同时测定电子烟液中莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松含量的方法与流程

1.本发明涉及电子烟液中同时对三种功能成分的定量分析技术领域，尤其涉及一种同时测定电子烟液中莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松含量的方法。


背景技术：

2.电子烟作为不燃烧的方式使吸入人体的为雾化液颗粒而非燃烧裂解产物，因此其电子烟液中的化学成分能够直接作用在咽喉与肺部；故而，在电子烟液中加入各种功能性成分是发展创新性技术的一种方向。
3.在研究中发现，莫努匹韦(molnupiravir)、布地奈德(budesonide)和丙酸倍氯米松(beclomethasone)这三种消炎疗效成分添加在电子烟液中出现良好的功能性作用；因此需要在后续的生产和研究中对电子烟液中的三种成分进行测定；但是在现有技术中，只能对其中一种物质进行单独测定，且现有技术只提及了采用hplc方法对丙酸倍氯米松进行含量检测，而没有提及到莫努匹韦和布地奈德的检测；更没有得到和开发出能够同时测定三种物质的方法；而同时测定三种物质的含量，在工业生产和产品检验上都具有重大意义，因此亟需一种可以同时对电子烟液中莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松三种成分进行测定的方法。


技术实现要素：

4.针对上述技术中存在的如:还未有一种高效、快速同时测定电子烟液中莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松含量的方法。
5.具体为一种同时测定电子烟液中莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松含量的方法，包括以下步骤:
6.(1)对照工作溶液配制
7.分别称取莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松标准品，并用50％甲醇水溶液定容，使其浓度约为20.58μg/ml、20.48μg/ml、19.01μg/ml，做为标准母液；再精密量取各物质标准母液0.3ml、0.5ml、1ml、5ml，用50％甲醇水溶液分别稀释并定容至10ml，即得各系列标准溶液；
8.(2)待测品制备
9.精密称取待测样品约1.0000g定容至10ml的容量瓶中，用50％甲醇水溶液超声萃取稀释并定容；将其中10ml的样品溶液置于离心管中，并在8000r/min下离心10min后，再用0.20μm微孔滤膜过滤，滤液供液相色谱检测；
10.(3)液相色谱分析
11.采用超高效合相色谱仪对步骤(1)得到的梯度浓度对照工作液和步骤(2)得到的滤液进行分析；
12.色谱柱：beh c18柱(2.1
×
100mm,1.7μm)；
13.流动相条件：a相为20mmol/l乙酸铵甲酸溶液(每1000ml 20mmol/l乙酸铵溶液加入200ul的甲酸)，b相为甲醇溶液；
14.梯度洗脱条件为：0min流动相a为80％，流动相b为20％；
15.6min时流动相a为35％，流动相b为65％；保留14min；
16.20.5min时流动相a为80％，流动相b为20％；平衡3.5min后进下一针；
17.流速：0.4ml/min；柱温：25℃；进样量：10μl；检测波长：240nm；
18.空白实验组为用50％的甲醇水溶液作空白过0.2μm滤膜得到滤液，对滤液进行上述步骤测定。
19.作为优选，乙酸铵、甲醇和甲酸均为色谱级别，标准品纯度均≥98％。
20.本发明的有益效果是:本发明所提出的电子烟液中莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松含量的方法；现有技术中并未发现同时检测电子烟液中该三种功能性成分的动机，且电子烟液属于复杂样品，常规技术手段难以做到同时分离其中的成分和杂质，而采用超高液相色谱检测法，并特殊选定了色谱柱beh c18柱(2.1
×
100mm,1.7μm)；并设计乙酸铵甲酸溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱，解决了现有技术中常规流动相无法对杂质干扰进行分离的缺陷；使得莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松能够较好析出；可以将复杂样品中的杂质进行分离；以此来做到同时准确测定电子烟液中莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松含量。
附图说明
21.图1为本发明对照品的液相色谱图；
22.图2为本发明1号电子烟液待测样品的液相色谱图；
23.图3为本发明2号电子烟液待测样品的液相色谱图；
24.图4为本发明3号电子烟液待测样品的液相色谱图；
25.图5为本发明4号电子烟液待测样品的液相色谱图；
26.图6为本发明5号电子烟液待测样品的液相色谱图；
27.图7为本发明6号电子烟液待测样品的液相色谱图。
具体实施方式
28.为了更清楚地表述本发明，下面结合实施例对本发明作进一步地描述。
29.在现有技术中，申请号为201910577202.5的文件公开了一种丙酸倍氯米松有关物质的检测方法；其中流动相选用磷酸盐以及四氢呋喃，而磷酸盐在高有机相液相系统中容易发生盐析现象，另外四氢呋喃的粘度较大，对液相系统的压力及peek管线有相当大的影响，因此该方法对仪器会造成一定的损害，同时溶剂的用量大且检测的耗时长，对于生产过程控制来说效率和成本弊端十分明显。而在其它的现有技术中，也没有获知需要对电子烟液中同时检测电子烟液中莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松含量的动机；更未有能够同时检测且不受杂质影响的现有检测手段，而且需要在一个技术方案中同时准确的析出三个能够分离的主峰，既没有现有技术作为有效参考，也没有具体方式揭露如何屏蔽电子烟液中的杂质干扰以达到有效分离的效果。因此，同时分离电子烟液中的莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松，并对含量进行检测分析相对现有技术更具有非显而易见性。
30.实施例1
31.一种同时测定电子烟液中莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松含量的方法，其特征在于，包括以下步骤:
32.(1)对照工作溶液配制
33.分别称取色谱级莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松标准品，并用50％甲醇水溶液定容，使其浓度约为20.58μg/ml、20.48μg/ml、19.01μg/ml，做为标准母液；再精密量取各物质标准母液0.3ml、0.5ml、1ml、5ml，用50％甲醇水溶液分别稀释并定容至10ml，即得各系列标准溶液；
34.(2)待测品制备
35.精密称取待测样品约1.0000g定容至10ml的容量瓶中，用50％甲醇水溶液超声萃取稀释并定容；将其中10ml的样品溶液置于离心管中，并在8000r/min下离心10min后，再用0.20μm微孔滤膜过滤，滤液供液相色谱检测；
36.(3)液相色谱分析
37.采用超高效合相色谱仪对步骤(1)得到的梯度浓度对照工作液和步骤(2)得到的滤液进行分析；
38.色谱柱：beh c18柱(2.1
×
100mm,1.7μm)；
39.流动相条件：a相为20mmol/l乙酸铵甲酸溶液(每1000ml 20mmol/l乙酸铵溶液加入200ul的甲酸)，b相为甲醇溶液；
40.梯度洗脱条件为：0min流动相a体积百分比为80％，流动相b体积百分比为20％；
41.6min时流动相a体积百分比为35％，流动相b体积百分比为65％；保留14min；在20min-20.5min这个时间段内，流动相比例迅速变化调整至下一个阶段，因此不做特别说明；
42.20.5min时流动相a体积百分比为80％，流动相b体积百分比为20％；平衡3.5min后进下一针；
43.流速：0.4ml/min；柱温：25℃；进样量：10μl；检测波长：240nm；
44.空白实验组为用50％的甲醇水溶液作空白过0.2μm滤膜得到滤液，对滤液进行上述步骤测定；
45.在本技术方案中，所指的莫努匹韦在cas数据库编号为2349386-89-4；丙酸倍氯米松在cas数据库编号为5534-09-8；布地奈德在cas数据库编号为5133-22-3；在超高效液相色谱定量分析中，分离是首要条件，基线分离是提供精准结构的有效保障；而针对电子烟液这种复杂混合物，其中目标组分已经达到三种，而干扰杂质则更多，因此大大增加了基线分离的难度；在分离多组分复杂混合物时，极性相近结构相似的组分是最难分离的物质对。正如其中丙酸倍氯米松和莫努匹韦两组分在电子烟液中分别受到相对应的杂质干扰，他们的极性相近、结构相似，分离难度大；而本方案采用乙酸铵甲酸溶液和甲醇作为流动相并且设计梯度洗脱的方式；有效地将电子烟液中存在的莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松有效进行了分离定性，并依照浓度和峰面积对其进行定量。
46.将上述步骤(1)中的各浓度梯度的混合标准溶液按照方法流程进行测定得到图1的对照色谱图；同时对六个批次的电子烟液待测样品进行测定；得到如图2-图7的液相色谱图；根据对照品的液相色谱图的出峰时间可以知道，每种物质的出峰时间并不重叠，且主峰
之间达到良好基线分离度，可以很快速准确的被分离检测到；所以在图2-图7可以判断出各物质的反应峰，从而利用保留时间和峰面积进行定性定量的分析。试验结果表明，本发明所选用的高效液相色谱参数能够满足对样品中3种目标成分的检测分离要求。六批次电子烟液待测样品的检测结果如下表1：
47.表1
[0048][0049]
注：nd，表示未检出。
[0050]
本发明的优势在于:
[0051]
1)本发明建立了一种利用超高液相色谱快速检测电子烟液中莫努匹韦、布地奈德和丙酸倍氯米松含量的方法，能够准确地进行定量，为不同类物质的准确判定、快速检测提供科学依据；
[0052]
2)克服了现有技术中常规技术手段带来的无法分离和杂质干扰的缺陷，解决了其中磷酸盐及四氢呋喃对色谱系统的损害问题，以及高溶剂量使用的环保和经济效益问题；
[0053]
3)本发明中的处理流程选择对各种物质达到了优异的分离效果。
[0054]
以上公开的仅为本发明的几个具体实施例，但是本发明并非局限于此，任何本领域的技术人员能思之的变化都应落入本发明的保护范围。