用于预防或治疗癌症的苯甲酰胺衍生物、其制备方法以及包含其作为活性成分的药物组合物与流程

用于预防或治疗癌症的苯甲酰胺衍生物、其制备方法以及包含其作为活性成分的药物组合物


背景技术：
发明领域
1.本发明涉及用于预防或治疗癌症的苯甲酰胺衍生物、其制备方法和包含其作为活性成分的药物组合物。
2.相关技术的描述
3.癌症的发生与各种环境因素有关，这些环境因素包括化学品、辐射和病毒，以及癌基因、肿瘤抑制基因及与凋亡和dna修复有关的基因的变化。最近对癌症分子机制的了解使得靶向抗癌疗法成为可能，这是一种新的治疗方法。
4.靶向药物通常用于靶向癌细胞特征性地必须显示其有效性的分子。分子靶点是与癌细胞信号转导途径、血管生成、基质、细胞周期调节剂和凋亡相关的基因。目前，包括酪氨酸激酶抑制剂和“血管生成抑制剂”在内的“信号转导途径抑制剂”在癌症治疗中用作重要的靶向药物。
5.已知蛋白酪氨酸激酶在许多恶性肿瘤中起着重要作用。具体而言，表皮生长因子受体(egfr)——erbb家族的受体酪氨酸激酶，在许多上皮细胞肿瘤中异常激活，所述上皮细胞肿瘤包括非小细胞肺癌(nsclc)、乳腺癌、神经胶质瘤、头颈部鳞状细胞癌、结肠癌、直肠癌、头颈部癌、胃癌和前列腺癌，并且已知egfr酪氨酸激酶的激活会造成细胞持续增殖、周围组织侵袭、远处转移、血管形成，并增加细胞存活率。
6.特别地，egfr是erbb酪氨酸激酶受体家族(egfr，her-2，erbb-3，erbb-4)之一，并且是具有细胞内结构域(包括细胞外配体结合结构域和酪氨酸激酶结构域)的跨膜酪氨酸激酶。当配体与形成同二聚体或异二聚体的受体结合时，细胞内酪氨酸激酶被激活，egfr刺激的信号激活磷脂酰肌醇3-激酶(pi3k/akt/mtor、ras/raf/mapk、jak/stat)信号传导通路(非专利文献1，nat rev cancer 2007；7：169-81.epidermal growth factor receptor mutations in lung cancer)。
7.特别是，egfr在超过一半的非小细胞肺癌(nsclc)中过表达，并且许多研究已经将egfr作为治疗靶点。已经开发出抑制egfr酪氨酸激酶活性的egfr tki(酪氨酸激酶抑制剂)，代表性药物包括吉非替尼(iressa
tm
)、厄洛替尼(tarceva
tm
)和拉帕替尼(tykerb
tm
，tyverb
tm
)。
8.另一方面，2004年，有报道称egfr的激活突变与非小细胞肺癌(nsclc)中吉非替尼治疗的反应相关。特别是egfr突变主要分为致敏突变和耐药突变，外显子19缺失和外显子21的l858r点突变是最重要的致敏突变，约占85-90％，已知外显子19缺失突变对tki更敏感。另一方面，外显子20的t790m点突变是最重要的耐药突变，已知在50％以上的获得性耐药患者中发现。
9.迄今为止，已鉴定的体细胞突变包括外显子19中的框内缺失或外显子20的插入，以及在表达的蛋白质中修饰单个核酸残基的点突变(例如，l858r、g719s、g719c、g719a和
l861q)。
10.尽管吉非替尼/厄洛替尼对具有egfr突变的nsclc患者具有最初临床效果，但在使用这些药物治疗期间，大多数患者最终发展晚期癌症。复发标本的早期研究识别出一种继发性egfr突变t790m，其使得吉非替尼(zepithinib)和厄洛替尼(erlotinib)无法有效抑制egfr激酶活性。随后的研究证明，在对吉非替尼或厄洛替尼获得耐药的患者中，大约50％的(24/48)肿瘤中发现了egfr t790m突变。这种二次遗传修饰发生在与用激酶抑制剂治疗的患者中的
‘
门卫(gatekeeper)’残基和与其相关的二次抗性等位基因(例如，伊马替尼抗性cml中abl中的t315i)相似的位置。
11.众所周知，egfr突变egfr_del19或egfr_l858r是非小细胞肺癌和头颈癌的主要原因，并且已经开发了它们的治疗药物iressa和taseba，且目前用于临床试验中。然而，当这些药物用于患者时，观察到获得性抗性，导致基于药物结构的egfr二次突变，并且还发现这是实际耐药的主要原因。当第一代egfr抑制剂平均使用10个月时，出现获得性抗性，即位于egfr激酶门卫中的t790m突变，第一代egfr抑制剂无效。也就是说，发生了egfr_del19_t790m或egfr_l858r_t790m双突变，常规治疗药物不显示功效。
12.基于这些事实，出现了开发具有优异的药物功效和新结构的第2代和第3代药物的需要。
13.在过去10年中，已经发现对egfr t790m双突变有作用的多种第3代新药候选物，并且临床研究正在进行，其中最先进的是跨国制药公司阿斯利康的azd9291。然而，已报道对azd9291的抗性发生在约10个月内，导致azd9291药效丧失，且特别是，已报道对包括c797s在内的三重突变的抗性。
14.因此，需要开发对wt egfr显示相对低的抑制作用，而对特异性活化或抗性突变形式的egfr显示较高抑制作用的抑制剂。


技术实现要素：

15.本发明的一个目的是提供一种能够通过抑制egfr突变来预防或治疗癌症的苯甲酰胺衍生物。
16.本发明的另一个目的是提供一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含所述苯甲酰胺衍生物作为活性成分。
17.本发明的另一个目的是提供一种用于预防或改善癌症的保健功能性食品组合物，其包含所述苯甲酰胺衍生物作为活性成分。
18.本发明的另一个目的是提供一种用于预防或治疗癌症的组合制剂，其包含所述苯甲酰胺衍生物和egfr拮抗剂。
19.本发明的另一个目的是提供一种用于制备预防或治疗癌症的药物的苯甲酰胺衍生物。
20.本发明的另一个目的是提供一种所述苯甲酰胺衍生物在制备用于预防或治疗癌症的药物中的用途。
21.本发明的另一个目的是提供一种通过施用所述苯甲酰胺衍生物来预防或治疗癌症的方法。
22.为了实现上述目的，在本发明的一个方面，本发明提供由下式1表示的化合物、其
光学异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐。
23.[式1]
[0024][0025]
(在式1中，
[0026]
r1为取代的c
6-12
芳基，其中所述取代的c
6-12
芳基为被未取代或取代的含有一个或多个选自n、o和s的杂原子的5-10元杂环烷基取代的c
6-12
芳基，
[0027]
所述取代的5～10元杂环烷基为c
1-15
直链或支链烷基羰基、-nr4r5、或被5～7元杂环烷基取代的5～10元杂环烷基，所述5～7元杂环烷基为未取代的或被一个或多个含有一个或多个选自n、o和s的杂原子的c
1-5
直链或支链烷基取代，并且r4和r5独立地为氢或c
1-15
直链或支链烷基；
[0028]
r2为卤素；
[0029]
r3为-oh、c
1-15
直链或支链烷氧基；以及
[0030]
x是＝ch-，或＝n-)。
[0031]
在本发明的另一个方面，本发明提供一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含由式1表示的化合物、其光学异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。
[0032]
在本发明的另一个方面，本发明提供一种用于预防或改善癌症的健康功能性食品组合物，其包含由式1表示的化合物、其光学异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。
[0033]
在本发明的另一个方面，本发明提供一种用于预防或治疗癌症的组合制剂，其包含式1表示的化合物、其光学异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐；和egfr拮抗剂。
[0034]
在本发明的另一个方面，本发明提供一种用于制备预防或治疗癌症的药物的苯甲酰胺衍生物。
[0035]
在本发明的另一个方面，本发明提供所述苯甲酰胺衍生物在制备用于预防或治疗癌症的药物中的用途。
[0036]
在本发明的另一个方面，本发明提供一种通过施用所述苯甲酰胺衍生物来预防或治疗癌症的方法。
[0037]
有益效果
[0038]
本发明一方面提供的所述苯甲酰胺衍生物可通过抑制egfr突变用于预防或治疗癌症，并且当与egfr拮抗剂如西妥昔单抗联合施用时，对抗癌活性表现出显著的协同作用，因此其可有效地用作抗癌剂。
附图说明
[0039]
图1和图2是显示当以本发明一方面提供的实施例化合物单独或与被称为egfr拮抗剂的西妥昔单抗组合处理过表达各种egfr突变的baf3细胞时评价抗癌活性的结果图。
具体实施方式
[0040]
以下，将详细描述本发明。
[0041]
本发明的实施方式可以以各种其它形式修改，并且本发明的范围不限于下面描述的实施方式。本领域的普通技术人员应当理解，给出本发明的实施方式是为了更精确地解释本发明。
[0042]
此外，在整个说明书中，“包含”一个元素，并不排除其它元素，而是可以包含其他元素，除非另有明确说明。
[0043]
在本发明的一个方面，本发明提供由下式1表示的化合物、其光学异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐。
[0044]
[式1]
[0045][0046]
(在式1中，
[0047]
r1为取代的c
6-12
芳基，
[0048]
其中，所述取代的c
6-12
芳基是被未取代或取代的含有一个或多个选自n、o和s的杂原子的5-10元杂环烷基取代的c
6-12
芳基，
[0049]
所述取代的5～10元杂环烷基是c
1-15
直链或支链烷基碳基、-nr4r5、或被5～7元杂环烷基取代的5～10元杂环烷基，所述5～7元杂环烷基是未取代的或被一个或多个含有一个或多个选自n、o和s的杂原子的c
1-5
直链或支链烷基取代，并且r4和r5独立地是氢或c
1-15
直链或支链烷基；
[0050]
r2为卤素；
[0051]
r3为-oh、或c
1-15
直链或支链烷氧基；以及
[0052]
x是＝ch-，或＝n-)。
[0053]
在另一个方面，
[0054]
r1为取代的c
6-12
芳基，
[0055]
其中，所述取代的c
6-12
芳基是被未取代或取代的含有一个或多个选自n、o和s的杂原子的5-10元杂环烷基取代的c
6-12
芳基，
[0056]
所述取代的5～10元杂环烷基是c
1-10
直链或支链烷基碳基、-nr4r5、或被6元杂环烷
基取代的5～10元杂环烷基，所述6元杂环烷基是未取代的或被一个或多个含有一个或多个选自n、o和s的杂原子的c
1-3
直链或支链烷基取代，并且r4和r5独立地是氢或c
1-10
直链或支链烷基；
[0057]
r2为卤素；
[0058]
r3为-oh、或c
1-10
直链或支链烷氧基；以及
[0059]
x＝ch-或＝n-。
[0060]
在另一个方面.
[0061][0062]
r2为-f、或-cl；
[0063]
r3为-oh；以及
[0064]
x是＝ch-。
[0065]
在另一个方面，所述由式1表示的化合物可以是由下式2表示的化合物。
[0066]
[式2]
[0067][0068]
在式2中，
[0069]
r1、r2、r3和x独立地如上式1中所定义。
[0070]
在另一方面，所述由式1表示的化合物优选为选自以下化合物中的任一种。
[0071]
(1)(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺；
[0072]
(2)(r)-4
′‑
(4-乙酰基哌嗪-1-基)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺；
[0073]
(3)(r)-4
′‑
(4-氨基哌啶-1-基)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺；
[0074]
(4)(r)-4
′‑
(4-氨基哌啶-1-基)-n-((5-氯-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺；
[0075]
(5)(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺；
[0076]
(6)(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺；
[0077]
(7)(r)-4
′‑
(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺；
[0078]
(8)(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺；
[0079]
(9)(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺；
[0080]
(10)(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(吡咯烷-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺；
[0081]
(11)4
′‑
((r)-3-氨基吡咯烷-1-基)-n-((r)-(5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺；
[0082]
(12)4
′‑
((s)-3-氨基吡咯烷-1-基)-n-((r)-(5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺；以及
[0083]
(13)4
′‑
((s)-3-氨基吡咯烷-1-基)-n-((r)-(5-氯-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺。
[0084]
本发明的式1表示的化合物可以以药学上可接受的盐的形式使用，其中所述盐优选为由药学上可接受的游离酸形成的酸加成盐。本文所述的酸加成盐可以由无机酸、无毒性有机酸或有机酸获得，所述无机酸例如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚硝酸和亚磷酸；所述无毒性有机酸例如脂族单/二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、链烷二酸、芳族酸和脂族/芳族磺酸；所述有机酸如乙酸、苯甲酸、柠檬酸、乳酸、马来酸、葡糖酸、甲磺酸、4-甲苯磺酸、酒石酸和富马酸。药学上无毒的盐的例子有硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、醋酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、癸酸盐、庚酸盐、丙酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐(cabacate)、富马酸盐、马来酸盐(maliate)、丁炔-1，4-二酸盐、己烷-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐(methylbenzoate)、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基
苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、羟丁酸盐、羟乙酸盐、乙醇酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。
[0085]
根据本发明的酸加成盐可通过本领域技术人员已知的常规方法制备。例如，将式1所示的衍生物溶解在有机溶剂如甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷和乙腈中，向其中加入有机酸或无机酸以诱导沉淀。然后，将沉淀物过滤并干燥，得到盐。或者将溶剂和过量的酸在减压条件下蒸馏，并干燥以得到盐。或者将沉淀物在有机溶剂中结晶。
[0086]
可通过使用碱制备药学上可接受的金属盐。通过以下方法获得碱金属或碱土金属盐：将化合物溶于过量的碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物溶液中；过滤不溶性复合盐；蒸发剩余溶液并干燥。此时，优选金属盐优选制备成药学上合适的钠盐、钾盐或钙盐形式。相应的银盐通过碱金属或碱土金属盐与适当的银盐(例如硝酸银)反应来制备。
[0087]
此外，本发明不仅包括由式1表示的化合物，还包括其药学上可接受的盐，以及可能由其产生的溶剂化物、光学异构体或水合物。
[0088]
术语“水合物”是指含有通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量的水的本发明的化合物或其盐。本发明的式1表示的化合物的水合物可以含有通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量的水。所述水合物可以含有1当量或更多的水，优选1至5当量的水。所述水合物可以通过从水或含水溶剂中结晶式1表示的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐来制备。
[0089]
术语“溶剂化物”是指含有通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量的溶剂的本发明的化合物或其盐。因此，优选的溶剂包括挥发性的、无毒的和/或适于施用于人的溶剂。
[0090]
术语“异构体”是指具有相同化学式或分子式但结构或空间上不同的本发明化合物或其盐。这些异构体包括结构异构体，如互变异构体、具有不对称碳中心的r或s异构体；立体异构体如几何异构体(反式，顺式)和光学异构体(对映体)。所有这些异构体及其混合物也包括在本发明的范围内。
[0091]
式1表示的化合物可以由以下通式制备，代表性地，对应于实施例1的化合物的制备工艺的通式1至3如下所示。
[0092]
通式1：
[0093][0094]
方案1：试剂和条件：(a)(s)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺、乙醇钛(iv)、thf、室温、17h；(b)1-(苯基磺酰基)-1h-吲哚、n-buli、thf、-75℃至室温、4h；(c)将4n hcl溶解在二恶烷、meoh中，室温、1h；(d)5n naoh，meoh，回流，过夜。
[0095]
通式2：
[0096][0097]
方案2：试剂和条件：(a)3-溴苯甲酸、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、羟基苯并三唑、三乙胺、ch2cl2、室温、过夜；(b)4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烯-2-基)苯酚(4-(4，4，5，5-tetramethyl-1，3，2-dioxaborolene-2-yl)phenol)、pd(oac)2、sphos、na2co3、二氧六环/h2o、100℃、过夜；(c)1，1，1-三氟-n-苯基-n-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺、三乙胺、4-二甲基氨基吡啶、ch2cl2、室温、3h。
[0098]
通式3：
[0099][0100]
方案3：试剂和条件：(a)4-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烯-2-基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯、pd(oac)2、sphos、na2co3、二恶烷/h2o、100℃、过夜；(b)将1m bbr3溶解在ch2cl2中，-78℃至室温，过夜。
[0101]
在本发明的另一个方面，本发明提供一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含由式1表示的化合物、其光学异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。
[0102]
此时，该化合物可通过抑制egfr(表皮生长因子受体)突变来预防或治疗癌症，所述egfr(表皮生长因子受体)突变可以是选自egfr l858r/t790m和egfr l858r/t790m/c797s中的至少一种。
[0103]
所述癌症可以是选自以下的至少一种：假粘液瘤、肝内胆道癌、肝母细胞瘤、肝癌、甲状腺癌、结肠癌、睾丸癌、骨髓增生异常综合征、成胶质细胞瘤、口腔癌、唇癌、菌丝体、急性髓系白血病、急性淋巴细胞性白血病、基底细胞癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞癌、男性乳腺癌、脑癌、垂体腺瘤、多发性骨髓瘤、胆囊癌、胆道癌、结直肠癌、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、视网膜母细胞瘤、脉络膜黑色素瘤、壶腹癌、膀胱癌、腹膜癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、鼻腔癌、非小细胞肺癌、舌癌、星形细胞瘤、小细胞肺癌、小儿脑癌、小儿淋巴瘤、小儿白血病、小肠癌、脑膜瘤、食道癌、神经胶质瘤、肾盂癌、肾细胞癌、心脏癌、十二指肠癌、恶性软组织癌、恶性骨癌、恶性淋巴瘤、恶性间皮瘤、恶性黑色素瘤、眼癌、外阴癌、输尿管癌、尿道癌、原发部位不明癌、胃淋巴瘤、胃癌、胃类癌、胃肠道间质瘤、威尔姆斯癌、乳腺癌、肉瘤、阴茎癌、咽癌、妊娠滋养细胞疾病、宫颈癌、子宫内膜癌、子宫肉瘤、前列腺癌、转移性骨癌、转移性脑癌、纵隔癌、直肠癌(rectal cancer)、直肠癌(rectal carcinoma)、阴道癌、脊髓癌、听神经瘤、胰腺癌、唾液腺癌、卡波西肉瘤、佩吉特氏病、扁桃体癌、鳞状细胞癌、肺腺癌、肺癌、肺鳞状细胞癌、皮肤癌、肛门癌、横纹肌肉瘤、喉癌、胸膜癌和胸腺癌。
[0104]
本发明的式1表示的化合物或其药学上可接受的盐可以口服或肠胃外给药，并且可以以药物制剂的一般形式使用。即，通过与常用的稀释剂或赋形剂如填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂和表面活性剂混合，可以制备用于口服或肠胃外给药的化合物或其药学上可接受的盐。用于口服给药的固体制剂是片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂和胶囊剂。这些固体制剂通过将一种或多种化合物与一种或多种合适的赋形剂如淀粉、碳酸钙、蔗糖或乳糖、明
胶等混合来制备。除简单的赋形剂之外，还可以使用润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石等。用于口服给药的液体制剂是混悬液、溶液、乳液和糖浆，除通常使用的简单稀释剂如水和液体石蜡外，上述制剂还可以含有各种赋形剂如润湿剂、甜味剂、芳香剂和防腐剂。用于肠胃外给药的制剂是无菌水溶液、水不溶性赋形剂、悬浮液和乳液。除活性化合物之外，水不溶性赋形剂和混悬剂还可以含有丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油、可注射酯如油酸乙酯等。
[0105]
包含式1所示化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分的药物组合物可以通过肠胃外给药，所述肠胃外给药包括皮下注射、静脉内注射、肌肉内注射或胸内注射。
[0106]
此时，为了制备作为用于肠胃外给药的制剂的式1所示的化合物或其药学上可接受的盐，将式1所示的化合物或其药学上可接受的盐与稳定剂或缓冲剂在水中混合以制备溶液或悬浮液，然后将其配制为安瓿或小瓶。本文所述的组合物可以是无菌的，并且另外含有防腐剂、稳定剂、可湿性粉剂或乳化剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂、以及其它治疗上有用的物质，并且所述组合物可以通过常规混合、造粒或包衣方法来配制。
[0107]
用于口服给药的制剂的例子有片剂、丸剂、硬/软胶囊、溶液、悬浮液、乳剂、糖浆、颗粒、酏剂和锭剂等。除了活性成分之外，这些制剂还可以包括稀释剂(例如，乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸)和润滑剂(例如，二氧化硅、滑石、硬脂酸盐及其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇)。片剂可以包括粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮，并且如果需要，还可以另外包括崩解剂，例如淀粉、琼脂糖、海藻酸或其钠盐或共沸混合物和/或吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂。
[0108]
在本发明的另一个方面，本发明提供一种用于预防或改善癌症的健康功能性食品组合物，其包含由式1表示的化合物、其光学异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。
[0109]
本发明的式1表示的化合物可以直接加入，或者按照常规方法与其它食品成分混合加入。活性成分的混合比例可以根据使用目的(预防或改善)进行调节。一般而言，本发明的化合物优选以食品总重量的0.1～90重量份添加到食品或饮料中。然而，如果为了健康和卫生或调节健康状况需要长期给药，则含量可以低于上述，但也可以接受更高的含量，因为已经证明本发明的化合物是非常安全的。
[0110]
此外，与其他饮料相似，本发明的保健饮料组合物还可以另外包括各种香料或天然碳水化合物等。所述天然碳水化合物可以是单糖、二糖、多糖和糖醇中的一种，所述单糖如葡萄糖和果糖，所述二糖如麦芽糖和蔗糖，所述多糖如糊精和环糊精，所述糖醇如xilytole、山梨糖醇和赤藓糖醇。此外，天然甜味剂(甜叶菊素、甜叶菊提取物，例如莱鲍迪甙a(rebaudioside a)、甘草甜素等)和合成甜味剂(糖精、阿斯巴甜等)可以作为甜味剂。100g本发明的组合物中，天然碳水化合物的含量优选为1～20g，更优选为5～12g。
[0111]
除了上述成分外，本发明的式1表示的化合物还可以包括各种营养素、维生素、矿物质(电解质)、香料(包括天然香料和合成香料)、着色剂和填充剂(奶酪、巧克力等)、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增粘剂、ph调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇、用于加入苏打中的碳酸盐等。此外，本发明式1表示的化合物可含有天然果汁和果肉，用于生产果汁饮料和蔬菜饮料。
[0112]
所述癌症可以是选自以下的一种：假粘液瘤、肝内胆道癌、肝母细胞瘤、肝癌、甲状腺癌、结肠癌、睾丸癌、骨髓增生异常综合征、成胶质细胞瘤、口腔癌、唇癌、菌丝体、急性髓
系白血病、急性淋巴细胞性白血病、基底细胞癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞癌、男性乳腺癌、脑癌、垂体腺瘤、多发性骨髓瘤、胆囊癌、胆道癌、结直肠癌、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、视网膜母细胞瘤、脉络膜黑色素瘤、壶腹癌、膀胱癌、腹膜癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、鼻腔癌、非小细胞肺癌、舌癌、星形细胞瘤、小细胞肺癌、小儿脑癌、小儿淋巴瘤、小儿白血病、小肠癌、脑膜瘤、食道癌、神经胶质瘤、肾盂癌、肾细胞癌、心脏癌、十二指肠癌、恶性软组织癌、恶性骨癌、恶性淋巴瘤、恶性间皮瘤、恶性黑色素瘤、眼癌、外阴癌、输尿管癌、尿道癌、原发部位不明癌、胃淋巴瘤、胃癌、胃类癌、胃肠道间质瘤、威尔姆斯癌、乳腺癌、肉瘤、阴茎癌、咽癌、妊娠滋养细胞疾病、宫颈癌、子宫内膜癌、子宫肉瘤、前列腺癌、转移性骨癌、转移性脑癌、纵隔癌、直肠癌(rectal cancer)、直肠癌(rectal carcinoma)、阴道癌、脊髓癌、听神经瘤、胰腺癌、唾液腺癌、卡波西肉瘤、佩吉特氏病、扁桃体癌、鳞状细胞癌、肺腺癌、肺癌、肺鳞状细胞癌、皮肤癌、肛门癌、横纹肌肉瘤、喉癌、胸膜癌和胸腺癌。
[0113]
在本发明的另一个方面，本发明提供一种用于预防或治疗癌症的组合制剂，其包含式1表示的化合物、其光学异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐；和egfr拮抗剂。
[0114]
此时，所述egfr拮抗剂可以是选自西妥昔单抗、厄洛替尼、吉非替尼和帕尼单抗中的至少一种。
[0115]
在本发明的另一个方面，本发明提供一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用药物组合物或保健功能性食品组合物的步骤，所述药物组合物或保健功能性食品组合物包含式1表示的化合物、其光学异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。
[0116]
在本发明的另一个方面，本发明提供用于预防或治疗癌症的由式1表示的化合物、其光学异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐。
[0117]
在本发明的另一个方面，本发明提供由式1表示的化合物、其光学异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗癌症的药物中的用途。
[0118]
本发明一方面提供的所述苯甲酰胺衍生物可通过抑制egfr突变用于预防或治疗癌症，并且当与egfr拮抗剂如西妥昔单抗联合施用时，对抗癌活性表现出显著的协同作用，因此其可有效地用作抗癌剂。上述描述由后续所述的实施例和实验例支持。
[0119]
以下，将通过实施例和实验例对本发明进行详细说明。
[0120]
然而，以下实施例和实验例仅用于说明本发明，本发明的内容并不限于此。
[0121]
通式1：
[0122][0123]
方案1：试剂和条件：(a)(s)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，乙醇钛(iv)，thf，室温，17h；(b)1-(苯磺酰基)-1h-吲哚，n-buli，thf，-75℃至室温，4h；(c)将4n hcl溶于二恶烷、meoh中，室温，1h；(d)5n naoh，meoh，回流，过夜。
[0124]
制备实施例1：(s，e)-n-(5-氟-2-甲氧基亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
[0125][0126]
将5-氟-2-甲氧基苯甲醛(100mg，0.73mmol)和(s)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(88.5mg，0.73mmol)与乙醇钛(iv)(331mg，1.45mmol)的混合物一起溶解在四氢呋喃(4ml)中。用隔膜密封反应烧瓶，并将反应混合物在室温下搅拌17小时。反应混合物用乙酸乙酯和水萃取。收集乙酸乙酯层，用无水硫酸镁干燥并过滤，在减压下蒸发除去溶剂，得到(s，e)-n-(5-氟-2-甲氧基亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(157mg)。
[0127]
90％收率：1h nmr(500mhz，氯仿-d)δ9.03(d，j＝2.4hz，1h)，7.69(dd，j＝8.8，3.2hz，1h)，7.19(ddd，j＝9.1，7.7，3.2hz，1h)，6.94(dd，j＝9.1，4.1hz，1h)，3.90(s，3h)，1.29(s，9h).
[0128]
制备实施例2：(s，e)-n-(5-氯-2-甲氧基亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
[0129][0130]
(s，e)-n-(5-氯-2-甲氧基亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺[制备实施例2](90％)通过与[制备实施例1]中所述的方法相似的方法制备。
[0131]1h nmr(500mhz，氯仿-d)δ9.01(s，1h)，7.96(d，j＝2.7hz，1h)，7.43(dd，j＝8.9，2.7hz，1h)，6.93(d，j＝8.9hz，1h)，3.91(s，3h)，1.29(s，9h).
[0132]
制备实施例3：(s)-n-((r)-(5-氟-2-甲氧基苯基)(1-(苯磺酰基)-1h-吲哚-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
[0133][0134]
在-78℃下，将正丁基锂滴加到1-(苯磺酰基)-1h-吲哚(100mg，0.29mmol)的四氢呋喃(4ml)溶液中。在-78℃下反应1小时后，向其中加入(s，e)-n-(5-氟-2-甲氧基亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺[制备实施例1](33.5mg，0.09mmol)的thf溶液，并将该混合物在-78℃下搅拌2小时。通过向混合物中加入饱和nh4cl水溶液终止反应，随后用乙酸乙酯萃取。收集乙酸乙酯层，用无水硫酸镁干燥并过滤。在减压下蒸发除去溶剂。将残渣通过填充有硅胶的快速柱色谱法(ch2cl2/etoac，10∶1)纯化，得到白色固体状(s)-n-((r)-(5-氟-2-甲氧基苯基)(1-(苯磺酰基)-1h-吲哚-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺[制备实施例3](38mg，75％)。
[0135]1h nmr(300mhz，氯仿-d)δ8.15(dd，j＝8.3，1.1hz，1h)，7.76-7.69(m，2h)，7.53-7.47(m，2h)，7.42-7.30(m，3h)，6.98(ddd，j＝8.9，7.7，3.0hz，1h)，6.90(dd，j＝9.0，4.5hz，1h)，6.80(d，j＝5.8hz，1h)，6.76(d，j＝0.9hz，1h)，6.72(dd，j＝9.1，3.0hz，1h)，3.92(s，3h)，1.26(s，9h).
[0136]
制备实施例4：(s)-n-((r)-(5-氯-2-甲氧基苯基)(1-(苯磺酰基)-1h-吲哚-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
[0137][0138]
(s)-n-((r)-(5-氯-2-甲氧基苯基)(1-(苯磺酰基)-1h-吲哚-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺[制备实施例4](96％)通过与[制备实施例3]中描述的方法类似的方法制备。
[0139]
制备实施例5：(r)-(5-氟-2-甲氧基苯基)(1-(苯磺酰基)-1h-吲哚-2-基)甲胺的制备
[0140][0141]
在室温下，将溶于二恶烷的4n hcl(0.16ml，0.32mmol)加入(s)-n-((r)-(5-氟-2-甲氧基苯基)(1-(苯磺酰基)-1h-吲哚-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺[制备实施例3](80mg，0.16mmol)的甲醇(2ml)溶液中。将混合物在减压下浓缩。残渣用乙醚固化，过滤，得到粉红色固体状(r)-(5-氟-2-甲氧基苯基)(1-(苯磺酰基)-1h-吲哚-2-基)甲烷胺[制备实施例5](产率：84％)。
[0142]1h nmr(300mhz，氯仿-d)δ9.69-9.40(m，3h)，7.96(d，j＝8.5hz，1h)，7.79(d，j＝7.7hz，2h)，7.58(s，1h)，7.26-7.12(m，3h)，7.07-6.91(m，2h)，6.83(dd，j＝9.1，4.2hz，1h)，6.71(s，1h)，6.57(d，j＝8.5hz，1h)，6.35(s，1h)，3.92(s，3h).
[0143]
制备实施例6：(r)-(5-氯-2-甲氧基苯基)(1-(苯磺酰基)-1h-吲哚-2-基)甲胺的制备
[0144][0145]
(r)-(5-氯-2-甲氧基苯基)(1-(苯磺酰基)-1h-吲哚-2-基)甲烷胺[制备实施例6](80％)通过与[制备实施例5]所述方法相似的方法制备。
[0146]1h nmr(300mhz，甲醇-d4)δ8.20(dt，j＝8.5，0.9hz，1h)，7.77-7.70(m，2h)，7.64-7.58(m，2h)，7.51-7.41(m，5h)，7.33(td，j＝7.6，1.0hz，1h)，7.21(d，j＝8.9hz，1h)，7.13(d，j＝2.6hz，1h)，6.81(t，j＝0.9hz，1h)，6.71(s，1h)，3.95(s，3h).
[0147]
制备实施例7：(r)-(5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲胺的制备
[0148][0149]
将naoh(5ml，20mmol)水溶液添加到(r)-(5-氟-2-甲氧基苯基)(1-(苯磺酰基)-1h-吲哚-2-基)甲胺[制备例5](1100mg，2.16mmol)的甲醇(11ml)溶液中，将混合物回流过夜。所述混合物在减压下浓缩。使用溶于二恶烷和乙酸乙酯(1∶1)的4n hcl固化残渣，得到黄色固体状(r)-(5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲胺[制备实施例7](产率：62％)。
[0150]1h nmr(300mhz，甲醇-d4)δ7.59(dt，j＝7.8，1.1hz，1h)，7.40-7.35(m，1h)，7.26-7.13(m，3h)，7.07(ddd，j＝8.1，7.1，1.1hz，1h)，6.99(dd，j＝8.9，2.7hz，1h)，6.62(t，j＝
0.9hz，1h)，6.01(s，1h)，3.97(s，3h)，3.68(s，3h).
[0151]
制备实施例8：(r)-(5-氯-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲胺的制备
[0152][0153]
(r)-(5-氯-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲胺[制备实施例8](60％)通过与[制备实施例7]中描述的方法相似的方法制备。
[0154]1h nmr(300mhz，甲醇-d4)δ7.58(d，j＝7.8hz，1h)，7.43(dd，j＝8.8，2.6hz，1h)，7.37(dd，j＝8.0，1.1hz，1h)，7.22(d，j＝2.6hz，1h)，7.19-7.11(m，2h)，7.10-7.02(m，1h)，6.59(s，1h)，5.96(s，1h)，3.96(s，3h).
[0155]
通式2：
[0156][0157]
方案2：试剂和条件：(a)3-溴苯甲酸、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、羟基苯并三唑、三乙胺、ch2cl2、室温、过夜；(b)4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烯-2-基)苯酚、pd(oac)2、sphos、na2co3、二氧六环/h2o、100℃、过夜；(c)1，1，1-三氟-n-苯基-n-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺、三乙胺、4-二甲基氨基吡啶、ch2cl2、室温、3h。
[0158]
制备实施例9：(r)-3-溴-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)苯甲酰胺的制备
[0159][0160]
在室温下，将三乙胺(0.11ml，0.41mmol)加入溶解在ch2cl2中的(r)-(5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲胺(100mg，0.37mmol)、3-溴苯甲酸(74.3mg，0.37mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(79mg，0.41mmol)和羟基苯并三唑(55.4mg，0.41mmol)的
溶液中。将混合物搅拌过夜。残渣用水和碳酸氢钠萃取，用盐水洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过mplc纯化粗化合物，得到黄色固体状(r)-3-溴-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)苯甲酰胺[制备实施例9](134mg，80％)。
[0161]1h nmr(300mhz，氯仿-d)δ8.86(s，1h)，7.95(t，j＝1.8hz，1h)，7.76-7.61(m，3h)，7.48(dq，j＝7.1，0.8hz，1h)，7.35-7.28(m，2h)，7.18-7.10(m，2h)，7.09-7.02(m，2h)，6.97(dd，j＝9.0，4.4hz，1h)，6.69-6.65(m，1h)，6.04(dt，j＝2.0，1.0hz，1h)，3.87(s，3h).
[0162]
制备实施例10：(r)-3-溴-n-((5-氯-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)苯甲酰胺的制备
[0163][0164]
(r)-3-溴-n-((5-氯-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)苯甲酰胺[制备实施例10](75％)通过与[制备实施例9]中描述的方法类似的方法制备。
[0165]1h nmr(300mhz，氯仿-d)δ7.95(t，j＝1.9hz，1h)，7.74-7.67(m，2h)，7.67-7.61(m，1h)，7.48(dd，j＝7.8，1.1hz，1h)，7.40(d，j＝2.6hz，1h)，7.36-7.29(m，3h)，7.14(ddd，j＝8.2，7.1，1.3hz，1h)，7.05(ddd，j＝8.1，7.1，1.1hz，1h)，6.95(d，j＝8.8hz，1h)，6.69(d，j＝8.3hz，1h)，6.06(dt，j＝2.0，0.9hz，1h)，3.87(d，j＝1.3hz，3h).
[0166]
制备实施例11：(r)-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
羟基-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0167][0168]
将4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烯-2-基)苯酚(1281mg，3.3mmol)、(r)-3-溴-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)苯甲酰胺[制备实施例9](500mg，0.05mmol)、pd(oac)2(12.6mg，0.055mmol)、sphos(45.15mg，0.11mmol)和碳酸钠(349.8mg，3.3mmol)在1，4-二恶烷/h2o(4.4/1.1ml)中脱气10分钟。将搅拌的悬浮液在100℃加热过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥，然后浓缩。残渣通过mplc纯化，得到黄色固体状(r)-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
羟基-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[制备实施例11](500mg，97％)。
[0169]1h nmr(300mhz，氯仿-d)δ8.86(s，1h)，8.02(t，j＝1.9hz，1h)，7.82(d，j＝8.3hz，1h)，7.71-7.64(m，2h)，7.47(ddd，j＝9.7，8.3，1.8hz，4h)，7.40(d，j＝8.6hz，1h)，7.33(dd，j＝8.0，1.0hz，1h)，7.20-7.10(m，2h)，7.09-7.02(m，2h)，6.99(d，j＝4.5hz，1h)，6.92(d，j＝8.6hz，2h)，6.88(d，j＝8.6hz，1h)，6.72(d，j＝8.3hz，1h)，6.06(s，1h)，3.87(s，3h).
[0170]
制备实施例12：(r)-n-((5-氯-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
羟基-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0171][0172]
(r)-n-((5-氯-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
羟基-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[制备实施例12]通过与[制备实施例11](90％)中所述的方法类似的方法制备。
[0173]1h nmr(300mhz，甲醇-d4)δ8.10(t，j＝1.8hz，1h)，7.78(ddt，j＝13.7，7.9，1.3hz，2h)，7.53(dd，j＝8.0，5.5hz，3h)，7.49-7.43(m，1h)，7.39-7.30(m，3h)，7.11-7.03(m，2h)，6.98(ddd，j＝8.0，7.1，1.1hz，1h)，6.92-6.86(m，3h)，6.12(t，j＝1.0hz，1h)，3.86(s，3h).
[0174]
制备实施例13：(r)-3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯基]-4-基-三氟甲磺酸酯的制备
[0175][0176]
在室温下，将三乙胺(0.47ml，3.36mmol)加入溶解于无水ch2cl2中的(r)-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
羟基-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[制备实施例11](1000mg，2.14mmol)、1，1，1-三氟-n-苯基-n-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(1062mg，2.57mmol)和4-二甲基氨基吡啶(8.8mg，0.072mmol)的溶液中。将混合物搅拌3小时。残渣用水和碳酸氢钠萃取，用盐水洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过mplc纯化粗化合物，得到黄色固体状(r)-3
′‑
((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基-三氟甲磺酸酯[制备实施例13](1030mg，80％)。
[0177]1h nmr(300mhz，氯仿-d)δ8.07(t，j＝1.7hz，1h)，7.85-7.75(m，2h)，7.72(ddd，j＝7.8，1.9，1.1hz，1h)，7.69-7.64(m，2h)，7.58-7.48(m，2h)，7.41-7.33(m，3h)，7.22-7.14(m，2h)，7.13-7.05(m，2h)，7.01(dd，j＝9.0，4.4hz，1h)，6.74(d，j＝8.2hz，1h)，6.08(s，1h)，3.90(s，3h).
[0178]
制备实施例14：(r)-3
′‑
(((5-氯-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基-三氟甲磺酸酯的制备
[0179]
[0180]
(r)-3
′‑
(((5-氯-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基-三氟甲磺酸酯[制备实施例14](85％)通过与[制备实施例13]中所述方法相似的方法制备：c
30h22
clf3n2o5s的lc-ms(m h

)：计算值为614.1，测得值为615.3。
[0181]
通式3：
[0182][0183]
方案3：试剂和条件：(a)4-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烯-2-基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯、pd(oac)2、sphos、na2co3、二恶烷/h2o、100℃、过夜；(b)将1m bbr3溶于ch2c12，-78℃至室温，过夜。
[0184]
制备实施例15：(r)-4-(3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制备
[0185][0186]
将4-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烯-2-基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(77mg，0.198mmol)、(r)-3-溴-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)苯甲酰胺[制备实施例9](30mg，0.066mmol)、pd(oac)2(0.7mg，0.003mmol)、sphos(2.5mg，0.006mmol)和碳酸钠(21mg，0.198mmol)在1，4-二恶烷/h2o(0.264/0.066ml)中脱气10分钟。将搅拌的悬浮液在100℃加热过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥，然后浓缩。残渣通过mplc纯化，得到黄色固体状(r)-4-(3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯[制备实施例15](29.2mg，70％)。
[0187]1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.12(s，1h)，7.92(t，j＝2.1hz，1h)，7.79(t，j＝10.1hz，2h)，7.61(dd，j＝8.7，2.5hz，2h)，7.55-7.43(m，2h)，7.37-7.32(m，1h)，7.16(d，j＝9.4hz，1h)，7.11-7.03(m，5h)，7.01-6.95(m，1h)，6.93(d，j＝2.7hz，1h)，6.14-6.09(m，
1h)，3.85(t，j＝2.1hz，3h)，3.59(d，j＝5.9hz，4h)，3.19(dt，j＝6.9，3.7hz，4h)，1.55-1.47(m，9h).
[0188]
制备实施例16：(r)-4-(3
′‑
(((5-氯-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制备
[0189][0190]
(r)-4-(3
′‑
(((5-氯-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯[制备例16](75％)通过与[制备实施例15]中所述的方法类似的方法来制备。
[0191]
实施例1：(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0192][0193]
在-78℃下，将溶解于二氯甲烷(0.28ml)中的1m三溴化硼缓慢加入(r)-4-(3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯[制备实施例15](29.2mg，0.046mmol)中。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并在0℃下添加碳酸氢钠以终止反应。将四氢呋喃与盐水一起加入其中。收集的有机层用mgso4干燥，过滤并浓缩。残渣经反相半制备型hplc纯化，得到白色固体状(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例1](6.3mg，26％)。
[0194]1h nmr(300mhz，甲醇-d4)δ8.14(t，j＝1.8hz，1h)，7.87-7.77(m，2h)，7.66(d，j＝8.8hz，2h)，7.54(t，j＝7.8hz，1h)，7.46(dt，j＝7.8，1.0hz，1h)，7.34(dd，j＝8.1，1.0hz，1h)，7.17-7.11(m，2h)，7.10-7.03(m，2h)，7.02-6.82(m，4h)，6.20(t，j＝0.9hz，1h)，3.48(dd，j＝7.2，3.7hz，4h)，3.41(d，j＝6.2hz，4h).
[0195]
通式4：
[0196][0197]
方案4：试剂和条件：(a)乙酸酐、et3n、ch2cl2、0℃至室温、4h；(b)k2co3、meoh、回流、过夜。
[0198]
制备实施例17：(r)-2-((4
′‑
(4-乙酰基哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4-氟苯基乙酸酯的制备
[0199][0200]
在0℃下，将醋酸酐(0.02ml，0.18mmol)加入(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例1](50mg，0.09mmol)和三乙胺(0.03ml，0.18mmol)的溶液中。将混合物搅拌4小时。残渣用水和碳酸氢钠萃取，用盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到(r)-2-((4
′‑
(4-乙酰基哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4-氟苯基醋酸酯[制备实施例17](70mg，黄色固体)，其用于下一步，无需进一步纯化：c
36h33
fn4o4的lc-ms(m h

)计算值为562.24，测得值为563.5。
[0201]
实施例2：(r)-4
′‑
(4-乙酰基哌嗪-1-基)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0202][0203]
在室温下，将碳酸钾(50mg，0.36mmol)加入(r)-2-((4
′‑
(4-乙酰基哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4-氟苯乙酸酯[制备实施例17](51mg，0.09mmol)的甲醇(10ml)溶液中。将混合物在回流下搅拌过夜。浓缩残渣，用二氯甲烷稀释，并用水和盐水洗涤。浓缩有机层，并通过反相半制备型hplc纯化，得到棕色固体状(r)-4
′‑
(4-乙酰基哌嗪-1-基)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例2](12mg，24％)。
[0204]1h nmr(500mhz，甲醇-d4)δ8.13(d，j＝2.0hz，1h)，7.79(dd，j＝18.8，7.8hz，2h)，7.64-7.59(m，2h)，7.55-7.50(m，1h)，7.46(d，j＝7.9hz，1h)，7.34(d，j＝8.1hz，1h)，7.10-7.05(m，4h)，6.98(t，j＝7.5hz，1h)，6.95-6.84(m，3h)，6.20(s，1h)，3.72(dt，j＝26.4，4.9hz，4h)，3.22(ddd，j＝26.9，7.6，3.3hz，4h)，2.15(d，j＝1.5hz，3h).
[0205]
通式5：
[0206][0207]
方案5：试剂和条件：(a)哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯、ruphos pd g1、cs2co3、二恶烷、110℃、过夜；(b)将1m bbr3溶解在ch2cl2中，0℃至室温，30分钟。
[0208]
制备实施例18：(r)-(1-(3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯基]-4.基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0209][0210]
将哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(50.1mg，0.25mmol)、(r)-3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基-三氟甲磺酸酯[制备实施例13](50mg，0.083mmol)、ruphos pd g1(1.01mg，0.001mmol)和碳酸铯(81.4mg，0.25mmol)在无水1，4-二恶烷(0.4ml)中脱气10分钟。将搅拌的悬浮液在110℃加热过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥并浓缩，得到(r)-(1-(3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯[制备实施例18](黄色固体)，其在下一步中使用，无需进一步纯化：c
39h41
fn4o4的lc-ms(m h

)计算值为648.31，测得值为649.2。
[0211]
制备实施例19：(r)-(1-(3
′‑
(((5-氯-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0212][0213]
(r)-(1-(3
′‑
((((5-氯-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯[制备实施例19]通过与[制备实施例18]中所述方法类似的方法制备：c
39h41
cln4o4的lc-ms(m h

)的计算值为664.28，测得值665.3。
[0214]
实施例3：(r)-4
′‑
(4-氨基哌啶-1-基)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0215][0216]
(r)-4
′‑
(4-氨基哌啶-1-基)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例3](20％)通过与[实施例1]中所述的方法类似的方法制备。
[0217]1h nmr(300mhz，甲醇-d4)δ9.23(d，j＝8.3hz，1h)，8.13(t，j＝1.7hz，1h)，7.85-7.74(m，2h)，7.63(d，j＝8.8hz，2h)，7.57-7.44(m，2h)，7.38-7.32(m，1h)，7.13(d，j＝8.8hz，2h)，7.10-7.04(m，2h)，7.02-6.82(m，4h)，6.21(d，j＝1.0hz，1h)，3.88(d，j＝13.0hz，2h)，2.93(td，j＝12.6，2.5hz，2h)，2.16-2.07(m，2h)，1.80(qd，j＝12.2，4.0hz，2h).
[0218]
实施例4：(r)-4
′‑
(4-氨基哌啶-1-基)-n-((5-氯-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0219][0220]
(r)-4
′‑
(4-氨基哌啶-1-基)-n-((5-氯-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例4](35％)通过与[实施例1]中所述方法相似的方法制备。
[0221]1h nmr(500mhz，甲醇-d4)δ8.17(d，j＝2.0hz，1h)，7.91(d，j＝7.8hz，1h)，7.84(t，j＝7.7hz，3h)，7.58(d，j＝7.7hz，3h)，7.47(d，j＝7.9hz，1h)，7.35(d，j＝8.1hz，1h)，7.29(t，j＝1.8hz，1h)，7.20-7.15(m，1h)，7.08(t，j＝7.6hz，1h)，6.98(t，j＝7.5hz，1h)，6.88(d，j＝8.5hz，2h)，3.91(d，j＝12.7hz，2h)，3.56(dd，j＝29.1，15.4hz，3h)，2.33(d，j＝13.2hz，2h)，2.14(q，j＝12.6hz，2h).
[0222]
通式6：
[0223][0224]
方案6：试剂和条件：(a)1-甲基-4-(哌啶-4-基)哌嗪、ruphos pd g1、cs2co3、二恶烷、110℃、过夜；(b)将1m bbr3溶解在ch2cl2中，0℃至室温，30分钟。
[0225]
制备实施例20：(r)-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0226][0227]
将1-甲基-4-(哌啶-4-基)哌嗪(46mg，0.25mmol)、(r)-3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基-三氟甲磺酸酯[制备实施例13](50mg，0.083mmol)、ruphos pd g1(1.01mg，0.001mmol)和碳酸铯(81.4mg，0.25mmol)在无水1，4-二恶烷(0.4ml)中脱气10分钟。将搅拌的悬浮液在110℃加热过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥并浓缩。混合物通过mplc纯化，得到黄色固体状(r)-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[制备实施例20](25mg，50％)。
[0228]1h nmr(300mhz，氯仿-d)δ9.08-8.99(m，1h)，8.03(t，j＝1.9hz，1h)，7.83(dd，j＝8.2，2.3hz，1h)，7.74-7.67(m，2h)，7.55-7.44(m，4h)，7.35(dd，j＝8.1，1.0hz，1h)，7.21-7.13(m，2h)，7.12-7.04(m，2h)，6.98(td，j＝6.4，3.0hz，3h)，6.74(dd，j＝8.2，2.9hz，1h)，6.08(dd，j＝2.1，1.0hz，1h)，3.88(d，j＝1.9hz，3h)，3.82(d，j＝12.7hz，2h)，2.83-2.57(m，10h)，2.54-2.46(m，1h)，2.43(s，3h)，1.96(d，j＝12.2hz，2h)，1.68(qd，j＝12.1，3.9hz，2h).
[0229]
实施例5：(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0230][0231]
(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例5](12％)通过与[实施例1]中所述的方法类似的方法制备。
[0232]1h nmr(300mhz，甲醇-d4)δ9.26(d，j＝8.4hz，1h)，8.15(s，1h)，7.87(d，j＝7.9hz，1h)，7.82(d，j＝8.0hz，1h)，7.74(d，j＝8.7hz，2h)，7.56(t，j＝7.8hz，1h)，7.46(d，j＝7.8hz，1h)，7.39-7.31(m，3h)，7.11-7.03(m，2h)，7.01-6.95(m，1h)，6.95-6.83(m，3h)，6.20(t，j＝1.0hz，1h)，3.89(d，j＝12.9hz，3h)，3.25-2.95(m，9h)，2.89(s，3h)，2.18(d，j＝12.9hz，2h)，1.91(q，j＝11.4，9.0hz，2h).
[0233]
通式7：
[0234][0235]
方案7：试剂和条件：(a)4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁基酯、ruphos pd g1、cs2co3、二恶烷、110℃、过夜；(b)将1m bbr3溶解在ch2cl2中，0℃至室温，30分钟。
[0236]
制备实施例21：(r)-4-(1-(3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制备
[0237][0238]
将4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(67mg，0.25mmol)、(r)-3
′‑
((5-氟-2-甲氧
基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯基]-4-基-三氟甲磺酸酯[实施例13](50mg，0.083mmol)、ruphos pd g1(1.01mg，0.001mmol)和碳酸铯(81.4mg，0.25mmol)在无水1，4-二恶烷(0.4ml)中脱气10分钟。将搅拌的悬浮液在110℃加热过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥并浓缩。混合物通过mplc纯化，得到黄色固体状(r)-4-(1-(3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯[制备实施例21](19.5mg，33％)。
[0239]1h nmr(300mhz，氯仿-d)δ9.09-8.90(m，1h)，8.01(t，j＝1.9hz，1h)，7.80(d，j＝8.3hz，1h)，7.67(tt，j＝8.1，1.3hz，2h)，7.53-7.40(m，4h)，7.35-7.29(m，1h)，7.20-7.12(m，2h)，7.12-7.02(m，1h)，7.01-6.91(m，3h)，6.72(dd，j＝8.2，4.1hz，1h)，6.07-6.03(m，1h)，3.85(d，j＝2.2hz，3h)，3.81(d，j＝13.2hz，2h)，3.46(t，j＝5.0hz，4h)，2.76(dd，j＝13.1，10.8hz，2h)，2.55(t，j＝5.1hz，4h)，2.46(t，j＝11.4hz，1h)，1.93(d，j＝12.3hz，2h)，1.68(qd，j＝12.0，3.9hz，2h)，1.47(s，9h).
[0240]
实施例6：(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0241][0242]
(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例6](36.8％)通过与[实施例1]中所述的方法类似的方法制备。
[0243]1h nmr(300mhz，甲醇-d4)δ8.15(s，1h)，7.90-7.78(m，2h)，7.73(d，j＝8.7hz，2h)，7.56(t，j＝7.8hz，1h)，7.46(d，j＝7.8hz，1h)，7.33(t，j＝7.6hz，3h)，7.11-7.03(m，2h)，7.02-6.95(m，2h)，6.94-6.83(m，2h)，6.20(d，j＝1.0hz，1h)，3.92(d，j＝12.5hz，2h)，3.45(d，j＝5.8hz，5h)，3.17(d，j＝11.8hz，5h)，2.21(d，j＝12.7hz，2h)，1.97(t，j＝12.2hz，3h).
[0244]
通式8：
[0245]
[0246]
方案8：试剂和条件：(a)n，n-二甲基哌啶-4-胺、ruphos pd g1、cs2co3、二恶烷、110℃、过夜；(b)将1m bbr3溶解在ch2cl2中，0℃至室温，30分钟。
[0247]
制备实施例22：(r)-4
′‑
(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0248][0249]
将n，n-二甲基哌啶-4-胺(32.05mg，0.25mmol)、(r)-3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基-三氟甲磺酸酯[制备实施例13](50mg，0.083mmol)、ruphos pd g1(1.01mg，0.001mmol)和碳酸铯(81.4mg，0.25mmol)在无水1，4-二恶烷(0.4ml)中脱气10分钟。将搅拌的悬浮液在110℃加热过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥并浓缩，得到(r)-4
′‑
(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[制备实施例22](黄色固体)：c
36h37
fn4o2的lc-ms(m h

)计算值为576.29，测得值为577.4。
[0250]
实施例7：(r)-4
′‑
(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0251][0252]
(r)-4
′‑
(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例7](6.4％)通过与[实施例1]中所述的方法类似的方法制备。
[0253]1h nmr(300mhz，甲醇-d4)δ9.22(d，j＝8.3hz，1h)，8.13(t，j＝1.8hz，1h)，7.80(ddt，j＝12.6，7.9，1.2hz，2h)，7.62(d，j＝8.8hz，2h)，7.57-7.49(m，1h)，7.46(dt，j＝7.8，1.2hz，1h)，7.34(dd，j＝8.1，1.0hz，1h)，7.14-7.04(m，4h)，7.01-6.92(m，2h)，6.91-6.84(m，2h)，6.44(d，j＝8.1hz，1h)，6.21(d，j＝1.0hz，1h)，3.97(d，j＝13.1hz，2h)，2.91(s，6h)，2.84(d，j＝12.4hz，1h)，2.18(d，j＝11.8hz，2h)，1.86(qd，j＝12.3，4.2hz，3h)，1.22(d，j＝10.8hz，2h).
[0254]
通式9：
[0255][0256]
方案9：试剂和条件：(a)4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯、ruphos pd g1、cs2co3、二恶烷、110℃、过夜；(b)将1m bbr3溶解在ch2cl2中，0℃至室温，30分钟。
[0257]
制备实施例23：(r)-4-(4-(3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基)哌嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
[0258][0259]
将4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(67mg，0.25mmol)、(r)-3
′‑
((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基-三氟甲磺酸酯[实施例13](50mg，0.083mmol)、ruphos pd g1(1.01mg，0.001mmol)和碳酸铯(81.4mg，0.25mmol)在无水1，4-二恶烷(0.4ml)中脱气10分钟。将搅拌的悬浮液在110℃加热过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥并浓缩，得到(r)-4-(4-(3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基)哌嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯[制备实施例23](黄色固体)：c
43h48
fn5o2的lc-ms(m h

)计算值为717.37，测得值为718.7。
[0260]
实施例8：(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0261]
[0262]
(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例8](12.1％)通过与[实施例1]中记载的方法类似的方法制备。
[0263]1h nmr(300mhz，甲醇-d4)δ8.14(t，j＝1.8hz，1h)，7.84(d，j＝7.7hz，1h)，7.80(d，j＝8.0hz，1h)，7.67(d，j＝8.7hz，2h)，7.54(t，j＝7.8hz，1h)，7.46(dd，j＝7.8，1.2hz，1h)，7.34(dd，j＝7.9，1.0hz，1h)，7.13(d，j＝8.8hz，2h)，7.09-7.03(m，2h)，7.02-6.95(m，1h)，6.94-6.84(m，3h)，6.44(d，j＝8.1hz，1h)，6.20(d，j＝1.0hz，1h)，3.71-3.46(m，10h)，3.13(t，j＝12.8hz，3h)，2.48(d，j＝13.2hz，2h)，2.12-1.92(m，3h).
[0264]
通式10：
[0265][0266]
方案10：试剂和条件：(a)1-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪、ruphos pd g1、cs2co3、二恶烷、110℃、过夜；(b)将1m bbr3溶解在ch2cl2中，0℃至室温，30分钟。
[0267]
制备实施例24：(r)-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0268][0269]
将1-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪(46mg，0.25mmol)、(r)-3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基-三氟甲磺酸酯[制备实施例13](50mg，0.083mmol)、ruphos pd g1(1.01mg，0.001mmol)和碳酸铯(81.4mg，0.25mmol)在无水1，4-二恶烷(0.4ml)中脱气10分钟。将搅拌的悬浮液在110℃加热过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥并浓缩，得到黄色固体状(r)-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[制备实施例24]：c
39h42
fn5o2的lc-ms(m h

)计算值为631.33，测得值为632.5。
[0270]
实施例9：(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0271][0272]
(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例9](5.4mg，22％)通过与[实施例1]中所述的方法类似的方法制备。
[0273]1h nmr(300mhz，甲醇-d4)δ8.13(t，j＝1.8hz，1h)，7.84(dt，j＝7.7，1.4hz，1h)，7.79(dt，j＝7.9，1.4hz，1h)，7.66(d，j＝8.7hz，2h)，7.54(t，j＝7.7hz，1h)，7.47(dt，j＝7.7，1.1hz，1h)，7.35(d，j＝8.1hz，1h)，7.12(d，j＝8.9hz，2h)，7.09-7.03(m，2h)，6.98(ddd，j＝8.0，7.1，1.1hz，1h)，6.95-6.84(m，3h)，6.21(d，j＝1.0hz，1h)，3.73(d，j＝12.9hz，3h)，3.56(d，j＝16.5hz，9h)，3.16(d，j＝13.2hz，2h)，2.93(s，3h)，2.50(d，j＝13.7hz，2h)，2.13(d，j＝13.2hz，2h).
[0274]
通式11：
[0275][0276]
方案11：试剂和条件：(a)吡咯烷、pd(oac)2、xantphos、cs2co3、二恶烷、80℃、过夜；(b)将1m bbr3溶解在ch2cl2中，0℃至室温，30分钟。
[0277]
制备实施例25：(r)-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(吡咯烷-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0278][0279]
将吡咯烷(25mg，0.35mmol)、(r)-3
′‑
((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基-三氟甲磺酸酯[制备实施例13](222mg，0.37mmol)、pd(oac)2(8mg，0.03mmol)、xantphos(20mg，0.03mmol)和碳酸铯(137mg，0.42mmol)在无水1，
4-二恶烷(1.9ml)中脱气10分钟。将搅拌的悬浮液在80℃加热过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥并浓缩。残渣通过mplc纯化，得到黄色固体状(r)-n-((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(吡咯烷-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[制备实施例25](收率：7％)：c
33h30
fn3o2的lc-ms (m h )：计算值为519.62，测得值为520.9。
[0280]
实施例10：(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(吡咯烷-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0281][0282]
(r)-n-((5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-4
′‑
(吡咯烷-1-基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例10](28％)通过与[实施例1]中所述的方法类似的方法制备。
[0283]1h nmr(500mhz，甲醇-d4)δ9.23(d，j＝8.3hz，1h)，8.13(s，1h)，7.78(t，j＝7.0hz，2h)，7.64(d，j＝8.6hz，2h)，7.51(t，j＝7.8hz，1h)，7.46(dt，j＝7.9，1.0hz，1h)，7.35(dt，j＝8.2，1.0hz，1h)，7.10-7.04(m，2h)，6.98(ddd，j＝7.9，7.0，1.0hz，1h)，6.95-6.91(m，1h)，6.90-6.85(m，4h)，6.20(t，j＝1.0hz，1h)，3.44(s，4h)，2.14-2.08(m，4h)；c
32h28
fn3o2的lc-ms(m h

)：计算值为505.22，测量值为506.6。
[0284]
通式12：
[0285][0286]
方案12：试剂和条件：(a)(r)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯、pd(oac)2、xantphos、cs2co3、二恶烷、80℃、过夜；(b)将1m bbr3溶解在ch2cl2中，0℃至室温，30分钟。
[0287]
制备实施例26：((r)-1-(3
′‑
(((r)-(5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联]-4-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0288][0289]
将(r)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(65mg，0.35mmol)、(r)-3
′‑
(((5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯]-4-基-三氟甲磺酸酯[制备实施例13](222mg，0.37mmol)、pd(oac)2(8mg，0.03mmol)、xantphos(20mg，0.03mmol)和碳酸铯(137mg，0.42mmol)在无水1，4-二恶烷(1.9ml)中脱气10分钟。将搅拌的悬浮液在80℃加热过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥并浓缩。通过mplc纯化残渣，得到黄色固体状((r)-1-(3
′‑
((((r)-(5-氟-2-甲氧基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)氨基甲酰基)-[1，1
′‑
联苯基]-4-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯[制备实施例26](14mg，7％)：c
38h39
fn4o4的lc-ms(m h

)：
[0290]
计算值为634.29，测得值为635.7。
[0291]
实施例11：4
′‑
((r)-3-氨基吡咯烷-1-基)-n-((r)-(5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0292][0293]4′‑
((r)-3-氨基吡咯烷-1-基)-n-((r)-(5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例11](18％)通过与[实施例1]中所述的方法类似的方法制备。
[0294]1h nmr(500mhz，甲醇-d4)δ9.22(d，j＝8.3hz，1h)，8.11(t，j＝1.8hz，1h)，7.81-7.73(m，2h)，7.70-7.63(m，1h)，7.62-7.55(m，3h)，7.51(t，j＝7.8hz，1h)，7.48-7.46(m，1h)，7.37-7.33(m，1h)，7.10-7.05(m，2h)，6.98(ddd，j＝8.0，7.0，1.0hz，1h)，6.95-6.85(m，3h)，6.79-6.74(m，2h)，6.21(t，j＝1.0hz，1h)，4.06(tt，j＝6.5，3.6hz，1h)，3.69-3.61(m，2h)，3.49(dd，j＝10.7，3.3hz，1h)，3.42(td，j＝9.2，4.9hz，1h)，2.50(ddt，j＝13.5，8.9，6.8hz，1h)，2.19(ddt，j＝12.9，8.3，4.5hz，1h)；c
32h29
fn4o2的lc-ms(m h

)，计算值为520.23，测得值为520.6.
[0295]
通式13：
[1，1
′‑
联苯]-4-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯[制备实施例28](40％)通过与[制备实施例27]中所述方法类似的方法制备：c
38h39
cln4o4的lc-ms(m h )：计算值为650.27，测得值为651.9。
[0304]
实施例12：4
′‑
((s)-3-氨基吡咯烷-1-基)-n-((r)-(5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0305][0306]4′‑
((s)-3-氨基吡咯烷-1-基)-n-((r)-(5-氟-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例12](21％)通过与[实施例1]中所述的方法类似的方法制备。
[0307]1h nmr(500mhz，甲醇-d4)δ9.22(d，j＝8.3hz，1h)，8.11(d，j＝1.9hz，1h)，7.78(t，j＝8.1hz，2h)，7.67(t，j＝6.4hz，1h)，7.64-7.57(m，3h)，7.51(t，j＝7.7hz，1h)，7.46(d，j＝7.9hz，1h)，7.35(d，j＝8.1hz，1h)，7.07(t，j＝7.4hz，2h)，6.98(t，j＝7.5hz，1h)，6.92(dd，j＝8.5，2.8hz，1h)，6.88(dt，j＝8.3，5.2hz，2h)，6.79-6.75(m，2h)，6.20(s，1h)，4.06(s，1h)，3.65(dd，j＝10.0，6.5hz，2h)，3.53-3.47(m，1h)，3.43(td，j＝9.1，4.9hz，1h)，2.51(dq，j＝14.7，7.3hz，1h)，2.20(td，j＝8.3，4.0hz，1h).
[0308]
实施例13：4
′‑
((s)-3-氨基吡咯烷-1-基)-n-((r)-(5-氯-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺的制备
[0309][0310]4′‑
((s)-3-氨基吡咯烷-1-基)-n-((r)-(5-氯-2-羟基苯基)(1h-吲哚-2-基)甲基)-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺[实施例13](5.2％)通过与[实施例1]中所述的方法类似的方法制备。
[0311]1h nmr(300mhz，甲醇-d4)δ9.20(d，j＝8.2hz，1h)，8.11(s，1h)，7.78(t，j＝6.2hz，2h)，7.62(d，j＝8.6hz，2h)，7.50(dd，j＝16.3，8.0hz，2h)，7.37-7.29(m，2h)，7.17(dd，j＝8.6，2.6hz，1h)，7.08(t，j＝7.5hz，1h)，6.98(t，j＝7.4hz，1h)，6.88(d，j＝8.5hz，2h)，6.77(d，j＝8.6hz，2h)，6.20(s，1h)，4.07(s，1h)，3.66(dd，j＝10.7，5.7hz，2h)，3.53-3.39(m，2h)，2.52(dq，j＝14.9，7.0hz，1h)，2.27-2.12(m，1h).
[0312]
实施例1-13中制备的化合物的结构总结并示于下表1中。
[0313]
[表1]
[0314][0315][0316]
实验例1：对egfr l858r/t790m/c797s的抑制能力的测定
[0317]
为了证实本发明一方面提供的实施例1-13中制备的化合物对egfr突变的抑制能力，进行了以下实验。
[0318]
特别地，使用西斯比奥公司(cisbio co)的htrf系统测量本发明化合物对egfr突变酶的活性。作为egfr l858r/t790m/c797s突变酶，购买了signalchem公司提供的蛋白质，并用作酶源。
[0319]
用于活性测量的分析缓冲液的组成如下：50mm tris-hcl(ph 7.5)、100mm nacl、7.5mm mgcl2、3mm kcl、0.01％吐温20、0.1％bsa和1mm dtt。在此，使用浓度为1mm的atp和浓度为0.5μm的生物素标记的肽底物进行酶反应。根据以下分析反应配方对化合物的egfr活性抑制作用进行分析。
[0320]
组分1：4μl egfr突变酶
[0321]
组分2：2μl化合物溶液
[0322]
组分3：4μl atp和生物素标记的肽混合物
[0323]
通过首先混合组分1和组分2，然后向其中加入组分3来引发酶反应。将混合物在37℃下反应2小时后，将10μl由链霉亲和素-xl665和由cisbio提供的铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体组成的测量溶液添加到酶反应溶液中，然后在室温下反应1小时。最后，使用perkin-elmer的envision仪器计算615nm和665nm处的荧光值的比率，以定量测量酶活性并证实化合物的抑制能力。使用prism程序(版本5.01，graphpad软件公司)分析在7个化合物浓度下测量的值，并计算ic
50
值，即化合物抑制能力指数。
[0324]
结果如表2所示。
[0325]
[表2]
[0326][0327][0328]
如表2所示，在本发明的一个方面提供的实施例1至13的化合物中，实施例1和3的化合物表现出优异的抗egfr l858r/t790m/c797s突变的抑制能力。
[0329]
实验例2：评估过表达各种egfr突变的baf3细胞中的抗癌活性
[0330]
为了证实根据本发明的式1所示化合物作为针对egfr野生型和突变体的变构抑制剂，评价ba/f3细胞系中对egfr野生型和突变体的抑制作用。此外，为了评价根据本发明的化合物与现有药物共同给药时的细胞活性，在转移性结肠直肠癌和转移性头颈鳞状癌中，单独使用西妥昔单抗或与化疗剂联合使用来评价联合给药的细胞活性。
[0331]
具体而言，本发明化合物对野生型和突变型ba/f3 egfr细胞系的活性使用promega的celltiter-glo系统进行如下测定。celltiter-glo分析是通过测量培养状态的细胞中存在的atp来确认细胞活力的方法。ba/f3 egfr野生型(wt)和ba/f3 egfr del19(d)、ba/f3 egfr del19/t790m(dt)、ba/f3 del19/t790m/c797s(dtc)、ba/f3 egfr l858r(l)、ba/f3 egfr l858r/t790m(lt)和ba/f3l858r/t790m/c79 797s(ltc)突变细胞系购自科洛恩生物科技有限公司(crown bioscience)并使用。将ba/f3 egfr野生型(wt)和ba/f3 egfr del19(d)、ba/f3 egfr del19/t790m(dt)、ba/f3 del19/t790m/c797s(dtc)、ba/f3 egfr l858r(l)、ba/f3 egfr l858r/t790m(lt)和ba/f3l858r/t790m/c797s(ltc)突变细胞系在37℃、5％co2培养箱中含有10％fbs和1％青霉素-链霉素的rpmi中培养。
[0332]
根据以下分析反应配方根据每种egfr突变体分析化合物的细胞存活抑制效果。
[0333]
将baf3细胞以2500个细胞/50μl/孔的密度等分在96孔细胞培养板中，以0、0.03、0.1、0.3和1μm浓度的50μl的式1所示化合物对其处理。将用该化合物处理的平板在37℃培养箱中反应72小时，然后根据celltiter-glo分析说明书在室温下放置30分钟以将平板温度维持在室温。此后，以100μl celltiter-glo试剂处理板的每个孔，随后在室温下振荡培养物10分钟。最后，使用光度计定量测量570nm处荧光值的比率，并确认化合物抑制细胞活力的能力。使用prism程序(版本5.01，graphpad软件，公司)分析化合物在5个浓度(0、0.03、0.1、0.3和1μm)下测量的值，并计算ic
50
值，即化合物抑制能力指数。
[0334]
结果示于图1和图2中。
[0335]
图1和图2示出用本发明一方面提供的实施例化合物单独或与称为egfr拮抗剂的西妥昔单抗组合处理过表达各种egfr突变的baf3细胞时评价抗癌活性的结果图。
[0336]
如图1和图2所示，当本发明的一个方面提供的实施例1和3的化合物与西妥昔单抗联合处理时，在具有egfr l858r/t790m和egfr l858r/t790m/c797s过表达的细胞中显示了协同抗癌活性。
[0337]
作为参考，图1和图2的y轴上的“仅相对于西妥昔单抗”意味着仅以西妥昔单抗单独处理时细胞活力(％)被认为是100％。
[0338]
制造例1：粉末的制备
[0339]
式1所示的衍生物
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
2g
[0340]
乳糖
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1g
[0341]
通过混合所有上述成分制备粉末，将其根据制备粉末的常规方法填充在密封包装中。
[0342]
制造例2：片剂的制备
[0343][0344][0345]
通过制备片剂的常规方法混合所有上述成分来制备片剂。
[0346]
制造例3：胶囊的制备
[0347][0348]
通过混合所有上述成分制备胶囊，将其根据制备胶囊的常规方法填充到明胶胶囊中。
[0349]
制造例4：可注射溶液的制备
[0350][0351]
根据制备可注射溶液的常规方法以所示的量包含所有上述成分来制备可注射溶液。
[0352]
制造例5：保健功能性食品的制备
[0353]
[0354][0355]
根据优选的混合比例混合适于保健功能性食品的维生素和矿物质，但是组成比例可以任意调整。在根据制备健康功能性食品的常规方法混合上述成分后，制备颗粒，并根据常规方法将颗粒用于制备健康功能性食品。
[0356]
制造例6：保健饮料的制备
[0357][0358]
根据制备保健饮料的常规方法混合上述成分。将混合物在85℃下加热1小时，同时搅拌，然后过滤。滤液装入灭菌的容器中，将其密封并再次灭菌，储存在冰箱中直到用于制备保健饮料的组合物。
[0359]
根据优选的混合比例混合适合于喜爱的饮料的成分，但是成分比例可以根据地区和种族偏好，例如需求类别、需求国家和使用目的等进行调整。
[0360]
工业适用性
[0361]
本发明的一方面提供的苯甲酰胺衍生物可通过抑制egfr突变用于预防或治疗癌症，并且当与egfr拮抗剂如西妥昔单抗联合施用时，其对抗癌活性表现出显著的协同作用，因此其可有效地用作抗癌剂。