大鼠急性心梗模型的构建方法、装置及模型

1.本技术涉及医学试验技术领域，更具体地，本技术涉及一种大鼠急性心梗模型的构建方法、装置及模型。


背景技术：

2.缺血性心脏病是危害人类健康的一大疾病，因缺血造成的心肌损害是不可逆的。基础研究中急于研发新的治疗办法以实现全民健康，那么缺血性心脏病的体内模型构建是研究的第一步，也是最至关重要的步骤之一。
3.常见方法有高脂饲料法、注射缩血管物质如垂体后叶素、异丙肾上腺素等、冠脉左前降支结扎、ameroid收缩环法、左心室注射微球颗粒、缺血再灌注法等。关于模型建立常见问题为耗时长、动物生存率低、成模不统一、花费贵、不能准确模拟临床患者发病。
4.目前大鼠缺血性心脏病模型的构建方法的主要缺点为：
5.(1)气管插管经颈部切开，损伤颈前肌肉、损伤气管旁组织，损害模型构建的均一性，对大鼠造成了二次损伤。
6.(2)开胸过程中切口太大，普通的扩胸器放置时间长、会损伤肺部，延长手术时间，缝合肋骨繁琐。
7.(3)挤压心脏于胸腔外的方法造成了心脏的机械损伤，而不将心脏挤压于胸腔外的方法由于心脏漂浮使结扎深度、广度不统一。
8.(4)气体麻醉深度不够，手术中易苏醒；戊巴比妥钠麻醉气道分泌物过多，手术成功后有动物会发生窒息死亡风险。
9.(5)剪断大鼠肋骨，影响存活，进一步延长了手术时间；
10.(6)手术中出现的积血影响肺部的扩张，损伤肺功能，无法保证胸腔的闭合以及负压，导致大鼠肺功能降低甚至气胸、液气胸死亡。
11.(7)判断模型成功的方式不统一，心电图与实际结扎成功有延迟，经常有误判的情况导致造成失败。


技术实现要素：

12.本发明的目的在于提供一种大鼠急性心梗模型的构建方法及所用装置，以解决上述技术问题中的至少一个。
13.为了达到上述目的中至少一个，本技术采用下述技术方案：
14.本技术第一方面提供一种大鼠急性心梗模型的构建方法，包括：
15.s1、将禁食12小时的大鼠称重，然后对大鼠进行麻醉并剔除胸腔部位左侧第四肋骨处的毛发；
16.s2、将大鼠取仰卧位，固定四肢，用大鼠呼吸导管经口腔插入气管，然后将呼吸导管连接呼吸机；
17.s3、使用眼科剪剪开大鼠胸部皮肤，逐层剥离胸浅肌和胸深肌，暴露出肋骨，再用
弯钳在第三肋骨和第四肋骨之间切出开口，并用拉钩撑开且固定开口，暴露胸腔；
18.s4、通过开口将经过生理盐水浸湿的湿棉条放入胸腔中，再将大鼠的肺部暂时移位至湿棉条处，保持肺部湿润；
19.s5、改变大鼠的体位，找到心脏左心耳位置，使用缝合线结扎左心耳下方2mm处的左前降支；
20.s6、将拉钩取下，并将胸腔内的湿棉条取出，冲洗胸腔，对胸腔进行排气，再依次缝合第三肋骨和第四肋骨间的开口、胸深肌肌肉上的切口、胸浅肌肌肉上的切口和皮肤上的切口；
21.s7、结扎15分钟后将大鼠脱离呼吸机，再观察8分钟至12分钟，然后将大鼠放置于电热毯中，并给予物品覆盖保温。
22.可选地，在所述步骤s7之后还包括：
23.s8、连续3天用碘伏擦拭大鼠伤口处，并在大鼠皮下连续3天注射青霉素。
24.本技术第二方面提供一种如第一方面所述的大鼠急性心梗模型的构建方法的所用装置，包括：
25.呼吸机；
26.插入大鼠气管处的呼吸导管，所述呼吸导管与所述呼吸机连通；
27.所述呼吸导管包括：
28.管体部；
29.与所述管体部的一端连接固定的用于插入大鼠气管处的管头部，与所述管体部的另一端连接固定的用以固定管体部的固定部；
30.位于所述管头部中的导丝部；
31.所述管体部的外侧壁上包括有深度指示条，所述深度指示条用以观测管头部插入大鼠气管中的深度；
32.所述管头部包括有与所述呼吸机连通的插头；
33.当管头部插入大鼠气管中后，将所述导丝部从管头部中拔出，并将所述插头与所述呼吸机连通；
34.所述装置还包括：用以撑开大鼠的第三肋骨和第四肋骨之间切出开口的拉钩，以使得大鼠的胸腔暴露；以及
35.在大鼠麻醉期间用以将大鼠体内的痰吸出体外的吸痰器。
36.可选地，所述拉钩包括：
37.拉钩头部和拉钩尾部，所述拉钩头部为圆润耙式拉钩，所述拉钩尾部为线条。
38.本技术第三方面提供一种如第一方面所述方法构建的大鼠急性心梗模型。
39.本技术的有益效果如下：
40.1、针对目前现有技术中存在的问题，本技术提供一种大鼠急性心梗模型的构建方法，通过在第三肋骨和第四肋骨之间切出开口，而不是剪断肋骨，可使大鼠术后快速恢复。冲洗胸腔的方式中，将现有技术中的灌洗为湿棉花间接吸取，避免机械损伤，增加成功率。胸腔闭合，使胸腔内术后保持负压，减少胸腔积液，最大限度排除其他因素对于实验均一性的干扰。
41.2、本技术提供的大鼠急性心梗模型的构建方法所用装置，通过使用本技术提供的
呼吸导管，在插入大鼠气管的过程中使得大鼠不会出现创伤；吸痰器的使用使得大鼠不会出现窒息死亡的情况；通过使用拉钩代替现有技术中的扩胸器，可以减小切口，缩短手术时间，避免肺部损伤。
附图说明
42.下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
43.图1示出本技术的一个实施例中的大鼠急性心梗模型的构建方法的流程图。
44.图2示出本技术的一个实施例中的大鼠急性心梗模型的构建方法的所用装置中的呼吸导管的结构示意图。
45.图3示出本技术的一个实施例中的大鼠急性心梗模型的构建方法的所用装置中的拉钩的结构示意图。
46.图4示出本技术的一个实施例中的大鼠急性心梗模型的构建方法的所用装置中的吸痰器的结构示意图。
47.图5示出使用本技术的一种实施方式中的大鼠急性心梗模型的构建方法对只结扎冠脉左前降支组的大鼠的心电图st段变化情况和假手术组的大鼠的心电图st段变化情况。
48.图6示出使用本技术的一种实施方式中的大鼠急性心梗模型的构建方法对只结扎冠脉左前降支组的大鼠的超声变化图。
49.图7示出示出使用本技术的一种实施方式中的大鼠急性心梗模型的构建方法对假手术组的大鼠的超声变化图。
具体实施方式
50.在下述的描述中，出于说明的目的，为了提供对一个或者多个实施方式的全面理解，阐述了许多具体细节。然而，很明显，也可以在没有这些具体细节的情况下实现这些实施方式。
51.在本技术的描述中，需要说明的是，术语“上”、“下”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本技术的限制。除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本技术中的具体含义。
52.还需要说明的是，在本技术的描述中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个
……”
限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
53.为解决现有技术中存在的问题，本技术的一个实施例提供一种大鼠急性心梗模型
的构建方法，如图1所示，包括如下步骤：
54.步骤s1、将禁食12小时的大鼠称重，然后对大鼠进行麻醉并剔除胸腔部位左侧第四肋骨处的毛发；其中，所述麻醉剂为0.4-0.55ml/100g的1％戊巴比妥钠；或者，所述麻醉剂由0.4-0.55ml/100g的1％戊巴比妥钠和盐酸利多卡因配合形成；具体的，当麻醉剂为0.4-0.55ml/100g的1％戊巴比妥钠对大鼠不完全起作用时，再使用盐酸利多卡因对大鼠进行局部麻醉；在大鼠麻醉期间使用吸痰器将大鼠体内的痰吸出体外，以防止大鼠窒息。
55.步骤s2、将大鼠取仰卧位，固定四肢，用大鼠呼吸导管经口腔插入气管，然后将呼吸导管连接呼吸机；具体的，将麻醉后的大鼠取仰卧位，并放在鼠板上进行固定，这里，可以使用“u”型脱敏胶带将大鼠固定在鼠板上；再通过光源照射大鼠咽喉部，将鼠板竖直放置，操作人员的左手将大鼠舌头拨至一侧，右手将呼吸导管经过大鼠口腔并在大鼠的气管张开时插入，当操作人员感觉有落空感后拔出呼吸导管中的导丝，呼吸导管插入成功后与呼吸机相连接；这样插入呼吸导管的方式对小鼠不会出现任何创伤；呼吸机参数为频率78次/分钟，潮气量7，呼吸比为1:2。
56.这里，呼吸导管插入成功的方式为：当大鼠呼吸频率与呼吸机的频率一致，并且当棉花絮放置于气管插管口处，棉花絮有飘动时，说明呼吸导管插入成功。大鼠呼吸频率与呼吸机的频率一致就可以确定呼吸机与呼吸导管的连接处不漏气。
57.步骤s2，在现有技术的操作方式为将大鼠颈前气管切开，给实验大鼠带来了二次损伤，增加了死亡率，同时气管切开难免会损伤到气管附近组织，给实验带来了不稳定性。经口气管插管避免了这种伤害，启发于人体抢救的气管插管办法，经此法可以缩短操作时间，提高生存率和模型稳定性。
58.步骤s3、使用眼科剪剪开大鼠胸部皮肤，逐层剥离胸浅肌和胸深肌，暴露出肋骨，再用弯钳在第三肋骨和第四肋骨之间切出开口，并用拉钩撑开且固定开口，暴露胸腔；具体的，以小鼠胸腔部跳动最强处为中点，即心搏最明显处，胸骨旁3mm处；使用眼科剪平肋骨剪开皮肤，再逐层剥离胸浅肌和胸深肌，当暴露出肋骨时，再用弯钳轻轻在第三肋骨和第四肋骨之间钝性开口，并用拉钩撑开且固定开口，使得胸腔得以暴露。使用拉钩代替现有技术中的扩胸器，可以减小切口，缩短手术时间，避免肺部损伤；该步骤启发于人体实验中的拉钩，经过改进应用于大鼠手术中，缩短开胸时间，提高成功率；拉钩尾部可使用橡皮胶带固定于鼠板中，实现一人操作。该步骤还代替现有技术中直接将大鼠的肋骨剪断的方式，使得大鼠术后恢复更快。
59.步骤s4、通过开口将经过生理盐水浸湿的湿棉条放入胸腔中，再将大鼠的肺部暂时移位至湿棉条处，保持肺部湿润；棉条的长度和宽度分别为1.5
㎝
和0.5cm。
60.步骤s5、改变大鼠的体位，找到心脏左心耳位置，使用缝合线结扎左心耳下方2mm处的左前降支；在改变大鼠体位之前，需要将大鼠左上肢松开；改变体位的具体方式为使大鼠右侧卧位，背部置垫子；垫子可以为肩胛骨处置直径3cm，高5cm圆筒状棉垫。通过改变大鼠体位，无需挤压心脏于胸腔外，避免心脏受到机械损伤；在胸腔内使漂浮的心脏结扎深度、广度、位置固定。
61.步骤s6、将拉钩取下，并将胸腔内的湿棉条取出，冲洗胸腔，对胸腔进行排气，再依次缝合第三肋骨和第四肋骨间的开口、胸深肌肌肉上的切口、胸浅肌肌肉上的切口和皮肤上的切口；这里，所述冲洗胸腔的方法为在胸腔中再次放置湿棉条，使用吸痰器抽吸湿棉条
表面，最后取出湿棉条。这里，将现有技术中的灌洗为湿棉花间接吸取，避免机械损伤，增加成功率。
62.其中，缝合第三肋骨和第四肋骨间的开口方式为先缝合最下方开口，再采用“十字交叉法”缝合上面和中间的两针，再使用吸痰器对胸腔负压排气，排气完成后再对第三肋骨和第四肋骨间的开口进行完全缝合。
63.具体的，缝合第三肋骨和第四肋骨间的开口时左手持镊子将肋骨微微太高，以防进针时扎到肺部或其他脏器，在大鼠呼气时进针。
64.步骤s7、结扎15分钟后将大鼠脱离呼吸机，再观察8分钟至12分钟，然后将大鼠放置于电热毯中，并给予物品覆盖保温；观察时间优选为是10分钟。这里，脱离呼吸机为将呼吸机与呼吸导管断开，保留呼吸导管的管头部在大鼠的气管中。
65.对于还未苏醒的大鼠，要注意观察体征，如出现心跳停止，立马胸外按压，重新连接呼吸机，心跳恢复后仍需密切观察；直至完全苏醒后放回干净垫料笼中，拔掉大鼠气管中的呼吸导管的管头部。
66.步骤s8、连续3天用碘伏擦拭大鼠伤口处，并在大鼠皮下连续3天注射青霉素，密切关注7天。这样，可以防止大鼠的伤口感染；在实际操作时，操作人员可根据实际情况确定是否需要在大鼠皮下连续3天注射青霉素。
67.在步骤s1之前，需要将所用到的所有器械使用75％酒精进行消毒。
68.本技术实施例所用大鼠以8周龄、体重280g左右为宜的spf级sd大鼠。
69.在实际操作过程中，可以选取90只雄性sd大鼠，分为结扎大鼠冠脉左前降支组与假手术组，结扎大鼠冠脉左前降支组80只，假手术组10只。
70.对于80只结扎冠脉左前降支组的大鼠选取出生6-8周，体重180-330g的雄性sd大鼠，对其进行上述步骤s1至步骤s8；
71.对于10只假手术组选取出生6-8周，体重180-330g的雄性sd大鼠，对其进行上述步骤s1至步骤s8；需要说明的是，上述步骤s5改为：改变大鼠的体位，找到心脏左心耳位置，使用缝合线只穿线不结扎左心耳下方2mm处的左前降支。
72.对于上述80只结扎冠脉左前降支组的大鼠和10只假手术组的大鼠的测试结果为：
73.1、心电图st段变化情况
74.如图4所示，对于假手术组大鼠，手术前后心电图st段无明显改变；
75.而缺血性心脏病组大鼠，手术前后心电图st段变化明显，冠状动脉结扎后大约3min内可见心电图ⅱ导联st段抬高与高耸的t波融合，呈弓背向上单向曲线，说明结扎成功。
76.2、心脏超声变化
77.如图5和图6所示，术后4周超声心动图监测各组大鼠心功能的情况，与假手术组相比，缺血性心脏病组大鼠左室射血分数(ef)和左室短轴率(fs)显著降低。
78.需要说明的是，将心尖部变白、心电图st段延迟抬高(3-5min)、心脏超声作为成模的判断。结扎成功后部分鼠的心电图st段抬高不会马上出现，一般在3-5分钟左右会出现变化，而结扎成功时大鼠心尖部变白是及时出现的成功标志。
79.本技术另一实施例提供一种大鼠急性心梗模型的构建方法的所用装置，如图2至4所示，包括：呼吸机；插入大鼠气管处的呼吸导管，呼吸导管的规格为16g；所述呼吸导管与
所述呼吸机连通；所述呼吸导管包括：管体部11；与所述管体部1的一端连接固定的用于插入大鼠气管处的管头部2，与所述管体部1的另一端连接固定的用以固定管体部1的固定部3；位于所述管头部2中的导丝部4；所述管体部1的外侧壁上包括有深度指示条5，所述深度指示条5用以观测管头部2插入大鼠气管中的深度；所述管头部2包括有与所述呼吸机连通的插头6；当管头部2插入大鼠气管中后，将所述导丝部4从管头部2中拔出，并将所述插头6与所述呼吸机连通；这里，管头部2的内径优选为1.32mm，外径优选为1.60mm，不以此为限；在实际应用中，根据大鼠体重、类型和具体的实际情况而定具体尺寸；而且管头部2为可弯曲的硬管，并且经过砂纸打磨处理；导丝部4的材质为金属，且直径为1mm。所述装置还包括：用以撑开大鼠的第三肋骨和第四肋骨之间切出开口的拉钩，以使得大鼠的胸腔暴露；以及在大鼠麻醉期间用以将大鼠体内的痰吸出体外的吸痰器。自制吸痰器采用50ml刻度注射器连接钝头软管。
80.通过使用本技术提供的呼吸导管，在插入大鼠的气管的过程中使得大鼠不会出现创伤；吸痰器的使用使得大鼠不会出现窒息死亡的情况。
81.可选地，所述拉钩包括：
82.拉钩头部7和拉钩尾部8，所述拉钩头部7为圆润耙式拉钩，其宽度为8mm，所述拉钩尾部8为线条，其长度为20cm至30cm。在实际使用时，拉钩尾部8可使用橡皮胶带固定于鼠板中。
83.本技术第三实施例提供一种上述第一个实施例中的方法构建的大鼠急性心梗模型。
84.显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。