负载pH响应型微载体的抗菌水凝胶及其制备方法和应用

负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶及其制备方法和应用
技术领域
1.本发明属于生物材料技术领域，具体涉及负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶及其制备方法和应用。


背景技术：

2.皮肤是人体最大的多层器官，包括表皮和真皮，一旦表皮受损，皮肤就会失去最基本的保护作用。如果不能及时有效治疗，创面很容易被大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等病原体定植，而伤口部位的微生物感染会严重延长愈合过程，形成慢性感染伤口。尽管抗菌材料的开发取得了进展，但仍然缺乏理想的针对感染性伤口愈合的促进伤口修复的材料，主要存在不能很好控制以及预防细菌感染、炎症期延长的问题。
3.当前研究表明伤口处新生组织生长迟缓，是伤口愈合缓慢的原因之一，在伤口愈合的细胞增殖期阶段，促进伤口处新生血管的形成，维持组织修复所需的养分，是促进伤口愈合的有效手段。
4.血管内皮生长因子(vegf)是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，具有促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用，然而vegf在体内的半衰期很短，这极大地影响了其作为信号分子的有效性，此外，过量的vegf会导致出血，同时还有可能出现负反馈控制，即细胞可能通过下调vegf膜受体水平达到停止接收细胞外vegf信号的效果，如何在伤口处实现vegf的智能持续缓释，并在治疗窗口期将vegf浓度维持在所需标准仍是一个挑战。因此，提供一种可有效实现vegf缓控释放的体系，是提高vegf在促进伤口愈合领域应用的主要措施之一。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供负载 ph响应型微载体的抗菌水凝胶及其制备方法和应用。本发明该水凝胶为接枝有复合微球的聚丙烯酰胺水凝胶，利用载有血管内皮生长因子vegf 的海藻酸钙微球表面涂覆的聚多巴胺涂层实现vegf缓控释放，在附着于聚多巴胺微球上原位还原形成的纳米银离子的共同作用下，赋予水凝胶以韧性、粘附性、抗氧化、抗菌和促血管化性能。
6.为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶，其特征在于，包括聚丙烯酰胺水凝胶和复合微球，所述复合微球包括载有血管内皮生长因子vegf的海藻酸钙微球，所述海藻酸钙微球上覆盖有聚多巴胺涂层，所述聚多巴胺涂层包括聚多巴胺微球，所述聚多巴胺微球表面附着有银纳米颗粒。
7.上述的一种负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶，其特征在于，所述银纳米颗粒为还原态银纳米颗粒。
8.此外，本发明还提供一种制备上述的负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶的方法，其特征在于，所述方法包括：
9.步骤一、将负载有vegf的海藻酸钙微球重悬于去离子水中，得到微球重悬液；
10.步骤二、将多巴胺加入所述微球重悬液中，调节ph为碱性，搅拌 0.4h～0.6h，得到含多巴胺的微球体系；
11.步骤三、向所述含多巴胺的微球体系中加入硝酸银，搅拌0.4h～0.6h，得到分散有银纳米颗粒的体系；
12.步骤四、向所述分散有银纳米颗粒的体系中加入丙烯酰胺、过硫酸铵、 n’n亚甲基双丙烯酰胺和四甲基乙二胺，混匀，静置，得到负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶。
13.上述的方法，其特征在于，所述负载有vegf的海藻酸钙微球的制备方法包括：
14.步骤一、将血管内皮生长因子vegf溶于海藻酸钠溶液，得到载药溶液；
15.步骤二、将所述载药溶液滴入氯化钙溶液中，得到负载有vegf的海藻酸钙微球悬液；
16.步骤三、将所述负载有vegf的海藻酸钙微球悬液离心，除去上清液，得到负载有vegf的海藻酸钙微球。
17.上述的方法，其特征在于，步骤二所述多巴胺的质量为步骤一所述去离子水质量的0.16％～0.25％。
18.上述的方法，其特征在于，步骤三所述硝酸银的质量为多巴胺质量的 0.05倍～0.08倍。
19.上述的方法，其特征在于，步骤四所述丙烯酰胺的质量为多巴胺质量的66倍～120倍，所述过硫酸铵的质量为多巴胺质量的6.6倍～12倍，所述 n’n亚甲基双丙烯酰胺的质量为多巴胺质量的1.3倍～2倍，所述四甲基乙二胺的体积为多巴胺质量的3.3倍～5倍，所述四甲基乙二胺的体积单位为 ml，所述多巴胺质量的单位为g。
20.上述的方法，其特征在于，步骤一所述海藻酸钠溶液的质量百分含量为0.5％～3％，所述载药溶液中血管内皮生长因子vegf的质量百分含量为 0.8
×
10-5
wt％～3
×
10-5
wt％。
21.上述的方法，其特征在于，步骤二所述氯化钙溶液的质量百分含量为 0.5％～3％。
22.更进一步的，本发明还提供一种应用上述负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶在制备感染性伤口修复用材料中的应用。
23.本发明与现有技术相比具有以下优点：
24.1、本发明提供一种负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶，该水凝胶包括聚丙烯酰胺水凝胶和复合微球，所述复合微球包括载有血管内皮生长因子vegf的海藻酸钙微球，所述海藻酸钙微球上覆盖有聚多巴胺涂层，所述聚多巴胺涂层包括聚多巴胺微球，所述聚多巴胺微球表面附着有银纳米颗粒，本发明的水凝胶为接枝有复合微球的聚丙烯酰胺水凝胶，利用载有血管内皮生长因子vegf的海藻酸钙微球表面涂覆的聚多巴胺涂层实现 vegf缓控释放，在附着于聚多巴胺微球上原位还原形成的纳米银离子的共同作用下，赋予水凝胶以韧性、粘附性、抗氧化、抗菌和促血管化性能。
25.3、本发明的上述水凝胶，压缩形变可达到70％，且在70％压缩形变循环25次后，本发明水凝胶的最大应力可以恢复到初始值的84.5％，具有良好韧性及回弹性。
26.3、本发明的上述水凝胶，具有良好粘附性，可附着于各种机体组织上，同时具有抗氧化、抗菌和促血管化的性能。
27.4、本发明提供一种制备上述负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶的方法，包括将多巴胺加入负载有vegf的海藻酸钙微球重悬液中自聚以在微球表面形成涂层、加入硝酸银使原位还原银纳米颗粒、加入丙烯酰胺、过硫酸铵、n’n亚甲基双丙烯酰胺和四甲基乙二胺成胶而得到水凝胶，该水凝胶可有效缓解海藻酸钙微球易溶胀所带来的药物释放过快缺陷以及聚丙烯酰胺水凝胶载药难问题，所具有的多孔网络结构结晰，交联稳定，可在抗菌基础上实现有效缓控释放vegf。
28.5、本发明的上述制备水凝胶的方法，原理可靠，利于推广应用。
29.下面结合附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
[0030][0031]
图1为实施例1步骤七静置前体系与负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶形貌比对图。
[0032]
图2为实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶的扫描电镜图片。
[0033]
图3为实施例1聚多巴胺涂覆的海藻酸钙微球在300x的扫描电镜图。
[0034]
图4为实施例1聚多巴胺涂覆的海藻酸钙微球在5kx的扫描电镜图。
[0035]
图5为实施例1原位还原在聚多巴胺涂层上的银纳米颗粒的透射电镜图。
[0036]
图6为实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶循环压缩力学性能测试结果。
[0037]
图7为实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶循环压缩力学性能测试结果。
[0038]
图8为实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶物理性能展示图。
[0039]
图9为实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶抗菌性能测试结果。
[0040]
图10为实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶在不同ph条件下药物释放情况。
[0041]
图11为不同样品伤口修复示意图。
[0042]
图12为不同样品伤口在第7天和第14天组织染色图。
具体实施方式
[0043]
以下实施例中，聚丙烯酰胺、多巴胺购买自上海麦克林生化科技有限公司，海藻酸钠、血管内皮生长因子vegf购买自北京索莱宝科技有限公司，所述丙烯酰胺分子量为71.08，藻酸钠分子量为198。
[0044]
本发明提供一种负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶，包括聚丙烯酰胺水凝胶和复合微球，所述复合微球包括载有血管内皮生长因子vegf的海藻酸钙微球，所述海藻酸钙微球上覆盖有聚多巴胺涂层，所述聚多巴胺涂层包括聚多巴胺微球，所述聚多巴胺微球表面附着有银纳米颗粒。本发明的水凝胶为接枝有复合微球的聚丙烯酰胺水凝胶，利用载有血管内皮生长因子vegf的海藻酸钙微球表面涂覆的聚多巴胺涂层实现vegf缓控释放，在附着于聚多巴胺微球上原位还原形成的纳米银离子的共同作用下，赋予水凝胶以韧性、粘附性、抗氧化、抗菌和促血管化性能。
[0045]
本发明的负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶中，所述银纳米颗粒为还原态银纳米颗粒。
[0046]
本发明还提供一种上述负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶的制备方法，所述方法包括：
[0047]
步骤一、将负载有vegf的海藻酸钙微球重悬于去离子水中，得到微球重悬液；
[0048]
步骤二、将多巴胺加入所述微球重悬液中，调节ph为碱性，搅拌 0.4h～0.6h，得到含多巴胺的微球体系；所述多巴胺的质量为步骤一所述去离子水质量的0.16％～0.25％；
[0049]
步骤三、向所述含多巴胺的微球体系中加入硝酸银，搅拌0.4h～0.6h，得到分散有银纳米颗粒的体系；所述硝酸银的质量为多巴胺质量的0.05 倍～0.08倍；
[0050]
步骤四、向所述分散有银纳米颗粒的体系中加入丙烯酰胺、过硫酸铵、 n’n亚甲基双丙烯酰胺和四甲基乙二胺，混匀，静置，得到负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶。所述丙烯酰胺的质量为多巴胺质量的66倍～120 倍，所述过硫酸铵的质量为多巴胺质量的6.6倍～12倍，所述n’n亚甲基双丙烯酰胺的质量为多巴胺质量的1.3倍～2倍，所述四甲基乙二胺的体积为多巴胺质量的3.3倍～5倍，所述四甲基乙二胺的体积单位为ml，所述多巴胺质量的单位为g；
[0051]
其中，所述负载有vegf的海藻酸钙微球的制备方法包括：
[0052]
步骤一、将血管内皮生长因子vegf溶于海藻酸钠溶液，得到载药溶液；所述海藻酸钠溶液的质量百分含量为0.5％～3％，所述载药溶液中血管内皮生长因子vegf的质量百分含量为0.8
×
10-5
wt％～3
×
10-5
wt％；
[0053]
步骤二、将所述载药溶液滴入氯化钙溶液中，得到负载有vegf的海藻酸钙微球悬液；所述氯化钙溶液的质量百分含量为0.5％～3％；
[0054]
步骤三、将所述负载有vegf的海藻酸钙微球悬液离心，除去上清液，得到负载有vegf的海藻酸钙微球。
[0055]
以下结合实施例具体说明本发明的内容，下列说明并非对本发明的限制。
[0056]
按本发明的方法制备得到一系列水凝胶，具体如下：
[0057]
实施例1
[0058]
本实施例提供一种负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶，包括聚丙烯酰胺水凝胶和复合微球，所述复合微球包括载有血管内皮生长因子vegf 的海藻酸钙微球，所述海藻酸钙微球上覆盖有聚多巴胺涂层，所述聚多巴胺涂层包括聚多巴胺微球，所述聚多巴胺微球表面附着有银纳米颗粒。
[0059]
所述银纳米颗粒为还原态银纳米颗粒。
[0060]
本实施例还提供一种上述负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶的制备方法，所述方法包括：
[0061]
步骤一、将0.1μg血管内皮生长因子vegf溶于0.64ml海藻酸钠溶液，得到载药溶液；所述海藻酸钠溶液的质量百分含量为1％；
[0062]
步骤二、利用静电纺丝技术，将所述载药溶液滴入5ml氯化钙溶液中，得到负载有vegf的海藻酸钙微球悬液；所述氯化钙溶液的质量百分含量为1.5％；相对海藻酸钠，氯化钙为过量添加；
[0063]
步骤三、将所述负载有vegf的海藻酸钙微球悬液离心，除去上清液，得到负载有vegf的海藻酸钙微球，标记为alg-vegf；
[0064]
步骤四、将所述负载有vegf的海藻酸钙微球重悬于6ml去离子水中，得到微球重悬
液；
[0065]
步骤五、将0.01g多巴胺加入所述微球重悬液中，调节ph为8.5，搅拌0.5h，得到含多巴胺的微球体系；
[0066]
步骤六、向所述含多巴胺的微球体系中加入0.8mg硝酸银，搅拌0.5h，得到分散有银纳米颗粒的体系；
[0067]
步骤七、向所述分散有银纳米颗粒的体系中加入1g丙烯酰胺、0.1g 过硫酸铵、0.02gn’n亚甲基双丙烯酰胺和0.05ml四甲基乙二胺，混匀，静置，得到负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶。
[0068]
对比例1
[0069]
本对比例考察原位还原银纳米颗粒对微球性能的影响，本对比例提供一种涂覆有多巴胺的微球，制备方法包括步骤一～步骤六，其中步骤一～步骤五与实施例1相同，步骤六为将所述含多巴胺的微球体系离心，去除上清液，得到涂覆有多巴胺的微球，标记为alg-pda。
[0070]
对比例2
[0071]
本对比例考察原位还原银纳米颗粒和胶液制备方法对水凝胶性能的影响，本对比例提供一种水凝胶，制备方法包括步骤一～步骤七，其中步骤一～步骤五与实施例1相同；
[0072]
步骤六、向所述含多巴胺的微球体系中加入1g丙烯酰胺、0.1g过硫酸铵和0.02gn’n亚甲基双丙烯酰胺，得到制备液；
[0073]
步骤七、向所述制备液中加入0.05ml四甲基乙二胺，混匀，静置，得到水凝胶，标记为pam-pda-alg-vegf。
[0074]
对比例3
[0075]
本对比例考察载药以及原位还原银纳米颗粒对水凝胶性能的影响，本对比例提供一种水凝胶，制备方法包括：
[0076]
步骤一、利用静电纺丝技术，将0.64ml海藻酸钠溶液滴入5ml氯化钙溶液中，得到海藻酸钙微球悬液；所述海藻酸钠溶液的质量百分含量为 1％，所述氯化钙溶液的质量百分含量为1.5％；
[0077]
步骤二、将所述海藻酸钙微球悬液离心，除去上清液，得到海藻酸钙微球；
[0078]
步骤三、将所述海藻酸钙微球重悬于6ml去离子水中，得到微球重悬液；
[0079]
步骤四、将0.01g多巴胺加入所述微球重悬液中，调节ph为8.5，搅拌0.5h，得到含多巴胺的微球体系；
[0080]
步骤五、向所述含多巴胺的微球体系中加入1g丙烯酰胺、0.1g过硫酸铵和0.02gn’n亚甲基双丙烯酰胺，得到制备液；
[0081]
步骤六、向所述制备液中加入0.05ml四甲基乙二胺，混匀，静置，得到水凝胶，标记为pam-pda-alg。
[0082]
对比例4
[0083]
本对比例考察载药对水凝胶性能的影响，本对比例提供一种水凝胶，制备方法包括：
[0084]
步骤一、利用静电纺丝技术，将0.64ml海藻酸钠溶液滴入5ml氯化钙溶液中，得到海藻酸钙微球悬液；所述海藻酸钠溶液的质量百分含量为1％，所述氯化钙溶液的质量百分
含量为1.5％；
[0085]
步骤二、将所述海藻酸钙微球悬液离心，除去上清液，得到海藻酸钙微球；
[0086]
步骤三、将所述海藻酸钙微球重悬于6ml去离子水中，得到微球重悬液；
[0087]
步骤四、将0.01g多巴胺加入所述微球重悬液中，调节ph为8.5，搅拌0.5h，得到含多巴胺的微球体系；
[0088]
步骤五、向所述含多巴胺的微球体系中加入0.8mg硝酸银，搅拌0.5h，得到分散有银纳米颗粒的体系；
[0089]
步骤六、向所述分散有银纳米颗粒的体系中加入1g丙烯酰胺、0.1g 过硫酸铵和0.02gn’n亚甲基双丙烯酰胺，得到制备液；
[0090]
步骤七、向所述制备液中加入0.05ml四甲基乙二胺，混匀，静置，得到水凝胶，标记为pam-pda-alg-ag。
[0091]
性能评价
[0092]
图1为实施例1步骤七静置前体系与水凝胶负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶形貌比对图。
[0093]
图2为实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶的扫描电镜图片。
[0094]
图3为实施例1聚多巴胺涂覆的海藻酸钙微球在300x的扫描电镜图。
[0095]
图4为实施例1聚多巴胺涂覆的海藻酸钙微球在5kx的扫描电镜图。
[0096]
图5为实施例1原位还原在聚多巴胺涂层上的银纳米颗粒的透射电镜图。结合图1～5可知，本发明的负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶外观呈黑棕色，整体具有多孔网络结构，表面附着有颗粒物，表明海藻酸钙微球表面覆盖有聚多巴胺微球形成的涂层，银纳米颗粒在聚多巴胺涂层表面附着。
[0097]
图6为实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶循环压缩力学性能测试结果，测试方法包括以恒定速率对水凝胶压缩并恢复，重复25次，最大压缩形变设定为70％。图7为实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶循环压缩力学性能测试结果，测试方法包括以恒定速率对水凝胶压缩并恢复，最大压缩形变设定为从10％到70％。根据图6～7可知，本发明的负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶压缩形变可达到70％，在70％压缩形变循环25次后，本发明负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶的最大应力可以恢复到初始值的84.5％，表明本发明负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶有较好的韧性和回弹性。
[0098]
图8为实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶物理性能展示图，根据图8可知，本发明的水凝胶可以粘附在动物组织心、肝、脾、肺、肾、皮肤以及一些材料表面，具有良好的粘附性能。
[0099]
图9为实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶抗菌性能测试结果，根据图9可知，在以革兰氏阳性细菌(金黄色葡萄球菌)以及革兰氏阴性菌(大肠杆菌)作为模型细菌的体系中分别接种实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶和对比例2的pam-pda-alg-vegf，共培养后观察抑菌圈。根据图9可见，实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌形成的抑菌圈直径能达到15.7mm，而对比例3没有抑菌圈形成，说明本发明的负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶具有显著的抑菌效果。
[0100]
图10为实施例1负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶在不同ph条件下药物释放情况，从图10中可以看出，在ph为7.4时，药物呈现缓控释放趋势，而在ph为6.5和8.5时，几乎
不释放，表明本发明负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶可根据所处微环境有效控制药物释放。
[0101]
图11为不同样品伤口修复示意图，可见，在修复第三天，采用本发明的负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶伤口面积明显减小，愈合速率远超过未施加任何水凝胶的空白组，修复第七天，炎症水平明显低于空白组，血小板-内皮细胞粘附分子(cd31)表达量高于空白组，修复第14天，所有样品对应伤口已经完全愈合，内部组织丰富度较高，有新生血管和毛孔，表明本发明水凝胶可有效促进感染性伤口的修复。
[0102]
图12为不同样品伤口在第7天和第14天组织染色图，分别为il-6 和cd31的荧光染色以及伤口组织的h&e染色。可见，在修复第三天，采用本发明的负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶伤口面积明显减小，愈合速率远超过自然愈合组，修复第七天，炎症水平明显低于自然愈合组，血小板-内皮细胞粘附分子(cd31)表达量高于自然愈合组，修复第14天，所有样品对应伤口已经完全愈合，内部组织丰富度较高，有新生血管和毛孔，表明本发明负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶可有效促进感染性伤口的修复。
[0103]
实施例2
[0104]
本实施例提供一种负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶，包括聚丙烯酰胺水凝胶和复合微球，所述复合微球包括载有血管内皮生长因子vegf 的海藻酸钙微球，所述海藻酸钙微球上覆盖有聚多巴胺涂层，所述聚多巴胺涂层包括聚多巴胺微球，所述聚多巴胺微球表面附着有银纳米颗粒。
[0105]
所述银纳米颗粒为还原态银纳米颗粒。
[0106]
本实施例还提供一种上述负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶的制备方法，所述方法包括：
[0107]
步骤一、将0.1μg血管内皮生长因子vegf溶于0.64ml海藻酸钠溶液，得到载药溶液；所述海藻酸钠溶液的质量百分含量为2％；
[0108]
步骤二、利用静电纺丝技术，将所述载药溶液滴入5ml氯化钙溶液中，得到负载有vegf的海藻酸钙微球悬液；所述氯化钙溶液的质量百分含量为1％；
[0109]
步骤三、将所述负载有vegf的海藻酸钙微球悬液离心，除去上清液，得到负载有vegf的海藻酸钙微球，标记为alg-vegf；
[0110]
步骤四、将所述负载有vegf的海藻酸钙微球重悬于6ml去离子水中，得到微球重悬液；
[0111]
步骤五、将0.01g多巴胺加入所述微球重悬液中，调节ph为8.5，搅拌0.5h，得到含多巴胺的微球体系；
[0112]
步骤六、向所述含多巴胺的微球体系中加入0.8mg硝酸银，搅拌0.5h，得到分散有银纳米颗粒的体系；
[0113]
步骤七、向所述分散有银纳米颗粒的体系中加入1g丙烯酰胺、0.1g 过硫酸铵、0.02gn’n亚甲基双丙烯酰胺和0.05ml四甲基乙二胺，混匀，静置，得到负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶。
[0114]
本实施例水凝胶的性能，与实施例1基本一致。
[0115]
实施例3
[0116]
本实施例提供一种负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶，包括聚丙烯酰胺水凝胶和
复合微球，所述复合微球包括载有血管内皮生长因子vegf 的海藻酸钙微球，所述海藻酸钙微球上覆盖有聚多巴胺涂层，所述聚多巴胺涂层包括聚多巴胺微球，所述聚多巴胺微球表面附着有银纳米颗粒。
[0117]
所述银纳米颗粒为还原态银纳米颗粒。
[0118]
本实施例还提供一种上述负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶的制备方法，所述方法包括：
[0119]
步骤一、将0.1μg血管内皮生长因子vegf溶于0.64ml海藻酸钠溶液，得到载药溶液；所述海藻酸钠溶液的质量百分含量为1％；
[0120]
步骤二、利用静电纺丝技术，将所述载药溶液滴入5ml氯化钙溶液中，得到负载有vegf的海藻酸钙微球悬液；所述氯化钙溶液的质量百分含量为0.5％；
[0121]
步骤三、将所述负载有vegf的海藻酸钙微球悬液离心，除去上清液，得到负载有vegf的海藻酸钙微球，标记为alg-vegf；
[0122]
步骤四、将所述负载有vegf的海藻酸钙微球重悬于6ml去离子水中，得到微球重悬液；
[0123]
步骤五、将0.015g多巴胺加入所述微球重悬液中，调节ph为8.5，搅拌0.5h，得到含多巴胺的微球体系；
[0124]
步骤六、向所述含多巴胺的微球体系中加入0.8mg硝酸银，搅拌0.5h，得到分散有银纳米颗粒的体系；
[0125]
步骤七、向所述分散有银纳米颗粒的体系中加入1g丙烯酰胺、0.1g 过硫酸铵、0.02gn’n亚甲基双丙烯酰胺和0.05ml四甲基乙二胺，混匀，静置，得到负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶。
[0126]
本实施例水凝胶的性能与实施例1基本一致。
[0127]
实施例4
[0128]
本实施例提供一种负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶，包括聚丙烯酰胺水凝胶和复合微球，所述复合微球包括载有血管内皮生长因子vegf 的海藻酸钙微球，所述海藻酸钙微球上覆盖有聚多巴胺涂层，所述聚多巴胺涂层包括聚多巴胺微球，所述聚多巴胺微球表面附着有银纳米颗粒。
[0129]
所述银纳米颗粒为还原态银纳米颗粒。
[0130]
本实施例还提供一种上述负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶的制备方法，所述方法包括：
[0131]
步骤一、将0.1μg血管内皮生长因子vegf溶于0.64ml海藻酸钠溶液，得到载药溶液；所述海藻酸钠溶液的质量百分含量为0.5％；
[0132]
步骤二、利用静电纺丝技术，将所述载药溶液滴入5ml氯化钙溶液中，得到负载有vegf的海藻酸钙微球悬液；所述氯化钙溶液的质量百分含量为1.5％；
[0133]
步骤三、将所述负载有vegf的海藻酸钙微球悬液离心，除去上清液，得到负载有vegf的海藻酸钙微球，标记为alg-vegf；
[0134]
步骤四、将所述负载有vegf的海藻酸钙微球重悬于6ml去离子水中，得到微球重悬液；
[0135]
步骤五、将0.01g多巴胺加入所述微球重悬液中，调节ph为8.5，搅拌0.6h，得到含
多巴胺的微球体系；
[0136]
步骤六、向所述含多巴胺的微球体系中加入0.8mg硝酸银，搅拌0.6h，得到分散有银纳米颗粒的体系；
[0137]
步骤七、向所述分散有银纳米颗粒的体系中加入1.2g丙烯酰胺、0.12g 过硫酸铵、0.02gn’n亚甲基双丙烯酰胺和0.05ml四甲基乙二胺，混匀，静置，得到负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶。
[0138]
本实施例水凝胶的性能与实施例1基本一致。
[0139]
实施例5
[0140]
本实施例提供一种负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶，包括聚丙烯酰胺水凝胶和复合微球，所述复合微球包括载有血管内皮生长因子vegf 的海藻酸钙微球，所述海藻酸钙微球上覆盖有聚多巴胺涂层，所述聚多巴胺涂层包括聚多巴胺微球，所述聚多巴胺微球表面附着有银纳米颗粒。
[0141]
所述银纳米颗粒为还原态银纳米颗粒。
[0142]
本实施例还提供一种上述负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶的制备方法，所述方法包括：
[0143]
步骤一、将0.1μg血管内皮生长因子vegf溶于0.64ml海藻酸钠溶液，得到载药溶液；所述海藻酸钠溶液的质量百分含量为3％；
[0144]
步骤二、利用静电纺丝技术，将所述载药溶液滴入5ml氯化钙溶液中，得到负载有vegf的海藻酸钙微球悬液；所述氯化钙溶液的质量百分含量为3％；
[0145]
步骤三、将所述负载有vegf的海藻酸钙微球悬液离心，除去上清液，得到负载有vegf的海藻酸钙微球，标记为alg-vegf；
[0146]
步骤四、将所述负载有vegf的海藻酸钙微球重悬于6ml去离子水中，得到微球重悬液；
[0147]
步骤五、将0.015g多巴胺加入所述微球重悬液中，调节ph为8.5，搅拌0.4h，得到含多巴胺的微球体系；
[0148]
步骤六、向所述含多巴胺的微球体系中加入0.8mg硝酸银，搅拌0.4h，得到分散有银纳米颗粒的体系；
[0149]
步骤七、向所述分散有银纳米颗粒的体系中加入1.2g丙烯酰胺、0.12g 过硫酸铵、0.02gn’n亚甲基双丙烯酰胺和0.05ml四甲基乙二胺，混匀，静置，得到负载ph响应型微载体的抗菌水凝胶。
[0150]
本实施例水凝胶的性能与实施例1基本一致。
[0151]
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何限制，凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。