野黄芩苷增强碘-125粒子放射敏感性的应用

1.本发明属于生物医药领域，具体涉及野黄芩苷增强肝细胞癌对
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i放射性粒子的辐射敏感性的新应用。


背景技术：

2.125
i放射性粒子植入技术的使用和推广，提高了晚期肝细胞癌临床治疗的安全性和有效性，尤其是与其他化疗药物（如洛铂）和中药制剂联合使用时，预后明显改善。然而，
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i放射性粒子对肝细胞癌细胞作用的具体机制仍有待研究。此外，中药制剂是否能增强肝细胞癌对
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i放射性粒子的辐射敏感性尚不清楚，探讨
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i放射性粒子的作用机制和新靶点，将有助于
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i放射性粒子更好地应用于临床，并为肝细胞癌提供新的治疗思路。
3.近年来，天然药物的抗肿瘤作用受到越来越多的关注。科技的进步使中医辨证从方剂深入中药有效成分的探究，深入到细胞、基因层面。许多传统中药具有强大的抗肿瘤作用，可显著抑制肿瘤生长，且副作用较小。野黄芩苷(scutellarin, scu)是一种黄酮类化合物，又名灯盏花乙素，可从黄芩、半枝莲、白花蛇舌草等传统中药内提取，是其有效作用成分。scu在多项实验研究中被证实对包括胃癌、肠癌、肺癌在内的多种肿瘤细胞具有显著的抑制作用，其可诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖，增加化疗药物的敏感性，但其是否可能增加放疗的敏感性，特别是增加碘125粒子治疗肝癌的疗效，二者通过何种途径起作用，具体机制目前尚不清楚。


技术实现要素：

4.针对现有技术中的问题，本发明提供一种野黄芩苷的新应用，能够增强肝细胞癌对
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i放射性粒子的辐射敏感性。
5.为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
6.一种野黄芩苷作为
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i放射治疗恶性肿瘤增敏剂的应用。
7.所述恶性肿瘤选自胃癌、肠癌、肺癌或肝癌。
8.本发明具有以下优点：本发明提供了野黄芩苷作为
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i放射治疗增敏剂的用途，通过试验验证了相比于
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i放射性粒子单一作用，野黄芩苷与
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i放射性粒子联合作用能够有效增强对靶细胞增殖的抑制，增强其促进细胞凋亡的能力。在临床应用中，对于存在
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i放射抵抗的患者，联合使用野黄芩苷可以增强
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i的治疗效果；并且
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i放射治疗增敏剂的使用，可以降低
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i的使用活度和临床治疗剂量，从而降低放射治疗相关并发症的发生率。从而提高患者治疗效果和生存质量。
附图说明
9.图1野黄芩苷浓度对数-hcc细胞抑制率曲线；图2为不同处理对细胞周期的影响；
图3为不同处理对细胞凋亡的影响；图4为不同处理对细胞增殖的影响；其中，*表示p《0.05，**表示p《0.01，***表示p《0.001。
具体实施方式
10.下面结合实施例和附图对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。
11.实施例1野黄芩苷对
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i的体外增敏试验肝细胞癌细胞系smmc7721和hepg2购自中乔新舟生物技术公司。smmc7721细胞在rpmi1640（corning,inc.）中培养，补充有10%胎牛血清（fbs）和1%青霉素-链霉素。hepg2细胞在dulbecco改良的eagle培养基（corning,inc.）中培养，补充有10%的fbs和1%的青霉素-链霉素，细胞在37℃和5%的二氧化碳中培养。
12.1.野黄芩苷致敏浓度的筛选采用cck-8试剂盒（dojindo，kumamoto）评估hepg2细胞对野黄芩苷（上海源叶生物科技有限公司）细胞毒性的敏感性：在96孔板中培养的细胞用浓度为0-5μg/ml的野黄芩苷处理72小时。使用graphpadprism9.0计算半数抑制浓度（ic
50
），选择ic
50
的10%作为野黄芩苷致敏浓度。不同野黄芩苷对2种hcc细胞的浓度对数-抑制率曲线如图1所示，经计算，针对hepg2细胞的增敏浓度为0.02μg/ml。
13.2.野黄芩苷对
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i抗增殖的影响采用hepg2细胞系的增敏浓度的野黄芩苷，联合
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i粒子体外照射模型共同处理细胞。将细胞分为：对照组、单scu处理组、单
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i处理组、scu联合
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i处理组。增敏浓度的scu是由细胞的培养基配制而成，当把细胞的正常培养基更换为含有scu的培养基后，随即将细胞放入
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i粒子体外照射开始照射，照射时间为72h，初始活性水平为3.0mci，剂量率为3.412cgy/h。
14.在6孔板中培养hepg2细胞（2
×
105个/孔），分别用增敏浓度的scu、
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i粒子以及两者的联合处理细胞后，收集细胞并使用预冷的70%乙醇固定1小时，然后用pi和rnasea（bdbiosciences）染色，然后使用流式细胞仪（beckman）检测。结果如图2所示：scu和
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i放射性粒子联合处理组的细胞周期停滞在g2/m期的程度大于单独使用
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i放射性粒子或scu的处理组。
15.3.野黄芩苷对
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i促进细胞凋亡的影响在6孔板中培养hepg2细胞（2
×
105个/孔），分别用增敏浓度的scu、
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i粒子以及两者的联合处理细胞后收集。使用bindingbuffer重悬细胞，再加入5μl碘化丙啶（pi）和annexinv-apc（elabscience）或annexinv-fitc（bdbiosciences）进行染色，避光20min后使用流式细胞仪（beckman）检测。annexinv-fitc/pi检测用于评估野黄芩苷对
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i放射性粒子诱导的hcc细胞凋亡的影响，结果如图3所示：联合治疗组的细胞凋亡率显著高于野黄芩苷或
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i放射性粒子单一治疗组。这说明，野黄芩苷促进了
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i放射性粒子诱导的细胞凋亡。
16.4.野黄芩苷对
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i抑制细胞增殖的影响在6孔板中培养hepg2细胞（2
×
105个/孔），分别用增敏浓度的scu、
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i粒子以及两
者的联合处理细胞后收集，通过edu实验检测细胞增殖。首先使用edu溶液进行短时间孵育，随后使用细胞固定液室温孵育30分钟。然后使用apollo染液和hoechst33342染液分别对细胞进行染色。最后使用免疫荧光显微镜观察染色情况，结果如图4所示：联合治疗组的细胞增殖率显著低于野黄芩苷或
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i放射性粒子单一治疗组。这说明，野黄芩苷促进了
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i放射性粒子引发的细胞抗增殖作用。


技术特征：
1.一种野黄芩苷作为
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i放射治疗恶性肿瘤增敏剂的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述恶性肿瘤选自胃癌、肠癌、肺癌或肝癌。

技术总结
本发明属于生物医药领域，提供了一种野黄芩苷作为


技术研发人员：李东 李玉亮 贺光辉 金蝶 王阳
受保护的技术使用者：山东大学第二医院
技术研发日：2022.03.07
技术公布日：2022/6/16