具有4-氨基苯甲酸羟化活性的多肽及其用途的制作方法

技术特征：
1.一种具有4-氨基苯甲酸羟化活性的多肽，其由以下a)～c)表示：a)其是在序列号2所示的氨基酸序列或与其具有至少47％的同一性的氨基酸序列中序列号2所示的氨基酸序列的47位或与其对应的位置的氨基酸残基为亮氨酸的具有4-氨基苯甲酸羟化活性的多肽；b)其是在序列号2所示的氨基酸序列或与其具有至少51％的同一性的氨基酸序列中序列号2所示的氨基酸序列的201位或222位、或者与201位或222位对应的位置的氨基酸残基为苯丙氨酸的具有4-氨基苯甲酸羟化活性的多肽；c)其是在序列号2所示的氨基酸序列或与其具有至少90％的同一性的氨基酸序列中序列号2所示的氨基酸序列的47位、72位、210位、294位或385位、或者与47位、72位、210位、294位或385位对应的位置的氨基酸残基为下列氨基酸的具有4-氨基苯甲酸羟化活性的多肽，(a)47位或与其对应的位置：异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、谷氨酰胺，(b)72位或与其对应的位置：丙氨酸、蛋氨酸，(c)210位或与其对应的位置：蛋氨酸，(d)294位或与其对应的位置：丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、丝氨酸，(e)385位或与其对应的位置：缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸。2.一种具有4-氨基苯甲酸羟化活性的突变多肽的制造方法，其包括以下a
′
)～c
′
)所示的氨基酸残基的取代：a
′
)在由序列号2所示的氨基酸序列或与其具有至少47％的同一性的氨基酸序列构成、且具有4-氨基苯甲酸羟化活性的多肽中，将序列号2所示的氨基酸序列的47位或与其对应的位置的氨基酸残基取代为亮氨酸；b
′
)在由序列号2所示的氨基酸序列或与其具有至少51％的同一性的氨基酸序列构成、且具有4-氨基苯甲酸羟化活性的多肽中，将序列号2所示的氨基酸序列的201位或222位、或者与201位或222位对应的位置的氨基酸残基取代为苯丙氨酸；c
′
)在由序列号2所示的氨基酸序列或与其具有至少90％的同一性的氨基酸序列构成、且具有4-氨基苯甲酸羟化活性的多肽中，将序列号2所示的氨基酸序列的47位、72位、210位、294位或385位、或者与47位、72位、210位、294位或385位对应的位置的氨基酸残基取代为下列氨基酸，(a)47位或与其对应的位置：异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、谷氨酰胺，(b)72位或与其对应的位置：丙氨酸、蛋氨酸，(c)210位或与其对应的位置：蛋氨酸，(d)294位或与其对应的位置：丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、丝氨酸，(e)385位或与其对应的位置：缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸。3.一种提升4-氨基苯甲酸羟化活性的方法，其包括以下a
′
)～c
′
)所示的氨基酸残基的取代：a
′
)在由序列号2所示的氨基酸序列或与其具有至少47％的同一性的氨基酸序列构成、且具有4-氨基苯甲酸羟化活性的多肽中，将序列号2所示的氨基酸序列的47位或与其对应的位置的氨基酸残基取代为亮氨酸；b
′
)在由序列号2所示的氨基酸序列或与其具有至少51％的同一性的氨基酸序列构成、且具有4-氨基苯甲酸羟化活性的多肽中，将序列号2所示的氨基酸序列的201位或222位、或
者与201位或222位对应的位置的氨基酸残基取代为苯丙氨酸；c
′
)在由序列号2所示的氨基酸序列或与其具有至少90％的同一性的氨基酸序列构成、且具有4-氨基苯甲酸羟化活性的多肽中，将序列号2所示的氨基酸序列的47位、72位、210位、294位或385位、或者与47位、72位、210位、294位或385位对应的位置的氨基酸残基取代为下列氨基酸，(a)47位或与其对应的位置：异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、谷氨酰胺，(b)72位或与其对应的位置：丙氨酸、蛋氨酸，(c)210位或与其对应的位置：蛋氨酸，(d)294位或与其对应的位置：丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、丝氨酸，(e)385位或与其对应的位置：缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸。4.如权利要求2或3所述的方法，其中，a
′
)所示的氨基酸残基的取代是由缬氨酸向亮氨酸的取代，b
′
)所示的氨基酸残基的取代是由酪氨酸向苯丙氨酸的取代。5.一种编码权利要求1所述的多肽的多核苷酸。6.一种包含权利要求5所述的多核苷酸的载体或dna片段。7.一种包含权利要求6所述的载体或dna片段的转化细胞。8.如权利要求7所述的转化细胞，其中，所述转化细胞是大肠杆菌或棒状杆菌属菌。9.如权利要求7或8所述的转化细胞，其中，所述转化细胞是能够供给4-氨基苯甲酸类的微生物。10.一种4-氨基-3-羟基苯甲酸类的制造方法，其包括对权利要求7～9中任一项所述的转化细胞进行培养的工序。11.如权利要求10所述的方法，其包括从培养基中回收4-氨基-3-羟基苯甲酸类的工序。12.如权利要求10或11所述的方法，其中，培养在存在4-氨基苯甲酸类的条件下进行。13.如权利要求10～12中任一项所述的方法，其中，4-氨基-3-羟基苯甲酸类为以下通式(1)所示的4-氨基-3-羟基苯甲酸衍生物，4-氨基苯甲酸类为以下通式(2)所示的4-氨基苯甲酸衍生物，式(1)中，r1表示氢原子、羟基、甲氧基、氨基、氟原子、氯原子、溴原子、碘原子、羧基、甲基、乙基，r2表示氢原子或羟基、甲氧基、氨基、氟原子、氯原子、溴原子、碘原子、羧基、甲基或乙基，x1和x2为氢原子或羟基且至少一方表示羟基，
式(2)中，r1表示氢原子、羟基、甲氧基、氨基、氟原子、氯原子、溴原子、碘原子、羧基、甲基、乙基，r2表示氢原子或羟基、甲氧基、氨基、氟原子、氯原子、溴原子、碘原子、羧基、甲基或乙基。

技术总结
本发明提供具有优异的4-氨基苯甲酸羟化活性的多肽及其利用方法。其是在序列号2所示的氨基酸序列或与其具有至少47％的同一性的氨基酸序列中序列号2所示的氨基酸序列的47位或与其对应的位置的氨基酸残基为亮氨酸的具有4-氨基苯甲酸羟化活性的多肽。氨基苯甲酸羟化活性的多肽。


技术研发人员：野中镜士朗 高桥史员
受保护的技术使用者：花王株式会社
技术研发日：2020.11.06
技术公布日：2022/6/21