翻译用组合物及肽的制备方法与流程

技术特征：
1.翻译用组合物，其包含结合第一氨基酸的第一trna和结合第二氨基酸的第二trna，所述第一trna的32，33，37及38位(trna编号规则)碱基的组合为(1)32u，33u，37g，38a，(2)32a，33u，37g，38u，(3)32a，33u，37a，38u，(4)32u，33u，37g，38u，(5)32u，33u，37a，38u，或(6)32c，33u，37g，38a，所述第一trna和所述第二trna的反密码子的第一个字母的碱基彼此不同，所述第一trna和所述第二trna的反密码子的第二个字母的碱基相同，所述第一trna和所述第二trna的反密码子的第三个字母的碱基相同，选自所述第一氨基酸及所述第二氨基酸中的至少一个为非天然氨基酸，其中a为腺嘌呤，c为胞嘧啶，g为鸟嘌呤，u为尿嘧啶。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述第一trna的反密码子的第一个字母的碱基为a或g而所述第二trna的反密码子的第一个字母的碱基为c或u，或所述第一trna的反密码子的第一个字母的碱基为c或u而所述第二trna的反密码子的第一个字母的碱基为a或g。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，所述第一及所述第二trna的反密码子的第二个字母及第三个字母的碱基的组合为(i)第二个字母为g，且第三个字母为g，(ii)第二个字母为a，且第三个字母为g，(iii)第二个字母为c，且第三个字母为c，(iv)第二个字母为g，且第三个字母为c，(v)第二个字母为a，且第三个字母为c，(vi)第二个字母为g，且第三个字母为u，(vii)第二个字母为g，且第三个字母为a，或(viii)第二个字母为c，且第三个字母为g。4.根据权利要求1～3中任一项所述的组合物，其中所述第一trna的trna体为嵌合trna体。5.根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其为用于无细胞翻译的组合物。6.根据权利要求1～5中任一项所述的组合物，其中所述嵌合trna体为32，33，37及38位(trna编号规则)碱基与除这些以外部位的碱基序列的来源不同的嵌合trna体。7.根据权利要求1～6中任一项所述的组合物，其中所述第一trna为人工trna。8.根据权利要求1～7中任一项所述的组合物(但是，不包括下述组合物：所述第一trna及所述第二trna在32，33，37及38位(trna编号规则)具有权利要求1的(4)中限定的碱基，并具有在1～31位及39～74位(trna编号规则)具有含有seq id no：255所述碱基序列的trna中1～31位及39～74位(trna编号规则)碱基序列的嵌合trna体的情况下，所述第一trna及所述第二trna的反密码子组合为gcg及ccg的组合物以及为ccg及gcg的组合物)。
9.根据权利要求1～8中任一项所述的组合物，其中所述第一trna为具有嵌合反密码子环的trna。10.根据权利要求1～9中任一项所述的组合物，其中所述第一trna的32，33，37及38位(trna编号规则)碱基的组合为(1)32u，33u，37g，38a，(2)32a，33u，37g，38u，(3)32a，33u，37a，38u，或(4)32u，33u，37g，38u。11.根据权利要求1～10中任一项所述的组合物，其中所述第二氨基酸为非天然氨基酸。12.权利要求1～11中任一项所述的组合物的制备方法，其包括通过将所述第一氨基酸在翻译体系外与trna结合而制备所述第一trna的工序，和/或通过将所述第二氨基酸在翻译体系外与trna结合而制备所述第二trna的工序。13.肽的制备方法，其包括使用权利要求1～11中任一项所述的组合物翻译核酸。14.降低密码子误读的方法，所述方法包括使用权利要求1～11中任一项所述的组合物翻译核酸，所述密码子误读为所述第一trna引起的与所述第二trna的反密码子互补的密码子的误读。15.降低密码子误读的方法，所述方法包括取代选自由具有与第一密码子互补的反密码子的trna的32，33，37及38位(trna编号规则)组成的组中的至少1个碱基，所述密码子误读为所述trna引起的第二密码子的误读，其中，所述第一密码子与所述第二密码子的第一个字母为相同的碱基，所述第一密码子与所述第二密码子的第二个字母为相同的碱基，所述第一密码子与所述第二密码子的第三个字母为彼此不同的碱基。

技术总结
本公开的课题之一为提供能够降低密码子误读引起的误译为非预期氨基酸的比例的新手段。在一些实施方式中，本公开提供翻译用组合物，所述翻译用组合物包含在tRNA的32，33，37及38位(tRNA编号规则)具有特定碱基组合的tRNA。根据本公开特定的实施方式，能够降低密码子误读引起的非预期氨基酸被导入的比例。读引起的非预期氨基酸被导入的比例。读引起的非预期氨基酸被导入的比例。


技术研发人员：笼谷万奈 山下博子
受保护的技术使用者：中外制药株式会社
技术研发日：2020.12.25
技术公布日：2022/6/17