括以下的测定：将来自供者血液、血沉棕黄层或白细胞单采术产物的人外周血单个核细胞再悬浮于调整至合乎需要的ph的由hbss 1％bsa组成的缓冲液中，所述ph例如是用mes调整的ph 6.0或用hepes调整的ph 7.4。接着在4℃下将细胞与20μg/ml的由融合于人igg1 fc的hvista ecd组成的重组嵌合蛋白(vista-fc)一起，并且与不同浓度的候选vista阻断抗体或对照抗体一起孵育30分钟。接着将细胞于相同缓冲液中洗涤两次，从而维持所需ph例如在6.0或7.4下的ph，并且在4℃下与识别vista-fc而非候选阻断抗体或对照抗体，并且在降低的ph下稳定的荧光团缀合二级抗体一起再孵育30分钟。接着如前所述洗涤细胞，并且立刻在不固定的情况下在bd fortessa或其他流式细胞仪上进行获取。对结合的抑制可例如如实施例中所述来测定。
[0107]
在具体实施方案中，本文所述的ab可触发或增强免疫应答，诸如抗原特异性免疫应答。在某些实施方案中，ab刺激t细胞活性，特别是在诸如见于肿瘤微环境中的酸性ph下。对t细胞活性的刺激可例如在混合淋巴细胞反应(mlr)中或在体外测定中采用抗原呈递细胞(天然或人工)和t细胞来测量。对t细胞活性的刺激还可使用例如实施例中所述的jurkat测定来测量。对t细胞活性的刺激还可通过测定从t细胞的ifn-γ分泌来测量，其中增强的ifn-γ分泌指示t细胞刺激。还可测量其他细胞因子从活化的t细胞的分泌。在某些实施方案中，测量活化的t细胞的信号转导，诸如nf-kb水平。在具体实施方案中，本文所述的ab抑制细胞粘附，此可如实施例中所述来测量。
[0108]
还可在单核细胞测定、adcc测定和adcp测定中显示抗vista ab的活性，特别是在诸如见于肿瘤微环境中的酸性ph下。
[0109]
在某些实施方案中，抗vista ab在肿瘤模型例如人vista敲入肿瘤模型中抑制肿瘤生长。
[0110]
如本文中的实施例中所示，抗vista ab在内体中的诸如用以增强抗体的药物代谢动力学(pk)性质即半衰期的再循环要求抗vista抗体在酸性条件下结合至vista。因此，如本文进一步所述，还预期在低ph例如6.5或更低的ph下结合至vista的抗vista ab相对于在酸性ph下不结合至vista的vista抗体具有更长的可接受半衰期。
[0111]
在一些实施方案中，相比于髓样细胞，vista抗体优选地在体内结合至一种或多种肿瘤。已在vista敲入小鼠中显示相比于血液，本文中的特定抗vista ab优先定位于肿瘤。举例来说，在一些实施方案中，在将ab施用至受试者之后24至51小时，相对于血液，本文中的抗体在肿瘤中以至少两倍的水平积累。在一些实施方案中，相对于受试者的血液，抗vista ab在肝或肺中不显著更多积累。在一些实施方案中，肿瘤中的抗vista ab可随时间而维持，例如多达在将vista ab施用至受试者后至少51小时。在一些实施方案中，通过向受试者施用经pet示踪剂标记的ab来测定抗vista ab在受试者中的定位。
[0112]
示例性hvista-ecd结合ab
[0113]
本文提供了相对于生理ph或中性ph，优先在酸性ph下(例如在酸性条件下)结合至hvista(ecd)的ab。
[0114]
本公开描述包括以下的抗hvista ab：p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s和p1-068748_d57k_d100s。这些抗体可含有p1-068744或p1-068748ab的被修饰来使至少一个h、d或e残基回复成见于p1-061015亲本抗体中的相同位置处的残基的重链cdr。在一些实施方案中，抗体可包含抗体p1-061015的轻链cdr。
[0115]
更一般来说，本公开包括包含重链可变区(vh)的抗hvista ab，所述重链可变区包含含有gftfsx1yamh的vh cdr1，其中x1是e或s(seq id no：690)；含有x2iwydgsnkyx3adsvkg的vh cdr2，其中x2是h或i，并且x3是e或y(seq id no：691)；和/或含有dsgfyx4syyfdx5的vh cdr3，其中x4是e或s，并且x5是e或y(seq id no：692)。在ab p1-061015中，这些位置分别是s、i、y、s和y，而在p1-068744中，这些位置是e、h、e、e和e。(例如参见图29c。)在此类情况下，抗体可包含p1-068744的vh cdr1、cdr2和/或cdr3，但具有向p1-61015的位置的以下指定回复(参见表11和表27)：p1-068744_e31s(即包含p1-068744的cdr，例外之处是x1是s)、p1-68744_h50i(即x2是i)、p1-68744_e59y(即x3是y)、p1-068744_e100s(即x4是s)、p1-068744_e102y(即x5是y)、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y或p1-068744_e59y_e102y。注意以上使用的这些抗体的命名基于kabat编号方案，其部分地通过它们的结构位置而非通过它们的序列位置来对残基编号。因为抗体可具有不同长度的cdr，所以所述编号方案可能未必对应于抗体序列的残基位置编号。在x1、x2、x3、x4和x5处的以上取代位于本文中的seq id no：95和103的重链序列的位置31、50、60、104和110处，如还可易于由审阅表11和表27所见。对于关于抗体残基编号格式的其他信息，参见例如m.dondelinger等人，front.immunol.9：2278(2018)。
[0116]
在一些实施方案中，抗体可包含p1-068744或其中x2是h的以上突变体中的一者的重链cdr。在一些实施方案中，抗体可包含p1-068744或其中x2是h，并且x4是e(即不包含h50i或e100s突变)的以上突变体中的一者的重链cdr。实例包括包含p1-068744、p1-068744_e31s、p1-068744_e31s_e102y、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e59y和p1-068744_e59y_e102y的重链cdr的抗体。在一些实施方案中，这些抗体还具有(a)由＜5
×
10-8
m、＜1
×
10-8
m、＜5
×
10-9
m或＜3
×
10-9
m的kd表示的对hvista的亲和力(例如根据表面等离子体共振(spr))；(b)在ph 7.4下1
×
10-8
和1
×
10-6
的kd(例如通过spr所测量)；并且/或者(c)抗体还具有在ph 6.0下＜5
×
10-3
(1/s)、＜4
×
10-3
(1/s)或＜3
×
10-3
(1/s)的k解离(例如如通过spr所测量)。在其他实施方案中，抗体保留在位置x2处的h和在位置x3处的e。在
一些实施方案中，抗体保留在位置x3与x4两者处的e。并且，在一些实施方案中，相较于p1-068744，抗体保留在x2处的h、在x3处的e和在x4处的e。实例包括包含p1-068744、p1-068744_e31s、p1-068744_e31s_e102y和p1-068744_e102y的重链cdr的抗体。在以上实施方案中，抗体可包含这些抗体中的一者的重链cdr和p061015抗体的轻链cdr。在一些实施方案中，抗hvista抗体是在本文中例如在以上所述的那些，在cdr或可变区中不具有其他氨基酸取代。
[0117]
此外，本公开包括包含重链可变区(vh)的抗hvista ab，所述重链可变区包含含有gftfsx1x2amh的vh cdr1，其中x1是h或s，并且x2是h或y(seq id no：693)；含有iiwydgsnx3x4yadsvkg的vh cdr2，其中x3是d或k，并且x4是d或y(seq id no：694)；和/或含有dsgfyx5syyfdy的vh cdr3，其中x5是d或s(seq id no：695)。在ab p1-061015中，这些位置分别是s、y、k、y和s，而在p1-068748中，这些位置是h、h、d、d和d。(参见图29c。)在此类情况下，抗体可包含p1-068748的vh cdr1、cdr2和/或cdr3，但具有向p1-61015的位置的以下指定回复(参见表12和表28)：p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s的vh cdr1、cdr2和/或cdr3。注意本文中的命名基于kabat编号。在x1、x2、x3、x4和x5处的以上取代位于seq id no：95和99的重链序列的位置31、32、58、59和104处，例如如还可由审阅表12和表28以及seqid no：95和99所见。
[0118]
在一些此类实施方案中，重链cdr可保留在位置x5处的d(即在氨基酸序列位置104处；即它们不含有如以上命名中所述的d100s取代)。在一些情况下，抗体保留在序列位置x5处的d，并且也显示与hvista的ph选择性结合。在一些情况下，抗体保留在位置x4处的d。在一些情况下，抗体保留在位置x4与x5两者处的d(即它相对于p1-068744不包括d58y或d100s取代)。在一些情况下，抗体包含p1-068748、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k或p1-068748_h31s_d57k的重链cdr。在一些此类情况下，抗体可包含这些抗体中的一者的重链cdr和p061015抗体的轻链cdr。在一些实施方案中，抗体还具有(a)由＜1
×
10-8
m、＜7
×
10-9
m或＜5
×
10-9
m的kd表示的对hvista的亲和力(例如根据表面等离子体共振(spr))；(b)在ph 7.4下5
×
10-8
和1
×
10-6
的kd(例如通过spr所测量)；并且/或者(c)抗体还具有在ph 6.0下＜5
×
10-3
(1/s)、＜4
×
10-3
(1/s)或＜3
×
10-3
(1/s)的k解离(例如如通过spr所测量)。在一些实施方案中，抗hvista抗体是在本文中例如在以上所述的那些，在cdr或可变区中不具有其他氨基酸取代。
[0119]
在某些实施方案中，抗hvista抗体包含p1-068744或p1-068748的vh和vl cdr，或包含p1-068744或p1-068748的包含向p1-061015中的那些氨基酸的氨基酸回复的vh和vl，其中这些氨基酸回复不影响抗体的所需特征。举例来说，抗hvista抗体可包含p1-068744或p1-068748的vh和vl或vh和vl cdr，具有不影响ph选择性和/或结合动力学的回复突变，如本文进一步所述。
[0120]
在某些实施方案中，抗hvista ab包含含有本文提供的任何抗hvista ab的vh cdr1、cdr2和/或cdr3的重链可变区(“vh”)。在某些实施方案中，抗hvista ab包含含有本文提供的任何抗hvista ab的vh cdr1、cdr2和cdr3的vh。在某些实施方案中，抗hvista ab包含含有以下各项的vh cdr1、cdr2和/或cdr3的vh：p1-061029或p1-061015或它们的子代，诸
068752p1-068754、p1-068761_e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g、p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y_p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s。
[0123]
在一些实施方案中，抗hvista ab可包含：
[0124]
(a)含有p1-061029的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-061029的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0125]
(b)含有p1-061015的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-061015的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0126]
(c)含有p1-068757的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068757的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0127]
(d)含有p1-068759的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068759的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0128]
(e)含有p1-068761的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0129]
(f)含有p1-068763的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068763的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0130]
(g)含有p1-068765的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068765的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0131]
(h)含有p1-068767的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0132]
(i)含有p1-068769的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068769的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0133]
(j)含有p1-068771的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068771的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0134]
(k)含有p1-068773的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068773的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0135]
(l)含有p1-068775的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068775的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0136]
(m)含有p1-069059的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-069059的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0137]
(n)含有p1-069061的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-069061的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0138]
(o)含有p1-069063的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-069063的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0139]
(p)含有p1-069065的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-069065的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0140]
(q)含有p1-069067的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-069067的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0141]
(r)含有p1-069069的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-069069的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0142]
(s)含有p1-069071的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-069071的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0143]
(t)含有p1-069073的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-069073的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0144]
(u)含有p1-069075的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-069075的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0145]
(v)含有p1-069077的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-069077的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0146]
(w)含有p1-068736的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068736的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0147]
(x)含有p1-068738的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068738的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0148]
(y)含有p1-068740的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068740的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0149]
(z)含有p1-068742的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068742的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0150]
(aa)含有p1-068744的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0151]
(bb)含有p1-068746的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068746的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0152]
(cc)含有p1-068748的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068748的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0153]
(dd)含有p1-068750的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068750
的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0154]
(ee)含有p1-068752的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068752的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0155]
(ff)含有p1-068754的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068754的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0156]
(gg)舍有p1-068761_e55a的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e55a的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0157]
(hh)含有p1-068761_h100g的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_h100g的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0158]
(ii)含有p1-068761_e56n的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e56n的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0159]
(jj)含有p1-068761_e55a_e56n的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e55a_e56n的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0160]
(kk)舍有p1-068761_e30d的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0161]
(ll)舍有p1-068761_e30d_e55a的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_e55a的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0162]
(mm)含有p1-068761_e56n_h100g的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e56n_h100g的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0163]
(nn)含有p1-068761_e30d_h100g的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_h100g的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0164]
(oo)舍有p1-068761_e30d_e56n的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_e56n的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0165]
(pp)含有p1-068761_e100ff的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e100ff的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0166]
(qq)含有p1-068761_e55a_e100ff的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e55a_e100ff的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0167]
(rr)含有p1-068761_h100g_e100ff的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_h100g_e100ff的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0168]
(ss)含有p1-068761_e30d_e100ff的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_e100ff的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0169]
(tt)舍有p1-068761_e56n_e100ff的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e56n_e100ff的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0170]
(uu)舍有p1-068761_e32y的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0171]
(vv)舍有p1-068761_e32y_e55a的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y_e55a的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0172]
(ww)舍有p1-068761_e32y_e56n的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y_e56n的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0173]
(xx)舍有p1-068761_e30d_e32y的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_e32y的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0174]
(yy)含有p1-068761_e32y_h100g的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y_h100g的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0175]
(zz)含有p1-068761_e32y_e100ff的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y_e100ff的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0176]
(aaa)含有p1-068767_d52n_d102v的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d52n_d102v的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0177]
(bbb)含有p1-068767_d52n的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d52n的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0178]
(ccc)舍有p1-068767_d52n_e55a的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d52n_e55a的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0179]
(ddd)含有p1-068767_e55a_d102v的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e55a_d102v的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0180]
(eee)含有p1-068767_d102v的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d102v的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0181]
(fff)舍有p1-068767_e55a的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e55a的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0182]
(ggg)含有p1-068767_e30d_d52n的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d_d52n的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0183]
(hhh)舍有p1-068767_e30d_d102v的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d_d102v的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0184]
(iii)含有p1-068767_e30d的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0185]
(jjj)含有p1-068767_e30d_e55a的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d_e55a的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0186]
(kkk)舍有p1-068767_e100ff_d102v的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e100ff_d102v的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0187]
(lll)含有p1-068767_e55a_e100ff的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e55a_e100ff的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0188]
(mmm)含有p1-068767_d52n_e100ff的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d52n_e100ff的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0189]
(nnn)含有p1-068767_e100ff的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e100ff的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0190]
(ooo)舍有p1-068767_e30d_e100ff的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d_e100ff的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0191]
(ppp)含有p1-061029_f100fe_v102d的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-061029_f100fe_v102d的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0192]
(qqq)含有p1-061029_f100fe的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有
p1-061029f100fe的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0193]
(rrr)含有p1-061029_v102d的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-061029_v102d的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0194]
(sss)含有p1-061029_y32e的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-061029_y32e的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0195]
(ttt)含有p1-061029_y32e_f100fe的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-061029_y32e_f100fe的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0196]
(uuu)舍有p1-068744_e31s的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e31s的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0197]
(vvv)含有p1-068744_h50i的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_h50i的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0198]
(www)含有p1-068744_e59y的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e59y的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0199]
(xxx)舍有p1-068744_e100s的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e100s的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0200]
(yyy)舍有p1-068744_e102y的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e102y的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0201]
(zzz)含有p1-068744_e31s_h50i的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e31s_h50i的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0202]
(aaaa)含有p1-068744_h50i_e59y的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_h50i_e59y的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0203]
(bbbb)舍有p1-068744_e59y_e100s的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744e5；9y_e100s的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0204]
(cccc)舍有p1-068744_e100s_e102y的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e100s_e102y的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0205]
(dddd)舍有p1-068744_e31s_e102y的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e31s_e102y的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0206]
(eeee)含有p1-068744_e31s_e59y的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e31s_e59y的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0207]
(ffff)含有p1-068744_e31s_e100s的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e31s_e100s的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0208]
(gggg)含有p1-068744_h50i_e100s的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_h50i_e100s的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0209]
(hhhh)含有p1-068744_h50i_e102y的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_h50i_e102y的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0210]
(iiii)含有p1-068744_e59y_e102y的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e59y_e102y的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
[0211]
(jjjj)含有p1-068748_h31s的vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_h31s的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl；
068767、p1-068769、p1-068771、p1-068773、p1-068775、p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069069、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068766、p1-068748、p1-068750、p1-068752p1-068754、p1-068761_e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g、p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y_p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s。
[0228]
在一些实施方案中，抗hvista ab包含抗体p1-061029、p1-068757、p1-068759、p1-068761、p1-068763、p1-068765、p1-068767、p1-068769、p1-068771、p1-068773、p1-068775、p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069069、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068766、p1-068748、p1-068750、p1-068752p1-068754、p1-068761_e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g、p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_
e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s中的任一者的vh，但在vh序列的框架区中具有1、2、3、4或5个氨基酸取代，诸如1、2、3、4或5个保守性取代。任选地，p1-061029或它的子代可在vh框架区中含有k16r和/或t84a的取代(p1-061015已在这些位置处具有r和a)。
[0229]
在某些实施方案中，抗hvista ab包含含有本文提供的任何抗hvista ab的vh cdr的氨基酸序列的vh cdr1、cdr2和cdr 3，并且包含与本文提供的任何抗hvista ab的vh至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh。在某些实施方案中，抗hvista ab包含含有与以下各项的vh的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的氨基酸序列的vh：p1-061029、p1-068757、p1-068759、p1-068761、p1-068763、p1-068765、p1-068767、p1-068769、p1-068771、p1-068773、p1-068775、p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069069、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068766、p1-068748、p1-068750、p1-068752p1-068754、p1-068761_e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g、p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y_p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748d100s、p1-068748h3_1s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s。在某些实施方案中，由于vh序列的框架区中的1、2、3、4或5个氨基酸取代，诸如1、2、3、4或5个保守性取代，或诸如p1-061029或它的子代中的k16r和/或t84a取代中的一者或两者，所以抗体的vh不同于序列表中所示的vh序列的vh。
068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y_p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s；以及含有p1-061029(seq id no：68)或p1-061015(seq id no：96)或包含t85v取代的p1-061015(参见seq id no：569；p1-061015t85v)的vl的氨基酸序列的vl。
[0234]
然而，在某些实施方案中，抗体的vh是p1-061029、p1-068757、p1-068759、p1-068761、p1-068763、p1-068765、p1-068767、p1-068769、p1-068771、p1-068773、p1-068775、p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069069、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068766、p1-068748、p1-068750、p1-068752p1-068754、p1-068761_e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g、p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30dd52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y_p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748h31s_d57k、p1-068748h31s_d58y、p1-068748h31s_d100s、p1-068748_h32y_
d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s的vh，但在vh序列的框架区中具有1、2、3、4或5个氨基酸取代，诸如1、2、3、4或5个保守性取代，并且vl是p1-061029或p1-061015或p1-061015t85v的vl。
[0235]
在某些实施方案中，抗hvista ab包含含有以下各项的vh和vl的氨基酸序列的vh和vl：p1-061029或p1-061015或它们的子代，诸如p1-061029、p1-068757、p1-068759、p1-068761、p1-068763、p1-068765、p1-068767、p1-068769、p1-068771、p1-068773、p1-068775、p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069069、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068766、p1-068748、p1-068750、p1-068752p1-068754、p1-068761_e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g、p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100se102y、p1-068744_e31s_e102y_p1-068744_e31s_e59y、p1-068744e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s，任选地，其中p1-061029或它的子代的vh包含k16r和/或t84a取代中的一者或两者，并且进一步任选地，其中p1-061015或它的子代的vl包含t85v取代。
[0236]
在某些实施方案中，抗hvista ab包含含有本文提供的任何抗hvista ab的vh cdr的氨基酸序列的vh cdr1、cdr2和cdr3，以及含有本文提供的任何抗hvista ab的vl cdr的氨基酸序列的vl cdr1、cdr2和cdr3，并且还包含各自与本文提供的任何抗hvista ab的相应vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl。在某些实施方案中，由于序列的框架区中的1、2、3、4或5个氨基酸取代，诸如1、2、3、4或5个保守性取代，或诸如在p1-061029或它的子代的情况下vh序列中的k16r和/或t84a取代中的一者或两者，或诸如在p1-061015或它的子代的情况下的t85v取代，所以抗体的vh和vl不同于序列表中所示的vh和vl序列。
[0237]
在某些实施方案中，抗hvista ab包含由本文提供的任何抗hvista ab的vh和vl的氨基酸序列组成的vh和vl。在某些实施方案中，抗hvista ab包含各自由以下各项的vh和vl
的氨基酸序列组成的vh和vl：p1-061029或p1-061015或它们的子代，诸如p1-061029、p1-068757、p1-068759、p1-068761、p1-068763、p1-068765、p1-068767、p1-068769、p1-068771、p1-068773、p1-068775、p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069069、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068766、p1-068748、p1-068750、p1-068752p1-068754、p1-068761_e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g、p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y_p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s，任选地，其中p1-061029或它的子代的vh通过具有k16r和/或t84a取代中的一者或两者而修饰，并且p1-061015或它的子代的vl通过具有t85v取代而修饰。
[0238]
抗hvista ab可包含：
[0239]
(a)含有p1-061029的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-061029的vl的氨基酸序列的vl；
[0240]
(b)含有p1-061015的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-061015的vl的氨基酸序列的vl；
[0241]
(c)含有p1-068757的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068757的vl的氨基酸序列的vl；
[0242]
(d)含有p1-068759的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068759的vl的氨基酸序列的vl；
[0243]
(e)含有p1-068761的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761的vl的氨基酸序列的vl；
[0244]
(f)含有p1-068763的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068763的vl的氨基酸序列的vl；
[0245]
(g)含有p1-068765的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068765的vl的氨基酸序列的
vl；
[0246]
(h)含有p1-068767的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767的vl的氨基酸序列的vl；
[0247]
(i)含有p1-068769的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068769的vl的氨基酸序列的vl；
[0248]
(j)含有p1-068771的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068771的vl的氨基酸序列的vl；
[0249]
(k)含有p1-068773的vh的氨基酸序列的vh和含有-068773的vl的氨基酸序列的vl；
[0250]
(l)含有p1-068775的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068775的vl的氨基酸序列的vl；
[0251]
(m)含有p1-069059的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069059的vl的氨基酸序列的vl；
[0252]
(n)含有p1-069061的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069061的vl的氨基酸序列的vl；
[0253]
(o)含有p1-069063的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069063的vl的氨基酸序列的vl；
[0254]
(p)含有p1-069065的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069065的vl的氨基酸序列的vl；
[0255]
(q)含有p1-069067的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069067的vl的氨基酸序列的vl；
[0256]
(r)含有p1-069069的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069069的vl的氨基酸序列的vl；
[0257]
(s)含有p1-069071的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069071的vl的氨基酸序列的vl；
[0258]
(t)含有p1-069073的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069073的vl的氨基酸序列的vl；
[0259]
(u)含有p1-069075的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069075的vl的氨基酸序列的vl；
[0260]
(v)含有p1-069077的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069077的vl的氨基酸序列的vl；
[0261]
(w)含有p1-068736的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068736的vl的氨基酸序列的vl；
[0262]
(x)含有p1-068738的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068738的vl的氨基酸序列的vl；
[0263]
(y)含有p1-068740的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068740的vl的氨基酸序列的vl；
[0264]
(z)含有p1-068742的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068742的vl的氨基酸序列的vl；
[0265]
(aa)含有p1-068744的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744的vl的氨基酸序列的vl；
[0266]
(bb)含有p1-068746的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068746的vl的氨基酸序列的vl；
[0267]
(cc)含有p1-068748的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748的vl的氨基酸序列的vl；
[0268]
(dd)含有p1-068750的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068750的vl的氨基酸序列的vl；
[0269]
(ee)含有p1-068752的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068752的vl的氨基酸序列的vl；
[0270]
(ff)含有p1-068754的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068754的vl的氨基酸序列的vl；
[0271]
(gg)含有p1-068761_e55a的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e55a的vl的氨基酸序列的vl；
[0272]
(hh)含有p1-068761_h100g的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_h100g的vl的氨基酸序列的vl；
[0273]
(ii)含有p1-068761_e56n的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e56n的vl的氨基酸序列的vl；
[0274]
(jj)含有p1-068761_e55a_e56n的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e55a_e56n的vl的氨基酸序列的vl；
[0275]
(kk)含有p1-068761_e30d的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d的vl的氨基酸序列的vl；
[0276]
(ll)含有p1-068761_e30d_e55a的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_e55a的vl的氨基酸序列的vl；
[0277]
(mm)含有p1-068761_e56n_h100g的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e56n_h100g的vl的氨基酸序列的vl；
[0278]
(nn)含有p1-068761_e30d_h100g的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_h100g的vl的氨基酸序列的vl；
[0279]
(oo)含有p1-068761_e30d_e56n的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_e56n的vl的氨基酸序列的vl；
[0280]
(pp)含有p1-068761_e100ff的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0281]
(qq)含有p1-068761_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e55a_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0282]
(rr)含有p1-068761_h100g_e100ff的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_h100g_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0283]
(ss)含有p1-068761_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0284]
(tt)含有p1-068761_e56n_e100ff的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_
e56n_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0285]
(uu)含有p1-068761_e32y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y的vl的氨基酸序列的vl；
[0286]
(vv)含有p1-068761_e32y_e55a的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y_e55a的vl的氨基酸序列的vl；
[0287]
(ww)含有p1-068761_e32y_e56n的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y_e56n的vl的氨基酸序列的vl；
[0288]
(xx)含有p1-068761_e30d_e32y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_e32y的vl的氨基酸序列的vl；
[0289]
(yy)含有p1-068761_e32y_h100g的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y_h100g的vl的氨基酸序列的vl；
[0290]
(zz)含有p1-068761_e32y_e100ff的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0291]
(aaa)含有p1-068767_d52n_d102v的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d52n_d102v的vl的氨基酸序列的vl；
[0292]
(bbb)含有p1-068767_d52n的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d52n的vl的氨基酸序列的vl；
[0293]
(ccc)含有p1-068767_d52n_e55a的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d52n_e55a的vl的氨基酸序列的vl；
[0294]
(ddd)含有p1-068767_e55a_d102v的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e55a_d102v的vl的氨基酸序列的vl；
[0295]
(eee)含有p1-068767_d102v的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d102v的vl的氨基酸序列的vl；
[0296]
(fff)含有p1-068767_e55a的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e55a的vl的氨基酸序列的vl；
[0297]
(ggg)含有p1-068767_e30d_d52n的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d_d52n的vl的氨基酸序列的vl；
[0298]
(hhh)含有p1-068767_e30d_d102v的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d_d102v的vl的氨基酸序列的vl；
[0299]
(iii)含有p1-068767_e30d的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d的vl的氨基酸序列的vl；
[0300]
(jjj)含有p1-068767_e30d_e55a的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d_e55a的vl的氨基酸序列的vl；
[0301]
(kkk)含有p1-068767_e100ff_d102v的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e100ff_d102v的vl的氨基酸序列的vl；
[0302]
(lll)含有p1-068767_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e55a_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0303]
(mmm)含有p1-068767_d52n_e100ff的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d52n_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0304]
(nnn)含有p1-068767_e100ff的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0305]
(ooo)含有p1-068767_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0306]
(ppp)含有p1-061029_f100fe_v102d的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-061029_f100fe_v102d的vl的氨基酸序列的vl；
[0307]
(qqq)含有p1-061029_f100fe的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-061029_f100fe的vl的氨基酸序列的vl；
[0308]
(rrr)含有p1-061029_v102d的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-061029_v102d的vl的氨基酸序列的vl；
[0309]
(sss)含有p1-061029_y32e的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-061029_y32e的vl的氨基酸序列的vl；
[0310]
(ttt)含有p1-061029_y32e_f100fe的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-061029_y32e_f100fe的vl的氨基酸序列的vl；
[0311]
(uuu)含有p1-068744_e31s的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e31s的vl的vl；
[0312]
(vvv)含有p1-068744_h50i的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_h50i的vl的vl；
[0313]
(www)含有p1-068744_e59y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e59y的vl的vl；
[0314]
(xxx)含有p1-068744_e100s的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e100s的vl的vl；
[0315]
(yyy)含有p1-068744_e102y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e102y的vl的vl；
[0316]
(zzz)含有p1-068744_e31s_h50i的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e31s_h50i的vl的vl；
[0317]
(aaaa)含有p1-068744_h50i_e59y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_h50i_e59y的vl的vl；
[0318]
(bbbb)含有p1-068744_e59y_e100s的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744e5；9y_e100s的vl的vl；
[0319]
(cccc)含有p1-068744_e100s_e102y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e100s_e102y的vl的vl；
[0320]
(dddd)含有p1-068744_e31s_e102y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e31s_e102y的vl的vl；
[0321]
(eeee)含有p1-068744_e31s_e59y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e31s_e59y的vl的vl；
[0322]
(ffff)含有p1-068744_e31s_e100s的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e31s_e100s的vl的vl；
[0323]
(gggg)含有p1-068744_h50i_e100s的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_
h50i_e100s的vl的vl；
[0324]
(hhhh)含有p1-068744_h50i_e102y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_h50i_e102y的vl的vl；
[0325]
(iiii)含有p1-068744_e59y_e102y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068744_e59y_e102y的vl的vl；
[0326]
(jjjj)含有p1-068748_h31s的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_h31s的vl的vl；
[0327]
(kkkk)含有p1-068748_h32y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_h32y的vl的vl；
[0328]
(llll)含有p1-068748_d57k的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_d57k的vl的vl；
[0329]
(mmmm)含有p1-068748_d58y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_d58y的vl的vl；
[0330]
(nnnn)含有p1-068748_d100s的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_d100s的vl的vl；
[0331]
(oooo)含有p1-068748_h31s_h32y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_h31s_h32y的vl的vl；
[0332]
(pppp)含有p1-068748_h32y_d57k的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_h32y_d57k的vl的vl；
[0333]
(qqqq)含有p1-068748_d57k_d58y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_d57k_d58y的vl的vl；
[0334]
(rrrr)含有p1-068748_d58y_d100s的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_d58y_d100s的vl的vl；
[0335]
(ssss)含有p1-068748_h31s_d57k的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_h31s_d57k的vl的vl；
[0336]
(tttt)含有p1-068748_h31s_d58y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_h31s_d58y的vl的vl；
[0337]
(uuuu)含有p1-068748_h31s_d100s的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_h31s_d100s的vl的vl；
[0338]
(vvvv)含有p1-068748_h32y_d58y的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_h32y_d58y的vl的vl；
[0339]
(wwww)含有p1-068748_h32y_d100s的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_h32y_d100s的vl的vl；或
[0340]
(xxxx)含有p1-068748_d57k_d100s的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068748_d57k_d100s的vl的vl，任选地，其中(a)或(c)-(ttt)的vh包含k16r和t84a取代中的一者或两者，并且任选地，其中(b)或(uuu)-(xxxx)的vl包含t85v取代。
[0341]
抗hvista ab可包含：
[0342]
(a)含有p1-061029的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-061029的vl的氨基酸序列的vl；
[0343]
(b)含有p1-068757的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068757的vl的氨基酸序列的vl；
[0344]
(c)含有p1-068759的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068759的vl的氨基酸序列的vl；
[0345]
(d)含有p1-068761的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761的vl的氨基酸序列的vl；
[0346]
(e)含有p1-068763的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068763的vl的氨基酸序列的vl；
[0347]
(f)含有p1-068765的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068765的vl的氨基酸序列的vl；
[0348]
(g)含有p1-068767的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767的vl的氨基酸序列的vl；
[0349]
(h)含有p1-068769的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068769的vl的氨基酸序列的vl；
[0350]
(i)含有p1-068771的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068771的vl的氨基酸序列的vl；
[0351]
(j)含有p1-068773的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有-068773的vl的氨基酸序列的vl；
[0352]
(k)含有p1-068775的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068775的vl的氨基酸序列的vl；
[0353]
(l)含有p1-069059的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069059的vl的氨基酸序列的vl；
[0354]
(m)含有p1-069061的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069061的vl的氨基酸序列的vl；
[0355]
(n)含有p1-069063的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069063的vl的氨基酸序列的vl；
[0356]
(o)含有p1-069065的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069065的vl的氨基酸序列的vl；
[0357]
(p)含有p1-069067的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069067的vl的氨基酸序列的vl；
[0358]
(q)含有p1-069069的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069069的vl的氨基酸序列的vl；
[0359]
(r)含有p1-069071的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069071的vl的氨基酸序列的vl；
[0360]
(s)含有p1-069073的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh、含有p1-069073的vl的氨基酸序列的vl；
[0361]
(t)含有p1-069075的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-069075的vl的氨基酸序列的vl；
[0362]
(u)含有p1-069077的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含
有p1-069077的vl的氨基酸序列的vl；
[0363]
(v)含有p1-068761_e55a的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e55a的vl的氨基酸序列的vl；
[0364]
(w)含有p1-068761_h100g的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_h100g的vl的氨基酸序列的vl；
[0365]
(x)含有p1-068761_e56n的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e56n的vl的氨基酸序列的vl；
[0366]
(y)含有p1-068761_e55a_e56n的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e55a_e56n的vl的氨基酸序列的vl；
[0367]
(z)含有p1-068761_e30d的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d的vl的氨基酸序列的vl；
[0368]
(aa)含有p1-068761_e30d_e55a的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_e55a的vl的氨基酸序列的vl；
[0369]
(bb)含有p1-068761_e56n_h100g的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e56n_h100g的vl的氨基酸序列的vl；
[0370]
(cc)含有p1-068761_e30d_h100g的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_h100g的vl的氨基酸序列的vl；
[0371]
(dd)含有p1-068761_e30d_e56n的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_e56n的vl的氨基酸序列的vl；
[0372]
(ee)含有p1-068761_e100ff的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0373]
(ff)含有p1-068761_e55a_e100ff的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e55a_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0374]
(gg)含有p1-068761_h100g_e100ff的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_h100g_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0375]
(hh)含有p1-068761_e30d_e100ff的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0376]
(ii)含有p1-068761_e56n_e100ff的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e56n_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0377]
(jj)含有p1-068761_e32y的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y的vl的氨基酸序列的vl；
[0378]
(kk)含有p1-068761_e32y_e55a的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y_e55a的vl的氨基酸序列的vl；
[0379]
(ll)含有p1-068761_e32y_e56n的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y_e56n的vl的氨基酸序列的vl；
[0380]
(mm)含有p1-068761_e30d_e32y的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e30d_e32y的vl的氨基酸序列的vl；
[0381]
(nn)含有p1-068761_e32y_h100g的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y_h100g的vl的氨基酸序列的vl；
[0382]
(oo)含有p1-068761_e32y_e100ff的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068761_e32y_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0383]
(pp)含有p1-068767_d52n_d102v的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d52n_d102v的vl的氨基酸序列的vl；
[0384]
(qq)含有p1-068767_d52n的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d52n的vl的氨基酸序列的vl；
[0385]
(rr)含有p1-068767_d52n_e55a的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d52n_e55a的vl的氨基酸序列的vl；
[0386]
(ss)含有p1-068767_e55a_d102v的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e55a_d102v的vl的氨基酸序列的vl；
[0387]
(tt)含有p1-068767_d102v的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh、含有p1-068767_d102v的vl的氨基酸序列的vl；
[0388]
(uu)含有p1-068767_e55a的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e55a的vl的氨基酸序列的vl；
[0389]
(vv)含有p1-068767_e30d_d52n的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d_d52n的vl的氨基酸序列的vl；
[0390]
(ww)含有p1-068767_e30d_d102v的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d_d102v的vl的氨基酸序列的vl；
[0391]
(xx)含有p1-068767_e30d的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d的vl的氨基酸序列的vl；
[0392]
(yy)含有p1-068767_e30d_e55a的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d_e55a的vl的氨基酸序列的vl；
[0393]
(zz)含有p1-068767_e100ff_d102v的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e100ff_d102v的vl的氨基酸序列的vl；
[0394]
(aaa)含有p1-068767_e55a_e100ff的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e55a_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0395]
(bbb)含有p1-068767_d52n_e100ff的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_d52n_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0396]
(ccc)含有p1-068767_e100ff的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0397]
(ddd)含有p1-068767_e30d_e100ff的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-068767_e30d_e100ff的vl的氨基酸序列的vl；
[0398]
(eee)含有p1-061029_f100fe_v102d的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-061029_f100fe_v102d的vl的氨基酸序列的vl；
[0399]
(fff)含有p1-061029_f100fe的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-061029_f100fe的vl的氨基酸序列的vl；
[0400]
(ggg)含有p1-061029_v102d的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-061029_v102d的vl的氨基酸序列的vl；
[0401]
(hhh)含有p1-061029_y32e的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列
的vh和含有p1-061029_y32e的vl的氨基酸序列的vl；或
[0402]
(iii)含有p1-061029_y32e_f100fe的通过k16r和/或t84a取代而修饰的vh的氨基酸序列的vh和含有p1-061029_y32e_f100fe的vl的氨基酸序列的vl。
[0403]
抗hvista ab可包含：
[0404]
(a)含有p1-061029的vh的vh cdr的vh和含有p1-061029的vl cdr的vl，以及与p1-061029的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0405]
(b)含有p1-061015的vh的vh cdr的vh和含有p1-061015的vl cdr的vl，以及与p1-061015的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0406]
(c)含有p1-068757的vh的vh cdr的vh和含有p1-068757的vl cdr的vl，以及与p1-068757的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0407]
(d)含有p1-068759的vh的vh cdr的vh和含有p1-068759的vl cdr的vl，以及与p1-068759的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0408]
(e)含有p1-068761的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761的vl cdr的vl，以及与p1-068761的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0409]
(f)含有p1-068763的vh的vh cdr的vh和含有p1-068763的vl cdr的vl，以及与p1-068763的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0410]
(g)含有p1-068765的vh的vh cdr的vh和含有p1-068765的vl cdr的vl，以及与p1-068765的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0411]
(h)含有p1-068767的vh的vh cdr的vh和含有p1-068767的vl cdr的vl，以及与p1-068767的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0412]
(i)含有p1-068769的vh的vh cdr的vh和含有p1-068769的vl cdr的vl，以及与p1-068769的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0413]
(j)含有p1-068771的vh的vh cdr的vh和含有p1-068771的vl cdr的vl，以及与p1-068771的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0414]
(k)含有p1-068773的vh的vh cdr的vh和含有p1-068773的vl cdr的vl，以及与p1-068773的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0415]
(l)含有p1-068775的vh的vh cdr的vh和含有p1-068775的vl cdr的vl，以及与p1-068775的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、
至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0416]
(m)含有p1-069059的vh的vh cdr的vh和含有p1-069059的vl cdr的vl，以及与p1-069059的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0417]
(n)含有p1-069061的vh的vh cdr的vh和含有p1-069061的vl cdr的vl，以及与p1-069061的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0418]
(o)含有p1-069063的vh的vh cdr的vh和含有p1-069063的vl cdr的vl，以及与p1-069063的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0419]
(p)含有p1-069065的vh的vh cdr的vh和含有p1-069065的vl cdr的vl，以及与p1-069065的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0420]
(q)含有p1-069067的vh的vh cdr的vh和含有p1-069067的vl cdr的vl，以及与p1-069067的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0421]
(r)含有p1-069069的vh的vh cdr的vh和含有p1-069069的vl cdr的vl，以及与p1-069069的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0422]
(s)含有p1-069071的vh的vh cdr的vh和含有p1-069071的vl cdr的vl，以及与p1-069071的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0423]
(t)含有p1-069073的vh的vh cdr的vh和含有p1-069073的vl cdr的vl，以及与p1-069073的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0424]
(u)含有p1-069075的vh的vh cdr的vh和含有p1-069075的vl cdr的vl，以及与p1-069075的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0425]
(v)含有p1-069077的vh的vh cdr的vh和含有p1-069077的vl cdr的vl，以及与p1-069077的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0426]
(w)含有p1-068736的vh的vh cdr的vh和含有p1-068736的vl cdr的vl，以及与p1-068736的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0427]
(x)含有p1-068738的vh的vh cdr的vh和含有p1-068738的vl cdr的vl，以及与p1-068738的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0428]
(y)含有p1-068740的vh的vh cdr的vh和含有p1-068740的vl cdr的vl，以及与p1-068740的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、
至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0429]
(z)含有p1-068742的vh的vh cdr的vh和含有p1-068742的vl cdr的vl，以及与p1-068742的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0430]
(aa)含有p1-068744的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744的vl cdr的vl，以及与p1-068744的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0431]
(bb)含有p1-068746的vh的vh cdr的vh和含有p1-068746的vl cdr的vl，以及与p1-068746的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0432]
(cc)含有p1-068748的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748的vl cdr的vl，以及与p1-068748的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0433]
(dd)含有p1-068750的vh的vh cdr的vh和含有p1-068750的vl cdr的vl，以及与p1-068750的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0434]
(ee)含有p1-068752的vh的vh cdr的vh和含有p1-068752的vl cdr的vl，以及与p1-068752的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0435]
(ff)含有p1-068754的vh的vh cdr的vh和含有p1-068754的vl cdr的vl，以及与p1-068754的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0436]
(gg)含有p1-068761_e55a的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e55a的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e55a的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0437]
(hh)含有p1-068761_h100g的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_h100g的vl cdr的vl，以及与p1-068761_h100g的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0438]
(ii)含有p1-068761_e56n的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e56n的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e56n的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0439]
(jj)含有p1-068761_e55a_e56n的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e55a_e56n的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e55a_e56n的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0440]
(kk)含有p1-068761_e30d的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e30d的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e30d的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0441]
(ll)含有p1-068761_e30d_e55a的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e30d_e55a
的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e30d_e55a的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0442]
(mm)含有p1-068761_e56n_h100g的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e56n_h100g的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e56n_h100g的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0443]
(nn)含有p1-068761_e30d_h100g的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e30d_h100g的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e30d_h100g的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0444]
(oo)含有p1-068761_e30d_e56n的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e30d_e56n的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e30d_e56n的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0445]
(pp)含有p1-068761_e100ff的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e100ff的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e100ff的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0446]
(qq)含有p1-068761_e55a_e100ff的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e55a_e100ff的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e55a_e100ff的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0447]
(rr)含有p1-068761_h100g_e100ff的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_h100g_e100ff的vl cdr的vl，以及与p1-068761_h100g_e100ff的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0448]
(ss)含有p1-068761_e30d_e100ff的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e30d_e100ff的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e30d_e100ff的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0449]
(tt)含有p1-068761_e56n_e100ff的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e56n_e100ff的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e56n_e100ff的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0450]
(uu)含有p1-068761_e32y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e32y的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e32y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0451]
(vv)含有p1-068761_e32y_e55a的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e32y_e55a的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e32y_e55a的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少
93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0452]
(ww)含有p1-068761_e32y_e56n的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e32y_e56n的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e32y_e56n的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0453]
(xx)含有p1-068761_e30d_e32y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e30d_e32y的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e30d_e32y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0454]
(yy)含有p1-068761_e32y_h100g的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e32y_h100g的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e32y_h100g的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0455]
(zz)含有p1-068761_e32y_e100ff的vh的vh cdr的vh和含有p1-068761_e32y_e100ff的vl cdr的vl，以及与p1-068761_e32y_e100ff的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0456]
(aaa)含有p1-068767_d52n_d102v的vh的vh cdr的vh和含有p1-068767_d52n_d102v的vl cdr的vl，以及与p1-068767_d52n_d102v的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0457]
(bbb)含有p1-068767_d52n的vh的vh cdr的vh和含有p1-068767_d52n的vl cdr的vl，以及与p1-068767_d52n的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0458]
(ccc)含有p1-068767_d52n_e55a的vh的vh cdr的vh和含有p1-068767_d52n_e55a的vl cdr的vl，以及与p1-068767_d52n_e55a的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0459]
(ddd)含有p1-068767_e55a_d102v的vh的vh cdr的vh和含有p1-068767_e55a_d102v的vl cdr的vl，以及与p1-068767_e55a_d102v的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0460]
(eee)含有p1-068767_d102v的vh的vh cdr的vh和含有p1-068767_d102v的vl cdr的vl，以及与p1-068767_d102v的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0461]
(fff)含有p1-068767_e55a的vh的vh cdr的vh和含有p1-068767_e55a的vl cdr的vl，以及与p1-068767_e55a的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
cdr的vl，以及与p1-061029_f100fe的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0473]
(rrr)含有p1-061029_v102d的vh的vh cdr的vh和含有p1-061029_v102d的vl cdr的vl，以及与p1-061029_v102d的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0474]
(sss)含有p1-061029_y32e的vh的vh cdr的vh和含有p1-061029_y32e的vl cdr的vl，以及与p1-061029_y32e的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0475]
(ttt)含有p1-061029_y32e_f100fe的vh的vh cdr的vh和含有p1-061029_y32e_f100fe的vl cdr的vl，以及与p1-061029_y32e_f100fe的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0476]
(uuu)含有p1-068744_e31s的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_e31s的vl cdr的vl，以及与p1-068744_e31s的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0477]
(vvv)含有p1-068744_h50i的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_h50i的vl cdr的vl，以及与p1-068744_h50i的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0478]
(www)含有p1-068744_e59y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_e59y的vl cdr的vl，以及与p1-068744_e59y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0479]
(xxx)含有p1-068744_e100s的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_e100s的vl cdr的vl，以及与p1-068744_e100s的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0480]
(yyy)含有p1-068744_e102y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_e102y的vl cdr的vl，以及与vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0481]
(zzz)含有p1-068744_e31s_h50i的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_e31s_h50i的vl cdr的vl，以及与p1-068744_e102y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0482]
(aaaa)含有p1-068744_h50i_e59y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_h50i_e59y的vl cdr的vl，以及与p1-068744_h50i_e59y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0483]
(bbbb)含有p1-068744_e59y_e100s的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_e5；9y_e100s的vl cdr的vl，以及与p1-068744_e59y_e100s的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0484]
(cccc)含有p1-068744_e100s_e102y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_e100s_e102y的vl cdr的vl，以及与p1-068744_e100s_e102y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0485]
(dddd)含有p1-068744_e31s_e102y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_e31s_e102y的vl cdr的vl，以及与p1-068744_e31s_e102y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0486]
(eeee)含有p1-068744_e31s_e59y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_e31s_e59y的vl cdr的vl，以及与p1-068744_e31s_e59y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0487]
(ffff)含有p1-068744_e31s_e100s的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_e31s_e100s的vl cdr的vl，以及与p1-068744_e31s_e100s的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0488]
(gggg)含有p1-068744__h50i_e100s的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_h50i_e100s的vl cdr的vl，以及与p1-068744_h50i_e100s的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0489]
(hhhh)含有p1-068744_h50i_e102y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_h50i_e102y的vl cdr的vl，以及与p1-068744_h50i_e102y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0490]
(iiii)含有p1-068744_e59y_e102y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068744_e59y_e102y的vl cdr的vl，以及与p1-068744_e59y_e102y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0491]
(jjjj)含有p1-068748_h31s的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_h31s的vl cdr的vl，以及与p1-068748_h31s的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0492]
(kkkk)含有p1-068748_h32y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_h32y的vl cdr的vl，以及与p1-068748_h32y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0493]
(llll)含有p1-068748_d57k的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_d57k的vl cdr的vl，以及与p1-068748_d57k的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0494]
(mmmm)含有p1-068748_d58y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_d58y的vl cdr1、cdr2和cdr3的vl，以及与p1-068748_d58y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至
少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0495]
(nnnn)含有p1-068748_d100s的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_d100s的vl cdr的vl，以及与p1-068748_d100s的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0496]
(oooo)含有p1-068748_h31s_h32y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_h31s_h32y的vl cdr的vl，以及与p1-068748_h31s_h32y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0497]
(pppp)含有p1-068748_h32y_d57k的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_h32y_d57k的vl cdr的vl，以及与p1-068748_h32y_d57k的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0498]
(qqqq)含有p1-068748_d57k_d58y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_d57k_d58y的vl cdr的vl，以及与p1-068748_d57k_d58y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0499]
(rrrr)含有p1-068748_d58y_d100s的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_d58y_d100s的vl cdr的vl，以及与p1-068748_d58y_d100s的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0500]
(ssss)含有p1-068748_h31s_d57k的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_h31s_d57k的vl cdr的vl，以及与p1-068748_h31s_d57k的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0501]
(tttt)含有p1-068748_h31s_d58y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_h31s_d58y的vl cdr的vl，以及与p1-068748_h31s_d58y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0502]
(uuuu)含有p1-068748_h31s_d100s的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_h31s_d100s的vl cdr的vl，以及与p1-068748_h31s_d100s的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0503]
(vvvv)含有p1-068748_h32y_d58y的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_h32y_d58y的vl cdr的vl，以及与p1-068748_h32y_d58y的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0504]
(wwww)含有p1-068748_h32y_d100s的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_h32y_d100s的vl cdr的vl，以及与p1-068748_h32y_d100s的vh和vl至少90％、至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；或
[0505]
(xxxx)含有p1-068748_d57k_d100s的vh的vh cdr的vh和含有p1-068748_d57k_d100s的vl cdr的vl，以及与p1-068748_d57k_d100s的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列，
[0506]
任选地，其中(a)或(c)-(ttt)中的任一者中的vh包含k16r和t84a取代中的一者或两者，或其中(b)或(uuu)-(xxxx)中的任一者中的vl含有t85v取代。
[0507]
在一些以上实施方案中，vh和/或vl可由于存在1、2、3、4或5个氨基酸取代诸如1、2、3、4或5个保守性取代而不同于种类(a)至(ttt)中的每一者的序列。在一些实施方案中，p1-061029或它的子代抗体中的一者的vh可包含k16r和t84a取代中的一者或两者。在一些实施方案中，p1-061015或它的子代抗体中的一者的vl可包含t85v取代。
[0508]
抗hvista ab可包含：
[0509]
(a)由p1-061029的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-061029的vl组成的vl；
[0510]
(b)由p1-061015的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-061015的vl组成的vl；
[0511]
(c)由p1-068757的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068757的vl组成的vl；
[0512]
(d)由p1-068759的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068759的vl组成的vl；
[0513]
(e)由p1-068761的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761的vl组成的vl；
[0514]
(f)由p1-068763的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068763的vl组成的vl；
[0515]
(g)由p1-068765的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068765的vl组成的vl；
[0516]
(h)由p1-068767的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767的vl组成的vl；
[0517]
(i)由p1-068769的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068769的vl组成的vl；
[0518]
(j)由p1-068771的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068771的vl组成的vl；
[0519]
(k)由p1-068773的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068773的vl组成的vl；
[0520]
(l)由p1-068775的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068775的vl组成的vl；
[0521]
(m)由p1-069059的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-069059的vl组成的vl；
[0522]
(n)由p1-069061的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-069061的vl组成的vl；
[0523]
(o)由p1-069063的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-069063的vl组成的vl；
[0524]
(p)由p1-069065的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-069065的vl组成的vl；
[0525]
(q)由p1-069067的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-069067的vl组成的vl；
[0526]
(r)由p1-069069的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-069069的vl组成的vl；
[0527]
(s)由p1-069071的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-069071的vl组成的vl；
[0528]
(t)由p1-069073的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-069073的vl组成的vl；
[0529]
(u)由p1-069075的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-069075的vl组成的vl；
[0530]
(v)由p1-069077的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-069077的vl组成的vl；
[0531]
(w)由p1-068736的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068736的vl组成的vl；
[0532]
(x)由p1-068738的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068738的vl组成的vl；
[0533]
(y)由p1-068740的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068740的vl组成的vl；
[0534]
(z)由p1-068742的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068742的vl组成的vl；
[0535]
(aa)由p1-068744的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744的vl组成的vl；
[0536]
(bb)由p1-068746的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068746的vl组成的vl；
[0537]
(cc)由p1-068748的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748的vl组成的vl；
[0538]
(dd)由p1-068750的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068750的vl组成的vl；
[0539]
(ee)由p1-068752的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068752的vl组成的vl；
[0540]
(ff)由p1-068754的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068754的vl组成的vl；
[0541]
(gg)由p1-068761_e55a的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e55a的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0542]
(hh)由p1-068761_h100g的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_h100g的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0543]
(ii)由p1-068761_e56n的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e56n的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0544]
(jj)由p1-068761_e55a_e56n的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e55a_e56n的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0545]
(kk)由p1-068761_e30d的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e30d的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0546]
(ll)由p1-068761_e30d_e55a的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e30d_e55a的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0547]
(mm)由p1-068761_e56n_h100g的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e56n_h100g的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0548]
(nn)由p1-068761_e30d_h100g的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e30d_h100g的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0549]
(oo)由p1-068761_e30d_e56n的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e30d_e56n的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0550]
(pp)由p1-068761_e100ff的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e100ff的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0551]
(qq)由p1-068761_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e55a_e100ff的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0552]
(rr)由p1-068761_h100g_e100ff的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_h100g_e100ff的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0553]
(ss)由p1-068761_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e30d_e100ff的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0554]
(tt)由p1-068761_e56n_e100ff的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e56n_e100ff的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0555]
(uu)由p1-068761_e32y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e32y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0556]
(vv)由p1-068761_e32y_e55a的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e32y_e55a的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0557]
(ww)由p1-068761_e32y_e56n的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e32y_
e56n的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0558]
(xx)由p1-068761_e30d_e32y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e30d_e32y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0559]
(yy)由p1-068761_e32y_h100g的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e32y_h100g的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0560]
(zz)由p1-068761_e32y_e100ff的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068761_e32y_e100ff的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0561]
(aaa)由p1-068767_d52n_d102v的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_d52n_d102v的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0562]
(bbb)由p1-068767_d52n的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_d52n的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0563]
(ccc)由p1-068767_d52n_e55a的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_d52n_e55a的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0564]
(ddd)由p1-068767_e55a_d102v的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_e55a_d102v的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0565]
(eee)由p1-068767_d102v的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_d102v的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0566]
(fff)由p1-068767_e55a的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_e55a的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0567]
(ggg)由p1-068767_e30d_d52n的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_e30d_d52n的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0568]
(hhh)由p1-068767_e30d_d102v的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_e30d_d102v的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0569]
(iii)由p1-068767_e30d的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_e30d的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0570]
(jjj)由p1-068767_e30d_e55a的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_e30d_e55a的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0571]
(kkk)由p1-068767_e100ffd102v的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_e100ff_d102v的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0572]
(lll)由p1-068767_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_e55a_e100ff的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0573]
(mmm)由p1-068767_d52n_e100ff的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_d52n_e100ff的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0574]
(nnn)由p1-068767_e100ff的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_e100ff的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0575]
(ooo)由p1-068767_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068767_e30d_e100ff的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0576]
(ppp)由p1-061029_f100fe_v102d的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-061029_f100fe_v102d的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0577]
(qqq)由p1-061029_f100fe的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-061029_f100fe的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0578]
(rrr)由p1-061029_v102d的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-061029_v102d的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0579]
(sss)由p1-061029_y32e的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-061029_y32e的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0580]
(ttt)由p1-061029_y32e_f100fe的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-061029_y32e_f100fe的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0581]
(uuu)由p1-068744_e31s的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744_e31s的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0582]
(vvv)由p1-068744_h50i的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744_h50i的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0583]
(www)由p1-068744_e59y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744_e59y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0584]
(xxx)由p1-068744_e100s的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744_e100s的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0585]
(yyy)由p1-068744_e102y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744_e102y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0586]
(zzz)由p1-068744_e31s_h50i的vh的氨基酸序列组成的vh和含有p1-068744_e31s_h50i的vl的vl；
[0587]
(aaaa)含有p1-068744_h50i_e59y的vh的氨基酸序列的vh和由p1-068744_h50i_e59y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0588]
(bbbb)由p1-068744_e59y_e100s的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744e5；9y_e100s的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0589]
(cccc)由p1-068744_e100s_e102y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744_e100s_e102y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0590]
(dddd)由p1-068744_e31s_e102y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744_e31s_e102y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0591]
(eeee)由p1-068744_e31s_e59y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744_e31s_e59y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0592]
(ffff)由p1-068744_e31s_e100s的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744_e31s_e100s的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0593]
(gggg)由p1-068744_h50i_e100s的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744_h50i_e100s的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0594]
(hhhh)由p1-068744_h50i_e102y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744_h50i_e102y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0595]
(iiii)由p1-068744_e59y_e102y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068744_e59y_e102y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0596]
(jjjj)由p1-068748_h31s的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_h31s的vl
的氨基酸序列组成的vl；
[0597]
(kkkk)由p1-068748_h32y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_h32y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0598]
(llll)由p1-068748_d57k的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_d57k的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0599]
(mmmm)由p1-068748_d58y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_d58y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0600]
(nnnn)由p1-068748_d100s的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_d100s的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0601]
(oooo)由p1-068748_h31s_h32y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_h31s_h32y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0602]
(pppp)由p1-068748_h32y_d57k的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_h32y_d57k的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0603]
(qqqq)由p1-068748_d57k_d58y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_d57k_d58y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0604]
(rrrr)由p1-068748_d58y_d100s的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_d58y_d100s的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0605]
(ssss)由p1-068748_h31s_d57k的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_h31s_d57k的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0606]
(tttt)由p1-068748_h31s_d58y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_h31s_d58y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0607]
(uuuu)由p1-068748_h31s_d100s的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_h31s_d100s的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0608]
(vvvv)由p1-068748_h32y_d58y的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_h32y_d58y的vl的氨基酸序列组成的vl；
[0609]
(wwww)由p1-068748_h32y_d100s的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_h32y_d100s的vl的氨基酸序列组成的vl；或
[0610]
(xxxx)由p1-068748_d57k_d100s的vh的氨基酸序列组成的vh和由p1-068748_d57k_d100s的vl的氨基酸序列组成的vl，
[0611]
任选地，其中(a)或(c)-(ttt)中的任一者中的vh包含重链k16r和t84a取代中的一者或两者，并且任选地，其中(b)或(uuu)-(xxxx)中的任一者中的vl包含t85v取代。
[0612]
在某些实施方案中，抗vista ab包含在以上以及在本文中其他地方所述的抗体的可变区和/或可变区cdr 1-3中的任一者，诸如：
[0613]
(1)以下各项的vh cdr1、cdr2和cdr3中的一者或多者：
[0614]
(2)以下各项的vh cdr1、cdr2和cdr3：
[0615]
(3)以下各项的vh：
[0616]
(4)以下各项的vh cdr1、cdr2和cdr3中的一者或多者以及vl cdr1、cdr2和cdr3中的一者或多者：
[0617]
(5)以下各项的vh cdr1、cdr2和cdr3以及vl cdr1、cdr2和cdr3：
[0618]
(6)以下各项的vh和vl：
[0619]
或
[0620]
(7)以下各项的vl(任选地，除p1-061015或它的子代的vl中的t85v取代之外)和vh(任选地，除在p1-061029或它的子代的情况下vh中的k16r和t84a取代中的一者或两者之外)：
[0621]
p1-061029、p1-068757、p1-068759、p1-068761、p1-068763、p1-068765、p1-068767、p1-068769、p1-068771、p1-068773、p1-068775、p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069069、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068766、p1-068748、p1-068750、p1-068752p1-068754、p1-068761_e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g、p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ffd102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y_p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s；并且所述抗vista ab还是igg抗体，诸如igg1、igg2、igg3或igg4抗体，或如以下章节中所述的其经修饰形式。在一些实施方案中，恒定区具有效应子功能，并且在一些实施方案中，恒定区是无效应子的。在某些实施方案中，恒定区是igg1.3的恒定区。
[0622]
在某些实施方案中，抗vista ab包含在以上以及在本文中其他地方所述的抗体的可变区和/或可变区cdr 1-3中的任一者，诸如：
[0623]
(1)以下各项的vh cdr1、cdr2和cdr3中的一者或多者：
[0624]
(2)以下各项的vh cdr1、cdr2和cdr3：
[0625]
(3)以下各项的vh：
[0626]
(4)以下各项的vh cdr1、cdr2和cdr3中的一者或多者以及vl cdr1、cdr2和cdr3中的一者或多者：
[0627]
(5)以下各项的vh cdr1、cdr2和cdr3以及vl cdr1、cdr2和cdr3：
[0628]
(6)以下各项的vh和vl：
[0629]
或
[0630]
(7)以下各项的vl和vh，除(在p1-061029和它的子代的情况下)vh中的k16r和t84a取代中的一者或两者之外：
[0631]
p1-061029、p1-068757、p1-068759、p1-068761、p1-068763、p1-068765、p1-068767、p1-068769、p1-068771、p1-068773、p1-068775、p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069069、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068766、p1-068748、p1-068750、p1-068752p1-068754、p1-068761_e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g、p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s，
[0632]
并且还包含以下特征中的一者或多者：
[0633]-在酸性ph例如ph 6.0或ph 6.5下特异性结合至hvista，例如ecd的富含组氨酸的区域或包含seq id no：2的氨基酸残基35-127的多肽；
[0634]-在生理ph或中性ph例如ph 7.4或ph 7.0下缺乏与hvista，例如ecd的富含组氨酸的区域或包含seq id no：2的氨基酸残基35-127的多肽的显著结合；
[0635]-在酸性ph例如ph 6.0或ph 6.5下特异性结合至食蟹猴vista，例如ecd的富含组氨酸的区域；
[0636]-在生理ph或中性ph例如ph 7.4或ph 7.0下缺乏与食蟹猴vista，例如ecd的富含组氨酸的区域的显著结合；
[0637]-相对于具有seq id no：2的hvista ecd，具有降低的与在以下氨基酸中的一者或多者处具有取代的hvista-ecd的结合：t35、y37、k38、t39、y41、r54、t61、f62、q63、l65、h66、l67、h68、h69、f97、l115、v117、i119、h121、h122、s124、e125、r127；
[0638]-与p1-061029、p1-068761、p1-068767、p1-061015、p1-068744和/或p1-068748交叉竞争与hvista的结合；
[0639]-在酸性ph例如ph 6.0或ph 6.5下抑制hvista与表达vista的人t细胞(例如原初或活化的t细胞)的结合；
[0640]-在酸性ph例如ph 6.0或ph 6.5下抑制hvista与psgl-1的结合(例如抑制具有seq id no：1的hvista的h153和h154与psgl-1酪氨酸y46和y48之间的相互作用)，其中psgl-1具有或不具有唾液酸化路易斯x，并且其中所述酪氨酸优选地是磺基酪氨酸，
[0641]-抑制hvista与vsig-3的结合；
[0642]-例如如实施例中所述测量的在食蟹猴中至少100、200、300、350、400、450、500、600或700小时(例如至少350小时)的平均滞留时间(mrt)；
[0643]-通过例如增强t细胞增殖；增强从t细胞的ifn-γ产生；以及/或者刺激t细胞受体介导的nf-kb信号传导来刺激t细胞活化；
[0644]-抑制vista介导的细胞：细胞粘附；
[0645]-特异性结合至表达vista的人肿瘤细胞样品或发炎人组织样品中的hvista；
[0646]-如例如使用实施例中所述的酵母表面展示和ngs测定所测定，通过一个或多个(例如至少1-3、1-5、1-10、5-10、5-15个或所有)在能量方面重要的接触残基y37、t39、r54、f62、h66、v117、i119或s124(参见表21)接触hvista；并且其中编号是成熟hvista(参见seq id no：2)的编号；
[0647]-如通过如实施例中所述的ms-hdx所测定，结合至具有seq id no：1的hvista的区域1：
57
lgpvdkghdvtf
68
(seq id no：566)；区域2：
86
rrpirnltfqdl
97
(seq id no：567)；和区域3：
148
vveirhhhsehrvhgame
165
(seq id no：568)，并且任选地，其中与区域2的结合是最强的；
[0648]-如例如通过如例如在实施例中所述的晶体照相术所测定，结合至hvista的富含组氨酸的β片层延伸部分；
[0649]-如例如通过如例如在实施例中所述的晶体照相术所测定，诸如通过氢键接触成熟hvista的h121、h122和/或h123(4.0埃或更小的距离)；
[0650]-通过位于vh cdr1、cdr2或cdr3中的至少一个或多个谷氨酸、天冬氨酸或组氨酸残基接触hvista；
[0651]-如实施例中所述，相较于髓样细胞，相较于血液，以及/或者相较于肝、肺和脾细胞，更好地在具有mc38肿瘤的人vista敲入小鼠中的肿瘤组织中积累；
[0652]-相较于髓样细胞，相较于血液，以及/或者相较于肝、肺和脾细胞，更好地在患者的肿瘤中积累(例如比如通过施用经pet示踪剂标记的ab来检测)；
[0653]-如通过如本文中的实施例30中所述的表面等离子体共振(spr)所测定，相比于它在中性或生理ph下与hvista的结合的kd或k解离，在酸性条件下(例如在6.5的ph下)以至多1/10、1/100或1/1000的kd(和/或k解离)特异性结合至hvista；
[0654]-抑制hvista与hvista结合的细胞(例如表达psgl-1的细胞)的结合，其中结合根据本文中的实施例31中所述的方案来测定(任选地，其中所述细胞是人白细胞、pbmc或t细胞)；
[0655]-如使用如本文中的实施例32中所述的竞争性spr表位划分所测定，阻断或交叉阻断本文所述的任一抗体的结合；以及
[0656]-权利要求中以及/或者实施例中阐述的任何额外特征。
[0657]
在某些实施方案中，抗hvista ab包含含有本文提供的任何抗hvista ab的重链的氨基酸序列的重链(hc)。在某些实施方案中，抗hvista ab包含含有以下各项的重链的氨基酸序列的重链：包含igg1.3重链恒定区的如以下在序列表中所示的p1-061029或p1-061015或它们的子代，诸如p1-061029.igg1.3(seq id no：69)、p1-068757.igg1.3、p1-068759.igg1.3、p1-068761.igg1.3、p1-068763.igg1.3、p1-068765.igg1.3、p1-068767.igg1.3、p1-068769.igg1.3、p1-068771.igg1.3、p1-068773.igg1.3、p1-068775.igg1.3、p1-069059.igg1.3、p1-069061.igg1.3、p1-069063.igg1.3、p1-069065.igg1.3、p1-069067.igg1.3、p1-069069.igg1.3、p1-069071.igg1.3、p1-069073.igg1.3、p1-069075.igg1.3、p1-069077.igg1.3、p1-061015.igg1.3、p1-068736.igg1.3、p1-068738.igg1.3、p1-068740.igg1.3、p1-068742.igg1.3、p1-068744.igg1.3、p1-068766.igg1.3、p1-068748.igg1.3、p1-068750.igg1.3、p1-068752.igg1.3、p1-068754.igg1.3、p1-068761_e55a.igg1.3、p1-068761_h100g.igg1.3、p1-068761_e56n.igg1.3、p1-068761_e55a_e56n.igg1.3、p1-068761_e30d.igg1.3、p1-068761_e30d_e55a.igg1.3、p1-068761_e56n_h100g.igg1.3、p1-068761_e30d_h100g.igg1.3、p1-068761_e30d_e56n.igg1.3、p1-068761_e100ff.igg1.3、p1-068761_e55a_e100ff.igg1.3、p1-068761_h100g_e100ff.igg1.3、p1-068761_e30d_e100ff.igg1.3、p1-068761_e56n_e100ff.igg1.3、p1-068761_e32y.igg1.3、p1-068761_e32y_e55a.igg1.3、p1-068761_e32y_e56n.igg1.3、p1-068761_e30d_e32y.igg1.3、p1-068761_e32y_h100g.igg1.3、p1-068761_e32y_e100ff.igg1.3、p1-068767_d52n_d102v.igg1.3、p1-068767_d52n.igg1.3、p1-068767_d52n_e55a.igg1.3、p1-068767_e55a_d102v.igg1.3、p1-068767_d102v.igg1.3、p1-068767_e55a.igg1.3、p1-068767_e30d_d52n.igg1.3、p1-068767_e30d_d102v.igg1.3、p1-068767_e30d.igg1.3、p1-068767_e30d_e55a.igg1.3、p1-068767_e100ffd102v.igg1.3、p1-068767_e55a_e100ff.igg1.3、p1-068767_d52n_e100ff.igg1.3、p1-068767_e100ff.igg1.3、p1-068767_e30d_e100ff.igg1.3、p1-061029_f100fe_v102d.igg1.3、p1-061029_f100fe.igg1.3、p1-061029v102d.igg1.3、p1-061029_y32e.igg1.3、p1-061029_y32e_f100fe.igg1.3、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y_p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s，并且任选地，对于p1-061029子代，其中vh包含k16r和t84a取代中的一者或两者，并且对于p1-061015子代，其中vl序列包含t85v取代。
[0658]
在某些实施方案中，抗hvista ab包含含有包含igg1.3重链恒定区的本文提供的任何抗hvista ab的重链的氨基酸序列的重链，以及本文提供的任何抗hvista ab的轻链的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗hvista ab包含含有以下各项的vh的氨基酸序列的重
链：包含igg1.3hc恒定区的p1-061029或p1-061015或它们的子代，诸如p1-061029.igg1.3(seq id no：69)、p1-068757.igg1.3、p1-068759.igg1.3、p1-068761.igg1.3、p1-068763.igg1.3、p1-068765.igg1.3、p1-068767.igg1.3、p1-068769.igg1.3、p1-068771.igg1.3、p1-068773.igg1.3、p1-068775.igg1.3、p1-069059.igg1.3、p1-069061.igg1.3、p1-069063.igg1.3、p1-069065.igg1.3、p1-069067.igg1.3、p1-069069.igg1.3、p1-069071.igg1.3、p1-069073.igg1.3、p1-069075.igg1.3、p1-069077.igg1.3、p1-061015.igg1.3、p1-068736.igg1.3、p1-068738.igg1.3、p1-068740.igg1.3、p1-068742.igg1.3、p1-068744.igg1.3、p1-068766.igg1.3、p1-068748.igg1.3、p1-068750.igg1.3、p1-068752.igg1.3、p1-068754.igg1.3、p1-068761_e55a.igg1.3、p1-068761_h100g.igg1.3、p1-068761_e56n.igg1.3、p1-068761_e55a_e56n.igg1.3、p1-068761_e30d.igg1.3、p1-068761_e30d_e55a.igg1.3、p1-068761_e56n_h100g.igg1.3、p1-068761_e30d_h100g.igg1.3、p1-068761_e30d_e56n.igg1.3、p1-068761_e100ff.igg1.3、p1-068761_e55a_e100ff.igg1.3、p1-068761_h100g_e100ff.igg1.3、p1-068761_e30d_e100ff.igg1.3、p1-068761_e56n_e100ff.igg1.3、p1-068761_e32y.igg1.3、p1-068761_e32y_e55a.igg1.3、p1-068761_e32y_e56n.igg1.3、p1-068761_e30d_e32y.igg1.3、p1-068761_e32y_h100g.igg1.3、p1-068761_e32y_e100ff.igg1.3、p1-068767_d52n_d102v.igg1.3、p1-068767_d52n.igg1.3、p1-068767_d52n_e55a.igg1.3、p1-068767_e55a_d102v.igg1.3、p1-068767_d102v.igg1.3、p1-068767_e55a.igg1.3、p1-068767_e30d_d52n.igg1.3、p1-068767_e30d_d102v.igg1.3、p1-068767_e30d.igg1.3、p1-068767_e30d_e55a.igg1.3、p1-068767_e100ff_d102v.igg1.3、p1-068767_e55a_e100ff.igg1.3、p1-068767_d52n_e100ff.igg1.3、p1-068767_e100ff.igg1.3、p1-068767_e30d_e100ff.igg1.3、p1-061029_f100fe_v102d.igg1.3、p1-061029_f100fe.igg1.3、p1-061029_v102d.igg1.3、p1-061029_y32e.igg1.3、p1-061029_y32e_f100fe.igg1.3、p1-068744_e31s.igg1.3、p1-68744_h50i.igg1.3、p1-68744_e59y.igg1.3、p1-068744_e100s.igg1.3、p1-068744_e102y.igg1.3、p1-068744_e31s_h50i.igg1.3、p1-068744_h50i_e59y.igg1.3、p1-068744e59y_e100s.igg1.3、p1-068744_e100s_e102y.igg1.3、p1-068744_e31s_e102y.igg1.3、p1-068744_e31s_e59y.igg1.3、p1-068744_e31s_e100s.igg1.3、p1-068744_h50i_e100s.igg1.3、p1-068744_h50i_e102y.igg1.3、p1-068744_e59y_e102y.igg1.3、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y.igg1.3、p1-068748_d57k.igg1.3、p1-068748_d58y.igg1.3、p1-068748_d100s.igg1.3、p1-068748_h31s_h32y.igg1.3、p1-068748_h32y_d57k.igg1.3、p1-068748_d57k_d58y.igg1.3、p1-068748_d58y_d100s.igg1.3、p1-068748_h31s_d57k.igg1.3、p1-068748_h31s_d58y.igg1.3、p1-068748_h31s_d100s.igg1.3、p1-068748_h32y_d58y.igg1.3、p1-068748_h32y_d100s.igg1.3或p1-068748_d57k_d100s.igg1.3，并且任选地，对于p1-061029子代，其中vh包含k16r和t84a取代中的一者或两者；以及含有p1-061029或p1-061015的轻链的氨基酸序列的轻链，并且任选地，对于p1-061015子代，其中vl序列包含t85v取代。
[0659]
抗hvista ab可包含：
[0660]
(a)含有p1-061029.igg1.3的重链的氨基酸序列(seq id no：69)的重链和含有
p1-061029的轻链氨基酸序列(seq id no：70)的轻链，
[0661]
(b)含有p1-061015.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-061015的轻链氨基酸序列的轻链；
[0662]
(c)含有p1-068757.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068757的轻链氨基酸序列的轻链；
[0663]
(d)含有p1-068759.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068759的轻链氨基酸序列的轻链；
[0664]
(e)含有p1-068761.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068761的轻链氨基酸序列的轻链；
[0665]
(f)含有p1-068763.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068763的轻链氨基酸序列的轻链；
[0666]
(g)含有p1-068765.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068765的轻链氨基酸序列的轻链；
[0667]
(h)含有p1-068767.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068767的轻链氨基酸序列的轻链；
[0668]
(i)含有p1-068769.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068769的轻链氨基酸序列的轻链；
[0669]
(j)含有p1-068771.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068771的轻链氨基酸序列的轻链；
[0670]
(k)含有p1-068773.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068773的轻链氨基酸序列的轻链；
[0671]
(l)含有p1-068775.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068775的轻链氨基酸序列的轻链；
[0672]
(m)含有p1-069059.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-069059的轻链氨基酸序列的轻链；
[0673]
(n)含有p1-069061.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-069061的轻链氨基酸序列的轻链；
[0674]
(o)含有p1-069063.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-069063的轻链氨基酸序列的轻链；
[0675]
(p)含有p1-069065.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-069065的轻链氨基酸序列的轻链；
[0676]
(q)含有p1-069067.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-069067的轻链氨基酸序列的轻链；
[0677]
(r)含有p1-069069.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-069069的轻链氨基酸序列的轻链；
[0678]
(s)含有p1-069071.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-069071的轻链氨基酸序列的轻链；
[0679]
(t)含有p1-069073.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-069073的轻链氨基酸序列的轻链；
068761_e30d_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[0700]
(oo)含有p1-068761_e30d_e56n.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[0701]
(pp)含有p1-068761_e100ff.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[0702]
(qq)含有p1-068761_e55a_e100ff.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e55a_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[0703]
(rr)含有p1-068761_h100g_e100ff.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_h100g_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[0704]
(ss)含有p1-068761_e30d_e100ff.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[0705]
(tt)含有p1-068761_e56n_e100ff.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e56n_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[0706]
(uu)含有p1-068761_e32y.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[0707]
(vv)含有p1-068761_e32y_e55a.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[0708]
(ww)含有p1-068761_e32y_e56n.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[0709]
(xx)含有p1-068761_e30d_e32y.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[0710]
(yy)含有p1-068761_e32y_h100g.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[0711]
(zz)含有p1-068761_e32y_e100ff.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[0712]
(aaa)含有p1-068767_d52n_d102v.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[0713]
(bbb)含有p1-068767_d52n.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n的轻链氨基酸序列的轻链；
[0714]
(ccc)含有p1-068767_d52n_e55a.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[0715]
(ddd)含有p1-068767_e55a_d102v.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e55a_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[0716]
(eee)含有p1-068767_d102v.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[0717]
(fff)含有p1-068767_e55a.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[0718]
(ggg)含有p1-068767_e30d_d52n.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d_d52n的轻链氨基酸序列的轻链；
068744_h50i_e59y的轻链氨基酸序列的轻链；
[0739]
(bbbb)含有p1-068744_e59y_e100s.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e59y_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[0740]
(cccc)含有p1-068744_e100s_e102y.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e100s_e102y的轻链氨基酸序列的轻链，
[0741]
(dddd)含有p1-068744_e31s_e102y.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[0742]
(eeee)含有p1-068744_e31s_e59y.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_e59y的轻链氨基酸序列的轻链；
[0743]
(ffff)含有p1-068744_e31s_e100s.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[0744]
(gggg)含有p1-068744_h50i_e100s.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[0745]
(hhhh)含有p1-068744_h50i_e102y.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[0746]
(iiii)含有p1-068744_e59y_e102y.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和vl和含有p1-068744_e59y_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[0747]
(jjjj)含有p1-068748_h31s.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s的轻链氨基酸序列的轻链；
[0748]
(kkkk)含有p1-068748_h32y.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[0749]
(llll)含有p1-068748_d57k.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d57k的轻链氨基酸序列的轻链；
[0750]
(mmmm)含有p1-068748_d58y.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[0751]
(nnnn)含有p1-068748_d100s.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[0752]
(oooo)含有p1-068748_h31s_h32y.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_h32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[0753]
(pppp)含有p1-068748_h32y_d57k.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y_d57k的轻链氨基酸序列的轻链；
[0754]
(qqqq)含有p1-068748_d57k_d58y.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d57k_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[0755]
(rrrr)含有p1-068748_d58y_d100s.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d58y_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[0756]
(ssss)含有p1-068748_h31s_d57k.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_d57k的轻链氨基酸序列的轻链；
[0757]
(tttt)含有p1-068748_h31s_d58y.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[0758]
(uuuu)含有p1-068748_h31s_d100s.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_d100s的轻链氨基酸序列的轻链，
[0759]
(vvvv)含有p1-068748_h32y_d58y.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[0760]
(wwww)含有p1-068748_h32y_d100s.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；或
[0761]
(xxxx)含有p1-068748_d57k_d100s.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d57k_d100s的轻链氨基酸序列的轻链，
[0762]
任选地，其中(a)或(c)至(ttt)中的任一者中的vh包含k16r和t84a取代中的一者或两者，并且任选地，其中(b)或(uuu)至(xxxx)中的任一者的vl包含t85v取代。
[0763]
抗hvista ab可包含：
[0764]
(a)含有p1-061029的hc的hc cdr的重链(hc)和含有p1-061029的lc cdr的轻链(lc)，以及分别与p1-061029.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0765]
(b)含有p1-061015的hc的hc cdr的hc和含有p1-061015的lc cdr的lc，以及分别与p1-061015.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0766]
(c)含有p1-068757的hc的hc cdr的hc和含有p1-068757的lc cdr的lc，以及分别与p1-068757.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0767]
(d)含有p1-068759的hc的hc cdr的hc和含有p1-068759的lc cdr的lc，以及分别与p1-068759.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0768]
(e)含有p1-068761的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0769]
(f)含有p1-068763的hc的hc cdr的hc和含有p1-068763的lc cdr的lc，以及分别与p1-068763.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0770]
(g)含有p1-068765的hc的hc cdr的hc和含有p1-068765的lc cdr的lc，以及分别与p1-068765.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0771]
(h)含有p1-068767的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0772]
(i)含有p1-068769的hc的hc cdr的hc和含有p1-068769的lc cdr的lc，以及分别与p1-068769.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0773]
(j)含有p1-068771的hc的hc cdr的hc和含有p1-068771的lc cdr的lc，以及分别
与p1-068771.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0774]
(k)含有p1-068773的hc的hc cdr的hc和含有p1-068773的lc cdr的lc，以及分别与p1-068773.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0775]
(l)含有p1-068775的hc的hc cdr的hc和含有p1-068775的lc cdr的lc，以及分别与p1-068775.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0776]
(m)含有p1-069059的hc的hc cdr的hc和含有p1-069059的lc cdr的lc，以及分别与p1-069059.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0777]
(n)含有p1-069061的hc的hc cdr的hc和含有p1-069061的lc cdr的lc，以及分别与p1-069061.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0778]
(o)含有p1-069063的hc的hc cdr的hc和含有p1-069063的lc cdr的lc，以及分别与p1-069063.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0779]
(p)含有p1-069065的hc的hc cdr的hc和含有p1-069065的lc cdr的lc，以及分别与p1-069065.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0780]
(q)含有p1-069067的hc的hc cdr的hc和含有p1-069067的lc cdr的lc，以及分别与p1-069067.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0781]
(r)含有p1-069069的hc的hc cdr的hc和含有p1-069069的lc cdr的lc，以及分别与p1-069069.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0782]
(s)含有p1-069071的hc的hc cdr的hc和含有p1-069071的lc cdr的lc，以及分别与p1-069071.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0783]
(t)含有p1-069073的hc的hc cdr的hc和含有p1-069073的lc cdr的lc，以及分别与p1-069073.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0784]
(u)含有p1-069075的hc的hc cdr的hc和含有p1-069075的lc cdr的lc，以及分别与p1-069075.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0785]
(v)含有p1-069077的hc的hc cdr的hc和含有p1-069077的lc cdr的lc，以及分别与p1-069077.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0786]
(w)含有p1-068736的hc的hc cdr的hc和含有p1-068736的lc cdr的lc，以及分别
与p1-068736.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0787]
(x)含有p1-068738的hc的hc cdr的hc和含有p1-068738的lc cdr的lc，以及分别与p1-068738.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0788]
(y)含有p1-068740的hc的hc cdr的hc和含有p1-068740的lc cdr的lc，以及分别与p1-068740.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0789]
(z)含有p1-068742的hc的hc cdr的hc和含有p1-068742的lc cdr的lc，以及分别与p1-068742.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0790]
(aa)含有p1-068744的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0791]
(bb)含有p1-068746的hc的hc cdr的hc和含有p1-068746的lc cdr的lc，以及分别与p1-068746.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0792]
(cc)含有p1-068748的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0793]
(dd)含有p1-068750的hc的hc cdr的hc和含有p1-068750的lc cdr的lc，以及分别与p1-068750.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0794]
(ee)含有p1-068752的hc的hc cdr的hc和含有p1-068752的lc cdr的lc，以及分别与p1-068752.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0795]
(ff)含有p1-068754的hc的hc cdr的hc和含有p1-068754的lc cdr的lc，以及分别与p1-068754.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0796]
(gg)含有p1-068761_e55a.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e55a的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e55a.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0797]
(hh)含有p1-068761_h100g.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_h100g的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_h100g.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0798]
(ii)含有p1-068761_e56n.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e56n的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e56n.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至
少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0799]
(jj)含有p1-068761_e55a_e56n.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e55a_e56n的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e55a_e56n.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0800]
(kk)含有p1-068761_e30d.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e30d的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e30d.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0801]
(ll)含有p1-068761_e30d_e55a.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e30d_e55a的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e30d_e55a.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0802]
(mm)含有p1-068761_e56n_h100g.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e56n_h100g的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e56n_h100g.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0803]
(nn)舍有p1-068761_e30d_h100g.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e30d_h100g的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e30d_h100g.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0804]
(oo)含有p1-068761_e30d_e56n.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e30d_e56n的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e30d_e56n.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0805]
(pp)含有p1-068761_e100ff.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e100ff的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e100ff.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0806]
(qq)含有p1-068761_e55a_e100ff.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e55a_e100ff的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e55a_e100ff.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0807]
(rr)含有p1-068761_h100g_e100ff.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_h100g_e100ff的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_h100g_e100ff.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0808]
(ss)含有p1-068761_e30d_e100ff.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_
e30d_e100ff的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e30d_e100ff.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0809]
(tt)含有p1-068761_e56n_e100ff.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e56n_e100ff的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e56n_e100ff.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0810]
(uu)舍有p1-068761_e32y.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e32y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e32y.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0811]
(vv)舍有p1-068761_e32y_e55a.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e32y_e55a的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e32y_e55a.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0812]
(ww)含有p1-068761_e32y_e56n.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e32y_e56n的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e32y_e56n.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0813]
(xx)舍有p1-068761_e30d_e32y.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e30d_e32y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e30d_e32y.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0814]
(yy)舍有p1-068761_e32y_h100g.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e32y_h100g的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e32y_h100g.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0815]
(zz)舍有p1-068761_e32y_e100ff.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068761_e32y_e100ff的lc cdr的lc，以及分别与p1-068761_e32y_e100ff.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0816]
(aaa)含有p1-068767_d52n_d102v.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_d52n_d102v的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_d52n_d102v.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0817]
(bbb)含有p1-068767_d52n.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_d52n的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_d52n.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0818]
(ccc)含有p1-068767_d52n_e55a.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_d52n_e55a的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_d52n_e55a.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0819]
(ddd)含有p1-068767_e55a_d102v.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_e55a_d102v的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_e55a_d102v.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0820]
(eee)含有p1-068767_d102v.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_d102v的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_d102v.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0821]
(fff)含有p1-068767_e55a.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_e55a的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_e55a.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0822]
(ggg)含有p1-068767_e30d_d52n.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_e30d_d52n的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_e30d_d52n.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0823]
(hhh)舍有p1-068767_e30d_d102v.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_e30d_d102v的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_e30d_d102v.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0824]
(iii)含有p1-068767_e30d.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_e30d的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_e30d.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0825]
(jjj)含有p1-068767_e30d_e55a.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_e30d_e55a的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_e30d_e55a.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0826]
(kkk)舍有p1-068767_e100ff_d102v.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_e100ff_d102v的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_e100ff_d102v.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0827]
(lll)含有p1-068767_e55a_e100ff.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_e55a_e100ff的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_e55a_e100ff.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％
或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0828]
(mmm)含有p1-068767_d52n_e100ff.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_d52n_e100ff的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_d52n_e100ff.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0829]
(nnn)含有p1-068767_e100ff.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_e100ff的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_e100ff.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0830]
(ooo)舍有p1-068767_e30d_e100ff.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-068767_e30d_e100ff的lc cdr的lc，以及分别与p1-068767_e30d_e100ff.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0831]
(ppp)含有p1-061029_f100fe_v102d.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-061029_f100fe_v102d的lc cdr的lc，以及分别与p1-061029_f100fe_v102d.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0832]
(qqq)含有p1-061029_f100fe.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-061029_f100fe的lc cdr的lc，以及分别与p1-061029_f100fe.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0833]
(rrr)含有p1-061029_v102d.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-061029_v102d的lc cdr的lc，以及分别与p1-061029_v102d.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0834]
(sss)含有p1-061029_y32e.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-061029_y32e的lc cdr的lc，以及分别与p1-061029_y32e.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0835]
(ttt)含有p1-061029_y32e_f100fe.igg1.3的hc的hc cdr的hc和含有p1-061029_y32e_f100fe的lc cdr的lc，以及分别与p1-061029_y32e_f100fe.igg1.3的hc和lc至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0836]
(uuu)含有p1-068744_e31s的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_e31s的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_e31s.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0837]
(vvv)含有p1-068744_h50i的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_h50i的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_h50i.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少
93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0838]
(www)含有p1-068744_e59y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_e59y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_e59y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0839]
(xxx)含有p1-068744_e100s的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_e100s的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_e100s.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0840]
(yyy)含有p1-068744_e102y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_e102y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_e102y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0841]
(zzz)含有p1-068744_e31s_h50i的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_e31s_h50i的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_e31s_h50i.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0842]
(aaaa)含有p1-068744_h50i_e59y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_h50i_e59y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_h50i_e59y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0843]
(bbbb)含有p1-068744_e59y_e100s的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_e5；9y_e100s的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_e59y_e100s.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0844]
(cccc)含有p1-068744_e100s_e102y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_e100s_e102y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_e100s_e102y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0845]
(dddd)含有p1-068744_e31s_e102y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_e31s_e102y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_e31s_e102y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0846]
(eeee)含有p1-068744_e31s_e59y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_e31s_e59y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_e31s_e59y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0847]
(fff)含有p1-068744_e31s_e100s的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_e31s_
e100s的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_e31s_e100s.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0848]
(gggg)含有p1-068744_h50i_e100s的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_h50i_e100s的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_h50i_e100s.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0849]
(hhhh)含有p1-068744_h50i_e102y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_h50i_e102y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_h50i_e102y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0850]
(iiii)含有p1-068744_e59y_e102y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068744_e59y_e102y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068744_e59y_e102y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0851]
(jjjj)含有p1-068748_h31s的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_h31s的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_h31s.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0852]
(kkkk)含有p1-068748_h32y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_h32y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_h32y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的vh和vl氨基酸序列；
[0853]
(llll)含有p1-068748_d57k的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_d57k的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_d57k.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0854]
(mmmm)含有p1-068748_d58y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_d58y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_d58y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0855]
(nnnn)含有p1-068748_d100s的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_d100s的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_d100s.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0856]
(oooo)含有p1-068748_h31s_h32y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_h31s_h32y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_h31s_h32y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0857]
(pppp)含有p1-068748_h32y_d57k的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_h32y_d57k的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_h32y_d57k.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0858]
(qqqq)含有p1-068748_d57k_d58y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_d57k_d58y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_d57k_d58y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0859]
(rrrr)含有p1-068748_d58y_d100s的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_d58y_d100s的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_d58y_d100s.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0860]
(ssss)含有p1-068748_h31s_d57k的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_h31s_d57k的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_h31s_d57k.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0861]
(tttt)含有p1-068748_h31s_d58y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_h31s_d58y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_h31s_d58y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0862]
(uuuu)含有p1-068748_h31s_d100s的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_h31s_d100s的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_h31s_d100s.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0863]
(vvvv)含有p1-068748_h32y_d58y的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_h32y_d58y的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_h32y_d58y.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；
[0864]
(wwww)含有p1-068748_h32y_d100s的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_h32y_d100s的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_h32y_d100s.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列；或
[0865]
(xxxx)含有p1-068748_d57k_d100s的hc的hc cdr的hc和含有p1-068748_d57k_d100s的lc cdr的lc，以及分别与p1-068748_d57k_d100s.igg1.3的vh和vl至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的hc和lc氨基酸序列。
[0866]
在一些以上实施方案中，hc和/或lc可由于存在1、2、3、4或5个氨基酸取代诸如1、2、3、4或5个保守性取代而不同于种类(a)至(ttt)中的每一者的序列。在一些实施方案中，举例来说，p1-061029或它的子代中的一者的hc可在hc的vh区中包含k16r和t84a取代中的
一者或两者(p1-061015和它的子代已在这些位置处分别具有r和a)。在一些实施方案中，p1-061015或它的子代的lc可包含t85v取代。
[0867]
在一些实施方案中，抗hvista ab可包含：
[0868]
(a)由p1-061029.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0869]
(b)由p1-061015.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-061015的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0870]
(c)由p1-068757.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068757的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0871]
(d)由p1-068759.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068759的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0872]
(e)由p1-068761.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0873]
(f)由p1-068763.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068763的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0874]
(g)由p1-068765.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068765的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0875]
(h)由p1-068767.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0876]
(i)由p1-068769.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068769的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0877]
(j)由p1-068771.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068771的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0878]
(k)由p1-068773.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068773的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0879]
(l)由p1-068775.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068775的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0880]
(m)由p1-069059.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-069059的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0881]
(n)由p1-069061.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-069061的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0882]
(o)由p1-069063.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-069063的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0883]
(p)由p1-069065.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-069065的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0884]
(q)由p1-069067.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-069067的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0885]
(r)由p1-069069.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-069069的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
068761_e30d_e55a的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0906]
(mm)由p1-068761_e56n_h100g.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e56n_h100g的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0907]
(nn)由p1-068761_e30d_h100g.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_h100g的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0908]
(oo)由p1-068761_e30d_e56n.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e56n的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0909]
(pp)由p1-068761_e100ff.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e100ff的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0910]
(qq)由p1-068761_e55a_e100ff.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e55a_e100ff的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0911]
(rr)由p1-068761_h100g_e100ff.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_h100g_e100ff的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0912]
(ss)由p1-068761_e30d_e100ff.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e100ff的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0913]
(tt)由p1-068761_e56n_e100ff.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e56n_e100ff的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0914]
(uu)由p1-068761_e32y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0915]
(vv)由p1-068761_e32y_e55a.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_e55a的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0916]
(ww)由p1-068761_e32y_e56n.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_e56n的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0917]
(xx)由p1-068761_e30d_e32y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e32y的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0918]
(yy)由p1-068761_e32y_h100g.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_h100g的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0919]
(zz)由p1-068761_e32y_e100ff.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_e100ff的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0920]
(aaa)由p1-068767_d52n_d102v.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n_d102v的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0921]
(bbb)由p1-068767_d52n.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0922]
(ccc)由p1-068767_d52n_e55a.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n_e55a的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0923]
(ddd)由p1-068767_e55a_d102v.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e55a_d102v的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
[0924]
(eee)由p1-068767_d102v.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d102v的轻链的氨基酸序列组成的轻链；
068744_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0945]
(zzz)由p1-068744_e31s_h50i.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_h50i的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0946]
(aaaa)由p1-068744_h50i_e59y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i_e59y的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[0947]
(bbbb)由p1-068744_e59y_e100s.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e5；9y_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0948]
(cccc)由p1-068744_e100s_e102y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e100s_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0949]
(dddd)由p1-068744_e31s_e102y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0950]
(eeee)由p1-068744_e31s_e59y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_e59y的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[0951]
(ffff)含有p1-068744_e31s_e100s.igg1.3的重链的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[0952]
(gggg)由p1-068744_h50i_e100s.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[0953]
(hhhh)由p1-068744_h50i_e102y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0954]
(iiii)由p1-068744_e59y_e102y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和vl和由p1-068744_e59y_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0955]
(jjjj)由p1-068748_h31s.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0956]
(kkkk)由p1-068748_h32y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0957]
(llll)由p1-068748_d57k.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d57k的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0958]
(mmmm)由p1-068748_d58y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0959]
(nnnn)由p1-068748_d100s.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0960]
(oooo)由p1-068748_h31s_h32y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_h32y的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[0961]
(pppp)由p1-068748_h32y_d57k.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y_d57k的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0962]
(qqqq)由p1-068748_d57k_d58y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d57k_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0963]
(rrrr)由p1-068748_d58y_d100s.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d58y_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0964]
(ssss)由p1-068748_h31s_d57k.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_d57k的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[0965]
(tttt)由p1-068748_h31s_d58y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[0966]
(uuuu)由p1-068748_h31s_d100s.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0967]
(vvvv)由p1-068748_h32y_d58y.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0968]
(wwww)由p1-068748_h32y_d100s.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；或
[0969]
(xxxx)由p1-068748_d57k_d100s.igg1.3的重链的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d57k_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[0970]
任选地，其中(a)或(c)至(ttt)中的任一者中的vh包含k16r和t84a取代中的一者或两者，并且任选地，其中(b)或(uuu)-(xxxx)中的vl包含t85v取代。
[0971]
在一些实施方案中，本公开考虑包含以下的抗vista mab：
[0972]
由以上所列的(a)至(ttt)的重链的氨基酸序列继之以lys残基组成的重链；和
[0973]
由以上所列的(a)至(ttt)的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[0974]
其中重链和轻链氨基酸序列选自来自以上所列的(a)至(ttt)之中的相同抗体种类。
[0975]
在一些实施方案中，抗hvista ab可包含含有本文中的抗体种类的vh氨基酸序列，但不含有如本文中的序列表中的hc序列中提供的igg1.3重链恒定区(并且参见seq id no：163)的重链氨基酸序列，抗体可包含不同重链恒定区序列，诸如人野生型igg1恒定区诸如人igg1同种异型f(igg1f)(seq id no：182)，或经修饰的人igg1恒定区诸如igg1.1f(seq id no：183)，或经修饰的人igg1恒定区诸如igg1.p238k(seq id no：184)。因此，本公开的实施方案包括包含以下的抗vista ab：
[0976]
(a)含有(i)p1-061029的vh的氨基酸序列(seq id no：67)和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-061029的轻链氨基酸序列(seq id no：70)的轻链；
[0977]
(b)含有(i)p1-061015的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-061015的轻链氨基酸序列的轻链；
[0978]
(c)含有(i)p1-068757的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068757的轻链氨基酸序列的轻链；
[0979]
(d)含有(i)p1-068759的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068759的轻链氨基酸序列的轻链；
[0980]
(e)含有(i)p1-068761的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761的轻链氨基酸序列的轻链；
[0981]
(f)含有(i)p1-068763的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068763的轻链氨基酸序列的轻链；
[0982]
(g)含有(i)p1-068765的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068765的轻链氨基酸序列的轻链；
[0983]
(h)含有(i)p1-068767的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767的轻链氨基酸序列的轻链；
[0984]
(i)含有(i)p1-068769的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068769的轻链氨基酸序列的轻链；
[0985]
(j)含有(i)p1-068771的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068771的轻链氨基酸序列的轻链；
[0986]
(k)含有(i)p1-068773的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068773的轻链氨基酸序列的轻链；
[0987]
(1)含有(i)p1-068775的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068775的轻链氨基酸序列的轻链；
[0988]
(m)含有(i)p1-069059的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-069059的轻链氨基酸序列的轻链，
[0989]
(n)含有(i)p1-069061的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-069061的轻链氨基酸序列的轻链；
[0990]
(o)含有(i)p1-069063的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-069063的轻链氨基酸序列的轻链；
[0991]
(p)含有(i)p1-069065的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-069065的轻链氨基酸序列的轻链；
[0992]
(q)含有(i)p1-069067的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-069067的轻链氨基酸序列的轻链；
[0993]
(r)含有(i)p1-069069的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-069069的轻链氨基酸序列的轻链；
[0994]
(s)含有(i)p1-069071的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-069071的轻链氨基酸序列的轻链；
[0995]
(t)含有(i)p1-069073的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-069073的轻链氨基酸序列的轻链；
[0996]
(u)含有(i)p1-069075的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-069075的轻链氨基酸序列的轻链；
[0997]
(v)含有(i)p1-069077的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-069077的轻链氨基酸序列的轻链；
[0998]
(w)含有(i)p1-068736的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068736的轻链氨基酸序列的轻链；
[0999]
(x)含有(i)p1-068738的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068738的轻链氨基酸序列的轻链；
[1000]
(y)含有(i)p1-068740的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068740的轻链氨基酸序列的轻链；
[1001]
(z)含有(i)p1-068742的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068742的轻链氨基酸序列的轻链；
[1002]
(aa)含有(i)p1-068744的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的
重链和含有p1-068744的轻链氨基酸序列的轻链，
[1003]
(bb)含有p1-068746的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068746的轻链氨基酸序列的轻链；
[1004]
(cc)含有(i)p1-068748的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748的轻链氨基酸序列的轻链，
[1005]
(dd)含有(i)p1-068750的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068750的轻链氨基酸序列的轻链，
[1006]
(ee)含有(i)p1-068752的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068752的轻链氨基酸序列的轻链，
[1007]
(ff)含有(i)p1-068754的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068754的轻链氨基酸序列的轻链；
[1008]
(gg)含有(i)p1-068761_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1009]
(hh)含有(i)p1-068761_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[1010]
(ii)含有(i)p1-068761_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1011]
(jj)含有(i)p1-068761_e55a_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e55a_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1012]
(kk)含有(i)p1-068761_e30d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d的轻链氨基酸序列的轻链；
[1013]
(ll)含有(i)p1-068761_e30d_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1014]
(mm)含有(i)p1-068761_e56n_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e56n_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[1015]
(nn)含有(i)p1-068761_e30d_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[1016]
(oo)含有(i)p1-068761_e30d_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1017]
(pp)含有(i)p1-068761_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1018]
(qq)含有(i)p1-068761_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e55a_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1019]
(rr)含有(i)p1-068761_h100g_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_h100g_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1020]
(ss)含有(i)p1-068761_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1021]
(tt)含有(i)p1-068761_e56n_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e56n_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1022]
(uu)含有(i)p1-068761_e32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1023]
(vv)含有(i)p1-068761_e32y_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1024]
(ww)含有(i)p1-068761_e32y_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1025]
(xx)含有(i)p1-068761_e30d_e32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1026]
(yy)含有(i)p1-068761_e32y_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[1027]
(zz)含有(i)p1-068761_e32y_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1028]
(aaa)含有(i)p1-068767_d52n_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1029]
(bbb)含有(i)p1-068767_d52n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1030]
(ccc)含有(i)p1-068767_d52n_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1031]
(ddd)含有(i)p1-068767_e55a_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e55a_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1032]
(eee)含有(i)p1-068767_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1033]
(fff)含有(i)p1-068767_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1034]
(ggg)含有(i)p1-068767_e30d_d52n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d_d52n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1035]
(hhh)含有(i)p1-068767_e30d_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1036]
(iii)含有(i)p1-068767_e30d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d的轻链氨基酸序列的轻链；
[1037]
(jjj)含有(i)p1-068767_e30d_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1038]
(kkk)含有(i)p1-068767_e100ff_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e100ff_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1039]
(lll)含有(i)p1-068767_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e55a_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1040]
(mmm)含有(i)p1-068767_d52n_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1041]
(nnn)含有(i)p1-068767_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基
酸序列的重链和含有p1-068767_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1042]
(ooo)含有(i)p1-068767_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1043]
(ppp)含有(i)p1-061029_f100fe_v102d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_f100fe_v102d的轻链氨基酸序列的轻链；
[1044]
(qqq)含有(i)p1-061029_f100fe的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_f100fe的轻链氨基酸序列的轻链；
[1045]
(rrr)含有(i)p1-061029_v102d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_v102d的轻链氨基酸序列的轻链；
[1046]
(sss)含有(i)p1-061029_y32e的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_y32e的轻链氨基酸序列的轻链；
[1047]
(ttt)含有(i)p1-061029_y32e_f100fe的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_y32e_f100fe的轻链氨基酸序列的轻链；
[1048]
(uuu)含有(i)p1-068744_e31s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1049]
(vvv)含有(i)p1-068744_h50i的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i的轻链氨基酸序列的轻链；
[1050]
(www)含有(i)p1-068744_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e59y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1051]
(xxx)含有(i)p1-068744_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1052]
(yyy)含有(i)p1-068744_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1053]
(zzz)含有(i)p1-068744_e31s_h50i的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_h50i的轻链氨基酸序列的轻链；
[1054]
(aaaa)含有(i)p1-068744_h50i_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i_e59y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1055]
(bbbb)含有(i)p1-068744_e59y_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e5；9y_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1056]
(cccc)含有(i)p1-068744_e100s_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e100s_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1057]
(dddd)含有(i)p1-068744_e31s_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1058]
(eeee)含有(i)p1-068744_e31s_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_e59y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1059]
(ffff)含有(i)p1-068744_e31s_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1060]
(gggg)含有(i)p1-068744_h50i_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1061]
(hhhh)含有(i)p1-068744_h50i_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1062]
(iiii)含有(i)p1-068744_e59y_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和vl和含有p1-068744_e59y_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1063]
(jjjj)含有(i)p1-068748_h31s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1064]
(kkkk)含有(i)p1-068748_h32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1065]
(llll)含有(i)p1-068748_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d57k的轻链氨基酸序列的轻链；
[1066]
(mmmm)含有(i)p1-068748_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1067]
(nnnn)含有(i)p1-068748_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1068]
(oooo)含有(i)p1-068748_h31s_h32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_h32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1069]
(pppp)含有(i)p1-068748_h32y_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y_d57k的轻链氨基酸序列的轻链；
[1070]
(qqqq)含有(i)p1-068748_d57k_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d57k_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1071]
(rrrr)含有(i)p1-068748_d58y_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d58y_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1072]
(ssss)含有(i)p1-068748_h31s_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_d57k的轻链氨基酸序列的轻链；
[1073]
(tttt)含有(i)p1-068748_h31s_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1074]
(uuuu)含有(i)p1-068748_h31s_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1075]
(vvvv)含有(i)p1-068748_h32y_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1076]
(wwww)含有(i)p1-068748_h32y_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；或
[1077]
(xxxx)含有(i)p1-068748_d57k_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d57k_d100s的轻链氨基酸序列的轻链，
[1078]
任选地，其中(a)或(c)至(ttt)中的任一者中的vh包含k16r和t84a取代中的一者或两者，并且任选地，其中(b)或(uuu)至(xxxx)的vl包含t85v取代。
[1079]
在一些实施方案中，lc可如以上(a)至(ttt)中所指定，但hc可由于存在1、2、3、4或5个氨基酸取代诸如1、2、3、4或5个保守性取代而不同于种类(a)至ttt)中的每一者的序列。在一些实施方案中，举例来说，p1-061029或它的子代中的一者的hc可在hc的vh区中包含
k16r和t84a取代中的一者或两者(p1-061015和它的子代已具有在vh位置16处的r和在vh位置84处的a)。在一些实施方案中，p1-061015或它的子代的vl可具有t85v取代。
[1080]
本公开的某些实施方案包括包含以下的抗vista ab：
[1081]
(a)由(i)p1-061029的vh的氨基酸序列(seq id no：67)和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029的轻链氨基酸序列(seq id no：70)组成的轻链；
[1082]
(b)由(i)p1-061015的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-061015的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1083]
(c)由(i)p1-068757的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068757的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1084]
(d)由(i)p1-068759的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068759的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1085]
(e)由(i)p1-068761的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1086]
(f)由(i)p1-068763的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068763的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1087]
(g)由(i)p1-068765的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068765的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1088]
(h)由(i)p1-068767的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1089]
(i)由(i)p1-068769的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068769的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1090]
(j)由(i)p1-068771的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068771的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1091]
(k)由(i)p1-068773的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068773的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1092]
(l)由(i)p1-068775的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068775的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1093]
(m)由(i)p1-069059的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-069059的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1094]
(n)由(i)p1-069061的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-069061的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1095]
(o)由(i)p1-069063的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-069063的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1096]
(p)由(i)p1-069065的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-069065的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1097]
(q)由(i)p1-069067的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-069067的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1098]
(r)由(i)p1-069069的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-069069的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1099]
(s)由(i)p1-069071的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-069071的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1100]
(t)由(i)p1-069073的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-069073的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1101]
(u)由(i)p1-069075的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-069075的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1102]
(v)由(i)p1-069077的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-069077的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1103]
(w)由(i)p1-068736的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068736的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1104]
(x)由(i)p1-068738的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068738的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1105]
(y)由(i)p1-068740的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068740的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1106]
(z)由(i)p1-068742的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068742的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1107]
(aa)由(i)p1-068744的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1108]
(bb)由p1-068746的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068746的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1109]
(cc)由(i)p1-068748的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1110]
(dd)由(i)p1-068750的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068750的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1111]
(ee)由(i)p1-068752的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068752的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1112]
(ff)由(i)p1-068754的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068754的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1113]
(gg)由(i)p1-068761_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1114]
(hh)由(i)p1-068761_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_h100g的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1115]
(ii)由(i)p1-068761_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e56n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1116]
(jj)由(i)p1-068761_e55a_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e55a_e56n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1117]
(kk)由(i)p1-068761_e30d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1118]
(ll)由(i)p1-068761_e30d_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基
酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1119]
(mm)由(i)p1-068761_e56n_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e56n_h100g的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1120]
(nn)由(i)p1-068761_e30d_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_h100g的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1121]
(oo)由(i)p1-068761_e30d_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e56n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1122]
(pp)由(i)p1-068761_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1123]
(qq)由(i)p1-068761_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e55a_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1124]
(rr)由(i)p1-068761_h100g_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_h100g_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1125]
(ss)由(i)p1-068761_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1126]
(tt)由(i)p1-068761_e56n_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e56n_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1127]
(uu)由(i)p1-068761_e32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1128]
(vv)由(i)p1-068761_e32y_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1129]
(ww)由(i)p1-068761_e32y_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_e56n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1130]
(xx)由(i)p1-068761_e30d_e32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e32y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1131]
(yy)由(i)p1-068761_e32y_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_h100g的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1132]
(zz)由(i)p1-068761_e32y_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1133]
(aaa)由(i)p1-068767_d52n_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1134]
(bbb)由(i)p1-068767_d52n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1135]
(ccc)由(i)p1-068767_d52n_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1136]
(ddd)由(i)p1-068767_e55a_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e55a_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1137]
(eee)由(i)p1-068767_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1138]
(fff)由(i)p1-068767_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1139]
(ggg)由(i)p1-068767_e30d_d52n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d_d52n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1140]
(hhh)由(i)p1-068767_e30d_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1141]
(iii)由(i)p1-068767_e30d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1142]
(jjj)由(i)p1-068767_e30d_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1143]
(kkk)由(i)p1-068767_e100ff_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e100ff_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1144]
(lll)由(i)p1-068767_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e55a_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1145]
(mmm)由(i)p1-068767_d52n_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1146]
(nnn)由(i)p1-068767_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1147]
(ooo)由(i)p1-068767_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1148]
(ppp)由(i)p1-061029_f100fe_v102d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_f100fe_v102d的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1149]
(qqq)由(i)p1-061029_f100fe的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_f100fe的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1150]
(rrr)由(i)p1-061029_v102d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_v102d的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1151]
(sss)由(i)p1-061029_y32e的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_y32e的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1152]
(ttt)由(i)p1-061029_y32e_f100fe的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_y32e_f100fe的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1153]
(uuu)由(i)p1-068744_e31s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1154]
(vvv)由(i)p1-068744_h50i的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1155]
(www)由(i)p1-068744_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e59y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1156]
(xxx)由(i)p1-068744_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1157]
(yyy)由(i)p1-068744_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸
序列组成的重链和由p1-068744_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1158]
(zzz)由(i)p1-068744_e31s_h50i的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_h50i的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1159]
(aaaa)由(i)p1-068744_h50i_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i_e59y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1160]
(bbbb)由(i)p1-068744_e59y_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e5；9y_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1161]
(cccc)由(i)p1-068744_e100s_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e100s_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1162]
(dddd)由(i)p1-068744_e31s_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1163]
(eeee)由(i)p1-068744_e31s_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_e59y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1164]
(ffff)由(i)p1-068744_e31s_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1165]
(gggg)由(i)p1-068744_h50i_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1166]
(hhhh)由(i)p1-068744_h50i_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1167]
(iiii)由(i)p1-068744_e59y_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和vl和由p1-068744_e59y_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1168]
(jjjj)由(i)p1-068748_h31s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1169]
(kkkk)由(i)p1-068748_h32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1170]
(llll)由(i)p1-068748_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d57k的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1171]
(mmmm)由(i)p1-068748_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1172]
(nnnn)由(i)p1-068748_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1173]
(oooo)由(i)p1-068748_h31s_h32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_h32y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1174]
(pppp)由(i)p1-068748_h32y_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y_d57k的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1175]
(qqqq)由(i)p1-068748_d57k_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d57k_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1176]
(rrrr)由(i)p1-068748_d58y_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d58y_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1177]
(ssss)由(i)p1-068748_h31s_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_d57k的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1178]
(tttt)由(i)p1-068748_h31s_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链，和由p1-068748_h31s_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1179]
(uuuu)由(i)p1-068748_h31s_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1180]
(vvvv)由(i)p1-068748_h32y_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1181]
(wwww)由(i)p1-068748_h32y_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；或
[1182]
(xxxx)由(i)p1-068748_d57k_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：182的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d57k_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1183]
其中vh的c末端氨基酸和seq id no：182的n末端氨基酸形成肽键；并且
[1184]
任选地，其中(a)或(c)至(ttt)中的任一者中的vh包含k16r和t84a取代中的一者或两者，并且任选地，其中(b)或(uuu)至(xxxx)中的任一者的vl包含t85v取代。
[1185]
在一些实施方案中，本公开考虑包含以下的抗vista mab：
[1186]
由(i)以上所列的(a)至(ttt)的vh，(ii)seq id no：182和(iii)lys残基的氨基酸序列组成的重链，其中vh的c末端氨基酸和seq id no：182的n末端氨基酸形成肽键，并且其中seq id no：182的c末端氨基酸接合于lys的n末端；和
[1187]
由以上所列的(a)至(xxxx)的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1188]
其中vh和轻链氨基酸序列选自来自以上所列的(a)至(xxxx)之中的相同抗体种类。
[1189]
本公开的某些实施方案包括包含以下的抗vista ab：
[1190]
(a)含有(i)p1-061029的vh的氨基酸序列(seq id no：67)和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-061029的轻链氨基酸序列(seq id no：70)的轻链；
[1191]
(b)含有(i)p1-061015的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-061015的轻链氨基酸序列的轻链；
[1192]
(c)含有(i)p1-068757的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068757的轻链氨基酸序列的轻链；
[1193]
(d)含有(i)p1-068759的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068759的轻链氨基酸序列的轻链；
[1194]
(e)含有(i)p1-068761的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761的轻链氨基酸序列的轻链；
[1195]
(f)含有(i)p1-068763的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068763的轻链氨基酸序列的轻链；
[1196]
(g)含有(i)p1-068765的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068765的轻链氨基酸序列的轻链；
[1197]
(h)含有(i)p1-068767的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767的轻链氨基酸序列的轻链；
[1198]
(i)含有(i)p1-068769的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068769的轻链氨基酸序列的轻链；
[1199]
(j)含有(i)p1-068771的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068771的轻链氨基酸序列的轻链；
[1200]
(k)含有(i)p1-068773的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068773的轻链氨基酸序列的轻链；
[1201]
(l)含有(i)p1-068775的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068775的轻链氨基酸序列的轻链；
[1202]
(m)含有(i)p1-069059的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-069059的轻链氨基酸序列的轻链，
[1203]
(n)含有(i)p1-069061的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-069061的轻链氨基酸序列的轻链；
[1204]
(o)含有(i)p1-069063的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-069063的轻链氨基酸序列的轻链；
[1205]
(p)含有(i)p1-069065的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-069065的轻链氨基酸序列的轻链；
[1206]
(q)含有(i)p1-069067的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-069067的轻链氨基酸序列的轻链；
[1207]
(r)含有(i)p1-069069的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-069069的轻链氨基酸序列的轻链；
[1208]
(s)含有(i)p1-069071的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-069071的轻链氨基酸序列的轻链；
[1209]
(t)含有(i)p1-069073的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-069073的轻链氨基酸序列的轻链；
[1210]
(u)含有(i)p1-069075的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-069075的轻链氨基酸序列的轻链；
[1211]
(v)含有(i)p1-069077的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-069077的轻链氨基酸序列的轻链；
[1212]
(w)含有(i)p1-068736的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068736的轻链氨基酸序列的轻链；
[1213]
(x)含有(i)p1-068738的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068738的轻链氨基酸序列的轻链；
[1214]
(y)含有(i)p1-068740的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068740的轻链氨基酸序列的轻链；
[1215]
(z)含有(i)p1-068742的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068742的轻链氨基酸序列的轻链；
[1216]
(aa)含有(i)p1-068744的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744的轻链氨基酸序列的轻链，
[1217]
(bb)含有p1-068746的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重
链和含有p1-068746的轻链氨基酸序列的轻链；
[1218]
(cc)含有(i)p1-068748的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748的轻链氨基酸序列的轻链，
[1219]
(dd)含有(i)p1-068750的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068750的轻链氨基酸序列的轻链，
[1220]
(ee)含有(i)p1-068752的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068752的轻链氨基酸序列的轻链，
[1221]
(ff)含有(i)p1-068754的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068754的轻链氨基酸序列的轻链；
[1222]
(gg)含有(i)p1-068761_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1223]
(hh)含有(i)p1-068761_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[1224]
(ii)含有(i)p1-068761_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1225]
(jj)含有(i)p1-068761_e55a_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e55a_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1226]
(kk)含有(i)p1-068761_e30d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d的轻链氨基酸序列的轻链；
[1227]
(ll)含有(i)p1-068761_e30d_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1228]
(mm)含有(i)p1-068761_e56n_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e56n_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[1229]
(nn)含有(i)p1-068761_e30d_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[1230]
(oo)含有(i)p1-068761_e30d_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1231]
(pp)含有(i)p1-068761_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1232]
(qq)含有(i)p1-068761_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e55a_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1233]
(rr)含有(i)p1-068761_h100g_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_h100g_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1234]
(ss)含有(i)p1-068761_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1235]
(tt)含有(i)p1-068761_e56n_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e56n_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1236]
(uu)含有(i)p1-068761_e32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1237]
(vv)含有(i)p1-068761_e32y_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1238]
(ww)含有(i)p1-068761_e32y_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1239]
(xx)含有(i)p1-068761_e30d_e32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1240]
(yy)含有(i)p1-068761_e32y_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[1241]
(zz)含有(i)p1-068761_e32y_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1242]
(aaa)含有(i)p1-068767_d52n_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1243]
(bbb)含有(i)p1-068767_d52n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1244]
(ccc)含有(i)p1-068767_d52n_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1245]
(ddd)含有(i)p1-068767_e55a_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e55a_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1246]
(eee)含有(i)p1-068767_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1247]
(fff)含有(i)p1-068767_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1248]
(ggg)含有(i)p1-068767_e30d_d52n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d_d52n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1249]
(hhh)含有(i)p1-068767_e30d_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1250]
(iii)含有(i)p1-068767_e30d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d的轻链氨基酸序列的轻链；
[1251]
(jjj)含有(i)p1-068767_e30d_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1252]
(kkk)含有(i)p1-068767_e100ff_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e100ff_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1253]
(lll)含有(i)p1-068767_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e55a_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1254]
(mmm)含有(i)p1-068767_d52n_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1255]
(nnn)含有(i)p1-068767_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1256]
(ooo)含有(i)p1-068767_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183
的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1257]
(ppp)含有(i)p1-061029_f100fe_v102d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_f100fe_v102d的轻链氨基酸序列的轻链；
[1258]
(qqq)含有(i)p1-061029_f100fe的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_f100fe的轻链氨基酸序列的轻链；
[1259]
(rrr)含有(i)p1-061029_v102d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_v102d的轻链氨基酸序列的轻链；
[1260]
(sss)含有(i)p1-061029_y32e的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_y32e的轻链氨基酸序列的轻链；
[1261]
(ttt)含有(i)p1-061029_y32e_f100fe的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_y32e_f100fe的轻链氨基酸序列的轻链；
[1262]
(uuu)含有(i)p1-068744_e31s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1263]
(vvv)含有(i)p1-068744_h50i的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i的轻链氨基酸序列的轻链；
[1264]
(www)含有(i)p1-068744_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e59y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1265]
(xxx)含有(i)p1-068744_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1266]
(yyy)含有(i)p1-068744_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1267]
(zzz)含有(i)p1-068744_e31s_h50i的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_h50i的轻链氨基酸序列的轻链；
[1268]
(aaaa)含有(i)p1-068744_h50i_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i_e59y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1269]
(bbbb)含有(i)p1-068744_e59y_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e5；9y_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1270]
(cccc)含有(i)p1-068744_e100s_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e100s_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1271]
(dddd)含有(i)p1-068744_e31s_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1272]
(eeee)含有(i)p1-068744_e31s_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_e59y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1273]
(ffff)含有(i)p1-068744_e31s_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1274]
(gggg)含有(i)p1-068744_h50i_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1275]
(hhhh)含有(i)p1-068744_h50i_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1276]
(iiii)含有(i)p1-068744_e59y_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和vl和含有p1-068744_e59y_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1277]
(jjjj)含有(i)p1-068748_h31s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1278]
(kkkk)含有(i)p1-068748_h32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1279]
(llll)含有(i)p1-068748_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d57k的轻链氨基酸序列的轻链；
[1280]
(mmmm)含有(i)p1-068748_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1281]
(nnnn)含有(i)p1-068748_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1282]
(oooo)含有(i)p1-068748_h31s_h32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_h32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1283]
(pppp)含有(i)p1-068748_h32y_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y_d57k的轻链氨基酸序列的轻链；
[1284]
(qqqq)含有(i)p1-068748_d57k_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d57k_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1285]
(rrrr)含有(i)p1-068748_d58y_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d58y_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1286]
(ssss)含有(i)p1-068748_h31s_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_d57k的轻链氨基酸序列的轻链；
[1287]
(tttt)含有(i)p1-068748_h31s_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1288]
(uuuu)含有(i)p1-068748_h31s_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1289]
(vvvv)含有(i)p1-068748_h32y_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1290]
(wwww)含有(i)p1-068748_h32y_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；或
[1291]
(xxxx)含有(i)p1-068748_d57k_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d57k_d100s的轻链氨基酸序列的轻链，
[1292]
任选地，其中(a)或(c)至(ttt)中的任一者中的vh包含k16r和t84a取代中的一者或两者，并且任选地，其中(b)或(uuu)至(xxxx)中的任一者的vl包含t85v取代。
[1293]
本公开的某些实施方案包括包含以下的抗vista ab：
[1294]
(a)由(i)p1-061029的vh的氨基酸序列(seq id no：67)和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029的轻链氨基酸序列(seq id no：70)组成的轻链；
[1295]
(b)由(i)p1-061015的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-061015的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1296]
(c)由(i)p1-068757的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068757的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1297]
(d)由(i)p1-068759的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068759的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1298]
(e)由(i)p1-068761的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1299]
(f)由(i)p1-068763的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068763的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1300]
(g)由(i)p1-068765的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068765的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1301]
(h)由(i)p1-068767的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1302]
(i)由(i)p1-068769的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068769的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1303]
(j)由(i)p1-068771的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068771的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1304]
(k)由(i)p1-068773的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068773的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1305]
(l)由(i)p1-068775的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068775的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1306]
(m)由(i)p1-069059的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-069059的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1307]
(n)由(i)p1-069061的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-069061的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1308]
(o)由(i)p1-069063的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-069063的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1309]
(p)由(i)p1-069065的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-069065的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1310]
(q)由(i)p1-069067的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-069067的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1311]
(r)由(i)p1-069069的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-069069的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1312]
(s)由(i)p1-069071的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-069071的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1313]
(t)由(i)p1-069073的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-069073的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1314]
(u)由(i)p1-069075的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-069075的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1315]
(v)由(i)p1-069077的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成
的重链和由p1-069077的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1316]
(w)由(i)p1-068736的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068736的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1317]
(x)由(i)p1-068738的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068738的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1318]
(y)由(i)p1-068740的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068740的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1319]
(z)由(i)p1-068742的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068742的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1320]
(aa)由(i)p1-068744的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1321]
(bb)由p1-068746的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068746的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1322]
(cc)由(i)p1-068748的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1323]
(dd)由(i)p1-068750的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068750的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1324]
(ee)由(i)p1-068752的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068752的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1325]
(ff)由(i)p1-068754的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068754的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1326]
(gg)由(i)p1-068761_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1327]
(hh)由(i)p1-068761_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_h100g的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1328]
(ii)由(i)p1-068761_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e56n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1329]
(jj)由(i)p1-068761_e55a_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e55a_e56n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1330]
(kk)由(i)p1-068761_e30d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1331]
(ll)由(i)p1-068761_e30d_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1332]
(mm)由(i)p1-068761_e56n_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e56n_h100g的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1333]
(nn)由(i)p1-068761_e30d_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_h100g的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1334]
(oo)由(i)p1-068761_e30d_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e56n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1335]
(pp)由(i)p1-068761_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1336]
(qq)由(i)p1-068761_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e55a_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1337]
(rr)由(i)p1-068761_h100g_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_h100g_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1338]
(ss)由(i)p1-068761_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1339]
(tt)由(i)p1-068761_e56n_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e56n_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1340]
(uu)由(i)p1-068761_e32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1341]
(vv)由(i)p1-068761_e32y_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1342]
(ww)由(i)p1-068761_e32y_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_e56n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1343]
(xx)由(i)p1-068761_e30d_e32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e32y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1344]
(yy)由(i)p1-068761_e32y_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_h100g的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1345]
(zz)由(i)p1-068761_e32y_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1346]
(aaa)由(i)p1-068767_d52n_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1347]
(bbb)由(i)p1-068767_d52n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1348]
(ccc)由(i)p1-068767_d52n_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1349]
(ddd)由(i)p1-068767_e55a_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e55a_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1350]
(eee)由(i)p1-068767_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1351]
(fff)由(i)p1-068767_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1352]
(ggg)由(i)p1-068767_e30d_d52n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d_d52n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1353]
(hhh)由(i)p1-068767_e30d_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1354]
(iii)由(i)p1-068767_e30d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序
列组成的重链和由p1-068767_e30d的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1355]
(jjj)由(i)p1-068767_e30d_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1356]
(kkk)由(i)p1-068767_e100ff_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e100ff_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1357]
(lll)由(i)p1-068767_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e55a_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1358]
(mmm)由(i)p1-068767_d52n_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1359]
(nnn)由(i)p1-068767_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1360]
(ooo)由(i)p1-068767_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1361]
(ppp)由(i)p1-061029_f100fe_v102d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_f100fe_v102d的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1362]
(qqq)由(i)p1-061029_f100fe的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_f100fe的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1363]
(rrr)由(i)p1-061029_v102d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_v102d的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1364]
(sss)由(i)p1-061029_y32e的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_y32e的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1365]
(ttt)由(i)p1-061029_y32e_f100fe的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_y32e_f100fe的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1366]
(uuu)由(i)p1-068744-e31s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1367]
(vvv)由(i)p1-068744_h50i的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1368]
(www)由(i)p1-068744_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e59y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1369]
(xxx)由(i)p1-068744_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1370]
(yyy)由(i)p1-068744-e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1371]
(zzz)由(i)p1-068744_e31s_h50i的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_h50i的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1372]
(aaaa)由(i)p1-068744_h50i_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i_e59y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1373]
(bbbb)由(i)p1-068744_e59y_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e5；9y_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1374]
(cccc)由(i)p1-068744_e100s_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e100s_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1375]
(dddd)由(i)p1-068744_e31s_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1376]
(eeee)由(i)p1-068744_e31s_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_e59y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1377]
(ffff)由(i)p1-068744_e31s_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1378]
(gggg)由(i)p1-068744_h50i_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1379]
(hhhh)由(i)p1-068744_h50i_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1380]
(iiii)由(i)p1-068744_e59y_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和vl和由p1-068744_e59y_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1381]
(jjjj)由(i)p1-068748_h31s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1382]
(kkkk)由(i)p1-068748_h32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1383]
(llll)由(i)p1-068748_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d57k的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1384]
(mmmm)由(i)p1-068748_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1385]
(nnnn)由(i)p1-068748_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1386]
(oooo)由(i)p1-068748_h31s_h32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_h32y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1387]
(pppp)由(i)p1-068748_h32y_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y_d57k的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1388]
(qqqq)由(i)p1-068748_d57k_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d57k_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1389]
(rrrr)由(i)p1-068748-d58y_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d58y_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1390]
(ssss)由(i)p1-068748-h31s_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_d57k的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1391]
(tttt)由(i)p1-068748_h31s_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1392]
(uuuu)由(i)p1-068748-h3 1s_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1393]
(vvvv)由(i)p1-068748_h32y_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨
基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1394]
(wwww)由(i)p1-068748_h32y_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；或
[1395]
(xxxx)由(i)p1-068748_d57k_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：183的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d57k_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1396]
其中vh的c末端氨基酸和seq id no：183的n末端氨基酸形成肽键；并且
[1397]
任选地，其中(a)或(c)至(ttt)中的任一者中的vh包含k16r和t84a取代中的一者或两者，并且任选地，其中(b)或(uuu)至(xxxx)中的任一者的vl包含t85v取代。
[1398]
在一些实施方案中，本公开考虑包含以下的抗vista mab：
[1399]
由(i)以上所列的(a)至(xxxx)的vh，(ii)seq id no：183和(iii)lys残基的氨基酸序列组成的重链，其中vh的c末端氨基酸和seq id no：183的n末端氨基酸形成肽键，并且其中seq id no：183的c末端氨基酸接合于lys的n末端；和
[1400]
由以上所列的(a)至(xxxx)的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1401]
其中vh和轻链氨基酸序列选自来自以上所列的(a)至(xxxx)之中的相同抗体种类。
[1402]
本公开的其他实施方案包括包含以下的抗vista ab：
[1403]
(a)含有(i)p1-061029的vh的氨基酸序列(seq id no：67)和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-061029的轻链氨基酸序列(seq id no：70)的轻链；
[1404]
(b)含有(i)p1-061015的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-061015的轻链氨基酸序列的轻链；
[1405]
(c)含有(i)p1-068757的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068757的轻链氨基酸序列的轻链；
[1406]
(d)含有(i)p1-068759的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068759的轻链氨基酸序列的轻链；
[1407]
(e)含有(i)p1-068761的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761的轻链氨基酸序列的轻链；
[1408]
(f)含有(i)p1-068763的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068763的轻链氨基酸序列的轻链；
[1409]
(g)含有(i)p1-068765的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068765的轻链氨基酸序列的轻链；
[1410]
(h)含有(i)p1-068767的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767的轻链氨基酸序列的轻链；
[1411]
(i)含有(i)p1-068769的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068769的轻链氨基酸序列的轻链；
[1412]
(j)含有(i)p1-068771的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068771的轻链氨基酸序列的轻链；
[1413]
(k)含有(i)p1-068773的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068773的轻链氨基酸序列的轻链；
[1414]
(l)含有(i)p1-068775的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的
重链和含有p1-068775的轻链氨基酸序列的轻链；
[1415]
(m)含有(i)p1-069059的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-069059的轻链氨基酸序列的轻链，
[1416]
(n)含有(i)p1-069061的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-069061的轻链氨基酸序列的轻链；
[1417]
(o)含有(i)p1-069063的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-069063的轻链氨基酸序列的轻链；
[1418]
(p)含有(i)p1-069065的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-069065的轻链氨基酸序列的轻链；
[1419]
(q)含有(i)p1-069067的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-069067的轻链氨基酸序列的轻链；
[1420]
(r)含有(i)p1-069069的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-069069的轻链氨基酸序列的轻链；
[1421]
(s)含有(i)p1-069071的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-069071的轻链氨基酸序列的轻链；
[1422]
(t)含有(i)p1-069073的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-069073的轻链氨基酸序列的轻链；
[1423]
(u)含有(i)p1-069075的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-069075的轻链氨基酸序列的轻链；
[1424]
(v)含有(i)p1-069077的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-069077的轻链氨基酸序列的轻链；
[1425]
(w)含有(i)p1-068736的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068736的轻链氨基酸序列的轻链；
[1426]
(x)含有(i)p1-068738的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068738的轻链氨基酸序列的轻链；
[1427]
(y)含有(i)p1-068740的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068740的轻链氨基酸序列的轻链；
[1428]
(z)含有(i)p1-068742的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068742的轻链氨基酸序列的轻链；
[1429]
(aa)含有(i)p1-068744的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744的轻链氨基酸序列的轻链，
[1430]
(bb)含有p1-068746的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068746的轻链氨基酸序列的轻链；
[1431]
(cc)含有(i)p1-068748的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748的轻链氨基酸序列的轻链，
[1432]
(dd)含有(i)p1-068750的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068750的轻链氨基酸序列的轻链，
[1433]
(ee)含有(i)p1-068752的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068752的轻链氨基酸序列的轻链，
[1434]
(ff)含有(i)p1-068754的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068754的轻链氨基酸序列的轻链；
[1435]
(gg)含有(i)p1-068761_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1436]
(hh)含有(i)p1-068761_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[1437]
(ii)含有(i)p1-068761_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1438]
(jj)含有(i)p1-068761_e55a_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e55a_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1439]
(kk)含有(i)p1-068761_e30d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d的轻链氨基酸序列的轻链；
[1440]
(ll)含有(i)p1-068761_e30d_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1441]
(mm)含有(i)p1-068761_e56n_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e56n_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[1442]
(nn)含有(i)p1-068761_e30d_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[1443]
(oo)含有(i)p1-068761_e30d_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1444]
(pp)含有(i)p1-068761e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1445]
(qq)含有(i)p1-068761_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e55a_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1446]
(rr)含有(i)p1-068761_h100g_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_h100g_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1447]
(ss)含有(i)p1-068761_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1448]
(tt)含有(i)p1-068761_e56n_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e56n_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1449]
(uu)含有(i)p1-068761_e32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1450]
(vv)含有(i)p1-068761_e32y_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1451]
(ww)含有(i)p1-068761_e32y_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_e56n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1452]
(xx)含有(i)p1-068761_e30d_e32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e30d_e32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1453]
(yy)含有(i)p1-068761_e32y_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的
氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_h100g的轻链氨基酸序列的轻链；
[1454]
(zz)含有(i)p1-068761_e32y_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068761_e32y_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1455]
(aaa)含有(i)p1-068767_d52n_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1456]
(bbb)含有(i)p1-068767_d52n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1457]
(ccc)含有(i)p1-068767_d52n_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1458]
(ddd)含有(i)p1-068767_e55a_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e55a_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1459]
(eee)含有(i)p1-068767_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1460]
(fff)含有(i)p1-068767_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1461]
(ggg)含有(i)p1-068767_e30d_d52n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d_d52n的轻链氨基酸序列的轻链；
[1462]
(hhh)含有(i)p1-068767_e30d_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1463]
(iii)含有(i)p1-068767_e30d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d的轻链氨基酸序列的轻链；
[1464]
(jjj)含有(i)p1-068767_e30d_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d_e55a的轻链氨基酸序列的轻链；
[1465]
(kkk)含有(i)p1-068767_e100ff_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e100ff_d102v的轻链氨基酸序列的轻链；
[1466]
(lll)含有(i)p1-068767_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e55a_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1467]
(mmm)含有(i)p1-068767_d52n_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_d52n_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1468]
(nnn)含有(i)p1-068767_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1469]
(ooo)含有(i)p1-068767_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068767_e30d_e100ff的轻链氨基酸序列的轻链；
[1470]
(ppp)含有(i)p1-061029_f100fe_v102d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_f100fe_v102d的轻链氨基酸序列的轻链；
[1471]
(qqq)含有(i)p1-061029_f100fe的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_f100fe的轻链氨基酸序列的轻链；
[1472]
(rrr)含有(i)p1-061029_v102d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_v102d的轻链氨基酸序列的轻链；
[1473]
(sss)含有(i)p1-061029_y32e的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_y32e的轻链氨基酸序列的轻链；
[1474]
(ttt)含有(i)p1-061029_y32e_f100fe的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-061029_y32e_f100fe的轻链氨基酸序列的轻链；
[1475]
(uuu)含有(i)p1-068744_e31s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1476]
(vvv)含有(i)p1-068744_h50i的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i的轻链氨基酸序列的轻链；
[1477]
(www)含有(i)p1-068744_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e59y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1478]
(xxx)含有(i)p1-068744_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1479]
(yyy)含有(i)p1-068744_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1480]
(zzz)含有(i)p1-068744_e31s_h50i的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_h50i的轻链氨基酸序列的轻链；
[1481]
(aaaa)含有(i)p1-068744_h50i_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i_e59y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1482]
(bbbb)含有(i)p1-068744_e59y_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e5；9y_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1483]
(cccc)含有(i)p1-068744_e100s_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e100s_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1484]
(dddd)含有(i)p1-068744_e31s_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1485]
(eeee)含有(i)p1-068744_e31s_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_e59y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1486]
(ffff)含有(i)p1-068744_e31s_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_e31s_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1487]
(gggg)含有(i)p1-068744_h50i_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i_e100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1488]
(hhhh)含有(i)p1-068744_h50i_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068744_h50i_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1489]
(iiii)含有(i)p1-068744_e59y_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和vl和含有p1-068744_e59y_e102y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1490]
(jjjj)含有(i)p1-068748_h31s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1491]
(kkkk)含有(i)p1-068748_h32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1492]
(llll)含有(i)p1-068748_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基
酸序列的重链和含有p1-068748_d57k的轻链氨基酸序列的轻链；
[1493]
(mmmm)含有(i)p1-068748_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1494]
(nnnn)含有(i)p1-068748_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1495]
(oooo)含有(i)p1-068748_h31s_h32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_h32y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1496]
(pppp)含有(i)p1-068748_h32y_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y_d57k的轻链氨基酸序列的轻链；
[1497]
(qqqq)含有(i)p1-068748_d57k_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d57k_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1498]
(rrr)含有(i)p1-068748_d58y_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d58y_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1499]
(ssss)含有(i)p1-068748_h31s_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_d57k的轻链氨基酸序列的轻链；
[1500]
(tttt)含有(i)p1-068748_h31s_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1501]
(uuuu)含有(i)p1-068748_h31s_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h31s_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；
[1502]
(vvvv)含有(i)p1-068748_h32y_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y_d58y的轻链氨基酸序列的轻链；
[1503]
(wwww)含有(i)p1-068748_h32y_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_h32y_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；或
[1504]
(xxxx)含有(i)p1-068748_d57k_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列的重链和含有p1-068748_d57k_d100s的轻链氨基酸序列的轻链；并且
[1505]
任选地，其中(a)或(c)至(ttt)中的任一者中的vh包含k16r和t84a取代中的一者或两者，并且任选地，其中(b)或(uuu)至(xxxx)中的任一者的vl包含t85v取代。
[1506]
本公开的其他实施方案包括包含以下的抗vista ab：
[1507]
(a)由(i)p1-061029的vh的氨基酸序列(seq id no：67)和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029的轻链氨基酸序列(seq id no：70)组成的轻链；
[1508]
(b)由(i)p1-061015的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-061015的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1509]
(c)由(i)p1-068757的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068757的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1510]
(d)由(i)p1-068759的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068759的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1511]
(e)由(i)p1-068761的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1512]
(f)由(i)p1-068763的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成
的重链和由p1-068763的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1513]
(g)由(i)p1-068765的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068765的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1514]
(h)由(i)p1-068767的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1515]
(i)由(i)p1-068769的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068769的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1516]
(j)由(i)p1-068771的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068771的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1517]
(k)由(i)p1-068773的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068773的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1518]
(l)由(i)p1-068775的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068775的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1519]
(m)由(i)p1-069059的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-069059的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1520]
(n)由(i)p1-069061的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-069061的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1521]
(o)由(i)p1-069063的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-069063的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1522]
(p)由(i)p1-069065的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-069065的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1523]
(q)由(i)p1-069067的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-069067的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1524]
(r)由(i)p1-069069的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-069069的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1525]
(s)由(i)p1-069071的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-069071的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1526]
(t)由(i)p1-069073的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-069073的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1527]
(u)由(i)p1-069075的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-069075的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1528]
(v)由(i)pl-069077的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-069077的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1529]
(w)由(i)p1-068736的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068736的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1530]
(x)由(i)p1-068738的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068738的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1531]
(y)由(i)p1-068740的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068740的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1532]
(z)由(i)p1-068742的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068742的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1533]
(aa)由(i)p1-068744的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1534]
(bb)由p1-068746的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068746的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1535]
(cc)由(i)p1-068748的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1536]
(dd)由(i)p1-068750的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068750的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1537]
(ee)由(i)p1-068752的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068752的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1538]
(ff)由(i)p1-068754的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068754的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1539]
(gg)由(i)p1-068761_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1540]
(hh)由(i)p1-068761_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_h100g的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1541]
(ii)由(i)p1-068761_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e56n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1542]
(jj)由(i)p1-068761_e55a_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e55a_e56n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1543]
(kk)由(i)p1-068761_e30d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1544]
(ll)由(i)p1-068761_e30d_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1545]
(mm)由(i)p1-068761_e56n_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e56n_h100g的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1546]
(nn)由(i)p1-068761_e30d_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_h100g的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1547]
(oo)由(i)p1-068761_e30d_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e56n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1548]
(pp)由(i)p1-068761_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1549]
(qq)由(i)p1-068761_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e55a_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1550]
(rr)由(i)p1-068761_h100g_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_h100g_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1551]
(ss)由(i)p1-068761_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨
基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1552]
(tt)由(i)p1-068761_e56n_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e56n_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1553]
(uu)由(i)p1-068761_e32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1554]
(vv)由(i)p1-068761_e32y_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1555]
(ww)由(i)p1-068761_e32y_e56n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_e56n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1556]
(xx)由(i)p1-068761_e30d_e32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e30d_e32y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1557]
(yy)由(i)p1-068761_e32y_h100g的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_h100g的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1558]
(zz)由(i)p1-068761_e32y_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068761_e32y_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1559]
(aaa)由(i)p1-068767_d52n_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1560]
(bbb)由(i)p1-068767_d52n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1561]
(ccc)由(i)p1-068767_d52n_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1562]
(ddd)由(i)p1-068767_e55a_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e55a_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1563]
(eee)由(i)p1-068767_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1564]
(fff)由(i)p1-068767_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1565]
(ggg)由(i)p1-068767_e30d_d52n的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d_d52n的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1566]
(hhh)由(i)p1-068767_e30d_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1567]
(iii)由(i)p1-068767_e30d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1568]
(jjj)由(i)p1-068767_e30d_e55a的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d_e55a的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1569]
(kkk)由(i)p1-068767_e100ff_d102v的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e100ff_d102v的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1570]
(lll)由(i)p1-068767_e55a_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e55a_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1571]
(mmm)由(i)p1-068767_d52n_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_d52n_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1572]
(nnn)由(i)p1-068767_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1573]
(ooo)由(i)p1-068767_e30d_e100ff的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068767_e30d_e100ff的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1574]
(ppp)由(i)p1-061029_f100fe_v102d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_f100fe_v102d的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1575]
(qqq)由(i)p1-061029_f100fe的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_f100fe的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1576]
(rrr)由(i)p1-061029_v102d的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_v102d的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1577]
(sss)由(i)p1-061029_y32e的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_y32e的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1578]
(ttt)由(i)p1-061029_y32e_f100fe的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-061029_y32e_f100fe的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1579]
(uuu)由(i)p1-068744_e31s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1580]
(vvv)由(i)p1-068744_h50i的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1581]
(www)由(i)p1-068744_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e59y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1582]
(xxx)由(i)p1-068744_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1583]
(yyy)由(i)p1-068744_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1584]
(zzz)由(i)p1-068744_e31s_h50i的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_h50i的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1585]
(aaaa)由(i)p1-068744_h50i_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i_e59y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1586]
(bbbb)由(i)p1-068744_e59y_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e5；9y_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1587]
(cccc)由(i)p1-068744_e100s_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e100s_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1588]
(dddd)由(i)p1-068744_e31s_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1589]
(eeee)由(i)p1-068744_e31s_e59y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_e59y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1590]
(ffff)由(i)p1-068744_e31s_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的
氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_e31s_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1591]
(gggg)由(i)p1-068744_h50i_e100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i_e100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1592]
(hhhh)由(i)p1-068744_h50i_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068744_h50i_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1593]
(iiii)由(i)p1-068744_e59y_e102y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和vl和由p1-068744_e59y_e102y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1594]
(jjjj)由(i)p1-068748_h31s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1595]
(kkkk)由(i)p1-068748_h32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1596]
(llll)由(i)p1-068748_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d57k的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1597]
(mmmm)由(i)p1-068748_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1598]
(nnnn)由(i)p1-068748_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1599]
(oooo)由(i)p1-068748_h31s_h32y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_h32y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1600]
(pppp)由(i)p1-068748_h32y_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y_d57k的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1601]
(qqqq)由(i)p1-068748_d57k_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d57k_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1602]
(rrrr)由(i)p1-068748_d58y_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d58y_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1603]
(ssss)由(i)p1-068748_h31s_d57k的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_d57k的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1604]
(tttt)由(i)p1-068748_h31s_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1605]
(uuuu)由(i)p1-068748_h31s_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h31s_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1606]
(vvvv)由(i)p1-068748_h32y_d58y的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y_d58y的轻链氨基酸序列组成的轻链；
[1607]
(wwww)由(i)p1-068748_h32y_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_h32y_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链；或
[1608]
(xxxx)由(i)p1-068748_d57k_d100s的vh的氨基酸序列和(ii)seq id no：184的氨基酸序列组成的重链和由p1-068748_d57k_d100s的轻链氨基酸序列组成的轻链，
[1609]
其中vh的c末端氨基酸和seq id no：184的n末端氨基酸形成肽键；并且
[1610]
任选地，其中(a)或(c)至(ttt)中的任一者中的vh包含k16r和t84a取代中的一者
068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s，并且/或者轻链可变区可与以下各项的轻链可变区至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一：p1-061029或p1-061015或它们的子代，诸如p1-061029、p1-068757、p1-068759、p1-068761、p1-068763、p1-068765、p1-068767、p1-068769、p1-068771、p1-068773、p1-068775、p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069069、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068766、p1-068748、p1-068750、p1-068752p1-068754、p1-068761_e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g、p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s。
[1616]
在一些实施方案中，抗hvista ab可包含与p1-061015的氨基酸vh序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的氨基酸vh序列，其中所述抗体包含p1-061015的vh cdr1、cdr2和/或cdr3，其中至少一个残基已被d、e或h取代。在一些实施方案中，p1-061015的vh cdr1、cdr2和cdr3中的
每一者含有一个、两个或三个被d、e或h取代的残基。在一些实施方案中，抗hvista ab可包含与p1-061015的氨基酸vh序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的氨基酸vh序列，其中所述抗体包含含有一个或两个在cdr1的氨基酸位置6、7、8和9处的d、e或h残基的vh cdr1，并且/或者包含具有一个、两个或三个在cdr2的位置1、2、4或8-11处的d、e或h残基的vh cdr2，和/或具有一个、两个或三个在cdr 3的位置2、3、6、7或12处的d、e或h残基的vh cdr3。(对于落在这些实施方案内的抗体的实例，参见下表6。)在此类情况下，轻链可变区可包含以下各项的cdr1、cdr2和/或cdr3：p1-061029或p1-061015或它们的子代，诸如p1-061029、p1-068757、p1-068759、p1-068761、p1-068763、p1-068765、p1-068767、p1-068769、p1-068771、p1-068773、p1-068775、p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069069、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068766、p1-068748、p1-068750、p1-068752p1-068754、p1-068761_e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g、p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s，并且/或者轻链可变区可与以下各项的轻链可变区至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一：p1-061029或p1-061015或它们的子代，诸如p1-061029、p1-068757、p1-068759、p1-068761、p1-068763、p1-068765、p1-068767、p1-068769、p1-068771、p1-068773、p1-068775、p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069069、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068766、p1-068748、p1-068750、p1-068752p1-068754、p1-068761_e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g、p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、
p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s。
[1617]
在一些实施方案中，此类经修饰的抗hvista p1-061029或p1-061015子代具有以下特征中的一者或多者：
[1618]-在酸性ph例如ph 6.0或ph 6.5下特异性结合至hvista，例如ecd的富含组氨酸的区域或包含seq id no：2的氨基酸残基35-127的多肽；
[1619]-在生理ph或中性ph例如ph 7.4或ph 7.0下缺乏与hvista，例如ecd的富含组氨酸的区域或包含seq id no：2的氨基酸残基35-127的多肽的显著结合；
[1620]-在酸性ph例如ph 6.0或ph 6.5下特异性结合至食蟹猴vista，例如ecd的富含组氨酸的区域；
[1621]-在生理ph或中性ph例如ph 7.4或ph 7.0下缺乏与食蟹猴vista，例如ecd的富含组氨酸的区域的显著结合；
[1622]-相对于具有seq id no：2的hvista ecd，具有降低的与在以下氨基酸中的一者或多者处具有取代的hvista-ecd的结合：t35、y37、k38、t39、y41、r54、t61、f62、q63、l65、h66、l67、h68、h69、f97、l115、v117、i119、h121、h122、s124、e125、r127；
[1623]-与p1-061029、p1-068761、p1-068767、p1-061015、p1-068744和/或p1-068748交叉竞争与hvista的结合；
[1624]-在酸性ph例如ph 6.0或ph 6.5下抑制hvista与表达vista的人t细胞(例如原初或活化的t细胞)的结合；
[1625]-在酸性ph例如ph 6.0或ph 6.5下抑制hvista与psgl-1的结合(例如抑制具有seq id no：1的hvista的h153和h154与psgl-1酪氨酸y46和y48之间的相互作用)，其中psgl-1具有或不具有唾液酸化路易斯x，并且其中所述酪氨酸优选地是磺基酪氨酸，
[1626]-抑制hvista与vsig-3的结合；
[1627]-例如如实施例中所述测量的在食蟹猴中至少100、200、300、350、400、450、500、600或700小时(例如至少350小时)的平均滞留时间(mrt)；
[1628]-通过例如增强t细胞增殖；增强从t细胞的ifn-γ产生；以及/或者刺激t细胞受体介导的nf-kb信号传导来刺激t细胞活化；
[1629]-抑制vista介导的细胞：细胞粘附；
[1630]-特异性结合至表达vista的人肿瘤细胞样品或发炎人组织样品中的hvista；
[1631]-如例如使用实施例中所述的酵母表面展示和ngs测定所测定，通过一个或多个(例如至少1-3、1-5、1-10、5-10、5-15个或所有)在能量方面重要的接触残基y37、t39、r54、f62、h66、v117、i119或s124(表21)接触hvista；并且其中编号是成熟hvista(seq id no：2)的编号；
[1632]-如通过如实施例中所述的ms-hdx所测定，结合至具有seq id no：1的hvista的区域1：
57
lgpvdkghdvtf
68
(seq id no：566)；区域2：
86
rrpirnltfqdl
97
(seq id no：567)；和区域3：
148
vveirhhhsehrvhgame
165
(seq id no：568)，并且任选地，其中与区域2的结合是最强的；
[1633]-如例如通过如例如在实施例中所述的晶体照相术所测定，结合至hvista的富含组氨酸的β片层延伸部分；
[1634]-如例如通过如例如在实施例中所述的晶体照相术所测定，诸如通过氢键接触成熟hvista的h121、h122和/或h123(4.0埃(a)或更小的距离)；
[1635]-通过位于vh cdr1、cdr2或cdr3中的至少一个或多个谷氨酸、天冬氨酸或组氨酸残基接触hvista；
[1636]-如实施例中所述，相较于髓样细胞，相较于血液，以及/或者相较于肝、肺和脾细胞，更好地在具有mc38肿瘤的人vista敲入小鼠中的肿瘤组织中积累；
[1637]-相较于髓样细胞，相较于血液，以及/或者相较于肝、肺和脾细胞，更好地在患者的肿瘤中积累(例如比如通过施用经pet示踪剂标记的ab来检测)；
[1638]-如通过如本文中的实施例30中所述的表面等离子体共振(spr)所测定，相比于它在中性或生理ph下与hvista的结合的kd或k解离，在酸性条件下(例如在6.5的ph下)以至多1/10、1/100或1/1000的kd(和/或k解离)特异性结合至hvista；
[1639]-抑制hvista与hvista结合的细胞(例如表达psgl-1的细胞)的结合，其中结合根据本文中的实施例31中所述的方案来测定(任选地，其中所述细胞是人白细胞、pbmc或t细胞)；
[1640]-如使用如本文中的实施例32中所述的竞争性spr表位划分所测定，阻断或交叉阻断本文所述的任一抗体的结合；以及
[1641]-权利要求中以及/或者实施例中阐述的任何额外特征。
[1642]
示例性抗体恒定区
[1643]
在一些实施方案中，本文所述的抗体包含一个或多个人恒定区。在一些实施方案中，人重链恒定区具有选自iga、igg和igd的同种型。在一些实施方案中，人轻链恒定区具有选自κ和λ的同种型。在一些实施方案中，本文所述的抗体包含人igg恒定区，诸如igg1、igg2、igg3或igg4。在一些实施方案中，本文所述的抗体包含人igg4重链恒定区。在一些此类实施方案中，本文所述的抗体在人igg4恒定区中包含s241p突变。在一些实施方案中，本文所述的抗体包含人igg4恒定区和人κ轻链。
[1644]
重链恒定区的选择可决定抗体是否将在体内具有效应子功能。在一些实施方案中，此效应子功能包括抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)和/或补体依赖性细胞毒性
(cdc)，并且可导致对抗体所结合的细胞的杀灭。在包括治疗一些癌症的方法的一些治疗方法中，细胞杀灭可为合乎需要的，例如当抗体结合至支持肿瘤的维持或生长的细胞时。可支持肿瘤的维持或生长的示例性细胞包括但不限于肿瘤细胞自身、有助于将血管系统募集至肿瘤的细胞、以及提供支持或促进肿瘤生长或肿瘤存活的配体、生长因子或反受体的细胞。在一些实施方案中，当效应子功能是合乎需要的时，选择包含人igg1重链或人igg3重链的抗体。
[1645]
在某些实施方案中，本文提供的抗体被改变以增加或降低抗体被糖基化的程度。可方便地通过改变氨基酸序列以致创建或移除一个或多个糖基化位点来实现对抗体添加或缺失糖基化位点。
[1646]
当抗体包含fc区时，可改变与其附接的碳水化合物。由哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含分支双触角寡糖，其通常通过n键联来与fc区的ch2结构域的asn297附接。参见例如wright等人tibtech 15：26-32(1997)。寡糖可包括各种碳水化合物，例如甘露糖、n-乙酰基葡糖胺(glcnac)、半乳糖和唾液酸、以及附接于双触角寡糖结构的“主干”中的glcnac的岩藻糖。在一些实施方案中，可对本发明的抗体中的寡糖进行修饰以创建具有某些改善的性质的抗体。举例来说，在一些实施方案中，可例如通过使通常以含有岩藻糖的糖基化加以糖基化的残基诸如asn297突变或通过其他手段使抗体无岩藻糖基化。在一些实施方案中，本文中的抗体可包含无岩藻糖基化人igg1恒定区。
[1647]
还提供了具有二等分寡糖的抗体，例如其中附接于抗体的fc区的双触角寡糖由glcnac二等分。此类抗体可具有降低的岩藻糖基化和/或改善的adcc功能。此类抗体的实例例如在wo 2003/011878(jean-mairet等人)；美国专利第6,602,684号(umana等人)；以及us 2005/0123546(umana等人)中描述。还提供了在附接于fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体。此类抗体可具有改善的cdc功能。此类抗体例如在wo 1997/30087(patel等人)；wo 1998/58964(raju，s.)；以及wo 1999/22764(raju，s.)中描述。
[1648]
还提供了具有氨基末端前导物延伸部分的抗体。举例来说，氨基末端前导序列的一个或多个氨基酸残基存在于抗体的任何一个或多个重链或轻链的氨基末端。一示例性氨基末端前导物延伸部分包含存在于抗体的一个或两个轻链上的三个氨基酸残基vhs或由其组成。
[1649]
可例如在被施用具有变异fc区的多肽的转基因小鼠、人或非人灵长类动物中测定人fcrn高亲和力结合多肽的体内或血清半衰期。也参见例如petkova等人international immunology 18(12)：1759-1769(2006)。
[1650]
在本发明的一些实施方案中，相比于包含岩藻糖的亲本抗体，无岩藻糖基化抗体在人效应细胞存在下更有效地介导adcc，通常，可使用如本文公开的体外adcc测定来测定adcc活性，但考虑用于例如在动物模型中等测定adcc活性的其他测定或方法。
[1651]
在某些实施方案中，通过用不同氨基酸残基替换至少一个氨基酸残基来改变fc区以改变抗体的一种或多种效应子功能。举例来说，可用不同氨基酸残基替换一个或多个选自氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320、322、330和/或331的氨基酸，以致抗体对效应配体具有改变的亲和力，但保留亲本抗体的抗原结合能力。对其的亲和力被改变的效应配体可为例如fc受体或补体的c1组分。这个方法进一步详细描述于winter等人的美国专利第5,624,821和5,648,260号中。
[1652]
在一些实例中，可用不同氨基酸残基替换一个或多个选自氨基酸残基329、331和322的氨基酸，以致抗体具有改变的c1q结合和/或降低或消除的补体依赖性细胞毒性(cdc)。这个方法进一步详细描述于idusogie等人的美国专利第6,194,551号中。
[1653]
在一些实例中，改变氨基酸位置231和239内的一个或多个氨基酸残基以由此改变抗体结合补体的能力。这个方法进一步描述于bodmer等人的pct公布wo 94/29351中。在一些实例中，可通过修饰一个或多个在以下位置处的氨基酸来修饰fc区以降低抗体依赖性细胞性细胞毒性(adcc)，并且/或者降低对fcγ受体的亲和力：234、235、236、238、239、240、241、243、244、245、247、248、249、252、254、255、256、258、262、263、264、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、299、301、303、305、307、309、312、313、315、320、322、324、325、326、327、329、330、331、332、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、433、434、435、436、437、438或439。示例性取代包括236a、239d、239e、268d、267e、268e、268f、324t、332d和332e。示例性变体包括239d/332e、236a/332e、236a/239d/332e、268f/324t、267e/268f、267e/324t和267e/268f7324t。可对fc进行的其他fc修饰是用于降低或消除与fcγr和/或补体蛋白质的结合，由此降低或消除fc介导的效应子功能诸如adcc、adcp和cdc的那些。示例性修饰包括但不限于在位置234、235、236、237、267、269、325、328、330和/或331(例如330和331)处的取代、插入和缺失，其中编号根据eu索引。示例性取代包括但不限于234a、235e、236r、237a、267r、269r、325l、328r、330s和331s(例如330s和331s)，其中编号根据eu索引。fc变体可包含236r/328r。用于降低fcγr和补体相互作用的其他修饰包括取代297a、234a、235a、237a、318a、228p、236e、268q、309l、330s、331 s、220s、226s、229s、238s、233p和234v，以及通过突变或酶促手段或通过在不使蛋白质糖基化的生物体诸如细菌中进行产生来达成的对在位置297处的糖基化的移除。这些和其他修饰综述于strohl，2009，current opinion in biotechnology 20：685-691中。举例来说，人igg1.3fc恒定区含有l234a、l235e和g237a取代。igg1fa.p238k(或igg1.p238k)含有p238k取代。igg1.1f包含l234a、l235e、g237a、a330s和p331s取代。
[1654]
还可使用增强对抑制性受体fcγriib的亲和力的fc变体。此类变体可提供具有与包括例如b细胞和单核细胞的fcγriib细胞相关的免疫调节活性的fc融合蛋白。在一个实施方案中，fc变体提供相对于一种或多种活化性受体，选择性增强的对fcγriib的亲和力。用于改变与fcγriib的结合的修饰包括一个或多个在根据eu索引的选自由234、235、236、237、239、266、267、268、325、326、327、328、330、331和332组成的组的位置处的修饰。用于增强fcγrllb亲和力的示例性取代包括但不限于234a、234d、234e、234f、234w、235d、235e、235f、235r、235y、236d、236n、237a、237d、237n、239d、239e、266m、267d、267e、268d、268e、327d、327e、328f、328w、328y、330s、331s和332e。示例性取代包括235y、236d、239d、266m、267e、268d、268e、328f、328w和328y。用于增强与fcγriib的结合的其他fc变体包括235y/267e、236d/267e、239d/268d、239d/267e、267e/268d、267e/268e和267e/328f。
[1655]
用于增强fcγr和补体相互作用的其他修饰包括但不限于取代298a、333a、334a、326a、2471、339d、339q、280h、290s、298d、298v、243l、292p、300l、396l、3051和396l.这些和其他修饰综述于strohl，2009，current opinion in biotechnology 20：685-691中。增加与fcγ受体的结合的fc修饰包括在fc区的氨基酸位置238、239、248、249、252、254、255、
256、258、265、267、268、269、270、272、279、280、283、285、298、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、312、315、324、327、329、330、335、337、338、340、360、373、376、379、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439中的任何一者或多者处的氨基酸修饰，其中fc区中残基的编号是如专利公布第wo00/42072号中的eu索引的编号。
[1656]
任选地，fc区可在为本领域技术人员所知的额外和/或替代性位置处包含非天然存在的氨基酸残基(参见例如美国专利第5,624,821；6,277,375；6,737,056；6,194,551；7,317,091；8,101,720号；pcx专利公布wo 00/42072；wo 01/58957；wo 02/06919；wo 04/016750；wo 04/029207；wo 04/035752；wo 04/074455；wo 04/099249；wo 04/063351；wo 05/070963；wo 05/040217，wo 05/092925和wo 06/0201 14)。
[1657]
可通过本领域中已知的多种体外测定方法(基于生物化学或免疫测定)测定fc区对它的配体的亲和力和结合性质，所述多种体外测定方法包括但不限于平衡方法(例如酶联免疫吸附测定(elisa)或放射免疫测定(ria))或动力学(例如biacore分析)以及其他方法诸如间接结合测定、竞争性抑制测定、荧光共振能量转移(fret)、凝胶电泳和色谱法(例如凝胶过滤)。这些和其他方法可利用在所考查的组分中的一者或多者上的标记，并且/或者采用多种检测方法，包括但不限于显色、荧光、发光或同位素标记。对结合亲和力和动力学的详细描述可见于聚焦于抗体-免疫原相互作用的paul，w.e.编，fundamental immunology，第4版，lippincott-raven，philadelphia(1999)中。
[1658]
在某些实施方案中，抗体被修饰以增加它的生物半衰期。各种方法是可能的。举例来说，这可通过增加fc区对fcrn的结合亲和力进行，举例来说，可使以下残基中的一者或多者突变：252、254、256、433、435、436，如美国专利第6,277,375号中所述。具体示例性取代包括以下中的一者或多者：t252l、t254s和/或t256f。或者，为增加生物半衰期，可在ch1或cl区内改变抗体以含有取自igg的fc区的ch2结构域的两个环的补救受体结合表位，如presta等人的美国专利第5,869,046和6,121,022号中所述。增加与fcrn的结合并且/或者改善药物代谢动力学性质的其他示例性变体包括在位置259、308、428和434处的取代，包括例如2591、308f、428l、428m、434s、43411.434f、434y和434x1。增加fc与fcrn的结合的其他变体包括：250e、250q、428l、428f、250q/428l(hinton等人2004，j.biol.chem.279(8)：6213-6216，hinton等人2006 journal of immunology 176：346-356)、256a、272a、286a、305a、307a、307q、31 1a、312a、376a、378q、380a、382a、434a(shields等人，journal of biological chemistry，2001，276(9)：6591-6604)、252f、252t、252y、252w、254t、256s、256r、256q、256e、256d、256t、309p、31 1 s、433r、433s、4331、433p、433q、434h、434f、434y、252y/254t/256e、433k/434f/436h、308t/309p/311s(dall acqua等人journal of immunology，2002，169：5171-5180，dall
′
acqua等人，2006，journal of biological chemistry 281：23514-23524)。用于调节fcrn结合的其他修饰描述于yeung等人，2010，j immunol，182：7663-7671中。
[1659]
在某些实施方案中，可使用具有特定生物特征的杂合igg同种型。举例来说，可通过用来自igg3的在两种同种型存在差异所处的位置处的氨基酸取代igg1 ch2和/或ch3区中的位置来构建igg1/igg3杂合变体。因此，可构建包含一个或多个取代例如274q、276k、300f、339t、356e、358m、384s、392n、397m、4221、435r和436f的杂合变异igg抗体。在本文所述的一些实施方案中，可通过用来自igg1的在两种同种型存在差异所处的位置处的氨基酸
取代igg2 ch2和/或ch3区中的位置来构建igg1/igg2杂合变体。因此，可构建包含一个或多个取代例如以下氨基酸取代中的一者或多者的杂合变异igg抗体：233e、234l、235l、-236g(是指在位置236处插入甘氨酸)和327a。
[1660]
此外，已定位人igg1上对fcγri、fcγrii、fcγriii和fcrn的结合位点，并且已描述具有改善的结合的变体(参见shields，r.l.等人(2001)j.biol.chem.276：6591-6604)。显示在位置256、290、298、333、334和339处的特定突变会改善与fcγriii的结合。另外，显示以下组合突变体会改善fcγriii结合：t256a/s298a、s298a/e333a、s298a/k224a和s298a/e333a/k334a，其已被证明展现增强的fcγriiia结合和adcc活性(shields等人，2001)。已鉴定具有强烈增强的与fcγriiia的结合的其他igg1变体，包括具有s239d/i332e和s239d/i332e/a330l突变的变体，其显示对fcγriiia的亲和力的最大增加、fcγriib结合的降低和在食蟹猴中的强力细胞毒性活性(lazar等人，2006)。将三重突变引入至抗体诸如阿仑珠单抗(alemtuzumab)(cd52特异性的)、曲妥珠单抗(trastuzumab)(her2/neu特异性的)、利妥昔单抗(rituximab)(cd20特异性的)和西妥昔单抗(cetuximab)(egfr特异性的)中转换为极大增强的体外adcc活性，并且s239d/i332e变体显示增强的使猴中b细胞消减的能力(lazar等人，2006)。此外，已鉴定含有l235v、f243l、r292p、y300l和p396l突变的igg1突变体，其在b细胞恶性肿瘤和乳腺癌的模型中在表达人fcγriiia的转基因小鼠中展现增强的与fcγriiia的结合和相伴增强的adcc活性(stavenhagen等人，2007；nordstrom等人，2011)。可使用的其他fc突变体包括：s298a/e333a/l334a、s239d/i332e、s239d/i332e/a330l、l235v/f243l/r292p/y300l/p396l和m428l/n434s。
[1661]
在某些实施方案中，选择具有降低的与fcγr的结合的fc。具有降低的fcγr结合的一示例性fc例如igg1 fc包含以下三个氨基酸取代：l234a、l235e和g237a。
[1662]
在某些实施方案中，选择具有降低的补体结合的fc。具有降低的补体结合的一示例性fc例如igg1 fc具有以下两个氨基酸取代：a330s和p331s。
[1663]
在某些实施方案中，选择基本上不具有效应子功能的fc，即它具有降低的与fcγr的结合和降低的补体结合。无效应子的一示例性fc例如igg1 fc包含以下五个突变：l234a、l235e、g237a、a330s和p331s。
[1664]
当使用igg4恒定结构域时，它可包括模拟igg1中的铰链序列并且由此使igg4分子稳定的取代s228p。
[1665]
还可使用wo 2017/087678或wo2016081746中所述的fc修饰。
[1666]
在某些实施方案中，抗体的糖基化是经修饰的。举例来说，可制备无糖基化抗体(即抗体缺乏糖基化)。糖基化可被改变以例如增加抗体对抗原的亲和力。此类碳水化合物修饰可通过例如改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点实现。举例来说，可进行一个或多个导致消除一个或多个可变区框架糖基化位点的氨基酸取代以由此消除在所述位点处的糖基化。此无糖基化可增加抗体对抗原的亲和力。此种方法进一步详细描述于co等人的美国专利第5,714,350和6,350,861号中。
[1667]
可通过使n297残基突变成另一残基例如n297a以及/或者通过使相邻氨基酸例如298突变以由此降低在n297上的糖基化来防止恒定区的在n297上的糖基化。
[1668]
另外或替代地，可制备具有改变的糖基化类型的抗体，诸如具有降低数量的岩藻糖基残基的低岩藻糖基化抗体或具有增加的二等分glcnac结构的抗体。已证明此类改变的
糖基化样式会增加抗体的adcc能力。此类碳水化合物修饰可通过例如在具有改变的糖基化机构的宿主细胞中表达抗体实现。具有改变的糖基化机构的细胞已在本领域中描述，并且可用作在其中表达本文所述的重组抗体的宿主细胞以由此产生具有改变的糖基化的抗体。举例来说，hanai等人的ep 1,176,195描述一种具有编码岩藻糖基转移酶的在功能上被破坏的fut8基因的细胞系，以致在此种细胞系中表达的抗体展现低岩藻糖基化。presta的pct公布wo 03/035835描述一种变异cho细胞系led 3细胞，其具有降低的使岩藻糖附接于asn(297)连接的碳水化合物的能力，从而还导致在所述宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖基化(也参见shields，r.l.等人(2002)j.biol.chem.277：26733-26740)。umana等人的pct公布wo 99/54342描述被工程改造以表达糖蛋白修饰性糖基转移酶{例如β(1，4)-n-乙酰氨基葡萄糖转移酶iii(gntiii))的细胞系，以致在经工程改造细胞系中表达的抗体展现增加的二等分glcnac结构，此导致抗体的adcc活性增加(也参见umana等人(1999)nat.biotech.17：176-180)。
[1669]
本文所述的抗体的另一修饰是聚乙二醇化。抗体可被聚乙二醇化以例如增加所述抗体的生物(例如血清)半衰期。为使抗体聚乙二醇化，通常使所述抗体或其片段与聚乙二醇(peg)诸如peg的反应性酯或醛衍生物在其中一个或多个peg基团变得附接于所述抗体或抗体片段的条件下反应。在一些实施方案中，通过与反应性peg分子(或类似反应性水溶性聚合物)的酰化反应或烷基化反应进行聚乙二醇化。如本文所用，术语“聚乙二醇”意图涵盖已用于衍生其他蛋白质的任何形式的peg，诸如单(c1-c10)烷氧基聚乙二醇或芳基氧基聚乙二醇或聚乙二醇-顺丁烯二酰亚胺。在某些实施方案中，待聚乙二醇化的抗体是无糖基化抗体。用于使蛋白质聚乙二醇化的方法在本领域中是已知的，并且可应用于本文所述的抗体。参见例如nishimura等人的ep 0 154 316和ishikawa等人的ep 0 401 384。
[1670]
在各种实施方案中，本文所述的结合至vista的抗体被修饰以选择性阻断抗原结合将是有害的所处的组织和环境中的抗原结合，但允许抗原结合将是有益的情况下的抗原结合(“可活化抗体”)。在一个实施方案中，产生特异性结合至抗体的抗原结合表面，并且干扰抗原结合的阻断肽“掩蔽物”，所述掩蔽物通过肽酶可裂解接头连接于抗体的结合臂中的每一者。参见例如cytomx的美国专利第8,518,404号。此类构建体可用于治疗其中相较于非肿瘤组织，肿瘤微环境中的蛋白酶水平极大增加的癌症。在肿瘤微环境中选择性裂解可裂解接头允许掩蔽/阻断肽的解离，从而使得能够达成在肿瘤中而非在其中抗原结合可能导致非所要的副作用的外周组织中的抗原结合选择性。连接于抗体的阻断肽的实例提供在wo 2018/08555中。
[1671]
或者，在一相关实施方案中，开发了一种包含两个抗原结合结构域的二价结合化合物(“掩蔽配体”)，其结合至(二价)抗体的两个抗原结合表面，并且干扰抗原结合，其中两个结合结构域掩蔽物通过例如可由肽酶裂解的可裂解接头连接于彼此(而非抗体)。参见例如tegopharm corp的国际专利申请公布第wo 2010/077643号。掩蔽配体可包含或源于抗体意图结合的抗原，或可独立地产生。此类掩蔽配体可用于治疗其中相较于非肿瘤组织，肿瘤微环境中的蛋白酶水平极大增加的癌症。在肿瘤微环境中选择性裂解可裂解接头允许两个结合结构域从彼此解离，从而降低对抗体的抗原结合表面的亲合力。所引起的掩蔽配体从抗体的解离使得能够达成在肿瘤中而非在其中抗原结合可能导致非所要的副作用的外周组织中的抗原结合选择性。
[1672]
核酸和宿主细胞
[1673]
还提供了编码抗体或其重链或轻链或其一部分的核酸。示例性核酸提供在序列表中。本文涵盖与序列表中的核酸至少80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％的任何核酸。还涵盖包含编码本文提供的抗体的核酸的组合物，以及包含这些的细胞和用于制备抗体的方法，所述方法包括培养用编码抗vista抗体的核酸转化的细胞，以及从培养基或所述细胞分离所述抗体。
[1674]
使用vista-ecd结合ab和相关药物组合物的治疗方法
[1675]
在某些实施方案中，在低ph下结合至vista，并且例如在中性或生理ph下缺乏显著结合的抗vista抗体可为vista拮抗剂抗体，即抑制vista的作用，以致免疫应答得到刺激的抗体。此类抗体可用于治疗其中刺激免疫系统或免疫应答是需要的疾病，诸如增生性疾病(良性或恶性)、癌症和感染性疾病(例如病毒性感染)。
[1676]
在某些实施方案中，在低ph下结合至vista，并且例如在中性或生理ph下缺乏显著结合的抗vista抗体可为vista激动剂抗体，即增加vista的作用，以致免疫应答得到抑制的抗体。此类抗体可用于治疗其中抑制免疫系统或免疫应答是需要的疾病，诸如自身免疫疾病和炎症性疾患，诸如类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、乳糜泻、舍格伦氏综合征(sjoigren’s syndrome)、格雷夫斯病(grave’s disease)、炎症性肠病、牛皮癣、强直性脊柱炎、移植物抗宿主疾病、过敏和哮喘。
[1677]
本文所述的抗体可用于例如治疗癌症。在一些实施方案中，提供了用于治疗癌症的方法，所述方法包括将有效量的本文所述的抗体施用至患者。在一些实施方案中，ab可触发或增强患者中的免疫应答，诸如抗原特异性免疫应答。在一些实施方案中，ab可刺激t细胞活性。在一些实施方案中，ab可抑制患者中至少一种肿瘤的生长。
[1678]
本文提供了用于治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗vista抗体，以致所述受试者得到治疗。抗vista抗体可单独使用。或者，抗vista抗体可与如以下进一步所述的另一剂联合使用。
[1679]
可用如本文所述的在酸性条件下特异性结合至vista-ecd蛋白的ab治疗的癌症的实例包括但不限于上皮癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病。可用本文所述的ab治疗的癌症还包括通常对免疫疗法起响应的癌症以及通常对免疫疗法不起响应的那些。可治疗的癌症还包括vista阳性癌症，例如具有vista阳性肿瘤浸润性细胞例如淋巴细胞、髓样或单核细胞性细胞的癌症。癌症可为具有实体肿瘤或血液恶性肿瘤(液体肿瘤)的癌症。
[1680]
用于治疗的癌症的非限制性实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状非小细胞肺癌(nsclc)、非鳞状nsclc、胶质瘤、胃肠癌、肾癌(例如透明细胞癌)、卵巢癌、肝癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、肾脏癌(例如肾细胞癌(rcc))、前列腺癌(例如激素难治性前列腺腺癌)、甲状腺癌、神经母细胞瘤、胰腺癌、胶质母细胞瘤(多形性胶质母细胞瘤)、子宫颈癌、胃癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌和头颈部癌(或上皮癌)、胃癌、生殖细胞肿瘤、小儿肉瘤、鼻窦天然杀伤、黑素瘤(例如转移性恶性黑素瘤、诸如皮肤或眼内恶性黑素瘤)、骨癌、皮肤癌、子宫癌、肛区癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童期实体肿瘤、输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(cns)赘瘤、原发性cns淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱轴肿瘤、脑癌、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏肉瘤(kaposi
′
s sarcoma)、表皮样
癌、鳞状细胞癌、t细胞淋巴瘤、包括由石棉诱导的癌症的环境诱导的癌症、病毒相关癌症或病毒起源的癌症(例如人乳头状瘤病毒(hpv相关或起源肿瘤))和源于两种主要血细胞谱系，即髓样细胞系(其产生粒细胞、红细胞、凝血细胞、巨噬细胞和肥大细胞)或淋巴样细胞系(其产生b细胞、t细胞、nk细胞和浆细胞)中的任一者的血液恶性肿瘤，诸如所有类型的白血病、淋巴瘤和骨髓瘤，例如急性、慢性、淋巴细胞性和/或髓源性白血病，诸如急性白血病(all)、急性髓源性白血病(aml)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)和慢性髓源性白血病(cml)、未分化型aml(mo)、髓母细胞性白血病(ml)、髓母细胞性白血病(m2；具有细胞成熟)、前髓细胞性白血病(m3或m3变体[m3v])、髓单核细胞性白血病(m4或伴有嗜酸性粒细胞增多症的m4变体[m4e])、单核细胞性白血病(m5)、红白血病(m6)、巨核母细胞性白血病(m7)、孤立性粒细胞性肉瘤和绿色瘤；淋巴瘤，诸如霍奇金氏淋巴瘤(hodgkin
′
s lymphoma，hl)、非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)、b细胞血液恶性肿瘤例如b细胞淋巴瘤、t细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞样淋巴瘤、单核细胞样b细胞淋巴瘤、粘膜相关的淋巴组织(malt)淋巴瘤、间变性(例如ki 1 )大细胞淋巴瘤、成人t细胞淋巴瘤/白血病、套细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性t细胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤、肠t细胞淋巴瘤、原发性纵隔b细胞淋巴瘤、前体t淋巴母细胞性淋巴瘤和t淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病(t-lbly/t-all)、外周t细胞淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤、移植后淋巴增生性病症、真性组织细胞性淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性渗出淋巴瘤、b细胞淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤(lbl)、淋巴谱系的造血系统肿瘤、急性淋巴母细胞性白血病、弥漫性大b细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(burkitt
′
s lymphoma)、滤泡性淋巴瘤、弥漫性组织细胞性淋巴瘤(dhl)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞性淋巴瘤、皮肤t细胞淋巴瘤(ctlc)(也被称为蕈样真菌病或西泽里综合征(sezary syndrome))和伴有瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(waldenstrom
′
s macroglobulinemia)的淋巴浆细胞样淋巴瘤(lpl)；骨髓瘤，诸如igg骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌型骨髓瘤、冒烟型骨髓瘤(也被称为无痛性骨髓瘤)、孤立性浆细胞瘤和多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、毛细胞淋巴瘤；骨髓谱系的造血系统肿瘤，间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；精原细胞瘤、畸胎癌、中枢和周围神经肿瘤，包括星形细胞瘤、神经鞘瘤；间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；以及其他肿瘤，包括黑素瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌和畸胎癌、淋巴谱系的造血系统肿瘤，例如t细胞和b细胞肿瘤，包括但不限于t细胞病症，诸如t前淋巴细胞性白血病(t-pll)，包括小细胞和脑形细胞类型；t细胞类型的大颗粒淋巴细胞白血病(lgl)；和t-nhl肝脾淋巴瘤；外周/胸腺后t细胞淋巴瘤(多形性和免疫母细胞性亚型)；血管中心性(鼻)t细胞淋巴瘤；头部或颈部癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌；急性髓样淋巴瘤，以及所述癌症的任何组合。本文所述的方法还可用于治疗转移性癌症、不可切除的难治性癌症(例如为例如采用阻断性ctla-4或pd-1抗体的先前免疫疗法所难治的癌症)和/或复发性癌症。
[1681]
在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，其中所述方法包括将如本文所述的在酸性条件下特异性结合至huvista的经分离抗体施用至患有癌症的受试者。在一些实施方案中，提供了本文所述的抗体用于治疗癌症的用途。
[1682]
在某些实施方案中，将本文所述的抗体施用至患有已展现对先前治疗的响应不充分或在先前治疗的情况下进展的癌症的患者，所述先前治疗例如是用免疫肿瘤学或免疫疗法药物进行的先前治疗。在一些实施方案中，癌症为先前治疗所难治或对先前治疗具有抗
15、il-21和ifnα的激动剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包括趋化因子诸如cxcr2、cxcr4、ccr2或ccr4的拮抗剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包括抗体。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂可包括疫苗，诸如靶向间皮素(mesothelin)的疫苗或减毒李斯特菌(listeria)癌症疫苗诸如crs-207。
[1688]
举例来说，本文所述的抗vista抗体可与以下剂中的一者或多者一起施用：
[1689]
抑制t细胞活化的蛋白质的拮抗剂(抑制剂或阻断剂)(例如免疫检查点抑制剂)，所述蛋白质诸如是ctla-4、pd-1、pd-l1、pd-l2和lag-3、半乳凝素9、ceacam-1、btla、cd69、半乳凝素-1、tigit、cd113、gpr56、b7-h3、b7-h4、2b4、cd48、garp、pd1h、lair1、tim-1、tim-3和tim-4；和/或(2)刺激t细胞活化的蛋白质的激动剂，所述蛋白质诸如是b7-1、b7-2、cd28、4-1bb(cd137)、4-1bbl、gitr、icos、icos-l、ox40、ox40l、cd70、cd27、cd40、dr3和cd28h。
[1690]
可与本文所述的抗vista抗体组合用于治疗癌症的示例性剂包括：(伊匹木单抗(ipilimumab))或曲美木单抗(tremelimumab)(针对ctla-4)、加利昔单抗(galiximab)(针对b7.1)、bms-936558(针对pd-1)、mk-3475(针对pd-1)、阿替利珠单抗(atezolizumab)阿维利尤单抗(avelumab)、度伐利尤单抗(durvalumab)、pdr001(novartis)、amp224(针对b7dc)、bms-936559(针对b7-h1)、mpdl3280a(针对b7-h1)、medi-570(针对icos)、amg557(针对b7h2)、mga271(针对b7h3)、imp321(针对lag-3)、bms-663513(针对cd137)、pf-05082566(针对cd137)、cdx-1127(针对cd27)、抗ox40抗体(providence health services)、humabox40l(针对ox40l)、阿塞西普(atacicept)(针对taci)、cp-870893(针对cd40)、鲁卡妥木单抗(lucatumumab)(针对cd40)、达西珠单抗(dacetuzumab)(针对cd40)、莫罗莫那-cd3(muromonab-cd3)(针对cd3)；抗gitr抗体mk4166、trx518、medi1873、inbrx-110、lk2-145、gwn-323、gitrl-fc，或它们的任何组合。
[1691]
可与抗vista抗体组合用于治疗癌症的其他分子包括nk细胞上抑制性受体的拮抗剂或nk细胞上活化性受体的激动剂，例如kir的拮抗剂(例如利瑞利尤单抗(lirilumab))。
[1692]
t细胞活化还可由可溶性细胞因子调控。在一些实施方案中，抗vista抗体可与意图抑制t细胞活化的细胞因子的拮抗剂或刺激t细胞活化的细胞因子的激动剂组合施用。举例来说，抗vista抗体可与(i)igsf家族或b7家族或tnf家族的抑制t细胞活化的蛋白质的拮抗剂(或抑制剂或阻断剂)或抑制t细胞活化的细胞因子(例如il-6、il-10、tgf-β、vegf；“免疫抑制性细胞因子”)的拮抗剂和/或(ii)igsf家族、b7家族或tnf家族的刺激性受体或刺激t细胞活化的细胞因子的激动剂组合使用。
[1693]
用于组合疗法的其他剂包括抑制或消减巨噬细胞或单核细胞的剂，包括但不限于csf-1r拮抗剂诸如csf-1r拮抗剂抗体，包括rg7155(wo11/70024、wo11/107553、wo11/131407、w013/87699、w013/119716、wo13/132044)或fpa-008(wo11/140249；w013169264；wo14/036357)。
[1694]
抗vista抗体还可与抑制tgf-β信号传导的剂一起施用。
[1695]
可与抗vista抗体组合的额外剂包括增强肿瘤抗原呈递的剂，例如树突细胞疫苗、gm-csf分泌性细胞疫苗、cpg寡核苷酸和咪喹莫德(imiquimod)，或增强肿瘤细胞的免疫原性的疗法(蒽环霉素(anthracycline))。
2011/161699、wo 2012/145493、美国专利第7,635,757和8,217,149号以及美国专利公布第2009/0317368号中所述的那些。还可使用wo2013/173223中公开的任何抗pd-1抗体。与这些抗体中的一者竞争结合，并且/或者与这些抗体中的一者结合至pd-1上的相同表位的抗pd-1抗体也可用于组合治疗中。
[1706]
在一些实施方案中，可用于组合疗法的抗pd-l1抗体是bms-936559(在wo 2007/005874和美国专利第7,943,743号中被称为12a4)，或包含pct公布wo 07/005874和美国专利第7，943，743号中所述的3g10、12a4、10a5、5f8、10h10、1b12、7h1、11e6、12b7和13g4的cdr或可变区的抗体。在某些实施方案中，抗pd-l1抗体是medi4736(也被称为度伐利尤单抗和抗b7-h1抗体)、mpdl3280a(也被称为阿替利珠单抗和rg7446)、msb0010718c(也被称为阿维利尤单抗；wo2013/79174)或rhigm12b7。还可使用wo2013/173223、wo2011/066389、wo2012/145493、美国专利第7,635,757和8,217,149号以及美国公布第2009/145493号中公开的任何抗pd-l1抗体。与这些抗体中的任一者竞争并且/或者结合至与这些抗体中的任一者的表位相同的表位的抗pd-l1抗体也可用于组合治疗中。
[1707]
在某些实施方案中，本公开的抗vista抗体可与ctla-4拮抗剂例如抗ctla-4抗体一起使用。在一个实施方案中，抗ctla-4抗体是选自以下的组的抗体：(伊匹木单抗或抗体10d1，描述于pct公布wo 01/14424中)、曲美木单抗(先前是替西木单抗(ticilimumab)，cp-675,206)、以下出版物中的任一者中所述的单克隆或抗ctla-4抗体：wo 98/42752；wo 00/37504；美国专利第6,207,156号；hurwitz等人(1998)pro.natl.acad.sci.usa 95(17)：10067-10071；camacho等人(2004)j.clin.oncology 22(145)：摘要号2505(抗体cp-675206)；以及mokyr等人(1998)cancer res.58：5301-5304。还可使用wo2013/173223中公开的任何抗ctla-4抗体。
[1708]
在一些实施方案中，本公开的抗vista抗体与lag3拮抗剂组合使用。抗lag3抗体的实例包括包含美国专利公布第us201i/0150892号、wo10/19570和wo2014/008218中所述的抗体25f7、26h10、25e3、8b7、11f2或17e5的cdr或可变区的抗体。在一个实施方案中，抗lag-3抗体是bms-986016。可使用的其他本领域公知的抗lag-3抗体包括us 2011/007023、wo08/132601和wo09/44273中所述的imp731和imp-321。与这些抗体中的任一者竞争并且/或者结合至与这些抗体中的任一者的表位相同的表位的抗lag-3抗体也可用于组合治疗中。
[1709]
在一些实施方案中，本公开的抗vista抗体可与cd137(4-1bb)激动剂诸如激动性cd137抗体组合施用。适合cd137抗体包括例如乌瑞利尤单抗(urelumab)或pf-05082566(w012/32433)。
[1710]
在一些实施方案中，抗vista抗体可与ox40激动剂诸如激动性ox40抗体组合施用。适合ox40抗体包括例如medi-6383、medi-6469或moxr0916(rg7888；wo06/029879)。
[1711]
在一个实施方案中，抗vista抗体与cd40激动剂诸如激动性cd40抗体组合施用。在某些实施方案中，免疫肿瘤学剂是cd40拮抗剂，诸如拮抗性cd40抗体。适合cd40抗体包括例如鲁卡妥木单抗(hcd122)、达西珠单抗(sgn-40)、cp-870，893或chi lob 7/4。
[1712]
在一个实施方案中，抗vista抗体与cd27激动剂诸如激动性cd27抗体组合施用。适合cd27抗体包括例如伐立利尤单抗(varlilumab)(cdx-1127)。
[1713]
在某些实施方案中，抗vista抗体连同抗gitr抗体一起施用，所述抗gitr抗体例如是具有如例如在wo2006/105021中所述的6c8的cdr序列的抗体，例如具有6c8的cdr的人源
化抗体；包含wo201i/028683中所述的抗gitr抗体的cdr的抗体；包含jp2008278814中所述的抗gitr抗体的cdr的抗体；包含wo2015/031667、wo2015/187835、wo2015/184099、wo2016/054638、wo2016/057841或wo2016/057846中所述的抗gitr抗体的cdr的抗体或本文所述或提及的其他抗gitr抗体。
[1714]
在一些实施方案中，抗vista抗体与mga271(针对b7h3)(wo11/109400)组合施用。
[1715]
在一些实施方案中，抗vista抗体与kir拮抗剂诸如利瑞利尤单抗组合施用。
[1716]
在一些实施方案中，抗vista抗体与ido拮抗剂组合施用。适合ido拮抗剂包括例如incb-024360(wo2006/122150、wo07/75598、wo08/36653、wo08/36642)、吲哚莫德(indoximod)、nlg-919(wo09/73620、wo09/1156652、wo11/56652、wo12/142237)或f001287。
[1717]
在一些实施方案中，抗vista抗体与toll样受体激动剂，例如tlr2/4激动剂(例如卡介苗(bacillus calmette-guerin))；tlr7激动剂(例如喜通诺(hiltonol)或咪喹莫德)；tlr7/8激动剂(例如瑞喹莫德(resiquimod))；或tlr9激动剂(例如cpg7909)组合施用。
[1718]
在一个实施方案中，抗vista抗体与tgf-β抑制剂例如gc1008、ly2157299、tew7197或imc-tr1组合施用。
[1719]
在某些实施方案中，抗vista剂例如抗体与抗psgl-1抗体一起施用。
[1720]
额外组合疗法
[1721]
本文中的ab还可在其他治疗模式之前，大体上与其他治疗模式同时，或在其他治疗模式之后提供，所述其他治疗模式例如是手术、化学疗法、放射疗法或施用生物制剂诸如另一治疗性抗体。在一些实施方案中，癌症在选自手术、化学疗法和放射疗法或它们的组合的疗法之后已复发或进展。举例来说，当存在可存在微转移的风险以及/或者为了降低复发风险时，如本文所述的抗vista抗体可作为辅助疗法施用。
[1722]
对于癌症的治疗，组合可与一种或多种额外抗癌剂诸如化学治疗剂、生长抑制剂、抗癌疫苗诸如基因疗法疫苗、抗血管生成剂和/或抗赘生组合物联合施用。可与本发明的抗体组合使用的化学治疗剂、生长抑制剂、抗癌疫苗、抗血管生成剂和抗赘生组合物的非限制性实例在本文中提供在“定义”下。
[1723]
在一些实施方案中，消炎药物可与组合一起施用，诸如类固醇或非类固醇消炎药物(nsaid)。在其中可合乎需要的是与用本文所述的抗vista抗体进行的治疗联合或在所述治疗之前致使异常增殖细胞静息的情况下，还可将激素和类固醇(包括合成类似物)，诸如17a-乙炔雌二醇(17a-ethinylestradiol)、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、睾酮(testosterone)、泼尼松(prednisone)、氟羟甲睾酮(fluoxymesterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、睾内酯(testolactone)、乙酸甲地孕酮(megestrolacetate)、甲基泼尼松龙(methylprednisolone)、甲基睾酮(methyl-testosterone)、泼尼松龙(prednisolone)、曲安西龙(triamcinolone)、氯烯雌酚(chlorotrianisene)、羟孕酮(hydroxyprogesterone)、胺鲁米特(aminoglutethimide)、雌氮芥(estramustine)、乙酸甲羟孕酮(medroxyprogesteroneacetate)、亮脯利特(leuprolide)、氟他胺(flutamide)、托瑞米芬(toremifene)、施用至患者。当采用本文所述的方法或组合物时，还可根据需要施用在临床环境中用于调节肿瘤生长或转移的其他剂，诸如止吐药。
[1724]
本文所述的抗体还可与免疫原性剂诸如癌性细胞、纯化肿瘤抗原(包括重组蛋白、
肽和碳水化合物分子)、细胞和用编码免疫刺激性细胞因子的基因转染的细胞(he等人(2004)j.immunol
′
.173：4919-28)组合。可使用的肿瘤疫苗的非限制性实例包括黑素瘤抗原的肽，诸如gp100、mage抗原、trp-2、mart1和/或酪氨酸酶的肽，或被转染以表达细胞因子gm-csf的肿瘤细胞(以下进一步讨论)。
[1725]
在人中，已显示一些肿瘤具有免疫原性，诸如黑素瘤。通过经由vista抑制降低t细胞活化的阈值，可活化宿主中的肿瘤应答，从而允许治疗非免疫原性肿瘤或具有有限免疫原性的那些肿瘤。
[1726]
本文所述的抗vista抗体还可与疫苗接种方案组合。已设计用于针对肿瘤进行疫苗接种的许多实验策略(参见rosenberg，s.，2000，development of cancer vaccines，asco educational book spring：60-62；logothetis，c，2000，asco educational book spring：300-302；khayat，d.2000，asco educational book spring：414-428；foon，k.2000，asco educational book spring：730-738；也参见restifo，n.和sznol，m.，cancer vaccines，第61章，第3023-3043页，devita等人(编)，1997，cancer：principles and practice of oncology，第五版)。在这些策略中的一者中，使用自体或同种异体肿瘤细胞制备疫苗。已显示这些细胞疫苗在肿瘤细胞被转导以表达gm-csf时最有效。已显示gm-csf是用于肿瘤疫苗接种的强力抗原呈递活化剂(dranoff等人(1993)proc.natl.acad.sci u.s.a.90：3539-43)。
[1727]
对各种肿瘤中基因表达和大规模基因表达样式的研究已导致确定所谓的肿瘤特异性抗原(rosenberg，sa(1999)immunity 10：281-7)。在许多情况下，这些肿瘤特异性抗原是在肿瘤中以及在肿瘤从其产生的细胞中表达的分化抗原，例如黑素细胞抗原gp100、mage抗原和trp-2。更重要的是，可显示这些抗原中的许多是见于宿主中的肿瘤特异性t细胞的靶标。vista抑制可与在肿瘤中表达的一批重组蛋白和/或肽联合使用以产生对这些蛋白的免疫应答。这些蛋白通常被免疫系统视为自身抗原，并且因此容忍它们。肿瘤抗原可包括蛋白质端粒酶，其为染色体的端粒的合成所需，并且在超过85％的人类癌症中以及仅在有限数目的体细胞组织中表达(kim等人(1994)science 266：2011-2013)。肿瘤抗原还可为由于改变蛋白质序列或创建两个无关序列之间的融合蛋白(即费城染色体中的bcr-abl)的体细胞突变或来自b细胞肿瘤的独特型而在癌细胞中表达的“新抗原”。
[1728]
其他肿瘤疫苗可包括来自牵涉于人类癌症中的病毒诸如人乳头状瘤病毒(hpv)、肝炎病毒(hbv和hcv)和卡波西氏疱疹肉瘤病毒(kaposi
′
s herpes sarcoma virus，khsv)的蛋白质。可与vista抑制联合使用的另一形式的肿瘤特异性抗原是从肿瘤组织自身分离的纯化热激蛋白(hsp)。这些热激蛋白含有来自肿瘤细胞的蛋白质的片段，并且这些hsp高度高效递送至抗原呈递细胞以引发肿瘤免疫性(suot和srivastava(1995)science 269：1585-1588；tamura等人(1997)science 278：117-120)。
[1729]
溶瘤性病毒也可与vista抗体组合使用。
[1730]
树突细胞(dc)是可用于引发抗原特异性应答的强力抗原呈递细胞。dc可离体产生，并且装载以各种蛋白质和肽抗原以及肿瘤细胞提取物(nestle等人(1998)nature medicine 4：328-332)。dc还可通过遗传手段转导以也表达这些肿瘤抗原。dc还已直接融合于肿瘤细胞以达成免疫目的(kugler等人(2000)nature medicine 6：332-336)。作为一种疫苗接种方法，dc免疫可有效地与vista抑制组合以活化更强力的抗肿瘤应答。
[1731]
感染性疾病治疗
[1732]
本文所述的方法还可用于治疗已暴露于特定毒素或病原体的患者。因此，本公开还考虑治疗受试者中的感染性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用如本文所述的抗体，例如拮抗剂vista抗体，以致所述受试者关于所述感染性疾病得到治疗。类似于如上所讨论抗体介导的vista抑制应用于肿瘤，它可单独或作为佐剂与疫苗组合用于刺激对病原体、毒素和自身抗原的免疫应答。本治疗方法针对其可能特别有用的病原体的实例包括当前不存在针对其的有效疫苗的病原体，或常规疫苗针对其达不到完全有效的病原体。这些包括但不限于hiv、肝炎(a、b和c)、流感、疱疹、贾第鞭毛虫(giardia)、疟疾、利什曼原虫(leishmania)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、绿脓假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)。vista抑制针对由在感染的过程期间呈现改变的抗原的作用物诸如hiv建立的感染可为有用的。
[1733]
可通过本文所述的方法治疗的导致感染的病原性病毒的一些实例包括hiv、肝炎(a、b或c)、疱疹病毒(例如vzv、hsv-1、hav-6、hsv-ii和cmv、艾伯斯坦巴尔病毒(epstein barr virus))、腺病毒、流感病毒、黄病毒、埃可病毒(echovirus)、鼻病毒、柯萨奇病毒(coxsackie virus)、冠状病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、痘苗病毒、htlv病毒、登革病毒(dengue virus)、乳头状瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、jc病毒和虫媒病毒性脑炎病毒。
[1734]
可通过本文所述的方法治疗的导致感染的病原性细菌的一些实例包括衣原体(chlamydia)、立克次氏体细菌(rickettsial bacteria)、分枝杆菌(mycobacteria)、葡萄球菌(staphylococci)、链球菌(streptococci)、肺炎球菌(pneumonococci)、腦膜炎球菌(meningococci)和淋球菌(gonococci)、克雷伯氏菌(klebsiella)、变形杆菌(proteus)、沙雷氏菌(serratia)、假单胞菌(pseudomonas)、军团菌(legionella)、白喉(diphtheria)、沙门氏菌(salmonella)、杆菌(bacilli)、霍乱(cholera)、破伤风(tetanus)、肉毒中毒(botulism)、炭疽(anthrax)、鼠疫(plague)、钩端螺旋体病(leptospirosis)和莱姆病细菌(lymes disease bacteria)。
[1735]
可通过本文所述的方法治疗的导致感染的病原性真菌的一些实例包括念珠菌(candida)(白色念珠菌(albicans)、克鲁斯念珠菌(krusei)、光滑念珠菌(glabrata)、热带念珠菌(tropicalis)等)、新型隐球酵母(cryptococcus neoformans)、曲霉(aspergillus)(烟曲霉(fumigatus)、黑曲霉(niger)等)、毛霉目属(genus mucorales)(毛霉属(mucor)、犁头霉属(absidia)、根霉属(rhizopus))、申克孢子丝菌(sporothrix schenkii)、皮炎芽生菌(blastomyces dermatitidis)、巴西副球孢子菌(paracoccidioides brasiliensis)、粗球孢子菌(coccidioides immitis)和荚膜组织胞浆菌(histoplasma capsulatum)。
[1736]
可通过本文所述的方法治疗的导致感染的病原性寄生物的一些实例包括溶组织内阿米巴(entamoeba histolytica)、结肠小袋纤毛虫(balantidium coli)、福勒尔耐格里原虫(naegleriafowleri)、棘阿米巴属种(acanthamoeba sp.)、蓝氏贾第鞭毛虫(giardia lambia)、隐孢子虫属种(cryptosporidium sp.)、卡氏肺囊虫(pneumocystis carinii)、间日疟原虫(plasmodium vivax)、果氏巴贝虫(babesia microti)、布氏锥虫(trypanosoma brucei)、克氏锥虫(trypanosoma cruzi)、杜氏利什曼虫(leishmania donovani)、刚地弓形虫(toxoplasma gondii)和巴西钩虫(nippostrongylus brasiliensis)。
[1737]
在所有以上方法中，vista抑制都可与其他形式的免疫疗法组合，所述其他形式的免疫疗法例如是本文所述的那些，诸如细胞因子治疗(例如干扰素、gm-csf、g-csf、il-2)，或可提供增强的肿瘤抗原呈递的双特异性抗体疗法(参见例如holliger(1993)proc.natl.acad.sci.usa 90：6444-6448；poljak(1994)structure 2：1121-1123)。
[1738]
施用途径和载体
[1739]
在各种实施方案中，可通过各种途径在体内施用抗体，所述各种途径包括但不限于口服、动脉内、胃肠外、鼻内、肌肉内、心内、室内、气管内、经颊、经直肠、腹膜内、真皮内、表面、经皮和鞘内，或以其他方式通过植入或吸入。主题组合物可被配制成呈固体、半固体、液体或气体形式的制剂；包括但不限于片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、软膏剂、溶液、栓剂、灌肠剂、注射剂、吸入剂和气雾剂。编码抗体的核酸分子可被包被至金微粒上，并且通过粒子轰击装置或“基因枪”进行真皮内递送，如文献(参见例如tang等人，nature 356：152-154(1992))中所述。可根据预定应用选择适当制剂和施用途径。
[1740]
在各种实施方案中，包含抗体的组合物与广泛多种药学上可接受的载体一起提供在制剂中(参见例如gennaro，remington：the science and practice of pharmacy with facts and comparisons：drugfacts plus，第20版(2003)；ansel等人，pharmaceutical dosage forms and drug delivery systems，第7版，lippencott williams and wilkins(2004)；kibbe等人，handbook of pharmaceutical excipients，第3版，pharmaceutical press(2000))。包括媒介物、佐剂和稀释剂的各种药学上可接受的载体是可用的。此外，各种药学上可接受的辅助物质诸如ph调整和缓冲剂、张力调整剂、稳定剂、湿润剂等也是可用的。非限制性示例性载体包括盐水、缓冲盐水、右旋糖、水、甘油、乙醇以及它们的组合。
[1741]
在各种实施方案中，可通过以下方式配制包含抗体的组合物以用于包括皮下施用的注射：将它们溶解、悬浮或乳化于水性或非水性溶剂诸如植物油或其他油、合成脂族酸甘油酯、高级脂肪酸的酯、或丙二醇中；并且如果需要，那么与常规添加剂诸如增溶剂、等张剂、助悬剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂一起配制。在各种实施方案中，可例如使用加压的可接受推进剂诸如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气等配制组合物以用于吸入。在各种实施方案中，组合物还可诸如与生物可降解或非生物可降解聚合物一起配制成持续释放微囊。一非限制性示例性生物可降解制剂包括聚乳酸-乙醇酸聚合物。一非限制性示例性非生物可降解制剂包括聚甘油脂肪酸酯。制备此类制剂的某些方法例如在ep 1 125 584 a1中描述。
[1742]
还提供了包括一个或多个各自含有一次或多次剂量的抗体或抗体的组合的容器的药物包装和药盒。在一些实施方案中，提供了单位剂量，其中所述单位剂量含有预定量的包含抗体或抗体的组合，伴有或不伴有一种或多种额外剂的组合物。在一些实施方案中，此种单位剂量提供于用于注射的单次使用预填充注射器中。在各种实施方案中，单位剂量中含有的组合物可包含盐水、蔗糖等；缓冲剂，诸如磷酸盐等；并且/或者在稳定和有效ph范围内配制。或者，在一些实施方案中，组合物可以可在添加适当液体例如无菌水后复原的冻干粉末形式提供。在一些实施方案中，组合物包含一种或多种抑制蛋白质聚集的物质，包括但不限于蔗糖和精氨酸。在一些实施方案中，本发明的组合物包含肝素和/或蛋白聚糖。
[1743]
以有效治疗或预防特定适应症的量施用药物组合物。治疗有效量通常取决于所治疗受试者的重量、他的或她的身体或健康状况、待治疗疾患的广泛性、或所治疗受试者的年龄。一般来说，可以在每剂约10μg/kg体重至约100mg/kg体重的范围内的量施用抗体。在一
些实施方案中，可以在每剂约50μg/kg体重至约5mg/kg体重的范围内的量施用抗体。在一些实施方案中，可以在每剂约100μg/kg体重至约10mg/kg体重的范围内的量施用抗体。在一些实施方案中，可以在每剂约100μg/kg体重至约20mg/kg体重的范围内的量施用抗体。在一些实施方案中，可以在每剂约0.5mg/kg体重至约20mg/kg体重的范围内的量施用抗体。
[1744]
抗体组合物可根据需要施用至受试者。可由本领域技术人员诸如主治医师基于以下考虑对施用频率作出决定：所治疗疾患、所治疗受试者的年龄、所治疗疾患的严重性、所治疗受试者的一般健康状况等。在一些实施方案中，将有效剂量的抗体施用至受试者一次或多次。在各种实施方案中，一个月一次、少于一个月一次诸如像每两个月或每三个月将有效剂量的抗体施用至受试者。在其他实施方案中，多于一个月一次诸如像每三周、每两周或每周施用有效剂量的抗体。在一些实施方案中，每1、2、3、4或5周一次施用有效剂量的抗体。在一些实施方案中，每周两次或三次施用有效剂量的抗体。将有效剂量的抗体施用至受试者至少一次。在一些实施方案中，可多次施用有效剂量的抗体，包括持续至少一个月、至少六个月或至少一年的时期。
[1745]
在某些实施方案中，抗vista抗体和本文讨论的第二剂的组合可以于药学上可接受的载体中的单一组合物形式并行施用，或以抗vista抗体和第二剂于药学上可接受的载体中的单独组合物形式并行施用。在一个实施方案中，可依序施用抗vista抗体和第二剂的组合。两种剂的施用可在例如相隔30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、3小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、3天、5天、7天或一周或多周的时间开始，或第二剂的施用可在已施用第一剂之后例如30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、3小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、3天、5天、7天或一周或多周开始。
[1746]
鉴定低ph结合hvista-ecd ab的方法
[1747]
本文还提供了用于鉴定在酸性(或低ph)条件下特异性结合至vista-ecd蛋白的ab的方法。在某些实施方案中，一种用于鉴定在ph 6.5或更小下特异性结合至vista-ecd蛋白的ab的方法包括使一种测试ab或多种测试ab与vista-ecd蛋白在ph 6.5或更小下接触，以及如果所述测试ab以10-7
m、10-8
m、10-9
m或更小的kd结合至vista蛋白的ecd，那么选择所述测试ab。在一些实施方案中，方法在ph 6.5下进行，而在其他实施方案中，它在ph 6.0下，或在ph 5.5下，或在ph 5.0下进行。在一些实施方案中，vista-ecd蛋白是hvista-ecd蛋白，或包含hvista igv结构域，或是包含seq id no：2的氨基酸20-95或seq id no：2的氨基酸20-70、35-95或35-70的多肽。在一些实施方案中，多肽还包含seq id no：2的氨基酸95-105。在一些实施方案中，多肽包含seq id no：2的氨基酸35-127或37-125。
[1748]
在一些实施方案中，方法还包括在中性、生理或碱性ph下，诸如在ph 7.0或ph 7.4下测试所述一种测试ab或多种测试ab的结合。在一些实施方案中，方法还包括如果抗体不仅在ph 6.5或更低下以10-7
m、10-8
m、10-9
m或更小的kd结合至vista-ecd蛋白，而且如果它还在ph 7.0或ph 7.4下特异性结合至多肽，那么选择所述抗体。在一些实施方案中，如果测试ab在酸性条件下例如在ph 6.5或更小下特异性结合至vista-ecd蛋白，还在中性和/或碱性ph下用类似亲和力特异性结合vista-ecd蛋白(即它们是全结合剂)，那么选择所述测试ab。举例来说，一些此类ab可在ph 6.5下和在ph 7.0或ph 7.4下(在例如25℃或在37℃下的恒定温度下)均以10-7
m、10-8
m、10-9
m或更小的kd结合至vista-ecd蛋白，以致ph 6.5下的kd在ph 7.0下的kd的1.5倍内。
ecd蛋白是完全hvista-ecd蛋白，或是包含hvista igv结构域的多肽，或是包含seq id no：2的氨基酸20-95或seq id no：2的氨基酸20-70、35-95或35-70的多肽。在一些实施方案中，多肽还包含seq id no：2的氨基酸95-105。在一些实施方案中，使用包含seq id no：2的氨基酸残基35-127的多肽。
[1755]
在一些实施方案中，一种用于改善vista抗体在酸性ph下与vista ecd的结合的方法包括增加一个或多个vh或vl cdr例如vh cdr1、cdr2和cdr3或仅vh cdr1和cdr3中谷氨酸、天冬氨酸和/或组氨酸残基的数目。在某些实施方案中，方法包括增加抗体的如例如通过晶体照相术测定的接触hvista的区域中谷氨酸、天冬氨酸和/或组氨酸残基的数目。
[1756]
在一些实施方案中，方法还包括在中性、碱性或生理ph下，诸如在ph 7.0或ph 7.4下测试所选ab的结合。在一些实施方案中，方法还包括如果抗体不仅在ph 6.5或更低下以10-8
m或更小的kd结合至vista-ecd蛋白，而且如果它还在ph 7.0或7.4下特异性结合至多肽，那么选择所述抗体。在一些此类实施方案中，如果ab在酸性条件下例如在ph 6.5或更小下特异性结合至vista-ecd蛋白，并且还在中性和/或碱性或生理ph下以类似亲和力特异性结合vista-ecd蛋白(即它们是全结合剂)，那么选择所述ab。举例来说，一些此类ab可在ph 6.5下和在ph 7.0下(在例如25℃或在37℃下的恒定温度下)均以10-8
m或更小的kd结合至vista-ecd蛋白，以致ph 6.5下的kd在ph 7.0下或在ph 7.4下的kd的1.5倍内。
[1757]
如果相比于在中性、生理或碱性ph下，某些ab在酸性条件下例如在ph 6.5或更小下以更高亲和力特异性结合至vista-ecd蛋白(“ph敏感性结合剂”或“ph敏感性ab”)，那么可选择所述ab。举例来说，在一些实施方案中，ab可在ph 6.5下以10-8
m或更小的kd，以及在ph 7.0下以大于10-8
m的kd结合至vista-ecd蛋白。在一些此类实施方案中，ab可在ph 6.5下以10-8
m或更小的kd，以及在ph 7.0下以大于在ph 6.5下的kd的1.5倍的kd结合至vista-ecd蛋白。在某些实施方案中，如果相比于在ph 7.0或ph 7.4下，ph敏感性ab在ph 6.5下以至多1/1.5、1/2、1/5、1/10、1/20、1/50、1/100、1/300、1/500、1/1000或1/5000的kd特异性结合至vista-ecd蛋白(在例如25℃或在37℃下的恒定温度下)，那么选择所述ph敏感性ab。举例来说，在一些情况下，如果相对于ph 7.0或ph 7.4或更高，ab在ph 6.0下以至多1/1.5、1/2、1/5、1/10、1/20、1/50、1/100、1/300、1/500、1/1000或1/5000的kd结合至vista-ecd蛋白(在例如25℃或在37℃下的恒定温度下)，那么选择所述ab。
[1758]
在某些实施方案中，方法还包括在两种ph值下测定k
解离
。在一些此类实施方案中，如果相对于在中性、生理或碱性条件下的k
解离
，ab在酸性条件下以更低的k
解离
特异性结合至vista-ecd蛋白，那么选择所述ab。在某些实施方案中，如果如例如在25℃下或在37℃下所测量，相比于在ph 7.0或ph 7.4下的k
解离
，ab在ph 6.5下以至多1/1.5、1/2、1/5、1/10、1/20、1/50或1/100的k
解离
在酸性条件下结合至vista-ecd蛋白，那么选择所述ab。举例来说，在一些实施方案中，如果如例如在25℃下或在37℃下所测量，相对于ph 7.0，ab在ph 6.0下以至多1/1.5、1/2、1/5、1/10、1/20、1/50或1/100的k
解离
速率结合至vista-ecd蛋白，那么选择所述ab。
[1759]
在某些实施方案中，方法还包括在两种ph值下测定k
缔合
。在一些此类实施方案中，如果相对于中性、生理或碱性条件，ab在酸性条件下以更高的k
缔合
结合至vista-ecd蛋白，那么选择所述ab。在某些实施方案中，如果如例如在25℃下或在37℃下所测量，相比于在ph 7.0或ph 7.4下的k
缔合
，ab在ph 6.5下以至少2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍的k
缔合
在酸性
条件下结合至vista-ecd蛋白，那么选择所述ab。举例来说，在一些实施方案中，如果如例如在25℃下或在37℃下所测量，相比于在ph 7.0或ph 7.4下，ab在ph 6.0下以至少2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍的k
缔合
结合至vista-ecd蛋白，那么选择所述ab。
[1760]
可通过关于在酸性ph例如ph 6.0或6.5下的结合来正性筛选vista抗体或fab或scfv的文库，以及关于在中性ph例如ph 7.0或生理ph例如ph 7.4下缺乏结合来负性筛选所述文库鉴定相对于中性或生理ph优先在酸性ph下结合至huvista的抗体。文库可富含谷氨酸、天冬氨酸和组氨酸残基，诸如以选择可在酸性ph下带电荷，并且更可能结合至vista的结合结构域。筛选可涉及在酸性ph下的正性选择和在中性或生理ph下的负性选择。正性选择和负性选择可加以交替。
[1761]
或者，在中性和酸性ph下结合至vista的抗体可被工程改造来缺乏在中性ph下的结合，并且维持或甚至增强在酸性ph下的结合。举例来说，可通过取代vh氨基酸残基和任选的vl氨基酸残基，诸如在一个或多个cdr中进行取代来创建文库，并且通过正性选择在酸性ph下结合至hvista的抗体以及负性选择在中性(或生理)ph下不结合至vista的抗体来筛选所述文库。类似方法可用于工程改造具有所需ph选择性、ph依赖性或ph非依赖性vista结合概况的vista结合抗体。
[1762]
具体示例性实施方案
[1763]
本公开的额外实施方案包括以下：
[1764]
1.一种经分离抗体，所述经分离抗体在酸性条件下特异性结合至人vista(hvista)。
[1765]
2.如实施方案1所述的经分离抗体，所述经分离抗体在酸性条件下特异性结合至hvista，但在中性或生理条件下不显著结合至hvista。
[1766]
3.如实施方案1或2所述的经分离抗体，其中相比于它在中性或生理条件下的kd，所述抗体在酸性条件下以至多1/10的kd结合至hvista。
[1767]
4.如实施方案1至3中的任一者所述的经分离抗体，其中相比于它在中性或生理条件下的kd，所述抗体在酸性条件下以至多1/100的kd结合至hvista。
[1768]
5.如实施方案1-4中的任一者所述的经分离抗体，其中相比于它在中性或生理条件下的kd，所述抗体在酸性条件下以至多1/1000的kd结合至hvista。
[1769]
6.如实施方案1-5中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在中性或生理条件下以10-5
m或更大的kd结合至hvista。
[1770]
7.如实施方案1-6中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在中性或生理条件下以10-4
m或更大的kd结合至hvista。
[1771]
8.如实施方案1-7中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在中性或生理条件下以10-3
m或更大的kd结合至hvista。
[1772]
9.如实施方案1-8中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-7
m或更小的kd结合至hvista。
[1773]
10.如实施方案1-9中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-8
m或更小的kd结合至hvista。
[1774]
11.如实施方案1-10中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-9
m或更小的kd结合至hvista。
[1775]
12.如实施方案1-11中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-7
或更小的kd结合至hvista，并且在中性或生理条件下以10-4
或更大的kd结合至hvista。
[1776]
13.如实施方案1-12中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-7
或更小的kd结合至hvista，并且在中性或生理条件下以10-5
或更大的kd结合至hvista。
[1777]
14.如实施方案1-13中的任一者所述的经分离抗体，其中相比于它在中性或生理条件下的k
解离
，所述抗体在酸性条件下以至多1/5的k
解离
结合至hvista。
[1778]
15.如实施方案1-14中的任一者所述的经分离抗体，其中相比于它在中性或生理条件下的k
解离
，所述抗体在酸性条件下以至多1/10的k
解离
结合至hvista。
[1779]
16.如实施方案1-15中的任一者所述的经分离抗体，其中相比于它在中性或生理条件下的k
解离
，所述抗体在酸性条件下以至多1/50的k
解离
结合至hvista。
[1780]
17.如实施方案1-16中的任一者所述的经分离抗体，其中相比于它在中性或生理条件下的k
解离
，所述抗体在酸性条件下以至多1/100的k
解离
结合至hvista。
[1781]
18.如实施方案1-17中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以7
×
10-3 s-1
或更小的k
解离
结合至hvista。
[1782]
19.如实施方案1-18中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以5
×
10-3 s-1
或更小的k
解离
结合至hvista。
[1783]
20.如实施方案1-19中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以3
×
10-3 s-1
或更小的k
解离
结合至hvista。
[1784]
21.如实施方案1-20中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-3 s-1
或更小的k
解离
结合至hvista。
[1785]
22.如实施方案1-21中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以7
×
10-4 s-1
或更小的k
解离
结合至hvista。
[1786]
23.如实施方案1-22中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以5
×
10-4 s-1
或更小的k
解离
结合至hvista。
[1787]
24.如实施方案1-23中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以3
×
10-4 s-1
或更小的k
解离
结合至hvista。
[1788]
25.如实施方案1-24中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-4 s-1
或更小的k
解离
结合至hvista。
[1789]
26.如实施方案1-25中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以7
×
10-5 s-1
或更小的k
解离
结合至hvista。
[1790]
27.如实施方案1-26中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以5
×
10-5 s-1
或更小的k
解离
结合至hvista。
[1791]
28.如实施方案1-21中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以3
×
10-5 s-1
或更小的k
解离
结合至hvista。
[1792]
29.如实施方案1-28中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-5 s-1
或更小的k
解离
结合至hvista。
[1793]
30.如实施方案1-29中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在中性或生理
条件下以10-3 s-1
或更大的k
解离
结合至hvista。
[1794]
31.如实施方案1-30中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在中性或生理条件下以3
×
10-3 s-1
或更大的k
解离
结合至hvista。
[1795]
32.如实施方案1-31中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在中性或生理条件下以5
×
10-3 s-1
或更大的k
解离
结合至hvista。
[1796]
33.如实施方案1-32中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在中性或生理条件下以7
×
10-3 s-1
或更大的k
解离
结合至hvista。
[1797]
34.如实施方案1-33中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在中性或生理条件下以10-2 s-1
或更大的k
解离
结合至hvista。
[1798]
35.如实施方案1-34中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在中性或生理条件下以3
×
10-2 s-1
或更大的k
解离
结合至hvista。
[1799]
36.如实施方案1-35中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在中性或生理条件下以5
×
10-2 s-1
或更大的k
解离
结合至hvista。
[1800]
37.如实施方案1-36中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在中性或生理条件下以7
×
10-2 s-1
或更大的k
解离
结合至hvista。
[1801]
38.如实施方案1-37中的任一者所述的经分离抗体，其中在中性或生理条件下所述抗体与hvista的结合是例如通过表面等离子体共振(spr)不可检测的。
[1802]
39.如实施方案1-38中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以5
×
10-3 s-1
或更小的k
解离
，以及在中性或生理条件下以7
×
10-3 s-1
或更大的k
解离
结合至hvista。
[1803]
40.如实施方案1-39中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-4 s-1
或更小的k
解离
，以及在中性或生理条件下以10-2 s-1
或更大的k
解离
结合至hvista。
[1804]
41.如实施方案1-40中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-8
m或更小的kd和5
×
10-3 s-1
或更小的k
解离
，以及在中性或生理条件下以10-6
m或更大的kd和7
×
10-3 s-1
或更大的k
解离
结合至hvista。
[1805]
42.如实施方案1-41中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-8
m或更小的kd和3
×
10-3 s-1
或更小的k
解离
，以及在中性或生理条件下以10-6
m或更大的kd和10-2
s-1
或更大的k
解离
结合至hvista。
[1806]
43.如实施方案1-42中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-12
至10-8
m的kd和10-4
至5
×
10-3 s-1
的k
解离
，以及在中性或生理条件下以10-7
至10-4
m的kd和3
×
10-3
至10-2 s-1
或更大的k
解离
结合至hvista。
[1807]
44.如实施方案1-43中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-12
至10-8
m的kd和10-4
至5
×
10-3 s-1
的k
解离
，以及在中性或生理条件下以10-7
至10-4
m的kd和3
×
10-3
至10-2 s-1
或更大的k
解离
结合至hvista；并且其中所述抗体以10-7
或更小的kd结合至食蟹猴vista。
[1808]
45.如实施方案1-44中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体以相比于在ph 7.4下，在ph 6.9下是至多1/10的kd和/或相比于在ph 7.4下，在ph 6.5下是至多1/100，以及相比于在ph 7.4下，在ph 6.0下是至多1/1000的kd结合至hvista。
[1809]
46.如实施方案1-45中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体结合至食蟹猴
(cyno)vista。
[1810]
47.如实施方案46所述的经分离抗体，其中相对于生理条件，所述抗体在酸性条件下以更高亲和力结合至食蟹猴vista。
[1811]
48.如实施方案45-47中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在酸性条件下以10-8
或更小的kd和/或10-2
或更小的k
解离
，以及在生理条件下以10-6
或更大的kd和/或10-2
或更大的k
解离
结合至食蟹猴vista。
[1812]
49.如实施方案1-48中的任一者所述的经分离抗体，其中酸性条件是具有6.5或更小的ph的条件。
[1813]
50.如实施方案1-49中的任一者所述的经分离抗体，其中酸性条件是具有6.0至6.5的ph的条件。
[1814]
51.如实施方案1-50中的任一者所述的经分离抗体，其中中性条件是具有7.0的ph的条件。
[1815]
52.如实施方案1-51中的任一者所述的经分离抗体，其中生理条件是具有7.35至7.45的ph的条件。
[1816]
53.如实施方案1-52中的任一者所述的经分离抗体，其中生理条件是具有7.4的ph的条件。
[1817]
54.如实施方案1-53中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体抑制hvista与人t细胞诸如人cd4 t细胞的结合(拮抗剂抗体)。
[1818]
55.如实施方案54所述的经分离抗体，其中所述抗体在具有小于ph 7.0的ph的条件下抑制hvista与人t细胞的结合。
[1819]
56.如实施方案1-55中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体抑制hvista与人psgl-1(hupsgl-1)的结合并且/或者与hupsgl1竞争与hvista的结合。
[1820]
57.如实施方案56所述的经分离抗体，其中所述抗体在具有小于ph 7.0的ph的条件下抑制hvista与hupsgl-1的结合。
[1821]
58.如实施方案1-57中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体抑制hvista与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合。
[1822]
59.如实施方案58所述的经分离抗体，其中所述抗体在具有小于ph 7.0的ph的条件下抑制hvista与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合。
[1823]
60.如实施方案55、57或59中的任一者所述的经分离抗体，其中具有小于ph 7.0的ph的条件是肿瘤或受试者中具有小于ph 7.0的ph，并且其中需要免疫刺激的任何患病区域。
[1824]
61.如实施方案1-60中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体刺激t细胞活化，如通过例如增强t细胞增殖；增强从t细胞的ifn-γ产生；以及/或者刺激t细胞受体介导的nf-kb信号传导所证明。
[1825]
62.如实施方案61所述的经分离抗体，其中所述抗体在具有小于ph 7.0的ph的条件下刺激t细胞活化。
[1826]
63.如实施方案1-62中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体降低vista介导的细胞-细胞粘附。
[1827]
64.如实施方案1-53中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体刺激vista的活
性(激动剂抗体)。
[1828]
65.如实施方案1-53和64中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体刺激hvista与人t细胞诸如人cd4 t细胞的结合。
[1829]
66.如实施方案65所述的经分离抗体，其中所述抗体在具有小于ph 7.0的ph的条件下刺激hvista与人t细胞的结合。
[1830]
67.如实施方案1-53和64-66中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体刺激hvista与hupsgl-1的结合。
[1831]
68.如实施方案67所述的经分离抗体，其中所述抗体在具有小于ph 7.0的ph的条件下刺激hvista与hupsgl-1的结合。
[1832]
69.如实施方案1-53和64-68中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体刺激hvista与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合。
[1833]
70.如实施方案69所述的经分离抗体，其中所述抗体在具有小于ph 7.0的ph的条件下刺激hvista与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合。
[1834]
71.如实施方案66、68和70中的任一者所述的经分离抗体，其中具有小于ph 7.0的ph的条件是自身免疫(例如类风湿性关节炎和狼疮)环境、炎症部位或受试者中具有小于ph 7.0的ph，并且其中需要免疫抑制的任何患病区域。
[1835]
72.如实施方案1-71中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体具有在食蟹猕猴中至少100、200、300、400或500天的平均滞留时间(mrt)。
[1836]
73.如实施方案1-72中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体不显著结合至它所施用的受试者的外周血中的vista阳性细胞例如嗜中性粒细胞。
[1837]
74.如实施方案1-73中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体不显著消减它所施用的受试者的外周血中的vista阳性细胞例如嗜中性粒细胞。
[1838]
75.如实施方案1-74中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体已被工程改造来在酸性ph下而非在中性或生理ph下结合至hvista。
[1839]
76.如实施方案75所述的经分离抗体，其中所述抗体已通过用谷氨酸、天冬氨酸或组氨酸残基替换hvista结合抗体的vh cdr1、cdr2和/或cdr3中的1-8个氨基酸来工程改造。
[1840]
77.如实施方案1-63和72-76中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体包含p1-061029或其变体的vh cdr1、cdr2和/或cdr3，所述变体相对于抗体p1-061029在vh cdr1、cdr2和/或cdr3中包含1至6或1至8个氨基酸差异，其中至多1、2或3个氨基酸变异存在于任一cdr中；或替代地，其中所述抗体包含p1-061015或其变体的vh cdr1、cdr2和/或cdr3，所述变体相对于抗体p1-061015在vh cdr1、cdr2和/或cdr3中包含1至6或1至8个氨基酸差异，其中至多1、2或3个氨基酸变异存在于任一cdr中。
[1841]
78.如实施方案77所述的经分离抗体，其中所述抗体包含p1-061029或其变体的vh cdr1、cdr2和cdr3，所述变体相对于p1-061029在vh cdr1、cdr2和/或cdr3/中包含1至6或1至8个氨基酸差异，或替代地，其中所述抗体包含p1-061015或其变体的vh cdr1、cdr2和cdr3，所述变体相对于p1-061015在vh cdr1、cdr2和/或cdr3中包含1至6或1至8个氨基酸差异。
[1842]
79.如实施方案77或78所述的经分离抗体，其中氨基酸变异是取代成谷氨酸残基(e)、天冬氨酸残基(d)或组氨酸残基(h)。
[1843]
80.如实施方案77-79中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体包含
[1844]-含有gftx1x2dx3amh的cdr1，其中x1是d或l，x2是e或d，并且x3是e或y(seq id no：563)；
[1845]-含有gix4wx5sx6x7igyadsvkg的cdr2，其中x4是d或n，x5是d或n，x6是d、e、h或a，并且x7是d、e、h或n(seq id no：564)；和/或
[1846]-含有vpgysx8gwidax9dx
10
的cdr3，其中x8是e、h或g，x9是e、d或f，并且x
10
是d、e或v(seq id no：565)。
[1847]
81.如实施方案80所述的抗体，其中所述抗体包含
[1848]-含有gftx1x2dx3amh的cdr1，其中x1是d或l，x2是e或d，并且x3是e或y(seq id no：563)；
[1849]-含有gix4wx5sx6x7igyadsvkg的cdr2，其中x4是d或n，x5是d或n，x6是d、e、h或a，并且x7是d、e、h或n(seq id no：564)；和
[1850]-含有vpgysx8gwidax9dx
10
的cdr3，其中x8是e、h或g，x9是e、d或f，并且x
10
是d、e或v(seq id no：565)。
[1851]
82.如实施方案80或81所述的经分离抗体，其中x3是e，并且x9是e。
[1852]
83.如实施方案80-82中的任一者所述的经分离抗体，其中x2是e，x7是e，并且/或者x8是h。
[1853]
84.如实施方案83所述的经分离抗体，其中满足以下三个条件中的两者或更多者：x2是e，x7是e，并且/或者x8是h。
[1854]
85.如实施方案84所述的经分离抗体，其中x2是e，x7是e，并且x8是h。
[1855]
86.如实施方案80-85中的任一者所述的经分离抗体，其中x6是e。
[1856]
87.如实施方案80-85中的任一者所述的经分离抗体，其中x6是a。
[1857]
88.如实施方案80-86中的任一者所述的经分离抗体，其中x1是l，x4是n，x5是n，并且/或者x
10
是v。
[1858]
89.如实施方案88所述的经分离抗体，其中满足以下四个条件中的两者或更多者：x1是l，x4是n，x5是n，并且/或者x
10
是v。
[1859]
90.如实施方案89所述的经分离抗体，其中满足以下四个条件中的三者或更多者：x1是l，x4是n，x5是n，并且/或者x
10
是v。
[1860]
91.如实施方案90所述的经分离抗体，其中x1是l，x4是n，x5是n，并且/或者x
10
是v。
[1861]
92.如实施方案80-91中的任一者所述的经分离抗体，其中x
10
是d。
[1862]
93.如实施方案80-92中的任一者所述的经分离抗体，其中x9是e。
[1863]
94.如实施方案80-93中的任一者所述的经分离抗体，其中x2是e，x4是d，并且/或者x6是e。
[1864]
95.如实施方案94所述的经分离抗体，其中满足以下条件中的两者或更多者：x2是e，x4是d，并且/或者x6是e。
[1865]
96.如实施方案95所述的经分离抗体，其中x2是e，x4是d，并且x6是e。
[1866]
97.如实施方案80-96中的任一者所述的经分离抗体，其中x1是l，x3是y，x5是n，x7是n，并且/或者x8是g。
[1867]
98.如实施方案97所述的经分离抗体，其中满足以下条件中的两者或更多者：x1是
068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g或p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s；或
[1878]
包含以下各项的通过k16r和t84a取代中的一者或两者而修饰(在p1-061029或它的子代的情况下)的vh：p1-061029、p1-068757、p1-068759、p1-068761、p1-068763、p1-068765、p1-068767、p1-068769、p1-068771、p1-068773、p1-068775、p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069069、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-069077、p1-068761_e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g或p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s。
[1879]
107.如实施方案1-106中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体包含含有与
p1-061029的氨基酸序列至少90％、95％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列的vl。
[1880]
108.如实施方案107所述的经分离抗体，其中所述抗体包含p1-061029的vl。
[1881]
109.如实施方案1-63和72-76中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体包含p1-061015或其变体的vh cdr1、cdr2和/或cdr3，所述变体相对于p1-061015在vh cdr1、cdr2和/或cdr3中包含1-6或1-8个氨基酸差异，其中至多1、2或3个氨基酸变异存在于任一cdr中。
[1882]
110.如实施方案109所述的经分离抗体，其中所述抗体包含p1-061015或其变体的vh cdr1、cdr2和cdr3，所述变体相对于所述p1-061015在vh cdr1、cdr2和/或cdr3中包含1-6个氨基酸差异，其中至多1、2或3个氨基酸变异存在于任一cdr中。
[1883]
111.如实施方案108或109所述的经分离抗体，其中氨基酸变异是取代成谷氨酸残基(e)、天冬氨酸残基(d)或组氨酸残基(h)。
[1884]
112.如实施方案108-111中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体包含
[1885]-含有gftfx1x2x3mh的cdr1，其中x1是e、d、h或s；x2是h或y；并且x3是d或a；
[1886]-含有x4x5wx6dgsx7x8x9x
10
adsvkg的cdr2，其中x4是e、h或i；x5是d或i；x6是d或y；x7是d或n；x8是d、h或k；x9是d、h或y；并且x
10
是e或y；和/或
[1887]-含有dx
11
x
12
fyx
13
x
14
yydfx
15
的cdr3，其中x
11
是e或s；x
12
是e或g；x
13
是d、e或s；x
14
是d或s；并且x
15
是d、e或y。
[1888]
113.如实施方案108-112中的任一者所述的抗体，其中所述抗体包含
[1889]-含有gftfx1x2x3mh的cdr1，其中x1是e、d、h或s；x2是h或y；并且x3是d或a；
[1890]-含有x4x5wx6dgsx7x8x9x
10
adsvkg的cdr2，其中x4是e、h或i；x5是d或i；x6是d或y；x7是d或n；x8是d、h或k；x9是d、h或y；并且x
10
是e或y；和
[1891]-含有dx
11
x
12
fyx
13
x
14
yydfx
15
的cdr3，其中x
11
是e或s；x
12
是e或g；x
13
是d、e或s；x
14
是d或s；并且x
15
是d、e或y。
[1892]
114.如实施方案98-102中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体包含以下各项的vh cdr1、cdr2和/或cdr3：p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068748、p1-068750、p1-068752、p1-068754、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s。
[1893]
115.如实施方案114所述的经分离抗体，其中所述抗体包含以下各项的vh cdr1、cdr2和cdr3：p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068748、p1-068750、p1-068752、p1-068754、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_
e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s。
[1894]
116.如实施方案98-115中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体包含p1-061015的vl的vl cdr1、cdr2和cdr3。
[1895]
117.如实施方案98-116中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体包含vh，所述vh包含与以下各项的氨基酸序列至少90％、95％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列：p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068748、p1-068750、p1-068752或p1-068754；或
[1896]
包含以下各项的通过1、2、3、4或5个氨基酸取代而修饰，或通过1、2、3、4或5个保守性氨基酸取代而修饰的vh的氨基酸序列：p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068748、p1-068750、p1-068752、p1-068754、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y_p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s。
[1897]
118.如实施方案98-117中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体包含含有以下各项的vh的氨基酸序列的vh：p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068748、p1-068750、p1-068752、p1-068754、p1-068744_e31s、p1-68744h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s；或
[1898]
包含以下各项的通过1、2、3、4或5个氨基酸取代而修饰，或通过1、2、3、4或5个保守性氨基酸取代而修饰的vh的氨基酸序列：p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068748、p1-068750、p1-068752、p1-068754、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_
e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s。
[1899]
119.如实施方案98-118中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体包含含有与p1-061015的氨基酸序列至少90％、95％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列的vl。
[1900]
120.如实施方案119所述的经分离抗体，其中所述抗体包含含有p1-061015的任选地通过t85v取代而修饰的氨基酸序列的vl。
[1901]
121.如实施方案1-120中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体在hvista的富含组氨酸的区域诸如富含组氨酸的β片层延伸部分处或附近结合。
[1902]
122.如实施方案121所述的经分离抗体，其中所述抗体在具有6.0-6.5的ph的条件下在hvista的所述富含组氨酸的区域诸如所述富含组氨酸的β片层延伸部分处或附近结合。
[1903]
123.如实施方案1-122中的任一者所述的经分离抗体，其中如例如通过实施例中所述的竞争性生物膜层干涉测量术(bli)表位划分测定所测定，所述抗体与例如包含以下各项的vh和vl的一种或多种本文所述的抗体竞争或交叉竞争与hvista的结合：p1-061029、p1-068757、p1-068759、p1-068761、p1-068763、p1-068765、p1-068767、p1-068769、p1-068771、p1-068773、p1-068775、p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069069、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-069077、p1-068761e55a、p1-068761_h100g、p1-068761_e56n、p1-068761_e55a_e56n、p1-068761_e30d、p1-068761_e30d_e55a、p1-068761_e56n_h100g、p1-068761_e30d_h100g或p1-068761_e30d_e56n、p1-068761_e100ff、p1-068761_e55a_e100ff、p1-068761_h100g_e100ff、p1-068761_e30d_e100ff、p1-068761_e56n_e100ff、p1-068761_e32y、p1-068761_e32y_e55a、p1-068761_e32y_e56n、p1-068761_e30d_e32y、p1-068761_e32y_h100g、p1-068761_e32y_e100ff、p1-068767_d52n_d102v、p1-068767_d52n、p1-068767_d52n_e55a、p1-068767_e55a_d102v、p1-068767_d102v、p1-068767_e55a、p1-068767_e30d_d52n、p1-068767_e30d_d102v、p1-068767_e30d、p1-068767_e30d_e55a、p1-068767_e100ff_d102v、p1-068767_e55a_e100ff、p1-068767_d52n_e100ff、p1-068767_e100ff、p1-068767_e30d_e100ff、p1-061029_f100fe_v102d、p1-061029_f100fe、p1-061029_v102d、p1-061029_y32e、p1-061029_y32e_f100fe、p1-061015、p1-068736、p1-068738、p1-068740、p1-068742、p1-068744、p1-068748、p1-068750、p1-068752、p1-068754、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s)。
[1904]
124.如实施方案1-123中的任一者所述的经分离抗体，其中如例如通过实施例中所述的竞争性生物膜层干涉测量术(bli)表位划分测定所测定，所述抗体划分至表位组a。
[1905]
125.如实施方案1-124中的任一者所述的经分离抗体，其中例如如通过实施例中所述的酵母突变分析所测定，所述抗体不显著结合至因为以下氨基酸残基中的一者或多者已被突变而修饰的hvista：t35、y37、k38、t39、y41、r54、t61、f62、q63、l65、h66、l67、h68、h69、f97、l115、v117、i119、h121、h122、s124、e125、r127。
[1906]
126.一种经分离抗体，所述经分离抗体结合至由seq id no：1或2组成的hvista，但不显著结合至因为以下氨基酸残基中的一者或多者已被突变而修饰的hvista：t35、y37、k38、t39、y41、r54、t61、f62、q63、l65、h66、l67、h68、h69、f97、l115、v117、i119、h121、h122、s124、e125、r127。
[1907]
127.如实施方案1-126中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体不显著结合至因为以下氨基酸残基中的2、3、4、5者或更多者已被突变而修饰的hvista：t35、y37、k38、t39、y41、r54、t61、f62、q63、l65、h66、l67、h68、h69、f97、l115、v117、i119、h121、h122、s124、e125、r127。
[1908]
128.如实施方案125-127中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体不结合至因为以下残基中的一者或多者已被突变成表22中所示的相应残基中的一者而修饰的hvista：h68、f97、l115、v117、i119、h121、h122、s124、e125、r127。
[1909]
129.一种在酸性条件下例如在6.5的ph下结合至hvista(如例如通过实施例中所述的测定中的一者所测量)的经分离抗体(ab)，其中所述ab抑制hvista与(a)t细胞和/或(b)psgl-1之间的相互作用，并且其中如例如使用实施例中所述的酵母表面展示和ngs测定所测定，所述ab通过本文所述的抗体诸如p1-061015、p1-068744、p1-068748、p1-061029、p1-068761或p1-068767的一个或多个(例如至少1-3、1-5、1-10、5-10、5-15个或所有)在能量方面重要的接触残基诸如一个或多个选自在能量方面重要的接触残基的以下群组中的一者的氨基酸接触hvista：(i)v34、t35、y37、k38、t39、y41、s52、r54、t61、f62、q63、l65、h66、l67、h68、h69、f97、l115、v117、i119、h121、h122、s124、e125、r127；(ii)v34、t35、y37、t39、y41、s52、r54、f62、l65、h66、h68、l115、v117、i119、r120、h121、h122、s124、e125；或(iii)y37、t39、r54、f62、h66、l115或v117，并且其中编号是成熟hvista的编号。
[1910]
130.一种在酸性条件下例如在6.5的ph下结合至hvista(如例如通过实施例中所述的测定中的一者所测量)的经分离ab，其中所述ab抑制hvista与(a)t细胞和/或(b)psgl-1之间的相互作用，并且其中如例如使用实施例中所述的酵母表面展示和ngs测定所测定，所述ab通过一个或多个(例如至少1-3、1-5、1-10、5-10、5-15个或所有)在能量方面重要的接触残基y37、t39、r54、f62、h66、v117、i119或s124接触hvista，并且其中编号是成熟hvista的编号。
[1911]
131.一种在酸性条件下例如在6.5的ph下结合至hvista(如例如通过实施例中所述的测定中的一者所测量)的经分离ab，其中所述ab抑制hvista与(a)t细胞和/或(b)psgl-1之间的相互作用，并且其中如例如使用实施例中所述的酵母表面展示和ngs测定所测定，所述ab通过p1-061015、p1-068744、p1-068748、p1-061029、p1-068761或p1-068767或本文所述的其他抗体的一个或多个(例如至少1-3、1-5、1-10、5-10、5-15个或所有)在能量方面重要的接触残基接触hvista，并且其中编号是成熟hvista的编号。
[1912]
132.如实施方案1-131中的任一者所述的经分离ab，其中所述ab结合至hvista的fg环。
[1913]
133.如实施方案1-132中的任一者所述的经分离ab，其中如例如通过如例如在实施例中所述的晶体照相术所测定，所述ab结合至hvista的所述富含组氨酸的β片层延伸部分。
[1914]
134.如实施方案1-133中的任一者所述的经分离ab，其中如例如通过如例如在实施例中所述的晶体照相术所测定，所述ab诸如通过氢键接触成熟hvista的h121、h122和h123(组氨酸三联体)(例如4.0埃(a)或更小的距离)。
[1915]
135.如实施方案1-134中的任一者所述的经分离ab，其中所述ab通过vh cdr1和vh cdr3，并且例如不显著通过vh cdr2以及/或者通过vl cdr接触hvista。
[1916]
136.如实施方案1-135中的任一者所述的经分离ab，其中所述抗体的氨基酸残基110和112分别与hvista的h121和h122形成氢键，并且任选地，其中所述抗体的氨基酸残基与hvista的h123形成氢键。
[1917]
137.如实施方案1-136中的任一者所述的经分离ab，其中所述ab通过位于vh cdr1、cdr2或cdr3中的至少一个或多个谷氨酸、天冬氨酸或组氨酸残基接触hvista。
[1918]
138.如实施方案1-137中的任一者所述的经分离ab，其中所述ab在中性或生理ph下不显著结合至hvista(如例如通过实施例中所述的测定中的一者所测量)。
[1919]
139.如实施方案1-138中的任一者所述的经分离ab，其中相比于它在中性或生理ph下与hvista的结合的kd和/或k解离，所述ab在酸性条件下例如在6.5的ph下以至多1/10、1/100或1/1000的kd(或k解离)结合至hvista(如例如通过实施例中所述的测定中的一者所测量)。
[1920]
140.如实施方案1-139中的任一者所述的经分离ab，其中所述ab在中性或生理ph下不显著结合至hvista(如例如通过实施例中所述的测定中的一者所测量)。
[1921]
141.一种在酸性条件下例如在6.5的ph下结合至hvista(如例如通过实施例中所述的测定中的一者所测量)的经分离抗体(ab)，其中所述ab：
[1922]
ο抑制hvista与(a)t细胞和/或(b)psgl-1之间的相互作用(例如抑制具有seq id no：1的hvista的h153和h154与psgl-1酪氨酸y46和y48之间的相互作用)；
[1923]
ο通过例如增强t细胞增殖；增强从t细胞的ifn-γ产生；以及/或者刺激t细胞受体介导的nf-kb信号传导来增强t细胞活化；
[1924]
ο如例如使用实施例中所述的酵母表面展示和ngs测定所测定，通过相对于seq id no：2的一个或多个(例如至少1-3、1-5、1-10、5-10、5-15个或所有)在能量方面重要的接触残基y37、t39、r54、f62、h66、v117、i119或s124(表21)接触hvista；并且其中编号是成熟hvista的编号；
[1925]
ο如例如通过如例如在实施例中所述的晶体照相术所测定，结合至hvista的富含组氨酸的β片层延伸部分；
[1926]
ο如例如通过如例如在实施例中所述的晶体照相术所测定，诸如通过氢键接触成熟hvista的h121、h122和/或h123(4.0埃或更小的距离)；
[1927]
ο如通过如实施例中所述的ms-hdx所测定，结合至具有seq id no：1的hvista的区域1：
57
lgpvdkghdvtf
68
(seq id no：566)；区域2：
86
rrpirnltfqdl
97
(seq id no：567)；和区域
3：
148
vveirhhhsehrvhgame
165
(seq id no：568)，并且任选地，其中与区域2的结合是最强的；
[1928]
ο与一种或多种本文所述的抗体例如p1-061015、p1-068744、p1-068748、p1-061029、p1-068761、p1-068767和vista.4竞争与hvista的结合(双向竞争)；
[1929]
ο通过位于vh cdr1、cdr2或cdr3中的至少一个或多个谷氨酸、天冬氨酸或组氨酸残基接触hvista；
[1930]
ο相较于肺、肝和脾组织，或相较于血液，更好地在具有mc38肿瘤的人vista敲入小鼠中的肿瘤组织中积累；
[1931]
ο相较于肺、肝和脾组织，或相较于血液，更好地在用所述抗体施用(例如通过施用具有pet示踪剂的抗体)的患者中的肿瘤中积累；并且/或者
[1932]
ο具有低靶标介导的药物处置，从而导致至少100、200、300、400、500、600或700小时的平均滞留时间(mrt)，如例如如实施例中所述所测量。
[1933]
142.一种经分离抗体(ab)，相比于它在中性或生理ph下与hvista的结合的kd或k解离，所述经分离抗体在酸性条件下例如在6.5的ph下以至多1/10、1/100或1/1000的kd(和/或k解离)结合至hvista(如例如通过实施例中所述的测定中的一者所测量)，其中所述ab：
[1934]
ο抑制hvista与(a)t细胞和/或(b)psgl-1之间的相互作用(例如抑制具有seq id no：1的hvista的h153和h154与psgl-1酪氨酸y46和y48之间的相互作用)；
[1935]
ο通过例如增强t细胞增殖；增强从t细胞的ifn-γ产生；以及/或者刺激t细胞受体介导的nf-kb信号传导来增强t细胞活化；
[1936]
ο如例如使用实施例中所述的酵母表面展示和ngs测定所测定，通过相对于seq id no：2的一个或多个(例如至少1-3、1-5、1-10、5-10、5-15个或所有)在能量方面重要的接触残基y37、t39、r54、f62、h66、v117、i119或s124(表21)接触hvista；并且其中编号是成熟hvista的编号；
[1937]
ο如例如通过如例如在实施例中所述的晶体照相术所测定，结合至hvista的富含组氨酸的β片层延伸部分；
[1938]
ο如例如通过如例如在实施例中所述的晶体照相术所测定，诸如通过氢键接触成熟hvista的h121、h122和/或h123(4.0埃(a)或更小的距离)；
[1939]
ο如通过如实施例中所述的ms-hdx所测定，结合至具有seq id no∶1的hvista的区域1：
57
lgpvdkghdvtf
68
(seq id no：566)；区域2：
86
rrpirnltfqdl
97
(seq id no：567)；和区域3：
148
vveirhhhsehrvhgame
165
(seq id no：568)，并且任选地，其中与区域2的结合是最强的；
[1940]
ο与一种或多种本文所述的抗体例如p1-061015、p1-068744、p1-068748、p1-061029、p1-068761、p1-068767和vista.4竞争与hvista的结合(双向竞争)；
[1941]
ο通过位于vh cdr1、cdr2或cdr3中的至少一个或多个谷氨酸、天冬氨酸或组氨酸残基接触hvista；并且/或者
[1942]
ο具有低靶标介导的药物处置，从而导致至少100、200、300、400、500、600或700小时的平均滞留时间(mrt)，如例如如实施例中所述所测量。
[1943]
143.如实施方案1-142中的任一者所述的经分离抗体，其中如例如通过icief所测量，所述抗体具有在6.5与6.8之间的等电点(pi)。
[1944]
144.如实施方案1-143中的任一者所述的经分离抗体，其中例如如实施例中所测
定，所述抗体展现低聚集，例如相比于抗体
‘
029、
‘
761或
‘
767(分别是p1-061015、p068744、p1-068748、p1-061029、p1-068761或p1-068767)的聚集是类似或更低的聚集。
[1945]
145.如实施方案1-144中的任一者所述的经分离抗体，其中例如如实施例中所测定，所述抗体展现相比于
‘
029、
‘
761或
‘
767的粘度是类似或更低的粘度。
[1946]
146.如实施方案1-145中的任一者所述的经分离抗体，其中例如如实施例中所测定，所述抗体展现相比于
‘
029、
‘
761或
‘
767的流体动力学半径是类似或更低的流体动力学半径。
[1947]
147.如实施方案1-146中的任一者所述的经分离抗体，其中例如如实施例中所测定，所述抗体展现相比于
‘
029、
‘
761或
‘
767的熔解温度是类似或更高的熔解温度(tm1)。
[1948]
148.如实施方案1-147中的任一者所述的经分离抗体，其中例如如实施例中所测定，所述抗体展现相比于
‘
029、
‘
761或
‘
767的高分子量种类的量是类似或更低的高分子量种类的量。
[1949]
149.如实施方案1-148中的任一者所述的经分离抗体，所述经分离抗体是igg抗体。
[1950]
150.如实施方案149所述的经分离抗体，所述经分离抗体是igg1、igg2或igg4抗体(任选地具有s228p的igg4)。
[1951]
151.如实施方案1-150中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体是无效应子抗体，例如缺乏adcc和/或cdc，和/或不显著结合至一种或多种fcγr例如fcγriii的抗体。
[1952]
152.如实施方案151所述的经分离抗体，其中恒定区包含野生型重链恒定区中的1-5个突变，相对于所述相应野生型重链恒定区的效应子功能和/或结合至一种或多种fcγr例如fcγriii的能力，所述1-5个突变降低所述抗体的效应子功能和/或结合至一种或多种fcγr例如fcγriii的能力。
[1953]
153.如实施方案1-152中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体的恒定区是igg1.3、igg1.1，或是具有p238k取代的igg1(例如igg1.p238k)。
[1954]
154.如实施方案1-150中的任一者所述的经分离抗体，其中所述抗体具有效应子功能并且/或者结合至一种或多种fcγr例如fcγriii。
[1955]
155.如实施方案154所述的经分离抗体，其中所述抗体是无岩藻糖基化的(例如无岩藻糖基化igg1抗体)。
[1956]
156.如实施方案154或155所述的经分离抗体，其中相对于相应野生型恒定区，恒定区包含1-5个增强所述抗体的效应子功能和/或结合至一种或多种fcγr例如fcγriii的能力的突变。
[1957]
157.如实施方案1-156中的任一者所述的经分离抗体，所述经分离抗体是全长抗体或包含全长重链(具有或不具有c末端赖氨酸)和全长轻链的抗体。
[1958]
158.如实施方案1-156中的任一者所述的经分离抗体，所述经分离抗体是所述抗体的抗原结合片段。
[1959]
159.如实施方案1-158中的任一者所述的经分离抗体，所述经分离抗体是多聚(例如二聚或三聚)抗体。
[1960]
160.如实施方案1-159中的任一者所述的经分离抗体，所述经分离抗体连接(例如共价)于另一分子。
[1961]
161.如实施方案160所述的经分离抗体，其中所述另一分子是标记。
[1962]
162.如实施方案160或161所述的经分离抗体，其中所述另一分子是肽。
[1963]
163.如实施方案1-162中的任一者所述的经分离抗体，所述经分离抗体是抗体药物缀合物(adc)或可活化抗体。
[1964]
164.一种经分离核酸，所述经分离核酸编码实施方案1-163或206-212中的任一者所述的抗体。
[1965]
165.一种经分离核酸，所述经分离核酸编码实施方案1-163或206-212中的任一者所述的抗体的重链和/或轻链。
[1966]
166.一种组合物，所述组合物包含编码实施方案1-163或206-212中的任一者所述的抗体的重链的经分离核酸和编码所述抗体的轻链的核酸。
[1967]
167.一种细胞，所述细胞包含实施方案164-166中的任一者所述的经分离核酸。
[1968]
168.一种制备抗体的方法，所述方法包括在表达所述抗体所处的条件下培养实施方案167所述的细胞。
[1969]
169.一种组合物，所述组合物包含实施方案1-168中的任一者所述的经分离抗体、核酸、组合物或细胞以及药学上可接受的载体。
[1970]
170.如实施方案169所述的组合物，所述组合物包含第二治疗剂。
[1971]
171.如实施方案170所述的组合物，其中所述第二治疗剂是免疫刺激剂或化学治疗剂。
[1972]
172.如实施方案171所述的组合物，其中所述第二治疗剂是免疫刺激剂，所述免疫刺激剂是免疫抑制性分子例如pd-1/pd-l1、ctla-4和lag-3的拮抗剂或免疫刺激性分子例如gitr和ox40的激动剂。
[1973]
173.一种治疗受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的刺激免疫应答并且/或者是vista拮抗剂抗体的实施方案1-172或206-212中的任一者所述的组合物或经分离抗体。
[1974]
174.如实施方案173所述的方法，其中所述受试者具有例如在所述癌症的肿瘤中的vista阳性细胞。
[1975]
175.如实施方案174所述的方法，其中细胞是vista阳性浸润性淋巴细胞性细胞(例如t细胞)或髓单核细胞性细胞。
[1976]
176.如实施方案173-175中的任一者所述的方法，其中所述受试者被首先测试肿瘤中vista阳性细胞的存在。
[1977]
177.如实施方案173-176中的任一者所述的方法，其中所述方法还包括施用第二疗法。
[1978]
178.如实施方案177所述的方法，其中所述第二疗法是化学疗法、放射疗法、手术或施用第二剂。
[1979]
179.如实施方案178所述的方法，其中所述第二疗法是第二剂，并且所述第二剂是免疫刺激剂或化学治疗剂。
[1980]
180.如实施方案179所述的方法，其中所述第二治疗剂是免疫刺激剂，所述免疫刺激剂是免疫抑制性分子例如pd-1/pd-l1、ctla-4和lag-3的拮抗剂或免疫刺激性分子例如gitr和ox40的激动剂。
[1981]
181.一种治疗受试者中的感染性疾病(例如病毒性疾病)的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的刺激免疫应答并且/或者是vista拮抗剂的实施方案1-172或206-212中的任一者所述的组合物或经分离抗体。
[1982]
182.一种治疗炎症、炎症性疾患和自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病或受益于降低免疫应答的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的抑制免疫应答例如t细胞活化或是vista激动剂的实施方案1-172或206-212中的任一者所述的组合物或经分离抗体。
[1983]
183.一种用于鉴定在ph 6.5或更小下以10-7
m或更小的kd结合至人vista细胞外结构域(hvista-ecd)的抗体(ab)的方法，所述方法包括使一种测试ab或多种测试ab与包含hvista-ecd或其片段的多肽在ph 6.5或更小下接触，所述片段包含hvista-ecd的igv结构域或包含seq id no：2的氨基酸20-95、20-70、35-70-127或35-127，以及选择以10-7
m或更小的kd结合至所述多肽的所述一种或多种测试ab。
[1984]
184.一种用于鉴定在ph 6.5或更小下以5
×
10-3
秒-1
或更小的k
解离
结合至人vista细胞外结构域(hvista-ecd)的抗体(ab)的方法，所述方法包括使一种测试ab或多种测试ab与包含hvista-ecd或其片段的多肽在ph 6.5或更小下接触，所述片段包含hvista-ecd的igv结构域或包含seq id no：2的氨基酸20-95、20-70、35-70或35-127，以及选择以5
×
10-3
秒-1
或更小的k
解离
结合至所述多肽的所述一种或多种测试ab。
[1985]
185.一种用于鉴定在ph 6.5下以与在ph 7.0下类似的亲和力结合至人vista细胞外结构域(hvista-ecd)的抗体(ab)的方法，所述方法包括：
[1986]
a.使一种测试ab或多种测试ab在ph 6.5下与包含hvista-ecd或其片段的多肽接触，所述片段包含hvista-ecd的igv结构域或包含seq id no：2的氨基酸20-95、20-70或35-70或35-127；
[1987]
b.使所述一种测试ab或多种测试ab在ph 7.0下与(a)的所述多肽接触；以及
[1988]
c.如果测试ab在ph 6.5下和在ph 7.0下以10-7
m或更小的kd结合至所述多肽，那么选择所述测试ab。
[1989]
186.一种用于鉴定相比于在ph 7.0下，在ph 6.5下以更高亲和力结合至人vista细胞外结构域(hvista-ecd)的抗体(ab)的方法，所述方法包括：
[1990]
a.使一种测试ab或多种测试ab在ph 6.5下与包含hvista-ecd或其片段的多肽接触，所述片段包含hvista-ecd的igv结构域或包含seq id no：2的氨基酸20-95、20-70、35-70或35-127；
[1991]
b.使所述一种测试ab或多种测试ab在ph 7.0下与(a)的所述多肽接触；以及
[1992]
c.如果相比于在ph 7.0下，测试ab在ph 6.5下以至多1/2的kd或k
解离
结合至所述多肽，那么选择所述测试ab。
[1993]
187.一种用于鉴定用于治疗癌症的特异性结合至人vista细胞外结构域(hvista-ecd)的抗体(ab)的方法，所述方法包括
[1994]
a.诸如根据实施方案183-186所述的方法鉴定在ph 6.5或更小下特异性结合至hvista-ecd的ab；以及
[1995]
b.选择(a)的在肿瘤模型中触发或增强免疫应答或在ph 6.5或更小下抑制肿瘤生长的ab。
[1996]
188.如实施方案187所述的方法，其中步骤(b)包括测量t细胞活性。
[1997]
189.如实施方案187或188所述的方法，所述方法还包括测量所述ab的抗肿瘤作用。
[1998]
190.一种用于改善结合至人vista细胞外结构域(hvista-ecd)的抗体(ab)的抗肿瘤功效的方法，所述方法包括
[1999]
a.提供在ph 6.5或更小下以小于所需值的亲和力结合至hvista-ecd的ab；
[2000]
b.用不同氨基酸残基(例如用谷氨酸、天冬氨酸或组氨酸残基)取代所述ab的重链或轻链中的1至5个氨基酸残基，其中所述1至5个氨基酸残基是与hvista-ecd的接触残基，例如氨基酸残基31、32、50、57、58、59、100或102中的一者或多者(seq id no：67、51或55中的编号)；
[2001]
c.确定在(b)中获得的ab相对于(a)的所述ab在ph 6.5或更小下是否对hvista-ecd具有更高亲和力；以及
[2002]
d.重复步骤(a)-(c)，持续足以获得在ph 6.5或更小下以10-7
m或更小的kd结合至hvista-ecd的ab的轮数。
[2003]
191.一种用于改善结合至人vista细胞外结构域(hvista-ecd)的抗体(ab)的抗肿瘤功效的方法，所述方法包括：
[2004]
a.提供在ph 6.5或更小下以小于所需值的亲和力结合至hvista-ecd的ab；
[2005]
b.制备(a)的所述ab的变体的文库，其中每个变体包含用不同氨基酸残基(例如用谷氨酸、天冬氨酸或组氨酸残基)对所述ab的重链或轻链中的1至5个氨基酸残基的取代，其中所述1至5个氨基酸残基是与hvista-ecd的接触残基，例如氨基酸残基31、32、50、57、58、59、100或102中的一者或多者(seq id no：67、51或55中的编号)；
[2006]
c.选择(b)的变体的所述文库的在ph 6.5或更小下以10-7
m或更小的kd结合至hvista-ecd的ab；以及
[2007]
d.任选地在肿瘤模型中测试(c)的所述ab的抗肿瘤功效。
[2008]
192.一种用于改善结合至人vista细胞外结构域(ecd)的抗体的药物代谢动力学的方法，所述方法包括增强所述抗体在例如等于或低于ph 6.5的酸性条件下结合至人vista的能力。
[2009]
193.一种用于选择结合至人vista，并且具有延长的半衰期(良好药物代谢动力学性质)的抗体的方法，其中所述方法包括选择在例如等于或低于ph 6.5的酸性条件下结合至人vista的抗体。
[2010]
194.一种用于改善结合至人vista(hvista)的抗体的功效的方法，所述方法包括增加所述抗体的一个或多个vh cdr中天冬氨酸、谷氨酸和/或组氨酸残基的数目，以增强所述抗体在酸性ph下与hvista的结合。
[2011]
195.一种用于分离结合至人vista(hvista)，并且在人血液中具有长久半衰期，并且/或者刺激肿瘤环境中的t细胞的抗体的方法，所述方法包括筛选结合至hvista的抗体的文库中在酸性ph下而非在中性ph下结合的那些抗体。
[2012]
196.如实施方案183-195中的任一者所述的方法，所述方法包括反向选择在生理ph下结合的那些抗体。
[2013]
197.如实施方案183-196中的任一者所述的方法，所述方法还包括选择是vista拮
抗剂或vista激动剂的抗体。
[2014]
198.如实施方案183-197中的任一者所述的方法，所述方法包括选择抑制vista与vista共受体(例如psgl-1)之间的相互作用和/或vista与t细胞或髓单核细胞性细胞之间的相互作用的那些抗体。
[2015]
199.如实施方案183-198中的任一者所述的方法，所述方法还包括选择具有p1-068761或p1-068767的性质中的一者或多者的抗体。
[2016]
200.一种用于改善结合至人vista细胞外结构域(hvista-ecd)的抗体(ab)的抗肿瘤功效的方法，所述方法包括
[2017]
a.提供在ph 7.0下结合至hvista-ecd，但在ph 6.5下不显著结合至hvista-ecd的ab；
[2018]
b.用不同氨基酸残基取代所述ab的重链或轻链例如cdr中的1至5个氨基酸残基，其中例如所述1至5个氨基酸残基是与hvista-ecd的接触残基，例如氨基酸残基31、32、50、57、58、59、100或102中的一者或多者(seq id no：67、51或55中的编号)；
[2019]
c.确定相比于在ph 7.0下，在(b)中获得的ab在ph 6.5下是否对hvista-ecd具有更高亲和力，以及/或者确定在(b)中获得的ab相对于亲本抗体((a)的抗体)在ph 6.5下是否具有类似或更高亲和力，以及相对于(a)的所述抗体在ph 7.0下是否具有更低亲和力；以及
[2020]
d.重复步骤(a)-(c)，持续足以获得在ph 6.5或更小下以10-7
m或更小的kd结合至hvista-ecd，并且在ph 7.0或更大下以10-6
m或更大的kd结合至hvista-ecd的ab的轮数。
[2021]
201.一种检测样品中的vista的方法，所述方法包括使所述样品与实施方案1-163或206-212中的任一者所述的vista抗体接触。
[2022]
202.一种治疗受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用结合至人vista(hvista)，并且抑制hvista的活性(例如t细胞活化)的经分离抗体和pd1/pd-l1通路拮抗剂，此导致例如所述受试者的肿瘤中cd4 和cd8 t细胞的数目的增加。
[2023]
203.一种治疗受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用结合至人vista(hvista)，并且抑制hvista的活性(例如t细胞活化)的经分离抗体和pd1/pd-l1通路拮抗剂，此导致例如所述受试者的肿瘤中耗竭t细胞和/或表达pd-1、lag3和/或tim-3的t细胞的数目的降低。
[2024]
204.一种治疗受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用结合至人vista(hvista)，并且抑制hvista的活性(例如t细胞活化)的经分离抗体和pd1/pd-l1通路拮抗剂，此导致例如所述受试者的肿瘤中cd4 和cd8 t细胞的数目的增加以及例如所述受试者的肿瘤中耗竭t细胞和/或表达pd-1、lag3和/或tim-3的t细胞的数目的降低和/或本文所述的其他特征。
[2025]
205.如实施方案202-204中的任一者所述的方法，其中结合至hvista的所述抗体是本文所述的抗体，诸如实施方案1-163或206-212中的任一者所述的抗体。
[2026]
206.如实施方案1-205中的任一者所述的抗体、组合物或方法，其中所述抗体包含在表21中所示的hvista残基处与hvista的一个或多个(例如1-5、5-10、10-15、10-20或15-20个)相互作用。
[2027]
207.如实施方案1-206中的任一者所述的抗体、组合物或方法，其中所述抗体在位
置31、32、50、57、58、59、100或102中的一者或多者处包含谷氨酸、天冬氨酸或组氨酸，其中编号是根据seq id no：67，51和55中的编号。
[2028]
208.一种在6.5的ph下结合至人vista细胞外结构域，并且任选地在ph 7.0下不显著结合至人vista细胞外结构域的经分离抗体，其中所述抗体在位置31、32、50、57、58、59、100或102中的一者或多者处包含谷氨酸、天冬氨酸或组氨酸，其中编号是根据seq id no：67，51和55中的编号。
[2029]
209.如实施方案1-208中的任一者所述的抗体、组合物或方法，其中所述抗体不包含以下中的任一者的重链可变区：p1-069059、p1-069061、p1-069063、p1-069065、p1-069067、p1-069071、p1-069073、p1-069075、p1-069077、p1-068761、p1-068767、p1-068773、p1-068765、p1-061029、p1-068757、p1-068771、p1-068775、p1-068769、p1-068759、p1-068763、p1-061015、p1-068748、p1-068744、p1-068736、p1-068752、p1-068740、p1-068742、p1-068746、p1-068750、p1-068738、p1-068754、p1-069293、p1-069298、p1-069302、p1-069312、p1-069309、p1-069307、p1-070864、p1-070866、p1-070868、p1-070870、p1-070872、p1-070874、p1-070876、p1-070878、p1-070880、p1-070882、p1-070884、p1-070886、p1-070888、p1-070890、p1-070892、p1-070894、p1-070896、p1-070898、p1-070900、p1-070902、p1-070904、p1-070906、p1-070908、p1-070910、p1-070912、p1-070914、p1-070916、p1-070918、p1-070920、p1-070922、p1-070924、p1-070926、p1-070928、p1-070930、p1-070932、p1-068744_e31s、p1-68744_h50i、p1-68744_e59y、p1-068744_e100s、p1-068744_e102y、p1-068744_e31s_h50i、p1-068744_h50i_e59y、p1-068744_e59y_e100s、p1-068744_e100s_e102y、p1-068744_e31s_e102y p1-068744_e31s_e59y、p1-068744_e31s_e100s、p1-068744_h50i_e100s、p1-068744_h50i_e102y、p1-068744_e59y_e102y、p1-068748_h31s、p1-068748_h32y、p1-068748_d57k、p1-068748_d58y、p1-068748_d100s、p1-068748_h31s_h32y、p1-068748_h32y_d57k、p1-068748_d57k_d58y、p1-068748_d58y_d100s、p1-068748_h31s_d57k、p1-068748_h31s_d58y、p1-068748_h31s_d100s、p1-068748_h32y_d58y、p1-068748_h32y_d100s或p1-068748_d57k_d100s，或不包含国际公布wo2018/169993中公开的任何抗体的重链可变区。
[2030]
210.如实施方案1-209中的任一者所述的抗体、组合物或方法，其中所述抗体抑制hvista细胞外结构域(ecd)与psgl-1之间的相互作用。
[2031]
211.如实施方案1-210中的任一者所述的抗体、组合物或方法，其中所述抗体与本文所述的抗体诸如
‘
761和
‘
767竞争与hvista ecd的结合(例如使用本文所述的bli)，并且/或者所述抗体与本文所述的抗体诸如
‘
761和
‘
767通过相同的氨基酸残基结合至hvista ecd。
[2032]
212.如实施方案1-211中的任一者所述的抗体、组合物或方法，其中如通过x射线晶体照相术所测定，例如如本文中所测定，所述抗体与组氨酸三联体(成熟hvista的h121、122和123)相互作用。
[2033]
213.如实施方案1-212中的任一者所述的抗体、组合物或方法，其中所述抗体接触所述hvista ecd的seq id no：2的至少一个氨基酸残基y37、t39、r54、h65、l114、v116、s123和e124。
[2034]
214.如实施方案1-213中的任一者所述的抗体、组合物或方法，其中相较于髓样细
胞，相较于血液，以及/或者相较于肝、肺和脾细胞，所述抗体优先在具有mc38肿瘤的人vista敲入小鼠中的肿瘤组织中积累。
[2035]
215.如实施方案1-215中的任一者所述的抗体、组合物或方法，其中相较于髓样细胞，相较于血液，以及/或者相较于肝、肺和脾细胞，在施用所述抗体之后，所述抗体优先在患者的肿瘤中积累(例如比如通过施用经pet示踪剂标记的ab来检测)。
[2036]
216.一种本文所述的经分离抗体，所述经分离抗体在重链和/或轻链中包含1、2、3个或更多个种系回复突变。
[2037]
其他实施方案包括：
[2038]
1.一种用于鉴定在ph 6.5或更小下以10-7
m或更小的kd结合至hvista-ecd的ab的方法，所述方法包括使一种测试ab或多种测试ab与包含hvista-ecd或其片段的多肽在ph 6.5或更小下接触，所述片段包含hvista-ecd的igv结构域或包含seq id no：2的氨基酸20-95、20-70或35-70，以及选择以10-7
m或更小的kd结合至所述多肽的所述一种或多种测试ab。
[2039]
2.一种用于鉴定在ph 6.5或更小下以10-3
秒-1
或更小的k
解离
结合至hvista-ecd的ab的方法，所述方法包括使一种测试ab或多种测试ab与包含hvista-ecd或其片段的多肽在ph 6.5或更小下接触，所述片段包含hvista-ecd的igv结构域或包含seq id no：2的氨基酸20-95、20-70或35-70，以及选择以10-3
秒-1
或更小的k
解离
结合至所述多肽的所述一种或多种测试ab。
[2040]
3.一种用于鉴定在ph 6.5下以与在ph 7.0下类似的亲和力特异性结合至hvista-ecd的ab的方法，所述方法包括：
[2041]
a.使一种测试ab或多种测试ab在ph 6.5下与包含hvista-ecd或其片段的多肽接触，所述片段包含hvista-ecd的igv结构域或包含seq id no：2的氨基酸20-95、20-70或35-70；
[2042]
b.使所述一种测试ab或多种测试ab在ph 7.0下与(a)的所述多肽接触；以及
[2043]
c.如果测试ab在ph 6.5下和在ph 7.0下以10-7
m或更小的kd结合至所述多肽，那么选择所述测试ab。
[2044]
4.一种用于鉴定相比于在ph 7.0下，在ph 6.5下以更高亲和力结合至hvista-ecd的ab的方法，所述方法包括：
[2045]
a.使一种测试ab或多种测试ab在ph 6.5下与包含hvista-ecd或其片段的多肽接触，所述片段包含hvista-ecd的igv结构域或包含seq id no：2的氨基酸20-95、20-70或35-70；
[2046]
b.使所述一种测试ab或多种测试ab在ph 7.0下与(a)的所述多肽接触；以及
[2047]
c.如果相比于在ph 7.0下，测试ab在ph 6.5下以至多1/2的kd结合至所述多肽，那么选择所述测试ab。
[2048]
5.一种用于鉴定用于治疗癌症的特异性结合至hvista-ecd的ab的方法，所述方法包括
[2049]
a.诸如根据实施方案32-35所述的方法鉴定在ph 6.5或更小下特异性结合至hvista-ecd的ab；以及
[2050]
b.选择(a)的在肿瘤模型中触发或增强免疫应答或在ph 6.5或更小下抑制肿瘤生长的ab。
[2051]
6.如实施方案38所述的方法，其中步骤(b)包括测量t细胞活性。
[2052]
7.如实施方案38或39所述的方法，所述方法还包括测量所述ab的抗肿瘤作用。
[2053]
8.一种用于改善结合至hvista-ecd的ab的抗肿瘤功效的方法，所述方法包括
[2054]
a.提供在ph 6.5或更小下以小于所需值的亲和力，例如以10-7
m或更大例如10-6
m、10-5
m或更大的kd和/或10-2
秒-1
或更大的k
解离
结合至hvista-ecd的ab；
[2055]
b.用不同氨基酸残基替换所述ab的重链或轻链中的1至5个氨基酸残基，其中所述1至5个氨基酸残基是与hvista-ecd的接触残基；
[2056]
c.确定在(b)中获得的ab相对于(a)的所述ab在ph 6.5或更小下是否对hvista-ecd具有更高亲和力；以及
[2057]
d.重复步骤(a)-(c)，持续足以获得在ph 6.5或更小下以10-7
m或更小的kd结合至hvista-ecd的ab的轮数。
[2058]
9.一种用于改善结合至hvista-ecd的ab的抗肿瘤功效的方法，所述方法包括：
[2059]
a.提供在ph 6.5或更小下以小于所需值的亲和力，例如以10-7
m或更大例如10-6
m、10-5
m或更大的kd和/或10-2
秒-1
或更大的k
解离
结合至hvista-ecd的ab；
[2060]
b.制备(a)的所述ab的变体的文库，其中每个变体包含用不同氨基酸残基对所述ab的重链或轻链中的1至5个氨基酸残基的取代，其中所述1至5个氨基酸残基是与hvista-ecd的接触残基；
[2061]
c.选择(b)的变体的所述文库的在ph 6.5或更小下以10-7
m或更小的kd结合至hvista-ecd的ab；以及任选地，
[2062]
d.在肿瘤模型中测试(c)的所述ab的抗肿瘤功效。
[2063]
10.一种用于改善结合至人vista ecd的抗体的药物代谢动力学的方法，所述方法包括增强所述抗体在例如等于或低于ph 6.5的酸性条件下结合至人vista的能力。
[2064]
11.一种用于选择结合至人vista，并且具有延长的半衰期(良好药物代谢动力学性质)的抗体的方法，其中所述方法包括选择在例如等于或低于ph6.5的酸性条件下结合至人vista的抗体。
[2065]
以下进一步在权利要求中提供其他示例性实施方案。
[2066]
实施例
[2067]
以下讨论的实施例意图仅例示本发明，并且不应被视为以任何方式限制本发明。实施例不意图表示以下实验是进行的所有或仅有实验。已努力确保关于所用数值(例如数量、温度等)的准确性，但应考虑一些实验误差和偏差。除非另外指示，否则份是重量份，分子量是平均分子量，温度以摄氏度计，并且压力处于或接近大气压。
[2068]
实施例1：vista的细胞外结构域格外富含组氨酸
[2069]
这个实施例显示vista的细胞外结构域格外富含组氨酸残基，这些组氨酸残基是在进化上保守的，并且它们可促进涉及vista的受体-配体相互作用。
[2070]
从uniprot和swiss-prot数据库提取含有免疫球蛋白结构域的蛋白质的细胞外结构域(ecd)的氨基酸序列，并且分析组氨酸含量。图1a以图的形式描绘这个分析的结果。对于每种蛋白质，组氨酸残基的频率以所有细胞外结构域氨基酸残基的百分比形式绘制在y轴上，并且细胞外结构域氨基酸残基的总数绘制在x轴上。每个数据点的直径对应于每种蛋白质的细胞外结构域中组氨酸残基的总数。vista(经标注)在它的细胞外结构域中含有格
外高频率的组氨酸残基。
[2071]
接着评估vista中组氨酸残基的进化保守性。图1b显示比对人、食蟹猕猴和小鼠vista的排除信号肽(“sig”)、跨膜结构域(“tmd”)和细胞内结构域的氨基酸参考序列。在所有三个物种之间保守的组氨酸残基用粗体表示并加下划线。在人和食蟹猴vista之间保守的组氨酸残基用粗体表示而不加下划线。vista的细胞外结构域组氨酸残基中的许多是在进化上保守的，从而表明vista的高组氨酸含量的重要生物学作用。
[2072]
相对于pdb数据库中的可用解析结构，基于序列同源性分析创建hvista igv结构域的三维模型。图1c中所示的模型指示vista的ecd中的许多组氨酸暴露在分子的表面处，在表面处，它们可在配体结合中以及在抗体识别中起作用。组氨酸残基被描绘为球和棍。
[2073]
实施例2：组氨酸质子化可调控肿瘤和其他酸性微环境中的vista受体-配体衔接和免疫抑制活性
[2074]
这个实施例描述响应于生理相关酸性ph的组氨酸质子化，以及其中vista细胞外结构域组氨酸在酸性ph而非生理ph的情况下赋予反受体或配体选择性的模型。
[2075]
图2a显示组氨酸残基中吡咯铵基团(nh)的质子化的缺乏与存在之间的平衡。组氨酸在溶液中的pka是6.5，从而指示相比于在较高ph下，组氨酸残基在ph 6.5和更低下更可能是质子化的，因此带正电荷。由于质子化而在vista ecd的表面处正电荷增加可影响受体或配体结合以及vista结构和/或功能。因此，ph的变化还可改变抗体结合表位，并且/或者导致抗体亲和力变化。
[2076]
图2b显示其中vista选择性地在酸性ph下衔接psgl-1或其他反受体和配体(vista-r)的模型。在生理ph下，诸如在血液中，预期vista的ecd上的组氨酸残基是非质子化的。因此，在生理ph下，vista与psgl-1或其他反受体和配体的结合是微不足道的。相比之下，在倾向于具有酸性细胞外ph的位置诸如肿瘤微环境或炎症部位中，酸性ph可部分地或完全地驱动vista ecd组氨酸质子化，因此使得能够达成vista与psgl-1或其他反受体和配体的衔接。因此，在酸性ph范围下强烈结合至vista-ecd蛋白的抗体可更有效抑制肿瘤中的vista活性。
[2077]
实施例3：vista由肿瘤中的髓单核细胞性细胞表达
[2078]
这个实施例显示vista常由肿瘤中的髓单核细胞性细胞表达，所述髓单核细胞性细胞包括巨噬细胞、树突细胞和粒细胞。
[2079]
将手术切除的非小细胞肺癌、肾透明细胞癌、黑素瘤、结肠直肠癌和其他肿瘤样品在冰冷pbs中洗涤，切割成约15mm3大小的片块，并且悬浮于补充以2％热失活fbs和2mm edta(fisher scientific 15575020)的冰冷rpmi-1640培养基(fisher scientific目录号11875093)中。将每个样品转移至大间隙玻璃杜恩斯装置(dounce)(坦布鲁克组织研磨器(tenbroeck tissue grinder))中，并且研磨直至组织片块从视觉上看得到解离。将悬浮液经70μm尼龙网过滤，并且离心。将上清液丢弃，并且在室温下将细胞集结块再悬浮于补充以0.1％牛血清白蛋白和250mg/ml经无菌过滤的dna酶1(ii级，来自牛胰腺，roche目录号10104159001)的室温pbs中，持续3分钟。接着将细胞在冰冷的经补充rpmi中洗涤，并且再悬浮于冰冷pbs中。添加细胞活力染料，并且在黑暗中在冰上孵育细胞。在20分钟之后，通过添加4％正常大鼠血清、4％正常小鼠血清、20％来自ab血浆的人血清和1∶125稀释的人trustain fcx
tm
(biolegend目录号422302)来封闭非特异性抗体染色。在黑暗中在冰上将细
胞用悬浮于明亮染色缓冲液(bdbiosciences目录号562794)中的经荧光团缀合的抗hla-dr抗体(bd biosciences目录号564040)、抗cd8抗体(fisher scientific目录号46-0087-42)、抗cd14抗体(biolegend目录号325620)、抗cd45抗体(biolegend目录号304017)、抗cd4抗体(bd biosciences目录号563875)、抗cd11c抗体(bd biosciences目录号744439)、抗cd15抗体(bd biosciences目录号563142)、抗pd-1抗体(bd biosciences目录号565299)、抗cd3抗体(bd biosciences目录号565515)、抗cd56抗体(fisher scientific目录号61-0567-42)、抗cd19抗体(bd biosciences目录号564977)和抗vista抗体(缀合于alexafluor
tm 647(fisher scientific目录号a20186)的vista抗体3)染色30分钟。将染色的细胞在冰冷pbs中洗涤，固定(fisher scientific目录号00-5523-00)，并且在流式细胞仪上进行获取。使用flowjo
tm
软件(bd biosciences)分析数据。如图3中所示，vista细胞表面表达在巨噬细胞和粒细胞上是最高的，在树突细胞上是中等的，并且在t细胞、天然杀伤细胞和b细胞上是较低的。
[2080]
实施例4：vista细胞结合展现酸性ph选择性
[2081]
这个实施例显示相比于在中性或生理ph下，多聚化人vista ecd在酸性ph下更高效结合至经刺激人cd4 t细胞和人外周血单个核细胞，并且这个结合可由抗人vista阻断抗体阻断。还显示了酸性ph选择性二聚化小鼠vista ecd与小鼠脾细胞的结合。
[2082]
通过rosettesep
tm
(stemcell目录号15062)从健康供者血液富集人cd4 t细胞，并且在补充以10％热失活fbs、glutamax
tm
(fisher scientific目录号35050061)、非必需氨基酸(fisher scientific 11140050)、丙酮酸钠(fisher scientific目录号11360070)和2-巯基乙醇(fisher scientific 21985023)的rpmi-1640中用人t活化cd3/cd28dynabeads
tm
(fisher scientific目录号111.32d)和重组人il-2(peprotech目录号200-02)在体外刺激约四天。在室温下将活化的cd4 t细胞用单生物素化hvista ecd分子(phe 33-ala 194(登记号aah20568)-多组氨酸；acrobiosystems，inc.b75-h82f3)染色30分钟，所述单生物素化hvista ecd分子以28：1摩尔比装载至藻红素(pe)缀合的链霉亲和素右旋糖酐聚体(目录号dx01-pe)上，稀释至用mm mes(sigma，1317-100ml)酸化至各种ph的汉克氏缓冲盐溶液(hank’s buffered salt solution，hbss，fisher scientific目录号14025134)中。作为对照，将活化的cd4 t细胞用未装载以hvista的经pe缀合的链霉亲和素右旋糖酐聚体染色。将染色的细胞用hbss mes洗涤，并且在流式细胞仪上进行获取。使用flowjo
tm
软件(bd biosciences)分析数据。图4a中描绘的结果显示在ph＞6.5下，相比于对照，hvista不更好地结合cd4 t细胞。相比之下，在ph＜6.5下，hvista展现逐渐增强的与cd4 t细胞的结合。左侧，从深灰色至浅灰色，填充直方图描绘在ph 7.0、6.5、6.4、6.3、6.1和6.0下的结合。一些直方图用它们的相应ph加以标注。在ph 6.0下非vista对照多聚体结合显示为未填充直方图。右侧是在各种ph下用经hvista装载的右旋糖酐聚体(圆圈)或用非装载右旋糖酐聚体(三角)染色的cd4 t细胞的图示pe平均荧光强度(mfi)。
[2083]
通过菲科尔(ficoll)梯度离心(ficoll-paque plus，ge life sciences目录号17144003)从健康供者血液富集外周血单个核细胞(pbmc)，并且如上所述用在hbss mes缓冲液中稀释的经hvista装载和经荧光团缀合的右旋糖酐聚体(也被称为多聚体)染色。图4b显示从深灰色至浅灰色描绘在ph 6.0下与cd19 b细胞、cd4 t细胞、cd8 t细胞、cd56 nk细胞和cd14 单核细胞的结合的填充直方图。未填充实线边界和虚线边界直方图分别描
绘在ph 7.4下与总pbmc淋巴细胞和单核细胞的结合。图4f和图4g显示vista结合至单核细胞与嗜中性粒细胞两者，并且相比于在ph 7.4下，在ph 6.0下更强烈地达成此举。结果显示hvista可在酸性ph下结合许多白细胞，但在生理ph下不显著结合许多白细胞。
[2084]
在经滴定抗人vista抗体或同种型匹配的非vista特异性抗体存在下在ph 6下用hvista多聚体染色活化的人cd4 t细胞。图4c中图示的结果显示相对于抗体浓度的vista多聚体mfi。抗hvista抗体(vista抗体3；方块)而非非vista特异性对照抗体(圆圈)以浓度依赖性方式阻断hvista与活化的cd4 t细胞的结合。未用经hvista装载的多聚体染色的cd4 t细胞的pe mfi作为对照来包括(单一三角)。
[2085]
图4d显示在ph 6.0下对被转染来表达全长人psgl-1(seq id no：3；核酸nm_003006.4)的硫酸乙酰肝素突变中国仓鼠卵巢(cho)细胞(株系pgsd-677，美国典型培养物保藏中心)的vista多聚体染色的代表性二维流式细胞计量术图。在存在或不存在经滴定抗vista阻断抗体(mab 3)下进行染色。未用vista多聚体染色的细胞作为对照加以显示。psgl-1抗体(bd biosciences目录号562758)染色绘制在y轴上，并且vista多聚体染色绘制在x轴上。
[2086]
从c57bl6/j小鼠(jackson laboratory目录号000664)收集脾细胞，并且在ph 6.0或7.4下依次用mvista ecd/人igg fc(可结晶片段)嵌合融合蛋白和荧光团缀合的抗人igg fc二级抗体(jackson immunoresearch目录号109-065-098)染色。通过图4e中的直方图描绘的结果显示相比于在生理ph(约ph 7.4)下，mvista在ph 6.0下更高效结合鼠脾细胞。从深灰色至浅灰色，填充直方图描绘在ph 6.0下与cd8 t细胞、cd11b 髓样细胞和cd4 t细胞的结合。未填充直方图描绘在ph 7.4下与总脾细胞的结合。
[2087]
实施例5：vista选择性地在酸性ph下介导细胞：细胞粘附和免疫抑制
[2088]
这个实施例显示相比于在中性或生理ph下，vista在酸性ph下更强力介导细胞：细胞粘附，并且抑制t细胞活化。
[2089]
建立了一种基于酸性ph可相容的流式细胞计量术的细胞/细胞接合测定。将异位表达全长人vista或载体的293t细胞(永生化人胚肾细胞系，atcc目录号crl-3216)用cfse(羧基荧光素丁二酰亚胺酯；fisher scientific目录号c34554)标记。将cho细胞用celltrace
tm far red(fisher scientific目录号c34564)标记。接着将载体或vista 293t细胞与cho细胞以1∶1比率在ph 7.0或ph 6.0缓冲液中混合，并且在室温下孵育1小时。通过流式细胞计量术评估cho和293t细胞/细胞接合物的形成。图5a至图5b中所示的结果证明vista表达性293t细胞优先在酸性ph下粘附于cho细胞，并且包括抗vista阻断抗体(vista mab 3；白色棒条)会抑制vista介导的细胞/细胞粘附。
[2090]
建立了一种酸性ph可相容的t细胞抑制测定。将表达nfkb启动子驱动的荧光素酶报告体的jurkat细胞(永生化人t细胞系，atcc目录号tib-152)与异位表达全长人vista和抗人t细胞受体激动剂抗体克隆okt3的单链可变片段的293t细胞(永生化人胚肾细胞系，atcc目录号crl-3216)以10∶1 jurkat：293t细胞比率在各种ph的hbss mes缓冲液中共培养。将抗vista阻断抗体(vista mab 3)或同种型匹配的非vista特异性对照抗体以10μg/ml添加至共培养物中。在孵育之后，通过测量荧光素酶活性(1秒间隔，promega目录号g7940)定量jurkat t细胞活化。结果显示于图5c至图5d中。图5c显示在不同ph下用抗vista(方块)或对照抗体(圆圈)处理的jurkat中的荧光素酶单位的图。图5d显示在测试的每种ph下抗
vista抗体处理的共培养物中的荧光素酶信号除以对照抗体处理的共培养物中的荧光素酶信号的图。结果显示vista介导的t细胞抑制在酸性ph下是最强力的。
[2091]
实施例6：vista通过细胞内再循环内体进行运输
[2092]
这个实施例显示vista可见于细胞内内体特别是rab11 再循环内体中，并且可通过内体运输再循环至细胞表面以及从细胞表面再循环。抗vista抗体在酸性ph下结合vista所具有的强度会影响它在内体运输期间保持结合于vista的能力。
[2093]
通过磁激活的细胞分选从pbmc分离单核细胞。接着将单核细胞与293t细胞两者固定在4％多聚甲醛中，并且针对rab5、rab7或rab11以及用抗vista抗体或对照抗体进行细胞内染色。是与抗vista抗体具有相同同种型的非vista结合抗体的对照抗体(“cab”)不以可检测方式结合表达人vista的单核细胞或293t细胞。抗vista抗体和对照抗体直接用alexa488标记。使用alexa594抗兔ig二级抗体检测rab抗体。进行hoescht 33342染色以鉴定细胞核。使用旋转盘共焦显微镜捕集图像。图6a显示表达人vista的293t细胞内vista、rab5(早期内体标志物)、rab7(晚期内体标志物)和rab11(再循环内体标志物)的共定位。图6b显示人单核细胞内vista和rab11的共定位。细胞内vista与rab11 再循环内体共定位。
[2094]
为评估vista通过内体再循环的能力，用三种在生理和酸性ph下具有不同vista结合性质的抗hvista抗体(vista mab 1、2和3)进行内吞溶酶体依赖性抗体药物缀合物杀灭测定。首先进行spr测定以比较在ph 7.4、6.7和6.0下所有三种vista抗体的hvista结合概况。将vista抗体捕集在含有固定化蛋白a的t100(ge healthcare)cm5生物传感器上，接着在37℃下使处于在所指示ph下的pbst运行缓冲液中的100nm hvista-ecd(seq id no：1的氨基酸32-193，具有7
×
his尾部，即afkvatpysl yvcpegqnvt ltcrllgpvd kghdvtfykt wyrssrgevq tcserrpirn ltfqdlhlhh gghqaantsh dlaqrhgles asdhhgnfsi tmrnltllds glycclvvei rhhhsehrvh gamelqvqtg kdapsncvvy psssqeseni tahhhhhhh；seq id no：325)流动。将减去参考的传感图以
‘
结合’报告点作归一化，并且绘图。vista抗体3“mab 3”(图6c，上部)展现在酸性ph下最大程度的vista结合损害，继之以仅受中度损害的vista抗体2“mab 2”(图6c，中部)。vista抗体1“mab 1”在酸性和生理ph条件下维持强烈vista结合(图6c，下部)。
[2095]
如下进行内吞溶酶体依赖性抗体药物缀合物杀灭测定。将内源性表达人vista的aml3细胞(永生化人单核细胞细胞系，atcc crl-9589)与经滴定抗vista抗体或非vista特异性对照抗体和缀合于组织蛋白酶b敏感性接头和细胞毒性微管溶素(tubulysin)有效载荷的抗人igg二级抗体一起培养。因为组织蛋白酶b主要在晚期内体和溶酶体中具有活性，所以通过早期内体和再循环内体与vista一起再循环的抗vista抗体将经受低水平的接头裂解，以及因此低水平的细胞毒性有效载荷释放和细胞死亡。在酸性内体中变得从vista解离，并且分选至晚期内体和溶酶体中的抗vista抗体将经受较高水平的接头裂解。在培养五天之后通过cell titer(promega目录号g7573)测量细胞活力。图6d显示这个测定的结果，其中aml3活力(cell titer glo)绘制在y轴上，并且初级抗体浓度绘制在x轴上。初级抗体的计算ec50：vista抗体1，倒三角，0.485μg/ml；vista抗体2，圆圈，0.092μg/ml；vista抗体3，方块，0.006μg/ml；对照，三角，1.085μg/ml。抗体效能与抗vista抗体在酸性ph下的结合逆相关。
[2096]
为确认在酸性ph下的结合导致效能差异，对vista抗体3进行亲和力优化，以致它
在酸性ph下结合vista的能力得到改善。图6e显示使用对于图6c所述的测定条件比较vista抗体3与这个变体vista抗体3c的hvista抗体结合概况的spr测定。vista抗体3再次展现在酸性ph下的vista结合损害，而变异vista抗体3c展现在酸性和生理ph下类似的vista结合。图6f显示vista抗体3c(菱形)在对于图6d所述的杀灭测定中的活性。相比于原始抗体的效能，vista抗体3的酸性ph优化变体展现1/31的效能，从而指示在酸性ph下受损的抗vista抗体结合导致在vista再循环期间抗体结合的损失。
[2097]
基于这些发现，提出了一种再循环模型，其中vista通过早期内体和再循环内体再循环至细胞表面以及从细胞表面再循环。这个模型描绘于图6g中。抗vista抗体可通过这些内体与vista一起再循环，从而维持靶标衔接。然而，在酸性ph下具有受损的vista结合的vista抗体，特别是在酸性ph下具有快速解离速率的那些，可在再循环期间从vista解离，并且变得在细胞内部被圈闭或降解，从而导致不良靶标衔接和循环抗体的连续消耗。相比之下，在酸性ph下结合并保持结合于vista的抗体可维持较高水平的靶标衔接，特别是在酸性微环境诸如肿瘤中，并且展现较长的体内平均滞留时间。
[2098]
实施例7：在生理ph下缺乏结合的vista抗体的优越性
[2099]
发明人已显示vista是一种酸性ph选择性免疫受体，从而证明用在酸性ph下良好结合的抗体靶向vista的重要性和效用。另外，在生理ph下不结合或微不足道地结合至vista的抗体由于若干原因而是有利的。首先，由于vista在循环髓单核细胞性细胞特别是单核细胞和嗜中性粒细胞上的表达相对充足，所以在生理ph下结合vista的抗体在血液中经受高水平的靶标介导的药物处置(tmdd)。vista通过细胞内内体进行再循环的倾向使这个效应加剧，从而导致抗vista抗体内化和降解。这个次级效应对于在酸性ph下具有受损的结合的抗体来说是特别有问题的，如可对于结合vista的富含组氨酸的配体界面的抗体所观察。两种效应均将降低循环中抗vista抗体的量，从而降低将到达肿瘤的抗体量以及因此抗体的预定生物学活性。其次，在生理ph下结合vista，并且具有效应子功能诸如诱导抗体依赖性细胞细胞毒性(adcc)、抗体依赖性细胞吞噬(adcp)或递送免疫调节性有效载荷的抗体将使循环髓单核细胞性细胞经受这些效应子功能，从而潜在地导致不合需要的作用，诸如循环嗜中性粒细胞消减或活化。因此，发明人发现在酸性ph下结合至huvista，但在生理ph下微不足道地结合至huvista的抗体具有双重优势，即(1)更好地暴露在相关部位诸如肿瘤中，和(2)在具有效应子功能诸如adcc、adcp或递送免疫调节性有效载荷的抗体的情况下，毒性降低。另外，因为vista自身是一种酸性ph选择性免疫受体，所以在生理ph下阻断vista的配体界面对于调节vista受体-配体活性可能是不必要的。因此，如下所述产生了在酸性ph下结合至huvista，但在生理ph下不显著结合至huvista的抗体。
[2100]
实施例8：相比于生理ph优先在酸性ph下结合至人vista的抗vista抗体的分离
[2101]
这个实施例描述相对于中性或生理ph，优先在低(酸性)ph下结合至人vista的抗体的产生。
[2102]
如下构建和筛选抗体的抗vista抗原结合片段的文库。使用从用全长人vista(hvista)免疫的humab小鼠分离的遗传物质创建抗体文库。将这些抗体形式化成scfv，并且通过mrna展示(xu l等人(2002)chemistry&biology 9：933；roberts rw和jw szostak(1997)proc.natl.acad.sci.usa 94：12297；kurz等人(2000)nucleic acids res.28(18)：e83)针对在低ph(ph 6.0)下的全长hvista结合进行选择。通过下一代测序(ngs)分析选择
输出物，并且鉴定显示在低ph下的vista结合方面强化的文库成员，重新格式化成igg 1.3(由具有氨基酸突变l234a、l235e和g237a的igg1 fc组成的无效应子igg1恒定区)，并且通过spr关于与vista的结合加以筛选。
[2103]
使用t200仪器(ge healthcare)进行表面等离子体共振(spr)分析以测量vista ab在酸性和生理ph下的缔合速率(定义为ka或k
缔合
，1/ms单位)、解离速率(定义为kd或k
解离
，s-1
单位)和亲和常数(定义为kd，m单位)。将蛋白a(fisher scientific目录号21181)在ph 4.5 10mm乙酸钠中稀释至20ug/ml，并且遵循制造商的胺偶联方案(ge healthcare)固定至cm5生物传感器的流动池上，以每个流动池6,000ru固定密度的蛋白a为目标。使用在ph 7.4和6.0下的pbst(137mm氯化钠、2.7mm氯化钾、10mm磷酸盐缓冲剂、0.05％吐温20(tween 20))运行缓冲液在37℃下进行spr实验。将抗体在ph 7.4 pbst中稀释至20nm，并且以5ul/min持续50秒穿过活性生物传感器流动池进行捕集。在ph 7.4和6.0运行缓冲液中制备50-0.2nm浓度系列的单价hvista-ecd(seq id no：325)，并且以40ul/min在捕集的抗体上注射以测量缔合和解离。两次15秒注射ph 1.510mm甘氨酸用于在测定循环之间再生蛋白a捕集表面。从减去参考流动池和0nm空白的传感图获得速率常数ka(k
缔合
)和kd(k
解离
)，并且在t200评估软件v.2.0中相对于1∶1结合模型加以拟合。对于每种vista抗体，计算在ph 6下的k
解离
/在ph 7.4下的k
解离
的比率以鉴定展现在酸性ph下缓慢解离速率和在生理ph下快速解离速率的抗体。
[2104]
重新格式化成igg1.3抗体的六种抗体在ph 6与ph 7.4两者下显示接近相等的亲和力。特别地，相比于在ph 7.4下，两种抗体在ph 6.0下具有更慢的解离速率(即相比于ph 6.0，在ph 7.4下的k
解离
更快)。这两种huvista抗体的可变区被称为p1-061015和p1-061029，并且包含这些可变区并形式化成igg1.3抗体的抗体分别被称为p1-061015.igg1.3和p1-061029.igg1.3。p1-061015.igg1.3和p1-061029.igg1.3的k
解离
速率提供在表1中。
[2105]
表1：所选抗体在ph 6.0和ph 7.0下的k
解离
[2106]
抗体名称ph 6k
解离
(s-1
)ph 7k
解离
(s-1
)ph 6/ph 7k
解离
p1-061015.igg1.31.4
×
10-3
2.3
×
10-3
0.6p1-061029.igg1.34.8
×
10-3
9.1
×
10-3
0.5
[2107]
p1-061015和p1-061029的重链和轻链cdr1、cdr2和cdr3序列提供在下表2中，并且还显示于在本公开的实施例章节之后的序列表中。
[2108]
表2：相比于ph 7.4优先在ph 6.0下结合至huvista的huvista抗体的氨基酸序列
[2109][2110]
实施例9：对p1-061015和p1-061029抗vista ab的进一步工程改造以开发酸性ph选择性抗体
[2111]
这个实施例描述对在实施例2中鉴定的可变区p1-061015和p1-061029的进一步工程改造以获得具有更高的k
解离
比率的抗huvista可变区，所述比率是在ph 6.0下的结合相对于ph 7.4的结合来说的。
[2112]
通过分别在p1-061015和p1-061029的vh cdr中引入特定突变来构建两个文库。文库仅允许最可能改善在低ph下的结合的氨基酸取代，即天冬氨酸、谷氨酸和组氨酸。文库还允许每个cdr中的单一和双重氨基酸取代，以及cdr间的重组(每个链最多6个氨基酸取代)。图7a显示引入至p1-061029的重链cdr3氨基酸序列中以形成p1-061029文库的突变。该图指示特定序列被排除以避免引入不利因素(例如dg)。
[2113]
通过酵母表面展示，以若干轮在ph 6.0下与全长hvista的结合来筛选’029和
‘
015文库。通过在正性(ph 6.0下与huvista的结合)与负性(ph 7.4下与huvista的结合)(显示于图7b中)选择之间切换进行更多轮选择，其中在负性选择轮中收集在ph 7.4下不结合至vista的文库成员。通过ngs分析选择输出物。通过流式细胞计量术分析在第9轮选择之后在ph 6.0下结合于huvista的’029文库成员在ph 6.0和ph 7.4下与人vista的结合。图7c显示代表性二维流式细胞计量术图，其显示在9轮选择之后的变体池。vista结合绘制在y轴上，并且变异抗体表达绘制在x轴上。显示了在各种抗体浓度和ph下的结合数据。结果证明与人vista的极其强烈的ph 6选择性结合，特别是在20nm下。
[2114]
使用不同方法从
‘
029文库分离
‘
029的额外子代克隆。一些克隆与通过第一方法鉴
定的那些克隆相同，并且分离了九种额外克隆。
[2115]
将选择用于进一步分析的从
‘
029文库分离的19种克隆重新格式化成igg1.3抗体。这些克隆的重链cdr相对于
‘
029vh cdr的氨基酸差异显示于表5中。
[2116]
表5：源于
‘
029亲本抗体的抗体的vh cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(由下划线分隔)
[2117][2118]
通过表面等离子体共振(spr)测量格式化成igg1.3抗体的
‘
029子代克隆中的每一者和亲本
‘
029抗体的若干制剂在ph 6.0和7.4下与人vista的结合。使用t100仪器(ge healthcare)进行spr分析以测量vista ab在酸性和中性ph下的k解离和kd结合亲和力测量结果。将蛋白a(thermofisher scientific目录号21181)在ph 4.510mm乙酸钠中稀释至20ug/ml，并且遵循制造商的胺偶联方案(ge healthcare)固定至cm5生物传感器的流动池上，以每个流动池2,000ru固定密度的蛋白a为目标。使用在ph 7.4和6.0下的pbst(137mm氯化钠、2.7mm氯化钾、10mm磷酸盐缓冲剂、0.05％20)运行缓冲液在37℃下进行spr实验。将抗体在ph 7.4 pbst中稀释至25nm，并且以5ul/min持续60秒穿过活性生物传感器流动池进行捕集。在ph 7.4和6.0运行缓冲液中制备50-5nm浓度系列的单价hvista-ecd(seq id no：325)，并且以40ul/min在捕集的抗体上注射以测量缔合和解离。两次15秒注射ph 1.5 10mm甘氨酸用于在测定循环之间再生蛋白a捕集表面。从减去参考流动池和
0nm空白的传感图获得速率常数ka(k
缔合
)和kd(k
解离
)，并且在t200评估软件v.2.0中相对于1∶1结合模型加以拟合。亲和常数kd计算为每种vista抗体的速率常数k
解离
/k
缔合
的比率。
[2119]
最大(或幅度)人vista结合响应定义为每种抗体的在50nm vista注射结束时的减去参考的
‘
结合’报告点响应，并且以响应单位(ru)报告。对每种抗体的最大人vista结合响应(ru)绘制在图7d中。绘制了平均结合响应(在两个至四个重复抗体之间)，并且误差棒代表标准偏差。结果指示
‘
029的所选子代克隆在ph 6.0下而非在ph 7.4下结合至hvista(除亲本
‘
029克隆之外，代表在ph 7.4下的结合的空圆圈全都位于图的下部)。
[2120]
使用上述方法通过spr测定
‘
029和它的子代的在ph 6.0下的k
解离
速率，并且表示在图7e中。图中的虚线代表
‘
029的k
解离
速率，并且相对于亲本
‘
029抗体的k
解离
速率，在虚线的左侧的克隆在ph 6.0下具有更慢的k
解离
速率，而相对于亲本
‘
029抗体的k
解离
速率，在右侧的那些在ph 6.0下具有更快的k
解离
速率。
[2121]
在中性和酸性ph下与
‘
029、
‘
761和
‘
767抗体的代表性hvistaspr结合传感图显示于图7f中。绘制了减去参考的50nm和5nm huvista传感图。在中性ph下，对于
‘
761和
‘
767观察到＜10ru vista结合信号，因此，为了充分测量和比较
‘
761和
‘
767与
‘
029的k
解离
和kd，需要在生理ph下利用μm vista浓度的spr动力学测定。
[2122]
对于这个测定，将
‘
029、
‘
761和
‘
767重新格式化成higg1f同种型，并且以标准higg1f形式以及以higg1f无岩藻糖基化形式表达以与higg1.3ffc进行比较。使用t100仪器(ge healthcare)进行spr动力学测定以测量vista ab在酸性和生理ph下的k解离和kd结合亲和力测量结果。将蛋白a(thermofisher scientific目录号21181)在ph 4.5 10mm乙酸钠中稀释至20μg/ml，并且遵循制造商的胺偶联方案(ge healthcare)固定至cm5生物传感器的流动池上，以每个流动池2,000ru固定密度的蛋白a为目标。使用在ph 7.4和6.0下的pbst(137mm氯化钠、2.7mm氯化钾、10mm磷酸盐缓冲剂、0.05％吐温20)运行缓冲液在37℃下进行spr实验。将抗体在ph 7.4pbst中稀释至25nm，并且以5ul/min持续45秒穿过活性生物传感器流动池进行捕集。在运行缓冲液中制备1600-0.78nm(ph 7.4)和100-0.78nm(ph 6.0)浓度系列的单价hvista-ecd(seq id no：325)，并且以40ul/min在捕集的抗体上注射以测量缔合和解离。两次15秒注射ph 1.5 10mm甘氨酸用于在测定循环之间再生蛋白a捕集表面。从减去参考流动池和0nm空白的传感图获得速率常数ka(k
缔合
)和kd(k
解离
)，并且在t200评估软件v.2.0中相对于1∶1结合模型加以拟合。亲和常数kd计算为每种vista抗体的速率常数k
解离
/k
缔合
的比率。计算在ph 7.4/ph 6.0下k
解离
和kd的比率以比较相对于生理ph，在酸性ph下的解离速率和亲和力改善。尽管先前不能够使用50nm hvista测定
‘
761和
‘
767的中性ph结合速率常数(图7d和图7f)，但将中性ph vista浓度范围增加至1.6μm导致这些克隆具有吻合1∶1结合模型的结合响应(＞10ru)。这些酸性选择性vista抗体的动力学数据显示于表6中。
‘
029亲本在两种ph下展现相等的k
解离
，而
‘
761和
‘
767展现在k
解离
方面相比于ph 7.4在ph 6下超过10倍的选择性，以及在kd方面相比于ph 7.4在ph 6下超过2000倍的选择性。人vista结合速率常数在higg1.3f、higg1f和无岩藻糖基化higg1f同种型变体之间是守恒的。
[2123]
表6：vista抗体的如通过spr测定的结合特征
[2124][2125][2126]
使用t100仪器(ge healthcare)在ph 7.4与ph 6.0之间的ph值下即在ph 6.9和ph 6.45下测量p1-061029(
“‘
029”)、p1-068761(
“‘
761”)和p1-068767(
“‘
767”)(呈igg1.3抗体形式)的人vista结合动力学。将蛋白a(thermofisher scientific目录号21181)在ph 4.5 10mm乙酸钠中稀释至20ug/ml，并且遵循制造商的胺偶联方案(ge healthcare)固定至cm5生物传感器的流动池上，以每个流动池2,000ru固定密度的蛋白a为目标。使用在ph 7.4、6.9、6.45和6.0下的pbst(137mm氯化钠、2.7mm氯化钾、10mm磷酸盐缓冲剂、0.05％吐温20)运行缓冲液在37℃下进行测定。将抗体在ph 7.4 pbst中稀释至25nm，并且以5ul/min持续45秒穿过活性生物传感器流动池进行捕集。在ph 7.4、6.9、6.45和6.0运行缓冲液中制备100-0.78nm浓度系列的单价hvista-ecd(seq id no：325)，并且以40ul/min在捕集的抗体上注射以测量缔合和解离。两次15秒注射ph 1.5 10mm甘氨酸用于在测定循环之间再生蛋白a捕集表面。从减去参考流动池和0nm空白的传感图获得速率常数ka(k
缔合
)和kd(k
解离
)，并且在t200评估软件v.2.0中相对于1∶1结合模型加以拟合。亲和常数kd计算为每种vista抗体的速率常数k
解离
/k
缔合
的比率。计算在每种ph相对于ph 6.0下k
off
和kd的比率以评估vista k
解离
和kd如何随着缓冲液ph向生理ph转变而变化，并且显示于表7中。
‘
029亲本在测试的每种ph下展现一致的k
解离
，而相较于ph 6.0，
‘
761和
‘
767子代在ph 6.9下展现至少10倍的更快vista k
解离
和100倍的更弱vista kd。随着缓冲液ph从酸性ph向生理ph转变，
‘
761和
‘
767的vista k
解离
与kd两者均变弱。
‘
761和
‘
767的用于比较的生理ph
数据从表7进行参考，并且以星号(*)指示。
[2127]
表7：
‘
029、
‘
761和
‘
767抗体在不同ph值下的动力学结合特征
[2128][2129]
表7中的数据指示相较于ph 6.0，在ph 6.45下，
‘
761和
‘
767与hvista的结合的亲和力是至多1/10；相较于ph 6.0，在ph 6.9下，
‘
761和
‘
767与hvista的结合的亲和力是至多1/100；并且相较于ph 6.0，在ph 7.4下，
‘
761和
‘
767与hvista的结合的亲和力是至多1/1000。
[2130]
‘
015文库也显示略微偏好与vista的ph 6选择性结合。子代克隆相对于
‘
015 vh cdr的氨基酸差异显示于表8中。使用以上对于
‘
029分析所述的相同方法，通过spr测量
‘
015子代克隆中的每一者和亲本
‘
015(全都呈igg1.3抗体形式)的若干制剂在ph 6.0和7.4下与人vista的结合，并且显示于表8中。
[2131]
表8：源于
‘
015亲本抗体的抗体的vh cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(由下划线分隔)
[2132][2133]
如通过spr测定的
‘
029和’015以及它们的子代克隆在ph 6.0和7.4下与huvista的结合的动力学的概述显示于表9和表10中。
[2134]
[2135]
[2136][2137]
因此，鉴定了相较于
‘
029亲本，在ph 6.0下维持或改善关于vista-ecd的k
解离
，并且还在生理ph下显示更弱的k
解离
或与vista的结合的损失的若干
‘
029子代克隆。
‘
015子代展现
与vista-ecd的酸性ph选择性结合，在中性ph下未检测到与vista的结合，但相较于
‘
015亲本，测定的所有
‘
015子代都在ph 6.0下产生更快的k
解离
。
[2138]
实施例10：对p1-061015子代p1-068744和p1-068748重链的进一步工程改造
[2139]
为进一步测试
‘
015子代p1-068744和p1-068748的ph选择性，使
‘
744和
‘
748抗体中的每一者的重链cdr内的特定氨基酸选择性地回复成亲本p1-061015氨基酸残基。下表显示
‘
744和
‘
748子代中的每一者的细节以及它们的cdr是如何从它们的亲本抗体的那些cdr变化的。
[2140]
如下表11中所示，p1-068744重链与它的亲本抗体p1-061015的重链进行比较(比较seq id no：95和103)，其中p1-068744在重链cdr中的特定位置处含有若干碱性残基。这些是在cdr1中的位置31处的e残基、在cdr2中的位置50处的h残基、在cdr2的位置60处的e(这个变化的回复在本文中被称为e59y-参见下表)、在cdr3中的位置104处的e(这个变化的回复在本文中被称为e100s-参见下表)和在cdr3的位置110(cdr3的末尾位置)处的e(这个变化的回复在本文中被称为e102y)。
[2141]
如下表12中所示，p1-068748重链与抗体p1-061015的重链进行比较(并且比较seq id no.95和99)，其中它也在重链cdr中含有若干碱性残基。具体来说，在cdr1的位置31和32处的h残基，在cdr2的位置58和59处的d残基(然而，回复体在本文中被称为d57k和d58y)，以及在cdr3的位置104处的d残基(这个变化的回复体在本文中被称为d100s)。
[2142]
4.5 10mm乙酸钠中稀释至20μg/ml，并且遵循制造商的胺偶联方案(ge healthcare)固定至cm5生物传感器的流动池上，以每个流动池2,000ru固定密度的蛋白a为目标。使用在ph 7.4、6.7和6.0下的pbst(137mm氯化钠、2.7mm氯化钾、10mm磷酸盐缓冲剂、0.05％吐温20)运行缓冲液在37℃下进行测定。将抗体在ph 7.4 pbst中稀释至25nm，并且以5μl/min持续40秒穿过活性生物传感器流动池进行捕集。在ph 7.4、6.7和6.0运行缓冲液中制备100-10nm浓度系列的单价hvista-ecd(seq id no：325)，并且以40μl/min在捕集的抗体上注射以测量缔合和解离。两次15秒注射ph 1.5 10mm甘氨酸用于在测定循环之间再生蛋白a捕集表面。从减去参考流动池和0nm空白的传感图获得速率常数ka(k缔合)和kd(k解离)，并且在t200评估软件v.2.0中相对于1∶1结合模型加以拟合。
[2145]
亲和常数kd计算为每种vista抗体的速率常数k
解离
/k
缔合
的比率。计算r最大％以比较ph影响抗体对vista的结合能力的程度，并且代表相对于预期最大vista结合响应的测量最大vista结合响应。r最大％定义为每种抗体的在100nm vista注射结束时的减去参考的
‘
结合’报告点响应(r最大)相对于预期vista结合响应(r预期)的比率。r预期计算为r预期＝[(vista-ecd分子量/mab分子量)
×
(mab
‘
捕集’报告点响应(ru)]
×
每个mab 2个结合位点。
[2146]
实施例11：vista抗体克隆与人vista的ph依赖性结合
[2147]
可测量抗体克隆与被工程改造来异位表达全长人vista(具有d187e取代的seq id no：1)的raji细胞的ph依赖性结合。可例如在6.0至8.1的ph下测量结合，所述ph诸如是ph 6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.6、7.0、7.2、7.4、8.0和/或8.1。
[2148]
举例来说，先前测量了克隆
‘
761和
‘
767与被工程改造来异位表达全长人vista(具有d187e取代的seq id no：1)的raji细胞的ph依赖性结合。对于这个实验，将
‘
761和
‘
767格式化成igg1.3抗体，并且通过抗人igg二级抗体(jackson immunoresearch目录号109-065-098)测量结合。显示于图8a至图8b中的结果指示
‘
761(图8a)和
‘
767克隆(图8b)在ph 7.2和8.1下不良地结合，但在酸性ph下，特别是在ph 6.0、6.1、6.2和6.4下更好地结合。结合mfi绘制在y轴上，并且初级抗体浓度以对数标度绘制在x轴上。还显示了非线性回归。
[2149]
图8c显示来自图8a至图8b中所述的实验的数据，所述实验在不同ph下在3125ng/ml下测量p1-068767(圆圈)和同种型匹配的非特异性对照抗体(三角)与表达人vista的raji细胞的结合。作为丧失50％的p1-068767结合所处的ph的“ph50”是约6.6。结合mfi绘制在y轴上，并且缓冲液ph绘制在x轴上。还显示了非线性回归。
[2150]
图8d显示同种型匹配的非特异性对照抗体(对于ph 7.0和6.0分别是填充和未填充圆圈)、抗vista mab 2(“对照”，参见图6c，在ph 7.0和6.0下分别是填充和未填充方块)、p1-068761(对于ph 7.0和6.0分别是填充和未填充三角)和p1-068767(对于ph 7.0和6.0分别是填充和未填充倒三角)与人单核细胞的结合的mfi。如图8a至图8b中所述检测结合。非ph选择性vista对照抗体(mab 2)在两种ph下均结合单核细胞。两种经工程改造的酸性ph选择性抗体在ph 6.0下均良好结合单核细胞，但在ph 7.0下的结合不比非特异性同种型匹配对照更好。因此，克隆
‘
761和
‘
767在中性ph下与vista具有弱结合或不具有结合，而是选择性地在酸性ph下结合细胞上的vista。
[2151]
图8e显示由
‘
029(方块)、
‘
761(三角)和
‘
767(倒三角)在ph 6.0下对重组vista多聚体与活化的人cd4 t细胞的结合的类似阻断，而非vista特异性对照抗体(圆圈)不阻断
vista结合。如实施例4中所述进行这个阻断测定。这些数据显示经工程改造的酸性ph选择性vista抗体仍然能够在酸性ph下阻断vista受体-配体结合。
[2152]
对于全都以无岩藻糖基化igg1抗体形式表达的p1-061029.igg1f、p1-068761.igg1f、p1-068767.igg1f抗体、非vista特异性抗体和非vista特异性阴性对照抗体，测量了在生理ph下通过抗体依赖性细胞细胞毒性(adcc)对靶标细胞(图8a至图8b中所述的表达人vista的相同raji细胞)的nk细胞特异性溶解。通过负性珠粒选择(stemcell technologies目录号19055)从pbmc富集nk细胞，并且在补充以1μm氢化可的松(stemcell technologies目录号07904)和500u/ml重组人il-2(peprotech目录号200-02)的myelocult
tm
培养基(stemcell technologies目录号05150)中培养过夜。在测定当天，异位表达人vista的raji细胞(图中所述)。从上清液荧光信号(envision
tm
板读取器)内插特异性溶解。从不具有抗体的共培养物获得自发性溶解信号，并且通过用溶解缓冲液(perkinelmer目录号4005-0010)溶解靶标细胞测定最大溶解信号。将抗体特异性溶解计算成观察到的溶解除以(最大溶解信号减去自发性溶解信号)的百分比。
[2153]
提供在图8f中的结果显示在生理ph下，在介导抗体依赖性细胞细胞毒性(adcc)方面，相对于p1-061029和阳性对照，p1-068761.igg1f和p1-068767.igg1f的效能降低。
[2154]
实施例12：vista抗体在食蟹猴中的食蟹猴vista亲和力和药物代谢动力学
[2155]
如这个实施例中所述，可测定本文中的抗vista抗体例如在食蟹猕猴中的药物代谢动力学。
[2156]
举例来说，用单次5mpk剂量的在酸性和中性ph下类似地结合的vista抗体(“对照”；mab2)、在酸性ph下具有受损的结合的vista抗体(“酸性ph敏感性”，mab3)或酸性ph选择性抗体
‘
767对人抗体原初食蟹猕猴进行静脉内注射，以测定这些抗体的食蟹猴pk。在注射之后每种抗体的血清浓度显示于图9中。p1-068767.igg1.3和对照抗vista抗体的平均滞留时间分别是717和22小时，从而指示酸性ph选择性极大降低了vista抗体靶标介导的药物处置(tmdd)。尽管对照抗体(mab 2)和酸性ph敏感性抗体(mab 3)在生理ph下类似地结合vista，但酸性ph敏感性抗体具有7.6小时的较低平均滞留时间，从而证明如实施例6和7中所述，酸性ph结合对vista抗体再循环的重要性。结果显示酸性ph选择性抗体具有优越的pk，并且因此将更容易实现在肿瘤或其他微环境中的靶标衔接。
[2157]
可在酸性和中性ph下评估酸性ph选择性和对照抗vista抗体的食蟹猴vista交叉反应性。可如此处所述使用t100仪器(ge healthcare)进行vista ab的结合亲和力测量。将蛋白a(th ermofisher scientific目录号#21181)在ph 4.5 10mm乙酸钠中稀释至20μg/ml，并且遵循制造商的胺偶联方案(ge healthcare)固定至cm5生物传感器的流动池上，以每个流动池2，000ru固定密度的蛋白a为目标。使用在ph 7.4和6.0下的pbst(137mm氯化钠、2.7mm氯化钾、10mm磷酸盐缓冲剂、0.05％吐温20)运行缓冲液在37℃下运行测定。将抗体(格式化成igg1.3抗体)在ph 7.4 pbst中稀释至25nm，并且以5μl/min持续45秒穿过活性生物传感器流动池进行捕集。在运行缓冲液中制备1600-0.78(ph 7.4)和100-0.78nm(ph 6.0)浓度系列的单价hvista-ecd(seq id no：325)和食蟹猴vista-ecd(afkvatlysl yvcpegqnvt ltcrvfgpvd kghdvtfykt wyrssrgevq tcserrpirn ltfqdlhlhh gghqaantsh dlaqrhgles asdhhgnfsi tmrnltllds glycclvveirhhhsehrvh gamelqvqtg kdapsscvay psssqeseni tahhhhhhh；(seq id no：326)，并且以40μl/min在捕集的抗体上注射以测量缔
合和解离。两次15秒注射ph 1.510mm甘氨酸用于在测定循环之间再生蛋白a捕集表面。从减去参考流动池和0nm空白的传感图获得速率常数ka(k
缔合
)和kd(k
解离
)，并且在t200评估软件v.2.0中相对于1∶1结合模型加以拟合。亲和常数kd计算为每种vista抗体的速率常数k解离/k缔合的比率。计算在ph 7.4/ph 6.0下k
解离
和kd的比率以比较相对于中性ph，在酸性ph下的解离速率和亲和力差异。
[2158]
为测试药物代谢动力学，用单次5mpk剂量的vista mab2(“对照”)、vista mab3(“酸性ph敏感性”)或测试抗体对人抗体原初食蟹猕猴进行静脉内注射。测定在注射之后每种抗体的血清浓度。可测定测试抗体和对照抗vista抗体的平均滞留时间，如例如在图9中所显示。
[2159]
实施例13：对高pi蛋白的ph选择性结合特异性
[2160]
可根据以下方案使用t100仪器(ge healthcare)在中性和酸性ph下通过spr评估抗体克隆对vista和其他高pi蛋白的结合特异性。将蛋白a(thermofisher scientific目录号21181)在ph 4.510mm乙酸钠中稀释至20μg/ml，并且遵循制造商的胺偶联方案(ge healthcare)固定至cm3生物传感器的流动池上，以每个流动池800ru固定密度的蛋白a为目标。使用在ph 7.4和6.0下的pbst(137mm氯化钠、2.7mm氯化钾、10mm磷酸盐缓冲剂、0.05％吐温20)运行缓冲液在25℃下进行spr实验。将抗体(例如格式化成igg1.3抗体)在ph 7.4 pbst中稀释至50nm，并且以5μl/min持续60秒穿过活性生物传感器流动池进行捕集。在ph 7.4和6.0运行缓冲液中制备100-10nm浓度系列的单价hvista-ecd(seq id no：325)、亲和素(thermofisher scientific目录号21128)、细胞色素c(sigma目录号c2867)、bsa(calbiochem目录号126593)和单价对照抗原(“ag”)，并且以50μl/min在捕集的抗体上注射以评估结合特异性。两次15秒注射ph 1.5 10mm甘氨酸可用于在测定循环之间再生蛋白a捕集表面。可使用t200评估软件v.2.0检查减去参考流动池和0nm空白的传感图。
[2161]
对p1-061029和它的子代抗体中的两者p1-068761和p1-068767进行的此种实验的结果显示于表13中。
[2162]
表13：vista克隆与具有高pi的蛋白质的结合
[2163]
[2164]
在表13中，定义为在样品注射结束时＞10ru spr结合响应的特异性结合由填充灰色框指示。“抗ag抗体”是vista结合对照ab。
‘
029克隆在酸性和中性ph下对vista具有特异性。
‘
029子代克隆
‘
761和
‘
767在酸性ph下对vista具有特异性，而对照抗体也维持抗原特异性。在这个测定中未观察到pi对照蛋白与蛋白a参考表面的非特异性结合(“nsb”)。因此，引入至
‘
761和
‘
767的vh cdr的带电荷氨基酸不导致这些抗体静电结合至其他高pi蛋白诸如亲和素和细胞色素c，或低pi蛋白诸如bsa。
[2165]
实施例14：t细胞活化的抑制
[2166]
这个实施例描述一种可被进行以测定抗体阻断hvista对jurkat t细胞活化的抑制的能力的测定。
[2167]
使用如实施例5中所述的相同测定。简要来说，将表达nfkb荧光素酶报告体的jurkat(人t细胞株系)细胞在各种ph下与表达人vista和抗人t细胞受体激动剂抗体okt3的单链可变片段的293t细胞共培养。将抗vista抗体或同种型匹配的非vista特异性对照抗体添加至共培养的细胞中。jurkat活化显示为荧光素酶单位以及相对于对照在抗vista处理的情况下荧光素酶信号的倍数增加。
[2168]
实施例15：突变分析鉴定了对vista抗体赋予ph依赖性结合性质的关键残基
[2169]
抗体p1-068761.igg1.3和p1-068767.igg1.3含有从p1-061029的5-6个突变(表7)。进行突变分析以鉴定对于赋予vista抗体的ph依赖性性质重要的关键残基。因此，合成了p1-068761和p1-068767的一组n-1(1个氨基酸向p1-061029回复)和n-2(2个氨基酸向p1-061029回复)变体，以igg1.3形式表达，并且分析它们在ph 6、ph 6.7和ph 7.4下与huvista的结合。
[2170]
使用t100仪器(ge healthcare)测量结合动力学。将蛋白a(thermofisher scientific目录号21181)在ph 4.5 10mm乙酸钠中稀释至20ug/ml，并且遵循制造商的胺偶联方案(ge healthcare)固定至cm5生物传感器的流动池上，以每个流动池2,000ru固定密度的蛋白a为目标。使用在ph 7.4、6.7和6.0下的pbst(137mm氯化钠、2.7mm氯化钾、10mm磷酸盐缓冲剂、0.05％吐温20)运行缓冲液在37℃下进行测定。将抗体在ph 7.4 pbst中稀释至25nm，并且以5ul/min持续40秒穿过活性生物传感器流动池进行捕集。在ph 7.4、6.7和6.0运行缓冲液中制备100-10nm浓度系列的单价hvista-ecd(seq id no：325)，并且以40ul/min在捕集的抗体上注射以测量缔合和解离。两次15秒注射ph 1.5 10mm甘氨酸用于在测定循环之间再生蛋白a捕集表面。从减去参考流动池和0nm空白的传感图获得速率常数ka(k缔合)和kd(k解离)，并且在t200评估软件v.2.0中相对于1∶1结合模型加以拟合。
[2171]
亲和常数kd计算为每种vista抗体的速率常数k
解离
/k
缔合
的比率。计算r最大％以比较ph影响抗体对vista的结合能力的程度，并且代表相对于预期最大vista结合响应的测量最大vista结合响应。r最大％定义为每种抗体的在100nm vista注射结束时的减去参考的
‘
结合’报告点响应(r最大)相对于预期vista结合响应(r预期)的比率。r预期计算为r预期＝[(vista-ecd分子量/mab分子量)
×
(mab
‘
捕集’报告点响应(ru)]
×
每个mab 2个结合位点。
[2172]
对于p1-068761回复变体获得的spr结果显示于图10a中，根据ph 6.0k
解离
从最慢至最快加以分级。在表中，展现对100nm hvista的微弱结合响应或不展现结合响应(＜10ru)
的抗体分类为非结合(nb)。结果指示在位置32处的e(即
‘
761的vh cdr1中的氨基酸残基7)与在位置100f处的e(
‘
761的vh cdr3中的氨基酸残基12)均为维持酸性ph选择性所需，因为向p1-061029亲本序列的这些回复允许在生理ph下达成显著hvista结合(r最大％＞10)。进一步分析揭示具有e55a(
‘
761的vh cdr2中的氨基酸残基6)回复的变体维持酸性ph选择性，并且展现在p1-068761的2倍内的类似结合动力学。相比之下，尽管具有h100g、e56n和e30d(分别是
‘
761的vh cdr3的氨基酸残基12、vh cdr2的氨基酸残基7和vh cdr1的氨基酸残基4)回复的变体维持酸性ph选择性，但这些mab还展现相较于p1-068761，在酸性ph下约3倍的更快k
解离
，从而致使这些突变体在酸性ph下的解离速率更接近p1-061029亲本。因此，将g100h、n56e和/或d30e突变添加至原始p1-061029克隆中有助于在酸性选择性p1-068761克隆的情况下观察到的酸性ph vista亲和力改善。
[2173]
对于p1-068767回复变体获得的spr结果显示于图10b中，根据ph 6.0k
解离
从最慢至最快加以分级。结果指示在位置102处的d(
‘
767的vh cdr3中的氨基酸残基14)为维持酸性ph选择性所需，并且向p1-061029亲本序列的d102v回复允许在中性ph下达成显著hvista结合(r最大％＞10)。进一步分析揭示具有e30d、d52n和e55a(分别是
‘
767的vh cdr1的氨基酸残基4、vh cdr2的氨基酸残基3和vh cdr3的氨基酸残基6)回复的变体维持酸性ph选择性，并且展现在p1-068767的2倍内的类似ph 6.0结合动力学。相比之下，具有e100ff(
‘
767的vh cdr3的氨基酸残基12)回复的变体维持酸性ph选择性，但相较于p1-068767在酸性ph下具有＞3倍的更快k解离。值得注意的是，相较于亲本mab p1-061029，具有e100ff回复的变体在酸性ph下展现甚至更快的k
解离
。
[2174]
实施例16：vista抗体的生物物理性质
[2175]
可通过如这个实施例中所述的以下分析和生物物理技术将p1-068744、p1-068748和它们的相应子代抗体的物理和化学性质与亲本p1-061015抗体的物理和化学性质进行比较(例如全都具有igg1.3恒定区)。
[2176]
使用agilent 1260hplc仪器，利用shodex
tm kw403-4f柱(4.6mm id
×
300mml)，在以0.30ml/min的流速运行的含有100mm磷酸钠、150mm氯化钠的ph 7.3缓冲液(0.2um过滤)中获取分析型sec数据。通过设置成在280nm下收集的agilent 1260infinity二极管阵列检测器收集数据，并且通过agilent chemstation软件(agilent，santa clara，ca)分析。
[2177]
在具有alcott 720nv自动进样器的proteinsimple ice3仪器上获取成像毛细管等电聚焦(icief)数据。将抗体样品与分离混合物混合以产生最终浓度0.2mg/ml抗体、0.35％甲基纤维素、2.0m脲、1％v/vpharmalyte pi 5-8和3％v/v pharmalyte pi 8-10.5。使用在1500v下1分钟的预聚焦时间以及在3000v下10分钟的聚焦时间，在proteinsimple cief fc涂布柱筒(产品号101701)中分析这些样品。使用ice cfr软件v4.3.1.5352分析数据。
[2178]
使用uncle分子表征仪器(unchained labs)，通过动态光散射(dls)测定抗体流体动力学尺寸，并且通过荧光光谱法和静态光散射(sls)表征热稳定性。在1
×
pbs缓冲液中在2mg/ml的浓度下制备抗体，接着用在不同ph下的含40mm tris的1
×
pbs或含40mm柠檬酸盐的1
×
pbs 1∶1稀释以产生1mg/ml抗体于20mm tris/1
×
pbs或20mm柠檬酸盐/1
×
pbs中的在ph 3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0或9.0下的最终样品。将这些样品上样至uni比色皿柱筒中，并且在稀释成不同ph制剂的1小时内分析。使用4次采集，每次5秒，在25℃下收集dls数据。
使用uncle分析软件v2.0版本拟合强度自相关函数。通过采用在266nm和473nm下激发，以0.5
°
/min的扫描速率从25℃至90℃扫描样品获得热变性数据。在250nm-720nm的范围内获取荧光数据。使用uncle分析软件v2.0版本分析荧光和sls数据。
[2179]
根据unchained labs的推荐方案，使用在配制的抗体溶液存在下测量聚苯乙烯珠粒的扩散速率的基于珠粒的dls方法，在uncle分子表征仪器(unchained labs)上测量抗体的表观粘度。简要来说，在含有0.5％吐温80的配制缓冲液中制备100nm聚苯乙烯珠粒(thermo scientific目录号3100a)的10％溶液。将3μl的这个聚苯乙烯珠粒混合物添加至30μl的配制抗体(在20mm组氨酸、260mm蔗糖(ph 6.0)中的各种ab浓度)中，并且将所得蛋白质/珠粒混合物上样至uni比色皿柱筒的3个单独道(每道9μl)中以进行一式三份分析。使用1.3cp的参考粘度，利用uncle分析软件v2.0版本分析数据。
[2180]
通过在20mm组氨酸、260mm蔗糖(ph 6.0)中制备50mg/ml抗体样品，以及暴露于40℃热应激4周，在加速应激条件下研究抗体的物理稳定性。在40℃孵育之前即刻(时间零点＝t0)以及在1周(1w)和4周(4w)的热应激之后移除等分试样，并且使用配制缓冲液将样品稀释至2mg/ml并通过asec分析。使用agilent 1260hplc仪器，利用shodex kw403-4f柱(4.6mm id
×
300mml)，在以0.30ml/min的流速运行的含有100mm磷酸钠、150mm氯化钠的ph 7.3缓冲液(0.2um过滤)中获取asec数据。通过设置成在280nm下收集的agilent 1260 infinity二极管阵列检测器收集数据，并且通过agilent chemstation软件(agilent，santa clara，ca)分析。
[2181]
使用动态光散射(dls)，在不同ph的缓冲液中，在3-9的ph范围内测定抗体的寡聚状态。在4.8-5.7nm的范围内的流体动力学半径(rh)值对于单体抗体样品是典型的。
[2182]
可通过监测随温度而变化的荧光和静态光散射，在不同ph的缓冲液中，在3-9的ph范围内测量热稳定性。通过荧光测定通常表示igg1抗体的ch2结构域的变性的第一热变性转变(tm1)，并且通过静态光散射测量通常表示igg1抗体的fab结构域的变性的聚集起始(t聚集)。
[2183]
举例来说，来自对p1-061029和它的p1-061761和p1-061767子代抗体进行的实验的结果如下。分析型尺寸排阻色谱法(asec)数据显示所有三种抗体都可纯化至高纯度，每个抗体样品由大于99.3％单体(主峰)、小于0.7％高分子量(hmw)种类和不可检测水平的低分子量(lmw)种类组成，表14。
[2184]
表14：抗vista抗体的分析型sec数据，显示高分子量种类的百分比(hmw％)、单体/主要种类的百分比(主要％)和低分子量种类的百分比(lmw％)。
[2185]
样品名称hmw％主要％lmw％p1-0610290.499.60.0p1-0687610.699.40.0p1-0687670.599.50.0
[2186]
抗体p1-061029的如通过成像毛细管等电聚焦(icief)测定的电荷变体概况显示存在具有8.56的等电点(pi)的主要种类(69.4％)和30.6％酸性种类。(图12a至图12c。)p1-068761显示具有6.69的pi的主要种类(66.4％)和33.6％酸性种类。p1-068767显示具有6.63的pi的主要种类(61.4％)和38.6％酸性种类。因此，三种抗体的酸性、碱性和主要种类的分布是类似的，但相比于亲本p1-061029抗体，经工程改造的抗体p1-068761和p1-068767
具有显著更低的等电点。
[2187]
使用动态光散射(dls)，在不同ph的缓冲液中，在3-9的ph范围内测定p1-061029、p1-068761和p1-068767的寡聚状态。每种抗体的所有流体动力学半径(rh)值都在4.8-5.7nm的范围内，此对于单体抗体样品是典型的，表15。这表明这些抗体在稀释成具有在3-9之间的ph的制剂之后第一小时内，在1mg/ml下不形成可检测水平的高分子量聚集种类。
[2188]
表15：在ph 3-ph 9的范围内1mg/ml抗vista抗体样品的如通过dls测定的流体动力学半径。
[2189][2190]
通过监测随温度而变化的荧光和静态光散射，在不同ph的缓冲液中，在3-9的ph范围内测量p1-061029、p1-068761和p1-068767的热稳定性。通过荧光测定通常表示igg1抗体的ch2结构域的变性的第一热变性转变(tm1)并显示于表16中，并且通过静态光散射测量通常表示igg1抗体的fab结构域的变性的聚集起始(t聚集)并显示于表17中。在tris/pbs制剂中，在中性ph(ph 7.0)下，三种抗体的tm1值是p1-061029(67.4℃)、p1-068761(67.0℃)和p1-068767(65.3℃)，t聚集值是p1-061029(67.8℃)、p1-068761(67.5℃)和p1-068767(65.8℃)。在处于相同中性ph 7.0或略微更具酸性的ph 6.0下的柠檬酸盐/pbs制剂中，每种抗体的tm1都在ph 7.0tris/pbs值的0.7
°
内。然而，对于每种抗体，在更具碱性的ph 8-9下，tm1值略低(低0.3
°‑
1.1
°
之间)，并且在更具酸性的ph 3-5下，tm1值显著更低。相较于中性ph，在更具碱性的ph 8.0-9.0下，p1-061029的t聚集在ph 7.0值的0.1
°
内，在ph 5.0下低1.0
°
，并且在最具酸性的ph条件ph 3.0-4.0下低得多(低6.1
°‑
19.6
°
)。在ph 3.0-4.0下，p1-068761和p1-068767的t聚集也显著更低。然而，在ph 5.0下，p1-068761的t聚集仅比在ph 6.0下的t聚集低0.2
°
，而相比于在ph 6.0下，在ph 5.0下，p1-068767的t聚集低2.2
°
，从而显示每种抗体的t聚集的一定差异，表17。
[2191]
表16：如通过荧光光谱法所测定，p1-061029、p1-068761、p1-068767在ph 3-ph 9的ph范围内的热稳定性(tm1值)
[2192][2193]
表17：如通过静态光散射所测定，p1-061029、p1-068761、p1-068767在ph 3-ph 9的ph范围内的热稳定性(t聚集值)
[2194][2195]
使用在配制的抗体溶液存在下测量聚苯乙烯珠粒的扩散速率的基于珠粒的dls方
法测量p1-061029、p1-068761和p1-068767的表观粘度。在44mg/ml下比较所有三种抗体显示在这些条件下，两种经工程改造的抗体与亲本抗体具有类似粘度，表18。在第二研究中，将p1-068761和p1-068767的额外蛋白质材料浓缩至更高浓度以分析在136mg/ml、100mg/ml和50mg/ml下的粘度。这些数据显示在较高抗体浓度下，表观粘度增加，其中在136mg/ml下，最大表观粘度对于p1-068761是5.7
±
0.7，并且对于p1-068767是5.3
±
0.6。
[2196]
表18：如通过基于珠粒的dls方法所测定，在25℃下抗体在20mm组氨酸、260mm蔗糖(ph 6.0)中的表观粘度(以cp计)。值代表来自三个uni道的数据的平均值和标准偏差
[2197][2198]
在40℃的加速应激条件下持续4周研究p1-061029、p1-068761和p1-068767于20mm组氨酸、260mm蔗糖(ph 6.0)中的50mg/ml样品的物理稳定性。通过对在40℃孵育之前即刻(时间零点＝t0)以及在1周(1w)和4周(4w)的40℃应激之后的样品进行asec来监测抗体的寡聚状态。这些数据显示所有三种抗体在40℃下4周之后都保持大于96％单体，具有低水平的hmw种类(＜1.6％hmw)和低水平的lmw种类(＜2.0％lmw)，表19。
[2199]
表19：抗vista抗体加速稳定性样品的asec数据，显示t0、1w和4w样品的高分子量种类的百分比(hmw％)、单体/主要种类的百分比(主要％)和低分子量种类的百分比(lmw％)
[2200][2201]
实施例17：具有种系重链或轻链框架区取代的抗vista抗体的产生
[2202]
可使抗vista抗体进一步在它们的可变区框架序列中突变。举例来说，它们可被进一步修饰，以使框架区更密切类似于见于人种系序列中的那些。
[2203]
举例来说，p1-061015、p1-068744、p1-068748和它们的相应子代中的轻链氨基酸残基85是t，而在人种系序列中，它是v。因此，在一些实施方案中，这个残基可被突变回v。举例来说，在某些实施方案中，抗体p1-061015、p1-068744、p1-068748以及它们的衍生物包含其中氨基酸残基85是v的轻链。在此类抗体中，轻链包含含有序列d
82
favyy
87
(seq id no：
569的位置82-87)而非d
82
fatyy
87
(seq id no：96的位置82-87)的框架区。
[2204]
实施例18：抗vista抗体和抗pd-1抗体协同地起引发肿瘤排斥的作用
[2205]
为表征阻断vista的酸性ph选择性配体界面在肿瘤中的影响，产生了在酸性ph下阻断小鼠vista与小鼠t细胞的结合的小鼠替代抗体vista.10。(vista.10还在生理ph下结合mvista。)为避免fc受体衔接和任何后续效应子功能，使vista.10转化成具有点突变d265a的igg1同种型，以避免fc受体衔接和效应子功能{clynes，2000}。将mc38肿瘤皮下植入在小鼠中，并且当肿瘤达到约70mm2时，每三天将以下治疗施用至小鼠：组1：在30mpk下4次剂量的抗klh migg1-d265a；组2：在5mg/kg下两次剂量的抗pd-1migg1-d265a；组3：在30mg/kg下4次剂量的抗vistamigg1-d265a；和组4：抗pd-1 抗vista组合。vista.10和pd-1阻断抗体的组合治疗在大多数用mc38结肠直肠腺癌肿瘤植入的小鼠中引发了肿瘤排斥(图15a至图15d)，抗pd-1和vista.10单一剂治疗适度地延迟但未阻止肿瘤进展(图15a至图15d)。
[2206]
与这些结果一致，对来自经治疗小鼠的肿瘤的离体分析显示在用vista.10和抗pd-1抗体治疗的小鼠中，肿瘤浸润性cd8 t细胞和cd4 t细胞的频率分别增加至5和10倍(图15e至图15f)。其他白细胞子组基本上不受影响。组合疗法还导致肿瘤浸润性cd8 t细胞上全都是t细胞耗竭和功能异常的标志物的pd-1、lag-3和tim-3的显著更低表达(图15e)。用单独pd-1或vista抗体治疗对t细胞频率和表型仅具有适度影响(图15e至图15f)。肿瘤内髓样细胞子组频率，包括巨噬细胞、单核细胞性髓源性抑制细胞(mdsc)和粒细胞性mdsc的那些频率，基本上不受vista抗体治疗影响。
[2207]
为情景化vista抗体活性，将vista剔除小鼠用mc38肿瘤植入，并且用pd-1阻断抗体或对照抗体治疗。如图15i中所示，在对照治疗组中，在vista剔除小鼠和它们的野生型同窝仔畜中，mc38肿瘤类似地生长。vista剔除小鼠展现对抗pd-1抗体的响应性增加，从而暗示vista和pd-1组合功效。这个响应性再次与增加的肿瘤内cd4 和cd8 t细胞相关联。这些数据指示在酸性ph下阻断vista结合的抗体足以逆转vista介导的免疫抑制。
[2208]
因为vista选择性地在酸性ph下起作用，所以我们假设vista介导的对抗肿瘤应答的抑制主要发生在肿瘤床自身内。我们测试了酸性ph选择性人vista阻断抗体p1-068767(’767)和它的非ph选择性亲本抗体p1-061029(’029)在表达人vista细胞外结构域而非内源性vista细胞外结构域的转基因小鼠(人vista敲入小鼠，genoway)中的活性。与以上所述的组合和vista剔除实验一致，p1-061029和p1-068767在与小鼠pd-1阻断抗体组合的情况下引发了类似功效(图15j至图15m)。
[2209]
测量了p1-068767和p1-061029在人vista敲入小鼠中的半衰期。如图15n中所示，相比于p1-061029，p1-068767展现接近20倍的更长平均滞留时间(mrt)，从而指示在ph 7.4下与vista的弱结合以及因此降低的tmdd(分别是71小时和4.1小时)。
[2210]
为评估非转基因模型中外周vista的抗体衔接，我们如下用p1-068767和称为vista.4的中性ph偏好抗体(相同申请人的单独专利申请族提供对vista.4的进一步描述)处理食蟹猕猴。在以5mg/kg的剂量10分钟静脉内输注至蛋白质原初食蟹猴(每种抗体n＝1)中之后评估vista.4和p1-068767。在输注后0.17、0.5、2、4、6、24、48、72、168、216、240、336小时收集连续血液样品。随后，获得血清样品以使用配体结合测定进行抗体浓度分析，所述测定采用重组vista作为捕集剂，以及抗人igg fc mab作为检测剂。测定的定量下限是1ng/
ml。通过使用kinetica软件(5.0版本，thermo fisher scientific)对血清mab浓度-时间数据进行非房室分析来估计平均滞留时间。结果显示p1-068767再次展现长得多的mrt(分别是717小时和7.6小时，图6o)。这些结果表明肿瘤微环境中而非血液和非酸性组织中的vista阻断驱动抗肿瘤功效。
[2211]
实施例19：vista.4抑制vista与psgl-1的结合
[2212]
免疫受体p-选择素糖蛋白配体-1(psgl-1)先前被鉴定为一种vista配体(参见wo2018132476)。psgl-1是选择素特别是p-选择素的受体，并且与它的主要配体p-选择素的结合是白细胞、血小板和内皮细胞之间的粘附相互作用的充分表征促进因素(carlow，d.a.等人，psgl-1 function in immunity and steady state homeostasis.immunol rev，2009.230(1)：第75-96页，以及abadier，m.和k.ley，p-selectin glycoprotein ligand-1 in t cells.curr opin hematol，2017.24(3)：第265-273页.18)。psgl-1还已被鉴定为在慢性病毒性感染、癌症肿瘤免疫性和一些自身免疫疾病的情形下t细胞应答的负性调控因子(angiari，s.等人，regulatory t cells suppress the late phase of the immune response in lymph nodes through p-selectin glycoprotein ligand-1.j immunol，2013.191(11)：第5489-500页；matsumoto，m.，m.miyasaka和t.hirata，p-selectin glycoprotein ligand-1 negatively regulates t-cell immune responses.j immunol，2009.183(11)：第7204-11页；nunez-andrade，n.等人，p-selectin glycoprotein ligand-1modulates immune inflammatory responses in the enteric lamina propria.j pathol，2011.224(2)：第212-21页；perez-frias，a.等人，development of an autoimmune syndrome affecting the skin and internal organs in p-selectin glycoprotein ligand 1 leukocyte receptor-deficient mice.arthritis rheumatol，2014.66(11)：第3178-89页；tinoco，r.等人，psgl-1 is an immune checkpoint regulator that promotes t cell exhaustion.immunity，2016.44(5)：第1190-203页)。这个免疫抑制功能似乎不依赖于已知psgl-1配体(tinoco，r.等人，psgl-1：a new player in the immune checkpoint landscape.trends immunol，2017.38(5)：第323-335页)。
[2213]
在基于细胞的测定中，显示重组psgl-1与重组p-选择素均能够阻断vista多聚体与活化的人cd4 t细胞的结合。通过crispr从活化的cd4 t细胞缺失psgl-1也消除了vista多聚体结合。此外，显示异位表达psgl-1足以使得能够达成在酸性ph下vista与cho细胞的结合，并且vista表达足以使得能够达成在酸性ph下psgl-1与293t细胞的结合。
[2214]
这个实施例显示psgl-1在酸性和生理ph下类似地结合p-选择素，但仅在酸性ph下结合vista(图17a)。使用octet生物传感器测定，用vista、p-选择素和先前显示支持高亲和力p-选择素结合的最小psgl-1糖肽(氨基酸1-19，具有磺基酪氨酸和唾液酸化路易斯x碳水化合物翻译后修饰两者)(sako，d.等人，a sulfated peptide segment at the amino terminus of psgl-1 is critical for p-selectin binding.cell，1995.83(2)：第323-319页)进行实验。
[2215]
psgl-1的配体界面依赖于带负电荷的磺基酪氨酸和唾液酸化路易斯-x翻译后修饰来以高亲和力结合p-选择素(sako等人1995 cell 83(2)：第323-319页)，因此，表达非唾液酸化路易斯-x装饰的psgl-1的原初t细胞不能高效衔接p-选择素。唾液酸化路易斯x装饰的psgl-1在循环单核细胞和嗜中性粒细胞上组成性表达，并且在活化的t细胞上诱导性表
达，这与在酸性ph下与这些细胞类型的强烈vista结合一致。然而，发现vista结合至原初t细胞与活化的t细胞两者，从而表明不同于p-选择素，vista不依赖于唾液酸化路易斯x来结合psgl-1。在额外octet生物传感器测定中，发现尽管vista与p-选择素均优先结合至具有唾液酸化路易斯x装饰的psgl-1糖肽，但仅vista结合不具有唾液酸化路易斯x的psgl-1糖肽。此外，在不表达酶葡糖胺基(n-乙酰基)转移酶(gcnt1)和α(1，3)-岩藻糖基转移酶-7酶(fut7)的细胞中产生的psgl-1缺乏唾液酸化路易斯x装饰，并且不良结合至p-选择素(图25a)。相比之下，vista不依赖于唾液酸化路易斯x来结合psgl-1(图25a)。这个结果与vista而非p-选择素结合至缺乏唾液酸化路易斯x的原初t细胞一致。
[2216]
此外，类似于p-选择素，vista在酸性ph下适度地结合至硫酸乙酰肝素。
[2217]
另外，阻断p-选择素结合的psgl-1抗体不阻断vista结合。这些数据指示vista结合类似但不同于由p-选择素结合的psgl-1界面的psgl-1界面。
[2218]
这个实施例还显示阻断vista与t细胞的结合的抗体p1-061029、p1-068761、p1-068767和vista.4还阻断vista与psgl-1糖肽的结合。
[2219]
进行竞争性octet测定以评估酸性ph选择性α-vista抗体p1-068761和p1-068767、p1-061029ph非依赖性亲本以及酸性ph敏感性vist a.4是否阻断vista与psgl1的结合。在octetred384生物膜层干涉测量(bli)仪器(pall/fortebio)上进行结合测定。所有测定步骤都在30℃下在1000rpm振荡速度下进行，并且所用缓冲液是ph 6.0pbst(137mm氯化钠、2.7mm氯化钾、10mm磷酸盐缓冲剂、0.05％吐温20)。将人vista-fc(r&d systems#7126-b7)在ph 6.0pbst中稀释至400nm，并且与0nm、40nm和400nm滴定系列的p1-068761、p1-068767、p1-061029和vista.4一起预混合30分钟。将由成熟psgl1的融合于人fc的氨基末端19个氨基酸组成的人psgl1 19聚体hufc蛋白捕集至抗人igg-fc传感器(ahc，pall/fortebio)上。接着用总人igg(jackson#009-000-002)封闭抗人捕集传感器。接着测量捕集的psgl1与vista-fc/α-vista抗体混合物的结合以评估α-vista抗体是否阻止vista结合至psgl1。对于每个抗体滴定系列，将vista与psgl1的结合的量值(nm移动)以设置在100％下的0nm未阻断vista：psgl1响应作归一化。来自这个测定的结果概述于图17b中。在这个测定中，400nm浓度的p1-061029、p1-068761、p1-068767和vista.4全都显示阻断活性。vista-fc蛋白被阻止与捕集的人psgl119聚体hufc蛋白结合，如由观察到的降低的vista结合所指示。
[2220]
另外，得到证明的是vista.4与p-选择素阻断性psgl-1抗体kpl-1两者均阻断vista与cho-psgl-1细胞的结合(图17c)。在psgl-1抗体阻断测定中，将细胞与所指示抗体kpl-1(bdbiosciences或biolegend)或pl2(mbl)一起预孵育，随后用32nm装载的vista多聚体或vista-fc嵌合蛋白标记。通过抗igg抗体(jackson immunoresearch)或抗6
×
his抗体(columbia biosciences)检测vista-fc结合。通过流式细胞计量术或均相时间分辨荧光(htrf)获取细胞。
[2221]
实施例20：结合于hvista的p1-068767的晶体结构
[2222]
为表征vista的结构和vista抗体结合的分子决定簇，制备了hvista igv结构域与p1-068767抗原结合片段(fab)的共晶体。在1.6a分辨率下测定所得复合物的结构(图18)。vista igv结构域通常为它的家族所特有，与pd-l1具有一定类似性(图18b)。然而，不同于pd-l1和大多数其他b7家族或免疫球蛋白超家族成员，vista igv结构域的两个c末端β折叠股含有多个额外残基，从而产生异常延伸的和富含组氨酸的中心β片层(图18b)。阻断抗体
p1-068767在这个β片层延伸部分处结合vista(图18c)，而非阻断抗体vista.5结合不同区域(图18e)。vista的β片层延伸部分由三个组氨酸残基：h121、h122和h123封盖。p1-068767残基e110和d112分别与vista残基h121和h122形成氢键(图18d)。这些相互作用与先前实施例中所述的发现充分一致，即p1-068767残基e110和d112对于达成酸性ph选择性是必需的和足够的。在共晶体中，vista残基h123与来自沉淀剂的硫酸盐分子相互作用，并且与p1-068767残基e1形成盐桥；但有可能的是vista h123可在不存在硫酸盐下与p1-068767形成真正的氢键(图18d)。额外相互作用提供在表13中。这些数据表明vista igv结构域的异乎寻常的富含组氨酸的β片层延伸部分是vista的酸性ph选择性受体-配体界面的关键组分。
[2223]
表20详述在vista原子的4a内的
‘
767fab hc原子之间的以埃计的距离。
[2224][2225]
实施例21：表位定位
[2226]
先前通过以下2种不同方法测定了格式化成igg1.3抗体的
‘
015、
‘
029、
‘
761和
‘
767的hvista表位：bli(生物膜层干涉测量术)竞争和酵母表面展示。
[2227]
进行竞争性bli表位划分测定以评估相较于p1-061029亲本、p1-061015和相关vista对照抗体1、2和3，酸性ph选择性vista抗体p1-068761和p1-068767是否保持vista上类似或重叠的表位。在octetred384 bli仪器(pall/fortebio)上进行夹心和串联形式的划分测定。所有测定步骤都在30℃下在1000rpm振荡速度下进行，并且所用缓冲液是酸性(ph 6.0)或中性(ph 7.4)pbst(137mm氯化钠、2.7mm氯化钾、10mm磷酸盐缓冲剂、0.05％吐温20)。对于夹心形式，抗人igg-fc传感器(ahc，pall/fortebio)首先在ph 7.4下捕集vista抗
体组套，接着用总人igg(jackson#009-000-002)封闭抗人捕集传感器。接着在ph 6.0下捕集人vista-ecd，并且最终在ph 6.0下评估所有可能的抗体组合的竞争。在串联形式测定中，经链霉亲和素包被的生物传感器(sax，pall/fortebio)首先在ph 7.4下捕集生物素化hvista-ecd，接着传感器在ph 6.0下捕集完全vista抗体组套，从而确保每种抗体在vista上的完全结合饱和，随后在ph 6.0下评估所有可能的抗体组合的竞争。
[2228]
竞争性bli表位划分测定的结果通过竞争矩阵概述，图11a。在这个图中，捕集的第一抗体按行列出，并且它对(第二)竞争抗体的结合或阻断活性显示于每列中。对于两种测定形式，竞争矩阵是相同的。对于夹心式测定，竞争抗体的结合(浅灰色)通过在0.4-1.2nm之间的范围内的信号来确定，并且阻断的抗体(黑色)展现非结合信号＜0.1nm。对于串联测定，竞争抗体的结合通过在0.3_0.8nm之间的范围内的信号来确定，并且阻断的抗体展现非结合信号＜0.2nm。尽管根据spr，在37℃下，
‘
vista mab 3’展现从hvista-ecd的快速酸性ph解离(图6c)，但它在任一bli测定形式(在30℃下进行)中都不快速解离。这些竞争性测定指示p1-061015、p1-061029、酸性ph选择性抗体p1-068761和p1-068767以及vista抗体2和3全都彼此竞争vista上类似或重叠的表位。然而，vista抗体1结合至单独和独特的表位。因此，引入至p1-061029的vh cdr以产生酸性选择性克隆p1-068761和p1-068767的带电荷氨基酸突变尚未显著改变vista结合表位。
[2229]
还根据chao等人(2004)j.mol.biol.342：539-550，oliphant等人(2006)j.virol.80：12149-12159以及kowalsky等人(2015)j.biol.chem.290：26457-26470的方法，使用酵母表面展示和ngs定位了抗体
‘
029、
‘
015、
‘
761和
‘
767的表位。简要来说，产生vista ecd的单点突变体的饱和诱变文库，并且展示在酵母的表面上。将丧失与所定位的抗体的结合，但保持与非阻断抗体(mab1)的结合的vista突变体分选和测序。因为它们保持与mab1的结合，所以这些突变体可能是正确折叠的，并且观察到的与所定位的抗体的结合的丧失可能归因于在能量方面重要的接触残基的丧失。将这些突变的位置指定为抗体的表位中在能量方面重要的残基，并且显示于下表21中。
[2230][2231]
表22包括来自表21的详细数据，并且基于在酵母表面展示/ngs方法中观察到的残基频率，列出hvista的可能降低所列的每种抗体的结合的氨基酸残基。
[2232]
表22：可能降低所列抗体的结合的vista氨基酸取代
[2233]
[2234][2235]
vista.4也用于先前在以上所述的竞争性bli表位划分测定中。结果指示vista.4与以上所述的抗体p1-061015、p1-061029、p1-068761和p1-068767竞争与人vista的结合，
因此与这些抗体属于同一表位组(组a)。vista.4不与vista mab 1竞争与人vista的结合。
[2236]
也如上所述使用酵母表面展示和ngs定位了vista.4的表位。将丧失与所定位的抗体的结合，但保持与非阻断抗体(mab1)的结合的vista突变体分选和测序。因为它们保持与mab1的结合，所以这些突变体可能是正确折叠的，并且观察到的与所定位的抗体的结合的丧失可能归因于在能量方面重要的接触残基的丧失。导致结合的丧失，并且被指定为抗体的表位中在能量方面重要的残基的突变的位置连同抗体p1-061015、p1-061029、p1-068761和p1-068767的在能量方面重要的接触残基(还显示于上表21中)一起显示于表16中。
[2237]
图11b和图11c显示相较于非阻断hvista抗体的表位(mab1；图11c)，涵盖如表21中所列的关于阻断hvista抗体的所有残基的表位(图11b)的图像。氨基酸残基66(h)和162(a)被指示来表示分子的定向。组氨酸残基呈灰色，并且表位残基呈黑色。值得注意的是，所有阻断抗vista mab都占据相同表位区域，这与octet划分数据(显示它们彼此竞争)一致，在查询的抗体之间具有细微残基差异。相比之下，非阻断hvista抗体(mab1)占据hvista分子上的独特表位区域，并且这由显示阻断mab都不与mab1竞争的octet划分数据进一步支持。
[2238]
实施例22：vista.4在酸性ph下抑制vista与t细胞的结合
[2239]
这个实施例显示vista.4和表位组a中的其他抗体在酸性ph下阻断vista与t细胞的结合，而vista.5(mab1)和表位组b中的其他抗体不这样(图21a和图21b)。
[2240]
基本上如实施例4中所述进行这个实施例。
[2241]
实施例23：vista.4增强t细胞增殖和ifn-7产生
[2242]
这个实施例显示vista阻断ab(表位组a)增强t细胞增殖和ifn-γ产生(图22)。不是阻断抗体的vista.5(mab1)不增强t细胞增殖或ifn-7产生。当t细胞与不表达vista的293t-okt3细胞共培养时，vista.4不具有影响。
[2243]
通过将vista抗体添加至与被工程改造来表达人vista和t细胞受体激动剂抗体okt3的单链可变片段的293t细胞(293t-okt3-vista)共培养的cd4 t细胞中来进行这个实验。
[2244]
实施例24：vista抑制t细胞受体介导的nf-kb信号传导
[2245]
进行这个实施例以进一步评估ph对vista功能的影响，并且这个实施例显示相比于在中性ph下，vista在酸性ph下更强力抑制t细胞受体介导的nf-kb信号传导(图23a)。在低于ph 6.5下达到最大抑制，这类似于vista：t细胞结合(图23a和图4a)。
[2246]
基本上如实施例5和13中所述使用nfkb报告jurkat t细胞测量nf-kb信号传导。jurkat细胞被工程改造来在nf-kb诱导型启动子的控制下表达荧光素酶。将这些jurkat nfkb-荧光素酶细胞与非照射的293t-okt3-vista细胞以4∶1的比率在用mes酸化至各种ph的hbss(thermofisher)中，并且在人抗人vista抗体存在下共培养4小时。通过荧光素酶底物测定(promega)测量jurkat细胞活化。vista介导的抑制在酸性ph下是最强力的，但在ph 7.0和高于7.0下维持适度的活性水平。类似地，相比于在ph 7.4下，重组vista在酸性ph下更大程度抑制t细胞nfkb磷酸化(图23b)。这些结果指示vista优先在酸性ph下抑制t细胞，并且这个活性由在酸性ph下阻断t细胞结合的抗体逆转。
[2247]
因此，这些数据表明阻断vista的酸性ph选择性受体-配体界面可逆转免疫抑制。
[2248]
实施例25：vista：psgl-1结合特异性由组氨酸和磺基酪氨酸残基决定
[2249]
为表征psgl-1结合特异性，除由唾液酸化路易斯x提供的psgl-1结合特异性之外，
我们还考查了有助于p-选择素结合的酪氨酸硫酸化翻译后修饰。为测试酪氨酸硫酸化的作用，通过阴离子交换液相色谱法将psgl-1糖肽分成富含磺基酪氨酸(＞90％)和磺基酪氨酸贫乏(＜1％)的峰。vista和p-选择素都不以可检测方式结合至磺基酪氨酸贫乏的psgl-1(图25b)。vista还不能结合其中酪氨酸被丙氨酸取代的psgl-1糖肽(未显示于图中)。这些结果指示磺基酪氨酸残基是psgl-1与vista的结合的关键介体。
[2250]
我们假设vista结合特异性由见于vista阻断抗体表位内的相同组氨酸残基：h153、h154和h155介导。用不带电荷的丙氨酸或带负电荷的天冬氨酸替换这些组氨酸残基显著降低了vista与重组psgl-1和cho-psgl-1细胞的结合(图25c至图25d)。通过短暂转染expi293细胞产生h153、h154和h155残基突变成丙氨酸、天冬氨酸或精氨酸的vista-fc蛋白。这些突变体也不能功能性地抑制t细胞(未显示于图中)。相比之下，用带正电荷的精氨酸残基替换保持了vista结合和功能(图25c至图25d)。阻断抗体vista.4和p1-068767良好结合至丙氨酸和精氨酸突变vista，但与天冬氨酸突变vista的结合不良(未显示)。非阻断抗体vista.5类似地结合至野生型和突变vista蛋白(未显示)。
[2251]
我们接着使用结合于p-选择素的psgl-1和结合于p1-068767fab的vista的解析结构(图18)开发对接至vista的psgl-1 19聚体糖肽的计算模型(图25e)。在这个模型中，psgl-1酪氨酸残基y46和y48与vista组氨酸残基h153和h154进行离子相互作用1酪氨酸残基y46和y48与vista组氨酸残基h153和h154进行离子相互作用距离)。psgl-1 y51更远离vista(约)，但可有意义地与vista h100相互作用。psgl-1 e56也与vista h98和h100形成离子相互作用。psgl-1 t57的可被唾液酸化路易斯x装饰的羟基的朝向是远离vista的，这与唾液酸化路易斯x对vista：psgl-1结合的影响微不足道一致。总之，这些数据和建模表明在酸性ph下vista与psgl-1的结合主要由vista组氨酸残基和h153、h154和h155，并且由psgl-1硫酸化酪氨酸残基y46和y48驱动。
[2252]
利用氢/氘交换质谱测定法(hdx-ms)探测人vista与mab vista.4的结合表位。通过监测主链酰胺氢原子的氘交换的速率和程度，hdx-ms探测溶液中的蛋白质构象和构象动力学(huang和chen(2014)analytical and bioanalytical chemistry 406，6541-6558；wei等人drug discovery today(2014)19，95-102)。hdx的水平取决于主链酰胺氢原子的溶剂可及性和蛋白质氢键。可通过ms精确测量在hdx后蛋白质的质量增加。当这个技术与酶促消化配对时，可解析在肽水平上的结构特征，从而使得能够将表面暴露的肽与内部折叠的那些肽，或与在蛋白质-蛋白质复合物的界面处螯合的那些肽区分。通常，进行氘标记和后续淬灭实验，继之以酶促消化、肽分离和ms分析。
[2253]
在表位定位实验之前，进行非氘化实验以产生重组人vista(15μm)和vista与mab vista.4(1∶1摩尔比)的蛋白质复合物的常见肽的清单。在hdx-ms实验中，将5μl的每个样品(vista或vista与mab vista.4)稀释至55μl的d2o缓冲液(10mm磷酸盐缓冲剂、d2o，ph 7.0)以开始标记反应。使反应进行不同时期：1分钟、10分钟和240分钟。到每个标记反应时期结束时，将反应通过添加淬灭缓冲液(具有4m gdncl和0.4m tcep的100mm磷酸盐缓冲液，ph 2.5，1∶1，v/v)来淬灭，并且将50μl的经淬灭样品注射至waters hdx-ms系统中以进行分析。在不存在/存在vista.4下监测常见胃酶解肽的氘摄取水平。获得的序列覆盖率是82％。
[2254]
hdx-ms实验提供人vista的85％序列覆盖率。如图19中所示，对人vista中的vista.4的hdx-ms数据分析指示vista.4的表位包含人vista的三个区域，其中区域2是主要
表位(残基编号对应于天然人vista序列，图20)：
[2255]
区域1：
57
lgpvdkghdvtf
68
(seq id no：566)
[2256]
区域2：
86
rrpirnltfqdl
97
(seq id no：567)
[2257]
区域3：
148
vveirhhhsehrvhgame
165
(seq id no：568)
[2258]
抗体vista.4在酸性和中性ph下同等良好结合。更多轮选择产生了相比于在ph 7.4下，在ph 6.0下以200倍的更高亲和力结合vista的变体。用vista阻断抗体进行的类似尝试产生了相对于ph 7.4，对于ph 6.0具有多达10，000倍选择性的变体。我们使用这些抗体来在酸性和中性ph下定位vista的受体-配体结合界面。ph非依赖性vista阻断抗体、中性ph选择性vista阻断抗体和酸性ph选择性vista阻断抗体结合几乎相同的表位，从而表明单独组氨酸质子化在无显著构象变化下控制vista在酸性ph下衔接它的反受体的能力。(vista.4进一步描述于相同申请人的另一申请族中。)
[2259]
实施例26：vista：psgl-1结合特异性由组氨酸和磺基酪氨酸残基决定
[2260]
为表征psgl-1结合特异性，除由唾液酸化路易斯x提供的psgl-1结合特异性之外，我们还考查了有助于p-选择素结合的酪氨酸硫酸化翻译后修饰。为测试酪氨酸硫酸化的作用，通过阴离子交换液相色谱法将psgl-1糖肽分成富含磺基酪氨酸(＞90％)和磺基酪氨酸贫乏(＜1％)的峰。vista和p-选择素都不以可检测方式结合至磺基酪氨酸贫乏的psgl-1(图25b)。vista还不能结合其中酪氨酸被丙氨酸取代的psgl-1糖肽(未显示于图中)。这些结果指示磺基酪氨酸残基是psgl-1与vista的结合的关键介体。
[2261]
我们假设vista结合特异性由见于vista阻断抗体表位内的相同组氨酸残基：h153、h154和h155介导(参见实施例20)。用不带电荷的丙氨酸或带负电荷的天冬氨酸替换这些组氨酸残基显著降低了vista与重组psgl-1和cho-psgl-1细胞的结合(图25c至图25d)。通过短暂转染expi293细胞产生h153、h154和h155残基突变成丙氨酸、天冬氨酸或精氨酸的vista-fc蛋白。这些突变体也不能功能性地抑制t细胞(未显示于图中)。相比之下，用带正电荷的精氨酸残基替换保持了vista结合和功能(图25c至图25d)。阻断抗体vista.4和p1-068767良好结合至丙氨酸和精氨酸突变vista，但与天冬氨酸突变vista的结合不良(未显示)。非阻断抗体vista.5类似地结合至野生型和突变vista蛋白(未显示)。
[2262]
我们接着使用结合于p-选择素的psgl-1和结合于p1-068767fab的vista的解析结构(图18)开发对接至vista的psgl-1 19聚体糖肽的计算模型(图25e)。在这个模型中，psgl-1酪氨酸残基y46和y48与vista组氨酸残基h153和h154进行离子相互作用1酪氨酸残基y46和y48与vista组氨酸残基h153和h154进行离子相互作用距离)。psgl-1 y51更远离vista(约)，但可有意义地与vista h100相互作用。psgl-1 e56也与vista h98和h100形成离子相互作用。psgl-1 t57的可被唾液酸化路易斯x装饰的羟基的朝向是远离vista的，这与唾液酸化路易斯x对vista：psgl-1结合的影响微不足道一致。总之，这些数据和建模表明在酸性ph下vista与psgl-1的结合主要由vista组氨酸残基和h153、h154和h155，并且由psgl-1硫酸化酪氨酸残基y46和y48驱动。
[2263]
实施例27：抗体对vista-vsig-3结合的影响
[2264]
近来已报道vista结合含有v组免疫球蛋白结构域的蛋白3(vsig-3)，这是一种在脑、睾丸和一些癌组织中表达的表面受体。
[2265]
进行bli结合实验以评估vista与vsig-3、cd42b/gp1bα、psgl-1和vista的多ph相
互作用。所有测定步骤都在含有0.05％v/v吐温20，如所指示调整ph至5.8、6.2、6.6、7.0或7.4的dpbs缓冲液(gibco)中进行。应用以上所述的实验条件，例外之处是首先将200nm人vista-fc捕集至ahc传感器，并且改为测量与500nm野生型人psgl-119聚体fc融合蛋白、500nm和y2a突变人psgl-1 19聚体fc融合蛋白、500nm人vsig-3-fc融合蛋白(r&d systems)、500nm人cd42b/gp1bα(r&d systems)或500nm人vista-fc融合蛋白(r&d systems)的结合。
[2266]
在竞争实验中测定抗vista抗体对hvista与hvsig-3之间的相互作用的影响。对于抗体和vsig-3竞争实验，将人vista-fc稀释至400nm，并且与0nm、200nm、400nm或800nm的每种测试抗体或人vsig-3-fc融合蛋白(r&d systems)一起预混合30分钟，随后评估结合。对于kpl-1和人p-选择素竞争实验，使用400nm kpl-1(millipore sigma)或400nm人p-选择素(r&d systems)封闭捕集的人psgl-119聚体fc融合蛋白，接着浸渍至经滴定人vista-fc中。显示于图26中的结果指示重组vista与重组vsig-3的结合是中度ph选择性的(图26c)，并且p1-061029和p1-068767以及在较小程度上vista.5抑制hvista与hvsig-3的结合(图26d)。不存在vsig-3与psgl-1之间竞争的证据。
[2267]
实施例28：vista抗体在肿瘤组织中的积累
[2268]
如图28中所示，将人vista敲入小鼠用mc38肿瘤植入，并且用经荧光标记的p1-061029(左侧)或p1-068767(右侧)治疗。显示了在注射后51小时，所指示器官中的辐射效率(
×
109)。这些数据代表单一实验。如图中所示，ph敏感性抗体p1-068767优先在肿瘤中积累，而p1-061029主要定位于富含白细胞的器官(例如肺、肝、脾)。(也参见图27e。)尽管与外周vista低效衔接，但当与抗pd-1抗体组合施用时，p1-068767在治疗益处方面与p1-061029不相上下(参见图15j至图15m)。这个结果表明vista的免疫抑制活性主要存在于酸性微环境内，并且ph选择性可用于开发针对vista和在肿瘤中具有活性的其他靶标的治疗剂。关于抗vista抗体的组织积累的其他数据显示于图27e中。
[2269]
活化诱导的共抑制性受体表达通常导致优先约束成熟免疫应答而非新生免疫应答。vista反而似乎依赖于ph选择性实现这个结果，其中抑制发生在发炎组织诸如肿瘤床中而非在血液或淋巴器官中。尽管肿瘤酸中毒的存在和免疫抑制作用是熟知的，但这些发现证明ph还可直接调节免疫检查点衔接。
[2270]
实施例29：关于vista抗体的其他结合动力学数据
[2271]
如以上在实施例9中一般地描述，通过spr在各种ph下对本文所述的vista抗体进行其他结合动力学实验。将抗体在ph 7.4 pbst中归一化至50nm浓度，并且通过以5μl/min流速注射45秒来捕集在蛋白a cm5芯片(id 4931)上。在处于ph 7.4、6.9、6.45和6.0下的pbst中制备8点人vista滴定物(100至7.8nm)。将滴定物以30μl/min在捕集的抗体上注射180秒。在t200评估软件中相对于1∶1结合模型拟合传感图，并且报告动力学常数。
[2272]
所得数据提供在下表23至表26中。每个表报告在四种测试ph(分别是7.4、6.9、6.45和6.0)中的一者下的数据。这些测定中使用的8点hvista滴定物被选择来提供在于中性ph条件下报告的动力学数值方面增加的置信度。在这个测定中应用了相对严格的非结合截断值。p1-061029抗体的某些子代(p1-068757、
‘
759、
‘
765、
‘
771和
‘
775)显示在ph 7.4下在微体积摩尔浓度下不结合至hvista，而
‘
761和
‘
767显示在ph 7.4下在100nm下不结合至hvista，但确实显示在微体积摩尔浓度下结合至hvista。
[2273]
[2274]
[2275]
[2276]
[2277]
[2278]
[2279]
[2280][2281]
实施例30：用于测定抗vista抗体与人vista的结合的spr方案
[2282]
可根据以下方案，通过表面等离子体共振(spr)测定抗vista抗体与人vista
(hvista)的结合亲和力和结合动力学。对于这些测定，使用具有组氨酸标签的hvista-ecd构建体(seq id no：325)。在t200仪器(ge healthcare)上在酸性和中性ph下测量结合。将蛋白a(thermofisher目录号21181)在ph 4.5 10mm乙酸钠中稀释至20μg/ml，并且遵循制造商的胺偶联方案(ge healthcare)固定至cd5生物传感器的流动池上。所有spr实验都使用在所指示ph下的pbst(137mm nacl、2.7mm kcl、10mm磷酸盐缓冲剂和0.05％20)运行缓冲液在37℃下进行。将抗体在ph 7.4 pbst中稀释至20nm，并且捕集在蛋白a表面上。以40μl/min在捕集的抗体上注射100至0.8nm浓度系列的单价人vista-ecd(seq id no：325)以测量缔合和解离。两次15秒注射ph 1.5 10mm甘氨酸用于在测定循环之间再生蛋白a捕集表面。从减去参考流动池和0nm空白的传感图获得速率常数ka(k
缔合
，缔合速率)和kd(k
解离
，解离速率)，并且在t200评估软件3.1版本中相对于1∶1结合模型加以拟合。
[2283]
在其他实验中，可将hvista-ecd构建体捕集在蛋白a表面上，并且在捕集的蛋白质上注射抗vista抗体。对于在这个测定中使用，遵循thermofisher目录号44985的方案，通过木瓜蛋白酶消化制备抗体fab片段。使用在ph 7.4和ph 6.0下的相同运行缓冲液(pbst)进行fab的结合。将先前描述的hvista-ecd构建体稀释至25nm，并且使用抗人fc cm5传感器芯片(ge healthcare)，以10μl/min捕集60秒，在此之后，以0.8至100nm的浓度范围注射fab。以30μl/min使用3m mgcl2的30秒脉冲再生表面。fab结合的r最大％(归一化spr结合响应)计算为(观察到的r最大/计算的r最小)
×
100，其中观察到的r最小＝在缔合阶段结束时的ru(结合响应单位)响应；计算的r最大＝(捕集水平/配体的分子质量)
×
分析物的分子质量。
[2284]
实施例31：细胞结合和阻断测定方案
[2285]
可根据以下方案进行用以测定本文中的抗vista抗体是否抑制hvista与细胞(其中所述细胞是hvista结合的细胞)的结合以及所述抑制的程度的测定。在人vista结合和阻断测定中，将藻红素(pe)缀合的链霉亲和素多聚体(immudex)在用2-(n-吗啉代基)乙烷磺酸(mes)调整至所指示ph的汉克氏缓冲盐溶液(hbss，具有钙和镁)中稀释至32nm。将稀释的右旋糖酐聚体用32-900nm重组单生物素化人vista(acro biosystems)装载以促进vista-右旋糖酐聚体捕集。未与vista一起孵育的
‘
空’多聚体用作阴性对照。在室温下将人白细胞、未刺激的外周血单个核细胞(pbmc)t细胞、用抗cd3/cd28珠粒刺激(人t活化thermofisher)进行刺激72-96小时的pbmc t细胞或中国仓鼠卵巢(cho)细胞用vista多聚体标记30分钟，随后用相同hbss mes缓冲液洗涤。或者，用人vista-fc嵌合蛋白标记细胞，并且用稀释至相同hbss mes缓冲液中的抗igg二级抗体(jackson immuno research)检测结合。将经标记细胞保持不固定，或用甲醛(foxp3固定缓冲液，ebioscience)固定，并且在流式细胞仪上进行获取。
[2286]
在vista抗体阻断测定中，将100nm装载的vista多聚体或vista-fc嵌合蛋白与所指示抗体一起预孵育，随后进行细胞结合。在重组蛋白阻断测定中，将细胞与所指示重组蛋白一起预孵育，随后用100nm装载的vista多聚体或vista-fc嵌合蛋白标记。
[2287]
在psgl-1抗体阻断测定中，将细胞与kpl-1(bd biosciences或biolegend)或pl2(mbl)一起预孵育，随后用32nm装载的vista多聚体或vista-fc嵌合蛋白标记。通过抗igg抗
体(jackson immuno research)或抗6
×
his抗体(columbia biosciences)检测vista-fc结合。通过流式细胞计量术或均相时间分辨荧光(htrf)获取细胞。
[2288]
在小鼠vista结合和阻断测定中，直接离体使用小鼠脾细胞和淋巴结驻留细胞，或首先用抗cd3/cd28珠粒刺激(小鼠t活化dynabeads，thermofisher)进行刺激48小时。将细胞在ph 6.0 hbss或pbs中用小鼠vista-fc嵌合蛋白标记。用抗igg二级抗体(jackson immuno research)检测vista-fc和结合。在抗体阻断测定中，将小鼠vista-fc与vista.10抗体一起预孵育，随后进行细胞标记。通过对cd4、cd8、b220和cd11b染色(thermofisher)测定vista与单个白细胞子组的结合。在流式细胞仪上获取细胞。
[2289]
在vsig-3结合测定中，cho和hek293细胞被工程改造来分别异位表达人vsig-3和vista蛋白。可使用抗vsig-3抗体(pab af4915，r&d systems)通过流式细胞计量术确认vsig-3表达。可使用抗vista抗体(克隆740804，r&d systems)通过流式细胞计量术确认vista表达。在含有0.9mm cacl2、0.05mm mgcl2和0.5％bsa的pbs缓冲液中进行细胞结合测定，所述pbs缓冲液通过改变缓冲液中na2hpo4和kh2po4的比率而调整至所需ph。以10μg/ml使用vista-fc和vsig-3-fc。用抗人igg(fab
′
)
2-pe抗体(invitrogen)检测结合。
[2290]
实施例32：抗体表位划分竞争测定和ph敏感性方案
[2291]
利用t200仪器，使用竞争性spr表位划分来鉴定交叉阻断所需vista抗体表位(例如vist a.4或p1-068767的表位)或非所需vista抗体表位(例如抗vista抗体vist a.5的表位)的vista特异性抗体。将测试抗体和对照抗体在ph 4.5 10mm乙酸钠中稀释至10μg/ml，并且遵循制造商的胺偶联方案(ge healthcare)固定至cm5生物传感器的流动池上。使用hbs-p 运行缓冲液(10 mm hepes、150mm nacl和0.05％v/v表面活性剂p20，ph 7.4)在25℃下评估竞争。通过固定化抗体捕集100nm单价人his标签化vista ecd(seq id no：325)，接着以100nm注射筛选的每种抗体以评估针对第二抗vista抗体诸如vista.4或vista.5的共结合或阻断活性。两次30秒注射ph 2.0 10mm甘氨酸用于在测定循环之间再生第二抗vista抗体(例如vista.4或vista.5)的表面。使用t200评估软件2.0版本分析传感图。还可在ph 7.4和6.0下在这个测定中评估被阻断(例如由vista.4或p1-068767阻断)的抗体以及未被阻断，即具有不同表位的那些抗体的ph依赖性vista结合。
[2292]
实施例33：p1-068744和p1-068748回复突变抗体的spr结合动力学
[2293]
为确定相对于p1-061015(seq id no：95)的重链cdr，在p1-068744(seq id no：103)和p1-068748(seq id no：99)的重链cdr中进行的氨基酸变化中有哪些为维持与人vista的高亲和力结合所必需，并且对于赋予酸性ph选择性性质是重要的，制备了p1-068744和p1-068748的回复突变体，并且在ph 6.0下和在ph 7.4下通过spr测试它们的结合动力学。p1-068744、p1-068748和p1-061015的重链cdr的氨基酸序列的比对例如在上表8中以及在图29c中加以显示。
[2294]
p1-068744重链与它的亲本抗体p1-061015的重链进行比较(比较seq id no：95和103)，其中p1-068744在重链cdr中含有若干碱性氨基酸残基(参见表8、表11和表27，并且比较seq id no：95和103)。基于seq id no：95和103，p1-068744在重链cdr1中的位置31处含有e残基而非s，在重链cdr2中的位置50处含有h残基而非i，在重链cdr2的位置60处含有e而非y(这个变化的回复在本文中被称为e59y)、在重链cdr3中的位置104处含有e而非s(这个变化的回复在本文中被称为e100s)，并且在重链cdr3的位置110(cdr3的末尾位置)处含有e
而非y(这个变化的回复在本文中被称为e102y)。
[2295]
在处于ph 6.0或7.4下的pbst运行缓冲液中在37℃下进行spr测定，并且包括以下步骤：以10μl/min流速持续30秒将抗体捕集在蛋白a芯片上；以40μl/min进行180秒样品注射，接着进行600秒解离；以30μl/min用甘氨酸(1.5)进行2
×
15秒再生注射。结果阐述于图29a和表27中。
[2296]
如表8、表12和表28中所示，p1-068748重链与抗体p1-061015的重链进行比较(并且比较seq id no.95和99)，其中它也在重链cdr中含有若干碱性残基。具体来说，比较seq id no：95和99，p1-068748含有在cdr1的位置31和32处的h残基、在cdr2的位置58和59处的d残基(回复体在本文中被称为d57k和d58y)以及在cdr3的位置104处的d残基(这个变化的回复体在本文中被称为d100s)。如以上对于p1-068744回复突变体所阐述来进行spr实验。p1-068748回复突变抗体的结果阐述于图29b中以及表28中。
[2297]
[2298]
[2299]
[2300]
[2301]
[2302]
[2303]
068748抗体，改善在ph 6.0下的kd的那些氨基酸残基。具有双下划线的氨基酸残基是其回复成p1-061015中的相应残基导致p1-068744或p1-068748的ph选择性的丧失的那些氨基酸残基，并且因此是这些抗体中对于与hvista的ph选择性结合重要的残基。具有锯齿状下划线的氨基酸残基是其回复成p1-061015中的相应残基对p1-068744或p1 068748与hvista的动力学和/或结合有害的那些氨基酸残基，并且因此是这些抗体中对于与hvista的结合重要的残基。特别地，包括h50i回复的p1-068744回复突变体如同p1-061015抗体一样是ph耐受性的。p1-068744 e31s突变维持ph选择性性质，并且相对于
‘
744抗体，在ph 6.0下具有改善的解离速率(约2-3倍)。当e31s突变与e59y或e100s组合时，改善的解离速率丧失。e59y和e100s回复似乎对动力学有害。包括d100s回复的p1-068748回复突变体如同p1-061015亲本抗体一样是ph耐受性的。单独或呈双重取代形式的h31s、h32y和d57k回复维持ph选择性，并且相较于
‘
748抗体，在ph 6.0下具有略微(≤2倍)改善的解离速率。包括d58y回复的p1-068748双重回复突变体显示不良结合和/或不良动力学。单一d58y回复突变体未表达，因此不可评估。
[2306]
实施例34：抗hvista抗体与表达hvista-ecd的细胞的结合
[2307]
为测试抗hvista抗体在ph 6.0和ph 7.4下与稳定表达hvista细胞外结构域(ecd)的293t细胞的结合，使用以下方案。通过将mes逐滴添加至溶液中直至达到所需ph来将酸性(ph 6.0)和中性(ph 7.4)hbss缓冲液调整至正确ph。将293-okt3-vista表达性细胞以约40,000个细胞/孔铺于96孔板上。用相应ph缓冲液洗涤细胞。将抗体(在10μg/ml下)添加至板的孔中，并且将板在冰上孵育45分钟，接着用相应缓冲液洗涤两次。接着以1∶200比率添加apc缀合的抗人igg二级抗体(例如apc山羊抗人抗体)，并且将板在冰上再孵育45分钟，接着用相应缓冲液洗涤两次。接着在流式细胞仪上读取荧光。
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来自这个实验的数据显示于图30a至图30d中，并且显示为相较于抗体p-061029在每种ph下的设置成100％的结合的结合百分比。测试的抗体都不显示与不表达hvista的293t亲本细胞的任何结合。图30a显示p1-068744和p1-068748抗体以及抗体p1-068767、p1-061029和它们的若干子代抗体的数据。图30b显示额外p1-068767或p1-061029子代抗体和若干vista.4子代抗体的数据。图30c和图30d显示各种p1-068744和p1-068748子代抗体的数据。
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序列表
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以下是在本技术中提及的某些序列的表。在seq id no：2中，氨基酸位置187可为d或e。
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在以下抗体序列中，vh cdr1、cdr2和cdr3序列分别位于包含氨基酸26-35、50-66和99-110的氨基酸位置处，并且vl cdr1、cdr2和cdr3序列分别位于包含氨基酸24-35、51-57和90-98的氨基酸位置处。vh cdr1根据abm(aa 26-35；abhinandan和manin(2008)mol.immunol.45：3832-3839；swindells等人(2017)j.mol.biol.429：356-364)来编号，并且所有其他cdr(vh cdr2、vh cdr3、vl cdr1-3)根据kabat来编号。特定抗体种类的cdr序列在以下在它们的vh和vl序列上用粗体表示并加下划线。
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再多了解一些
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